关键词： 肾炎防衰液   糖尿病肾脏病   转录组学   核心基因   分子靶点  

摘要： 该研究基于肾组织转录组学探究肾炎防衰液治疗糖尿病肾脏病（diabetic kidney disease，DKD）的分子靶点。采用高脂饲料联合链脲佐菌素诱导C57BL/6J小鼠建立DKD模型，分为正常组、模型组、肾炎防衰液低剂量组、肾炎防衰液中剂量组、肾炎防衰液高剂量组、达格列净组，每组12只。肾炎防衰液低、中、高剂量组小鼠分别按照不同剂量灌胃中药悬浊液；达格列净组灌胃达格列净悬浊液；正常组、模型组小鼠灌胃等体积生理盐水，连续12周。给药结束后，分别检测各组小鼠血糖、肾功能指标、尿白蛋白/肌酐比值（UACR）；观察肾组织病理特征的变化，并通过RNA-Seq测序分析肾组织转录组，筛选差异表达基因（DEGs），并进行基因本体论（GO）功能和京都基因与基因组百科全书（KEGG）信号通路分析。此外，基于加权基因共表达网络分析（WGCNA）筛选模块基因，将差异基因和模块基因取交集确定核心基因。利用逆转录实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）验证核心基因表达，并基于Nephroseq数据库验证核心基因表达，单细胞测序数据对核心基因进行分析，最后构建核心基因-miRNA网络。结果显示，肾炎防衰液能显著降低DKD小鼠血糖水平、肾系数、血清肌酐、血清尿素氮和UACR，改善肾组织病理损伤。转录组测序共鉴定出1 284个DEGs，其中95个基因与肾炎防衰液干预DKD相关，最终确定6个核心基因（S100A6、EPHA2、TNC、SPON1、CLDN4和TACSTD2）。核心基因主要富集在细胞外基质、基底膜和上皮形成等生物过程，以及细胞外基质-受体相互作用等信号通路中，且与肾功能和UACR具有相关性。Nephroseq数据库中核心基因表达与测序结果一致，单细胞测序分析显示核心基因在不同细胞类型中具有特定的表达模式，构建的gene-micro-RNA网络揭示它们之间复杂的相互作用关系。该研究基于转录组学技术发现，肾炎防衰液通过调节S100A6、EPHA2、TNC、SPON1、CLDN4和TACSTD2基因表达及其相关信号通路，发挥治疗DKD的作用，为肾炎防衰液治疗DKD提供了科学依据。

关键词： PGCs   胰岛素   转铁蛋白   细胞增殖   细胞凋亡  

摘要： 本研究旨在观察胰岛素和转铁蛋白联合添加对鸡原始生殖细胞(Primordial Germ Cells,PGCs)在体外培养时的影响。收集4.5 d如皋黄鸡胚胎性腺中的PGCs进行分离培养,并设置3组不同成分的培养基进行培养,即正常培养组、无胰岛素无血清组、胰岛素-转铁蛋白组(10μg/mL胰岛素与0.05 mg/mL转铁蛋白)。分别测定3组培养体系下PGCs的增殖、凋亡及生物学活性等。结果显示:在添加胰岛素和转铁蛋白的培养体系中,PGCs增殖显著高于无胰岛素无血清组,略高于正常培养组(P>0.05);相比于无胰岛素无血清组,胰岛素-转铁蛋白组中细胞凋亡相关基因CASPASE3(Cysteinyl Aspartate Specific Proteinase 3)、CASPASE9(Cysteinyl Aspartate Specific Proteinase 9)与C-MYC(Myelocytomatosis Viral Oncogene Homolog)均显著下调;相比于无胰岛素无血清组和正常培养组,添加胰岛素-转铁蛋白组中铁死亡相关基因GPX4(Glutathione Peroxidase 4)与SLC7A11(Solute Carrier Family 7 Member 11)表达显著上调,NOX4(NADPH Oxidase 4)表达显著下调,亚铁离子含量显著下调,PI3K(Phosphatidyl-inositol 3-kinase)与MTOR(Mammalian TargetofRapamycin)的表达显著上调。综合以上结果,相比于无胰岛素无血清培养基和完全培养基,10μg/mL胰岛素和0.05 mg/mL转铁蛋白联合添加进行鸡PGCs体外培养表现更佳。

