关键词:
肺鳞癌
健脾益肾化痰方
细胞凋亡
细胞迁移
长链非编码RNA
泛素特异性蛋白酶4
组蛋白去乙酰化酶2
摘要:
目的 从LncRNA ALAL-1/USP4/HDAC2信号通路探讨健脾益肾化痰方治疗肺鳞癌的可能作用机制。方法 40只SD大鼠随机分为对照组和高、中、低浓度中药组,每组10只。高、中、低浓度中药组大鼠分别灌胃45、30、15 g/(kg·d)健脾益肾化痰方浓缩液,对照组灌胃10 ml/(kg·d)生理盐水,每日1次,连续10天后取血制备含药血清。人肺鳞癌细胞株SK-MES-1细胞分为对照血清组及健脾益肾化痰方低、中、高含药血清组,对照血清组加入10%含生理盐水血清培养,健脾益肾化痰方低、中、高含药血清组分别加入10%低、中、高浓度中药含药血清培养。孵育48 h后采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,计算总凋亡率;细胞划痕实验观察0 h和培养24 h各组细胞迁移面积,计算迁移率。另将SK-MES-1细胞分为对照血清组,健脾益肾化痰方低、中、高含药血清组,LncRNA沉默组,USP4抑制组,HDAC2抑制组,对照血清组加入10%含生理盐水血清培养,健脾益肾化痰方低、中、高含药血清组分别加入10%低、中、高浓度中药含药血清培养,LncRNA沉默组转染ALAL-1 siRNA,USP4抑制组加入35μmol/L去泛素化酶抑制剂(PR-619),HDAC2抑制组加入60μmol/L伏立诺他,培养24、48 h后,CCK-8法检测各组细胞存活率;培育24 h后qPCR法检测各组细胞LncRNA ALAL-1、USP4、HDAC2 mRNA表达;培育48 h后免疫印迹法检测各组细胞USP4、HDAC2蛋白水平。结果 与对照血清组比较,健脾益肾化痰方中、高含药血清组细胞总凋亡率显著升高,健脾益肾化痰方低、中、高含药血清组细胞迁移率显著降低(P<0.05或P<0.01)。健脾益肾化痰方低、中、高含药血清组细胞迁移率随浓度的升高而降低,呈现浓度依赖性(P<0.05或P<0.01)。与对照血清组同时间比较,各组细胞24、48 h时存活率均显著下降(P<0.05或P<0.01);与健脾益肾化痰方低含药血清组同时间比较,健脾益肾化痰方高含药血清组和LncRNA沉默组细胞在24、48 h时存活率亦降低(P<0.05)。与对照血清组比较,健脾益肾化痰方低、中含药血清组和USP4抑制剂组USP4、HDAC2 mRNA表达降低,健脾益肾化痰方高含药血清组、LncRNA沉默组LncRNA ALAL-1、USP4、HDAC2 mRNA表达降低,HDAC2抑制剂组HDAC2 mRNA表达亦降低;除HDAC2抑制剂组USP4蛋白水平外,其余各组细胞中USP4、HDAC2蛋白水平均降低(P<0.05或P<0.01)。结论 健脾益肾化痰方含药血清能够抑制人肺鳞癌细胞增殖,促进凋亡,其作用机制可能与其抑制LncRNA ALAL-1/USP4/HDAC2通路相关,且以高浓度效果最好。