关键词： C4-2细胞   多肽   SHSFSVGSGDHSFT序列   细胞凋亡  

摘要： 目的 明确SHSFSVGSGDHSFT序列修饰的前列腺特异性膜抗原（PSMA）靶向性多肽对去势抵抗性前列腺癌C4-2细胞生长的影响。方法 设计及合成包含SHSFSVGSGDHSFT序列的新型内皮抑素/PSMA靶向性多肽及内皮抑素24肽，内皮抑素24肽用作对照。光谱共聚焦显微镜检测新型内皮抑素/PSMA靶向性多肽的靶向性；CCK-8法检测新型内皮抑素/PSMA靶向性多肽对C4-2细胞增殖的影响；流式细胞术确定新型内皮抑素/PSMA靶向性多肽对C4-2细胞凋亡的影响；采用划痕实验及TranswellTM小室检测新型内皮抑素/PSMA靶向性多肽对C4-2细胞运动及迁移的影响；Westernblot法检测新型内皮抑素/PSMA靶向性多肽对PSMA表达的影响。结果 新型内皮抑素/PSMA靶向性多肽能特异性靶向PSMA高表达的前列腺癌C4-2细胞并抑制PSMA表达，进而有效的抑制其增殖、迁移，以及诱导C4-2细胞凋亡。结论 新型内皮抑素/PSMA靶向性多肽对C4-2细胞具有生长抑制作用，这一研究结果为去势抵抗性前列腺癌的治疗提供新思路。

关键词： Mechanical stretching   Chronic wound   Angiogenesis   Single-cell sequencing   eNOS   NPWT   Negative pressure wound therapy   CaM   calmodulin   eNOS   endothelial nitric oxide synthase   HSP90   heat shock protein 90   Cav-1   caveolin-1   TMT   tandem mass tags   GSEA   gene set enrichment analysis   HDMECs   human dermal microvascular endothelial cells   LECs   lymphatic endothelial cells   AECs   arterial endothelial cells   VeECs   vein endothelial cells   CapECs   capillary endothelial cells   WT   wild-type   MUT   mutant   Co-IP   coimmunoprecipitation   ECL   enhanced chemiluminescence   Ch-IP   chromatin immunoprecipitation   CSD   scaffolding domain   iNOS   inducible NOS   nNOS   neuronal NOS   PP2A   protein phosphatase 2A  

摘要： Background Chronic wound pathogenesis involves impaired angiogenesis. While negative pressure wound therapy (NPWT) clinically promotes angiogenesis, its biomechanical mechanisms remain unclear. Methods A mechanical stretching model simulating NPWT was established in vitro. Multiomics approaches (single-cell sequencing, Ch-IP, Co-IP, and molecular docking) were employed to dissect HSP90-related regulatory networks. Typical molecular biological techniques are used to detect the expression of relevant proteins. Moreover, a rat dorsal wound model was used for the animal experiments. Results NPWT-induced mechanical stimulation activates the GNAS/CREB1/HSP90 axis, increasing HSP90 transcription via CREB1 nuclear translocation. Elevated HSP90 displaces Cav-1 to augment eNOS Ser1177 phosphorylation, driving angiogenesis to promote wound healing. Pharmacological or genetic disruption of GNAS/CREB1 suppresses HSP90 expression and angiogenic capacity. Conclusion This study reveals a GNAS-mediated mechanotransduction pathway that activates HSP90-dependent eNOS signaling to accelerate wound angiogenesis, suggesting novel targets for therapeutic intervention.

关键词： 奶牛子宫内膜上皮细胞   非酯化脂肪酸   沉默信息调节因子1   叉头盒蛋白O1   凋亡因子  

摘要： 旨在探究叉头盒蛋白O1（fork head box O 1， FoxO1）对高浓度非酯化脂肪酸（non-esterified fatty acids， NEFA）状态下的奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡因子的表达变化的影响。通过实时荧光定量PCR法及Western blot法评价添加激活剂白藜芦醇（resveratrol）后沉默信息调节因子(silent information regulator 1， SIRT1)的表达效果，明确奶牛子宫内膜上皮细胞中FoxO1的表达情况。加入Resveratrol和高浓度的NEFA后，检测FoxO1通路关键因子及细胞凋亡相关因子蛋白的表达变化情况。与对照组相比，添加Resveratrol上调SIRT1的蛋白和mRNA表达水平（P<0.01），下调Ac-FoxO1蛋白表达水平（P<0.01）；下调Caspase-3蛋白表达水平无显著影响（P>0.05），上调Bcl-2、Bcl-xl的蛋白表达水平（P<0.01），下调Bax和Bax/Bcl-2的蛋白表达水平（P<0.05）。与NEFA组相比，NEFA+Resveratrol组上调IGF-1、SIRT1和p-AKT蛋白表达水平（P<0.01），下调FoxO1、p-FoxO1、Ac-FoxO1、FoxO1/p-FoxO1、AKT和AKT/p-AKT蛋白表达水平（P<0.01），上调Bcl-xl和Bcl-2蛋白表达水平（P<0.01），下调Caspase-3、Bax和Bax/Bcl-2蛋白表达水平（P<0.01）。激光共聚焦检测结果显示，NEFA+Resveratrol组与NEFA组相比，抑制FoxO1的表达水平（P<0.01）。Resveratrol可有效激活SIRT1的表达，进而抑制了FoxO1的表达，降低了高浓度NEFA状态下奶牛子宫内膜上皮细胞中凋亡因子的表达水平。

