关键词： 产气荚膜梭菌   α毒素   铁蛋白   纳米颗粒   免疫原性  

摘要： 本研究旨在制备产气荚膜梭菌α毒素-铁蛋白纳米颗粒抗原并评价其对小鼠的免疫原性。将带有D56G、H68G点突变和Spytag序列的α毒素全长基因和带有SpyCatcher序列的铁蛋白（Ferritin）基因片段分别克隆至原核表达载体pET 28a，后进行表达并对表达产物进行鉴定和纯化。对纯化后的αm2ST进行细胞毒性、卵磷脂酶活性以及溶血活性分析。将纯化的αm2ST和FeSC在体外对接，随后，将α毒素-铁蛋白(αm2-Fe)对接产物和αm2ST分别与佐剂混合后免疫小鼠。免疫后每周采集小鼠血清，检测IgG、IgG亚型抗体水平和中和效价，并在二免后28 d取脾细胞分析T细胞亚群和IFN-γ分泌水平。结果显示，在28 ℃条件下，αm2ST和FeSC均以可溶性表达为主。αm2ST未被检测出细胞毒性、卵磷脂酶活性和溶血活性，这说明αm2ST已无毒性。将αm2ST和FeSC体外对接后，经SDS-PAGE、TEM和DLS分析，证实αm2-Fe形成直径32.7～50.7 nm的纳米颗粒，主峰为37.8 nm。小鼠免疫后，αm2-Fe组能产生较高水平的IgG2a抗体（P<0.001）；小鼠二免后21 d，αm2-Fe组血清中和效价为64倍，显著高于αm2ST组的32倍（P<0.05）；二免后28 d，αm2-Fe组脾细胞刺激后上清中的IFN-γ也高于αm2ST组（P<0.05），流式细胞术分析显示αm2-Fe组产生了较高比例的效应性CD8+T细胞（P<0.001）。小鼠试验证实αm2-Fe纳米颗粒抗原能有效刺激小鼠产生体液免疫和细胞免疫。

关键词： 中医药   网状Meta分析   证据库   循证医学   再评价  

摘要： 目的 构建中医药网状Meta分析（NMA-TCM）证据库，以期为中医药疗效的比较与评价提供一站式、高效率平台，推动中医药二次研究证据高效转化。方法 制定纳入、排除标准纳入文献；采用Note Express筛选文献。采用Vue、ElementUI、Spring Boot、Spring IOC等工具构建NMA-TCM系统架构。参考PICOS原则、NMA撰写要求、已发表的高质量NMA-TCM，并通过专家共识确定证据库录入字段；应用AMSTAR 2和PRISMA-NMA量表的条目构成评价字段；基于系统日志、工作进度状态栏等进行数据透明化管理；运用逻辑运算符实现高级查询；采用统计表程序实现数据分析。结果 成功构建了NMA-TCM证据库，其录入、管理、检索/导出、数据分析和可视化4个功能均已实现。当前证据库共收录已发表NMA-TCM研究900余篇，年发表数量整体呈上升趋势，病种集中在循环系统疾病、呼吸系统疾病。干预措施涵盖口服中成药、中药注射液、外用药、汤剂、非药物干预（针灸、按摩、传统功法等）。结论 构建的NMATCM可实现对NMA-TCM研究的快速分析和再评价功能。

摘要： DNA damage signaling requires functional interactions between 53BP1 and the wild-type p53 tumor suppressor. Cancer cells often express elevated levels of transcriptionally inactive mutant p53 (mtp53) that maintains MDM2 and MDMX (MDM4) binding partners. The ability of mtp53 to functionally interact with additional proteins in the context of a dynamic equilibrium with MDM2-MDMX heterodimers has not been described. Employing a stable isotope labeling in cell culture analysis in T47D breast cancer cells (expressing mtp53 L194F), we uncovered several chromatin-associated DNA replication and repair factors as MDM2-regulated phosphoproteins, including 53BP1. We used proximity ligation analysis in multiple breast cancer cell lines to confirm 53BP1-MDM2 complex formation. We demonstrated that a mtp53-MDM2/MDMX complex promoted 53BP1-MDC1 interactions by showing that mtp53-MDM2/MDMX complex disruptors, Nutlin 3a and ALRN-6924, reduced the 53BP1-MDC1 nuclear interactions (especially in S-phase). Surprisingly, these MDM2-driven MDC1-53BP1 interactions were not ATM dependent, suggesting distinct 53BP1-MDC1 complexes in response to genotoxic stress. We found that MDM2-deficient cells have increased poly-ADP-ribosylation on chromatin which supports the possibility that a mtp53-MDM2/MDMX pathway promotes aberrant DNA repair. Taken together, our data suggest that a mtp53-MDM2/MDMX complex orchestrates DNA repair machinery activity on chromatin, thus priming cancer cells for persistent DNA damage repair (CPR).