关键词： 麻黄-桂枝药对   支气管哮喘   寒饮蕴肺证   胸腺基质淋巴细胞生成素   Toll样受体4  

摘要： 目的研究麻黄-桂枝药对对哮喘寒饮蕴肺证大鼠呼吸功能和气道炎症的影响及作用机制。方法将60只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组[1 mg/(kg·d)]和麻黄-桂枝低、中、高剂量组[0.234、0.936、1.872 g/(kg·d)],每组10只。模型组和各给药组大鼠通过腹腔注射抗原液(卵清蛋白100 mg+氢氧化铝100 mg)致敏、1%卵清蛋白雾化激发哮喘,并在此基础上施以“形寒、饮冷”刺激,建立哮喘寒饮蕴肺证大鼠模型。从实验第2天开始,各组大鼠灌胃相应药物或生理盐水,每天1次,连续给药21 d。观察各组大鼠在实验过程中的一般行为学变化,测定造模前和末次给药后的肺功能指标[呼气流量峰值(PEF)、气道阻力(Raw)、功能残气量(FRC)、呼气中期流速(EF50%)]以及末次给药后血清中白细胞介素6(IL-6)、IL-13、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)含量,观察大鼠的肺组织病理学形态变化,检测其肺组织中IL-6、IL-13、TNF-α、IFN-γ、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、Toll样受体4(TLR4)mRNA及TSLP、TLR4蛋白表达水平。结果与模型组比较,地塞米松组和麻黄-桂枝中、高剂量组大鼠肺组织损伤明显减轻;Raw,FRC,IL-6、IL-13、TNF-α含量及mRNA表达水平,TSLP、TLR4 mRNA及蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05);PEF、EF50%和IFN-γ含量及mRNA表达水平均显著升高(P<0.05);只有少数大鼠出现哮喘典型症状。结论麻黄桂枝药对能显著改善哮喘寒饮蕴肺证大鼠的呼吸功能,减轻气道炎症,其作用机制可能与抑制TSLP/TLR4信号通路、调节Th1/Th2失衡有关。

关键词： 老年原发性骨质疏松   地舒单抗   碳酸钙D3咀嚼片   疗效   骨代谢   炎症反应  

摘要： 目的探究地舒单抗联合碳酸钙D3咀嚼片治疗老年原发性骨质疏松的效果。方法便利选取2021年6月—2023年6月连云港市第二人民医院老年医学科收治的100例老年原发性骨质疏松患者为研究对象,按治疗方法分为两组,每组50例。观察组给予地舒单抗联合碳酸钙D3咀嚼片治疗,对照组单纯给予碳酸钙D3咀嚼片治疗。比较两组治疗效果、骨代谢指标、炎症因子水平。结果观察组治疗有效率为98.00%(49/50),高于对照组的80.00%(40/50),差异有统计学意义(χ^(2)=8.274,P<0.05)。观察组骨代谢指标、炎症因子水平均优于对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论和传统的单药治疗相比,地舒单抗联合碳酸钙D3咀嚼片治疗老年原发性骨质疏松的疗效明显,且安全性较高。

关键词： 家禽   混合感染   分子诊断   基因芯片   环介导恒温扩增   核酸序列扩增  

摘要： 家禽多种病原混合感染在养殖业中日益频发,严重影响畜禽健康以及产业经济效益,传统诊断方法在面对多病原体协同感染时存在诸多局限,而分子诊断技术凭借其高效性、特异性及敏感性,为家禽混合感染的检测提供了有力工具。实时荧光PCR、基因芯片、环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)及核酸序列扩增(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)等技术在禽白血病与马立克氏病等多病原混合感染诊断中展现出显著优势。通过对4种主要分子诊断技术在检测性能与适用场景的系统分析,发现多重实时荧光PCR以及基因芯片技术在高通量筛查方面具有优势,而LAMP与NASBA等恒温扩增技术更适合现场快速检测。