关键词： 杜仲雄花   三七花   2型糖尿病   肝肾同调   磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3β信号通路   网络药理学   小鼠  

摘要： 目的 在“肝肾同调”的中医理论下，整合网络药理学预测、分子对接与动物实验验证，系统分析杜仲雄花-三七花药对调控2型糖尿病（T2DM）糖脂代谢紊乱的多靶点作用网络，揭示其潜在分子机制。方法 从中药系统药理数据库与分析平台、中国知网、维普网、万方数据知识服务平台获取杜仲雄花与三七花的活性成分，再通过有机小分子生物活性数据库、瑞士靶点预测数据库及SuperPred药物靶点预测数据库筛选、预测药物的作用靶点；基于人类基因数据库、在线人类孟德尔遗传数据库和治疗靶点数据库筛选T2DM关键基因靶点；使用Cytoscape软件，构建“成分-靶点-通路”关系网络图，利用基因本体功能富集及京都基因和基因组百科全书通路富集分析揭示相关靶基因和通路功能；随后采用分子对接验证核心成分与关键靶点的结合活性。动物实验选用自发型T2DM动物模型小鼠，正常组为6只同窝(wt/wt)小鼠。将成模的24只小鼠根据血糖及体质量分为模型组、二甲双胍组（0.26 g/kg）、杜仲雄花-三七花药对高剂量组（2.6 g/kg）、杜仲雄花-三七花药对低剂量组（1.3 g/kg），每组6只。每日灌胃1次，连续6周。每周测量体质量及空腹血糖（FBG），第5周进行口服葡萄糖耐量实试验（OGTT）。给药结束后，测量体质量、身长、肝脏质量及双侧附睾脂肪质量；使用HE染色法观察肝脏病理变化；使用比色法检测血清天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）；通过蛋白质印迹法检测肝脏组织磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）/糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）信号通路蛋白表达水平。结果 筛选出杜仲雄花-三七花药对活性成分 38 个，预测靶点 669 个，与 1 275 个T2DM 靶点取交集，获得 185个共同靶点，构建蛋白质-蛋白质相互作用网络并富集到 PI3K/AKT 信号通路。分子对接验证核心成分与 AKT1 等靶点的强结合活性，发现杜仲雄花-三七花药对可能通过β-谷甾醇等成分靶向激活 PI3K/AKT 通路，抑制 GSK3β活性。动物实验表明，与模型组比较，二甲双胍组可降低小鼠FBG及AST、ALT水平（P < 0.01），但是在体质量、Lee’s指数与附睾脂肪系数方面无明显改善；杜仲雄花-三七花药对组均可使Lee’s指数、肝脏指数与附睾脂肪系数降低（P < 0.01），其中低剂量组可减缓小鼠的体质量增长速度，高剂量组能降低小鼠FBG，改善糖耐量，降低TC、TG和LDL-C水平、提高HDL-C水平（均P < 0.01）。HE染色结果显示，二甲双胍组及杜仲雄花-三七花药对组可使模型小鼠肝细胞结构明显改善，脂肪变性减轻，其中高剂量较低剂量效果更明显。杜仲雄花-三七花药对低剂量组PI3K、磷酸化PI3K（p-PI3K）、AKT、磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β）蛋白表达增加（P < 0.05，P < 0.01），GSK-3β蛋白表达下降（P < 0.05）；高剂量组PI3K、p-PI3K、AKT、磷酸化AKT、 p-GSK-3β蛋白表达增加（P < 0.01），GSK-3β蛋白表达下降（P < 0.01）。结论 杜仲雄花-三七花药对可能通过PI3K/AKT/GSK3β通路改善模型大鼠T2DM 糖脂代谢紊乱。

关键词： 气街-络脉轴”理论   干-支耦合机制   糖尿病及其并发症   气血运行   络脉瘀阻   病机  

摘要： 糖尿病（diabetes mellitus，DM）及其并发症作为全球最严峻的公共卫生挑战之一，其病理机制涉及多系统、多层次的复杂调控网络。现代医学研究证实，DM不仅表现为以胰岛素抵抗和β细胞功能障碍为核心的糖代谢紊乱，更伴随着进行性加重的微循环障碍（包括微血管病变）和器官纤维化（大血管病变）等系统性病理改变。该文基于“气街-络脉轴”理论与干-支耦合机制，深入探讨DM及其并发症的病机与治疗。研究发现，气街作为气血运行的主干通道，其功能紊乱直接导致胰岛素抵抗和β细胞功能障碍；络脉作为气血运行的细小分支，其瘀阻是DM微血管病变和大血管并发症的关键病理环节。通过干（气街）-支（络脉）耦合机制分析，揭示了中枢代谢调控与靶器官损伤之间的内在联系。在中医药治疗方面，以“调畅气街，恢复代谢平衡”“疏通络脉，改善微循环”“协调干-支，防治并发症”的干预体系，旨在恢复气街与络脉的正常功能，协调干-支系统，从而为DM及其并发症的防治提供新的思路和方法。该研究通过构建“气街-络脉轴”理论框架，不仅为DM及其并发症的防治提供了创新的中医诊疗思路，更为推动中医药理论的现代化阐释和临床转化应用开辟了新途径，为提升DM及其并发症的防治提供了独特的理论依据和实践指导。