关键词： 脊髓损伤   神经源性膀胱   脊髓电刺激   内质网应激   lncRNA MIAT/miR-221-3p/SIRT1轴  

摘要： 目的 探究脊髓电刺激对脊髓损伤大鼠神经源性膀胱的影响并分析其机制。方法 SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、脊髓损伤组（SCI组）和脊髓电刺激组（SCS组），每组10只。对大鼠进行BBB评分，并分析大鼠的尿流动力学；HE染色观察大鼠膀胱组织病理形态变化；Western blot检测大鼠膀胱组织中GRP78、CHOP、Caspase-12和SIRT1蛋白表达；RT-qPCR检测大鼠脊髓组织中lncRNA MIAT、miR-221-3p和SIRT1 mRNA表达；双荧光素酶报告基因实验验证miR-221-3p与lncRNA MIAT和SIRT1的靶向关系。结果 脊髓电刺激增加脊髓损伤大鼠BBB评分，降低大鼠膀胱最大压力、膀胱基础压力和漏尿点压力，增加大鼠膀胱顺应性，改善大鼠膀胱组织病理损伤，降低大鼠膀胱组织中GRP78、CHOP和Caspase-12蛋白以及miR-221-3p表达，增加大鼠膀胱组织中lncRNA MIAT和SIRT1表达。结论 脊髓电刺激改善脊髓损伤诱导的神经源性膀胱，其机制可能与上调lncRNA MIAT增加miR-221-3p靶基因SIRT1表达而抑制内质网应激有关。

关键词： 药对   中医药   糖尿病肾病   作用机制   临床研究  

摘要： 糖尿病肾病（DKD）是糖尿病最常见的微血管并发症之一，也是导致终末期肾病（ESRD）的主要原因。目前西医治疗手段有限，难以逆转肾脏损伤，而中医药在DKD的防治中展现出独特优势，尤其是药对配伍的应用。本文系统综述了药对在DKD治疗中的作用机制、临床研究进展及未来发展方向。药对通过多成分、多靶点的协同作用，显著改善胰岛素抵抗、减轻氧化应激、抑制肾脏纤维化，并降低尿蛋白水平，从而发挥肾脏保护作用。根据不同病程阶段（早期滋阴清热、中期益气化瘀、晚期补肾培元），药对的辨证施治体现了中医整体观和个体化治疗思想。然而，药对研究仍面临机制阐释不足、临床证据质量参差不齐等挑战。未来研究应聚焦于阐明机制、提高质量标准、探索个体化治疗及联合应用，推动其在DKD治疗中的规范化应用。

关键词： 甘油三酯葡萄糖指数   甘油三酯葡萄糖体重指数   甘油三酯/高密度脂蛋白胆固醇   2型糖尿病   尿失禁  

摘要： 目的 探讨甘油三酯葡萄糖指数（TyG）、甘油三酯葡萄糖体重指数（TyG-BMI）、甘油三酯/高密度脂蛋白胆固醇（TG/HDL-C）与女性2型糖尿病（T2DM）患者合并尿失禁的相关性。方法 选取2021年9月—2023年5月于兰州大学第一医院就诊的415例年龄≥18岁的女性T2DM患者，收集其临床资料。根据TyG、TyG-BMI、TG/HDL-C的四分位数将患者分为Q1、Q2、Q3、Q4组，比较各组患者一般资料和尿失禁发生率、类型及严重程度；采用二元Logistic回归及受试者操作特征曲线分析上述指标与女性T2DM患者合并尿失禁的关系。结果 随着TyG、TyG-BMI、TG/HDL-C升高，女性T2DM患者尿失禁发生率及严重程度增加（P<0.001），其中压力性尿失禁占比更高（P<0.05）。Logistic回归分析显示，与TyG、TyG-BMI、TG/HDL-C最低四分位数（Q1）组相比，Q2～Q4组患者上述指标与女性T2DM患者合并尿失禁呈显著相关性（P<0.001）。校正相关影响因素后TyG、TyG-BMI与女性T2DM患者合并尿失禁的相关性仍然显著，而TG/HDL-C与女性T2DM患者合并尿失禁的相关性减弱；多因素Logistic回归分析显示，TyG、TyG-BMI是女性2型糖尿病患者尿失禁发生的危险因素。受试者操作特征曲线分析显示，TyG、TyG-BMI、TG/HDL-C筛选尿失禁发生最佳临界值分别为7.22、168.33、2.43。结论 女性T2DM患者中高TyG、TyG-BMI、TG/HDL-C与尿失禁风险及其严重程度密切相关，提示早期监测和控制或有助于降低尿失禁风险。

