关键词:
核受体亚家族1D组成员1
骨性关节炎
软骨细胞
退变
核因子-κB信号通路
摘要:
目的探讨核受体亚家族1D组成员1(NR1D1)激动剂SR9009对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的小鼠软骨细胞退变的影响及其机制。方法2023年1月至2024年12月,酶消化法获取小鼠软骨细胞后,通过IL-1β(10 ng/ml)诱导构建体外软骨细胞退变模型,实验分组为:对照组(Control)、IL-1β组(IL-1β)、SR9009低剂量组(IL-1β+SR90095μmol/L)、SR9009高剂量组(IL-1β+SR900910μmol/L)。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测炎症指标,活性氧(ROS)试剂盒检测氧化应激,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测环氧合酶2(COX2),基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、MMP-13和2型胶原(CollagenⅡ)mRNA表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测NR1D1、COX2、MMP-3、MMP-13、CollagenⅡ、核因子-κB抑制因子α(IκBα),p-IκBα、核因子-κB-β(IKKβ)、p-IKKβ、核因子-κB p65(NF-κB p65)和p-p65的蛋白表达。两组间比较采用LSD-t检验,多组间比较采用方差分析(ANOVA)。结果SR9009低剂量组、高剂量组细胞活性高于IL-1β组(0.58±0.03、0.62±0.03比0.41±0.01,t=13.13、10.58,P<0.01),差异有统计学意义。SR9009低剂量组、高剂量组细胞早期凋亡率、晚期凋亡率低于IL-1β组[(13.77±1.44)%、(7.34±1.23)%比(19.05±2.41)%,(10.19±0.84)%、(4.47±0.93)%比(16.59±1.48)%,t=3.25、7.49、6.50、12.01,P<0.05],差异有统计学意义。SR9009高剂量组TNF-α、IL-6水平明显低于IL-1β组[(41.29±6.74)pg/ml比(123.0±11.14)pg/ml、(51.95±9.04)pg/ml比(152.59±7.45)pg/ml,t=14.88、10.88,P<0.01],差异有统计学意义。ROS检测结果显示,SR9009低剂量组、SR9009高剂量组ROS水平低于IL-1β组(2.89±0.23比4.71±0.70、2.02±0.29比4.71±0.70,t=4.23、6.19,P<0.05),差异有统计学意义。RT-PCR结果显示,SR9009高剂量组NR1D1、CollagenⅡ表达量高于IL-1β组(1.06±0.05比0.46±0.07、2.23±0.12比0.76±0.08,t=7.08、10.40,P<0.05),COX-2、MMP-3、MMP-13表达量低于IL-1β组(1.85±0.13比4.23±0.21、1.80±0.08比4.38±0.26、1.62±0.12比4.62±0.20,t=9.82、9.29、12.10,P<0.05),差异有统计学意义。Western blot结果显示,SR9009高剂量组NR1D1、CollagenⅡ表达量高于IL-1β组(2.15±0.15比0.86±0.12、2.03±0.16比1.02±0.11,t=6.88、6.75,P<0.05),COX-2、MMP-3、MMP-13表达量低于IL-1β组(1.01±0.07比3.43±0.42、1.32±0.12比3.57±0.34、1.21±0.08比4.14±0.34,t=8.89、8.95、10.97,P<0.05),差异有统计学意义。SR9009干预组在IL-1β刺激5 min时间点p-IκBα/IκBα、p-IKKβ/IKKβ和p-p65/p65表达量低于IL-1β组(0.65±0.04、0.56±0.05、0.73±0.06比1.32±0.11、1.44±0.07、1.97±0.11,t=6.624、6.723、6.726,P<0.05),差异有统计学意义。结论NR1D1激动剂SR9009抑制NF-κB通路降低炎症因子和基质金属蛋白酶的表达,减轻IL-1β诱导的软骨细胞退变,对关节软骨发挥保护作用。