关键词： 藏红花酸   糖尿病视网膜病变   视网膜色素上皮细胞   信号转导子和转录激活子3   氧化应激   炎症  

摘要： 目的探讨藏红花酸(CRO)治疗糖尿病视网膜病变(DR)的潜在价值及其对信号转导子和转录激活子3(STAT3)活性的影响。方法(1)体外实验:大鼠RPE细胞分为C组、HG组、HG+5/10/20CRO组和HG+20CRO+Colivelin TFA(C-TFA)组。C组用正常糖(5 mmol·L^(-1)葡萄糖)培养基培养,HG+5/10/20CRO组用添加5、10、20μmol·L^(-1)CRO的高糖(25 mmol·L^(-1)葡萄糖)培养基培养,HG+20CRO+C-TFA组用添加20μmol·L^(-1)CRO和0.5μmol·L^(-1)C-TFA的高糖培养基培养。各组细胞培养48 h后,MTT法检测细胞活力,EdU染色检测细胞增殖,TUNEL染色检测细胞凋亡,ELISA检测氧化应激和炎症因子水平,Western blot检测STAT3活化水平。(2)体内实验:将SD大鼠分为6组:NC组、DR组、20/40/80CRO组和80CRO+C-TFA组。NC组为正常对照大鼠,其他组均为STZ诱导的DR模型大鼠。NC组和DR组灌胃5 g·L^(-1)羧甲基纤维素钠。20/40/80CRO组分别灌胃20、40、80 mg·kg^(-1)的CRO;80CRO+C-TFA组灌胃80 mg·kg^(-1) CRO,同时腹腔注射1 mg·kg^(-1) C-TFA。治疗4周后,HE染色和TUNEL染色观察视网膜形态和细胞凋亡情况。ELISA检测视网膜中的氧化应激和炎症因子水平,Western blot检测视网膜中STAT3活化水平。结果(1)体外实验:与HG组相比,HG+5/10/20CRO组RPE细胞的相对细胞活力和EdU+细胞比例均升高,TUNEL+细胞比例降低,MDA含量降低,SOD和GPx活性均升高,TNF-α、IL-1β和IL-6水平均降低,STAT3磷酸化水平降低(均为P<0.05)。与HG+20CRO组相比,HG+20CRO+C-TFA组RPE细胞上述指标均被逆转(均为P<0.05)。(2)体内实验:与DR组相比,20/40/80CRO组大鼠视网膜TUNEL+细胞比例降低,视网膜MDA含量降低,SOD和GPx活性均升高,TNF-α、IL-1β和IL-6水平均降低,视网膜STAT3磷酸化水平降低(均为P<0.05)。与80CRO组相比,80CRO+C-TFA组大鼠视网膜上述指标均被逆转(均为P<0.05)。结论CRO通过抑制STAT3活性减轻高糖诱导的大鼠RPE细胞损伤以及DR大鼠视网膜损伤。

关键词： 宫颈癌   人乳头瘤病毒   减数分裂   生信分析  

摘要： 目的:通过生物信息学方法挖掘与宫颈癌相关的减数分裂相关基因,并分析其临床应用价值。方法:基于TCGA数据库挖掘宫颈癌组织与正常组织间的差异表达基因。采用基因集富集分析软件筛选出数据完整且准确的减数分裂数据集。基于GEO数据库,筛选包含有不同病变级别、不同HPV感染状态以及不同放化疗反应情况的转录组测序数据,对其进行二次统计学分析。结果:共筛选出119个与减数分裂相关的基因,其中在宫颈癌组织中表达上调的有14个,表达下调的有5个。差异表达的减数分裂相关基因中,最终发现SYCE2、BLM、RBBP8、RPA2基因与宫颈癌患者预后相关。通过计算Tau指数最终发现SYCP2、SYCE2、SMC1B三个基因在睾丸/宫颈癌组织中特异性表达。SYCP2检测诊断CINⅡ+和CINⅡ+的受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分别为0.846(95%CI:0.777～0.915)和0.806(95%CI:0.731～0.881)。且SYCP2在正常宫颈组织和低级别病变中的表达均高于高级别病变和宫颈癌组织。SYCP2和SMC1B在HPV阳性宫颈癌中的表达水平高于HPV阴性者,SYCE2在HPV16阳性宫颈癌中的表达水平高于HPV阴性者(P均<0.05)。放化疗完全反应型宫颈癌患者中的SYCP2和SYCE2表达水平低于非完全反应型宫颈癌患者(P均<0.05)。结论:减数分裂相关基因SYCP2、SYCE2及SMC1B作为睾丸/宫颈癌特异性表达基因,与HPV感染相关,且SYCP2表达水平与宫颈病变级别呈明显正相关,SYCP2、SYCE2高表达与宫颈癌放化疗抵抗相关,三者有望作为宫颈癌早期筛查与靶向治疗的有效分子靶标。