关键词： 黄芪甲苷IV   糖尿病肾病   AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路  

摘要： 通过网络药理学及分子对接探究黄芪甲苷IV（astragaloside IV，ASIV）对糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）大鼠的干预机制，并通过Western blot及RT-qPCR验证其通过腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine 5'-monophosphate-activated protein kinase，AMPK）/沉默信息调节因子1（silent information regulator 1，SIRT1）/核因子κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）信号通路对DN大鼠的干预效果。利用网络药理学及分子对接筛选ASIV干预DN的潜在靶点，采用高脂饮食联合链脲佐菌素注射诱导SD大鼠建立DN损伤模型，将大鼠分为正常组、模型组、二甲双胍组、40 mg/kg ASIV组、80 mg/kg ASIV组，每组6只；使用HE和Masson染色评估肾脏病理改变，并通过Western blot和RT-qPCR检测AMPK、SIRT1、NF-κB的表达水平。网络药理学及分子对接结果显示，AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路是ASIV干预DN的潜在关键机制。动物实验中，ASIV干预后，改善了炎性细胞浸润以及胶原纤维沉积，与模型组比较，40 mg/kgASIV组和80 mg/kg ASIV组均能显著激活AMPK（P<0.05），提高SIRT1的表达（P<0.05），抑制NF-κB的表达（P<0.05）。网络药理学及动物实验结果表明，ASIV通过调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路，改善DN大鼠的肾脏功能和组织病理学损伤，为其作为治疗DN的潜在药物提供了理论支持。

关键词： 糖尿病早期肾病   中医治疗   气阴两虚兼血瘀   名医经验   宫成军  

摘要： 糖尿病肾脏疾病（Diabetic Kidney Disease， DKD）作为一种糖尿病的严重并发症，近年来其患病率随着全球糖尿病患者数量的激增而持续攀升，已成为导致终末期肾脏疾病（End-Stage Renal Disease， ESRD）的主要原因之一。当DKD发展到终末期，必将给患者及其家属生理和心理造成极大的负担，因此对糖尿病肾病的早期治疗尤为关键。宫成军教授从事内分泌临床20余年，治疗糖尿病早期肾病数千例，实现了预期的治疗效果，患者反馈良好。宫成军教授提出早期糖尿病肾病的核心病机在于气阴两虚与血瘀并存。治疗时，需遵循益气养阴以固本、活血化瘀以治标的基本原则。该文是笔者通过长期跟师学习，对宫成军教授治疗早期DKD的学术思想进行分析，希望能为临床上治疗糖尿病早期肾病提供思路。

关键词： 柚皮素   口腔溃疡   促进愈合   炎症反应   胶原合成  

摘要： 目的：探究柚皮素对口腔溃疡的治疗效果和作用机制。方法：构建昆明小鼠口腔溃疡模型，通过一般状况观察和组织切片染色，考察柚皮素是否改善实验动物的口腔溃疡愈合情况；利用ELISA、RT-qPCR、Western blot，考察柚皮素对模型动物和细胞的炎症反应、伤口愈合以及对细胞增殖、迁移的作用；利用酵母聚糖A诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的炎症模型，考察柚皮素对免疫细胞的作用。结果：23.44 mg·kg-1剂量柚皮素有效促进小鼠口腔愈合，改善组织炎性细胞浸润。柚皮素上调模型动物血清中IL-10含量，下调溃疡组织CXCL2、IL-1β、IL-6基因表达，上调Col3a1、MMP-3、TIMP-1、TIMP-2基因表达；同时下调RAW264.7细胞中的Dectin-1和NF-κB表达。结论：柚皮素可通过抑制炎症反应，调控胞外基质和胶原合成，共同作用促进口腔溃疡愈合。该研究为天然来源的柚皮素用于口腔溃疡的治疗提供了研究基础。

关键词： 大鼠模型   酶联免疫吸附试验   多型调理吞噬实验   免疫原性   24价肺炎链球菌多糖结合疫苗  

摘要： 目的 通过研究大鼠免疫肺炎链球菌多糖结合疫苗后血清中血清型特异性IgG结合抗体含量与杀菌功能抗体滴度的相关性，评价大鼠模型是否可用于肺炎链球菌多糖结合疫苗免疫原性研究。方法 以5种不同剂量24价肺炎链球菌多糖结合疫苗（PCV24）分别按0、0/14和0/14/28d3种免疫程序肌肉注射免疫SD大鼠，在不同的时间点（d）收集血清。采用世界卫生组织（WHO）标准定量酶联免疫吸附试验方法（ELISA）检测血清中血清型特异性IgG结合抗体含量，采用多型调理吞噬实验方法（MOPA）检测血清中杀菌功能抗体滴度。采用Minitab17统计软件分析血清型特异性IgG结合抗体含量与杀菌功能抗体滴度的相关性。结果 不同剂量PCV24按不同免疫程序免疫大鼠后，血清中血清型特异性IgG结合抗体含量和杀菌功能抗体滴度变化趋势具有较好的一致性。24种血清型中除血清型10A外，其余23种血清型的IgG结合抗体含量与杀菌功能抗体滴度均具有较好的相关性（P＜0.05，相关系数r≥0.600）。结论 大鼠免疫PCV24后，血清中血清型特异性IgG结合抗体含量与杀菌功能抗体滴度可以一致性反映出抗体水平的变化趋势，二者具有较好的相关性。研究表明该模型可以用于评价肺炎链球菌多糖结合疫苗的免疫原性。