关键词： 糖尿病肾脏病   DKD   微血管并发症   终末期肾脏疾病  

摘要： 糖尿病肾脏病(DKD)是糖尿病非常常见且严重的微血管并发症之一,被广泛认为是导致终末期肾脏疾病的关键因素。随着全球范围内糖尿病患者数量的不断增加,糖尿病肾脏病的发生率也随之升高。但令人担忧的是,在疾病的初期阶段,糖尿病肾脏病通常不会表现出明显的不适症状,许多患者往往是在肾脏功能已经遭受显著损害后才察觉到问题的存在。其实,只要通过早期诊断与综合管理策略的应用,就可以有效地控制糖尿病肾脏病的发展进程。那么,如何预防糖尿病肾脏病?一旦确诊,又该采取哪些治疗手段?日常生活中,怎样才能科学合理地进行护理?

关键词： 晚蚕沙外熨法   糖尿病胃轻瘫   细胞凋亡   PI3K/AKT信号通路  

摘要： [目的]探讨晚蚕沙外熨法对糖尿病胃轻瘫(DGP)大鼠的作用机制。[方法]随机选取8只大鼠作为空白组,其余大鼠构建DGP模型,造模成功后随机分为模型组、外熨组(晚蚕沙外熨法)和莫沙必利组(1.57 mg/kg)连续治疗2周。检测大鼠胃排空率、随机血糖水平,苏木精-伊红(HE)染色观察胃窦部形态变化,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)、磷酸化(p)-PI3K、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT的蛋白表达,TUNEL染色检测大鼠胃窦部细胞凋亡。[结果]与空白组比较,模型组胃排空率明显下降(P<0.01),随机血糖水平升高(P<0.01),胃窦部腺体结构紊乱,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、蛋白表达明显升高(P<0.01),胃窦部细胞凋亡增加(P<0.01);与模型组比,外熨组胃排空率明显上升(P<0.01),随机血糖下降(P<0.05),胃窦部组织结构逐渐恢复,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达明显降低(P<0.01),胃窦部细胞凋亡减少(P<0.01)。[结论]晚蚕沙外熨法可降低DGP大鼠胃窦部细胞凋亡、改善胃动力以及降低随机血糖水平,其机制可能与调控PI3K/AKT信号通路有关。

关键词： 糖尿病下肢血管病   糖尿病并发症   益气养阴活血方   气阴两虚   血瘀   糖脂代谢指标   炎症   25羟维生素D  

摘要： 目的:观察益气养阴活血方联合常规西药治疗气阴两虚兼血瘀型糖尿病下肢血管病(DLEAD)患者的临床疗效。方法:将90例气阴两虚兼血瘀型DLEAD患者随机分为治疗组与对照组,每组45例。对照组予降糖药物、他汀类药物、抗血小板药物等常规西药治疗,治疗组在对照组治疗的基础上加用中药汤剂益气养阴活血方,2组均连续治疗12周后进行疗效观察。比较2组患者治疗前后中医证候评分,空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 hPG)、糖化血红蛋白(HbAlc)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)等糖脂代谢指标,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)等炎症指标,踝肱指数(ABI)、足背动脉血管内径、足背动脉血流量等周围血管功能指标以及25羟维生素D[25-(OH)D]水平变化情况,并于治疗结束后进行疗效评估。结果:治疗后2组患者中医证候总分均较本组治疗前明显降低(P<0.05),治疗组明显低于对照组(P<0.05)。治疗后2组患者FPG、2 hPG、HbAlc、TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-6、hs-CRP水平均较本组治疗前明显降低(P<0.05),治疗组上述指标明显低于对照组(P<0.05)。治疗后2组患者HDL-C、25-(OH)D、ABI、足背动脉血管内径、足背动脉血流量水平均较本组治疗前明显升高(P<0.05),治疗组上述指标明显高于对照组(P<0.05)。治疗组中医证候总有效率为88.89%,明显高于对照组的77.78%(P<0.05)。结论:在常规西药治疗基础上加用益气养阴活血方可以显著改善气阴两虚兼血瘀型DLEAD患者的中医证候,同时在降血糖、降血脂、抗炎、改善周围血管功能等方面具有明显优势,值得临床推广。