关键词： 环孢素滴   玻璃酸钠   干眼   治疗效果   Meta分析  

摘要： 目的 研究环孢素滴眼液联合玻璃酸钠滴眼液治疗干眼的临床效果。方法 采用复合布尔逻辑检索方式，文献检索数据库包括知网、万方、PubMed、维普、Web-of-science等，检索时间为从建库至2024年4月1日。纳入文献质量评价使用Corchrane偏倚风险评估工具，Meta分析选择Revman5.3软件，对于连续性变量计算其均数差（mean deviation， MD），对于二分类变量计算其相对危险度（relative risk， RR），另行5%置信区间计算。结果 纳入RCT共17篇，文献质量评价均为B级，泪膜破裂时间（break-up time，BUT）试验组高于对照组，17项研究组间高度异质性(I2=99%，P<0.00001)；去除较高偏移文献后，结果变为中等异质性(I2=34%，P<0.00001)，差异均有统计学意义。结论 环孢素滴眼液联合玻璃酸钠滴眼液对干眼有较好的治疗效果。

关键词： 2型糖尿病   化瘀通络灸   认知功能   胰岛素抵抗   随机对照试验  

摘要： 目的：观察化瘀通络灸对2型糖尿病认知减退患者认知功能和胰岛素抵抗的影响。方法：将90例2型糖尿病认知减退患者随机分为艾灸组和等待艾灸组，每组45例。等待艾灸组予常规降糖治疗，连续治疗12周；艾灸组在常规降糖治疗基础上，予化瘀通络灸治疗，穴取百会、神庭和大椎，每次百会反复压灸20 min，神庭和大椎均悬灸20 min，隔日1次，每周3次，共治疗12周。两组均随访12周（随访期间继续原药物降糖方案维持血糖水平），于治疗前、治疗后、随访时，观察两组患者蒙特利尔认知评估（MoCA）量表、简易智力状态检查（MMSE）量表、中文版Addenbrooke认知评估量表Ⅲ（ACE-Ⅲ）、符号数字转换测验（SDMT）量表、阿森斯失眠量表（AIS）评分及胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。结果：艾灸组患者治疗后和随访时MOCA评分、MMSE评分、ACE-Ⅲ各分项评分（包括注意力、记忆力、语言流利性、语言及视空间能力）及总分、SDMT评分均较治疗前升高（P＜0.01，P＜0.05）；等待艾灸组患者治疗后MMSE评分、ACE-Ⅲ分项评分（包括记忆力、注意力）及总分，随访时ACE -Ⅲ分项评分（包括语言、记忆力及注意力）及总分、SDMT评分均较治疗前升高（P＜0.05，P＜0.01）；艾灸组患者治疗后和随访时AIS评分较治疗前降低（P＜0.05）；两组患者治疗后和随访时HOMA-IR均较治疗前降低（P＜0.01）。艾灸组患者随访时ACE-Ⅲ注意力、记忆力分项评分及总分均较治疗后降低（P＜0.05，P＜0.01），等待艾灸组患者随访时语言分项评分及总分、SDMT评分均较治疗后升高（P＜0.01，P＜0.05）。与等待艾灸组比较，艾灸组患者治疗后、随访时MOCA评分、MMSE评分、SDMT评分、ACE -Ⅲ分项评分（包括注意力、记忆力、语言流利性）及总分均升高（P＜0.05，P＜0.01），HOMA-IR降低（P＜0.05）。结论：化瘀通络灸可有效改善2型糖尿病认知减退患者的认知功能，其机制可能与改善胰岛素抵抗指数有关。

关键词： 水通道蛋白质5   干燥综合征   Toll样受体4   髓样分化因子88   NF-κB   信号通路  

摘要： 目的：探讨水通道蛋白5（aquaporin 5，AQP5）对干燥综合征（Sj?gren syndrome，SS）大鼠Toll样受体4（Toll-like receptor 4，TLR4）/髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88，MyD88）/核因子κB（nuclear factor κB，NF-κB）信号的影响。方法：从基因表达综合数据库（Gene Expression Omnibus，GEO）中提取SS基因表达数据集GSE406611和GSE84844，使用R软件分析AQP5的mRNA表达。构建大鼠SS模型，将造模成功的大鼠随机分为SS组、SS+NC组和SS+pc组，每组各10只；取10只正常大鼠作为Normal组。Normal组、SS组、SS+NC组大鼠于颌下腺位置每日一次皮下注射10 μg的rno-pcDNA3.1-AQP5-NC，SS+pc组大鼠于颌下腺位置每日一次皮下注射10 μg的rno-pcDNA3.1-AQP5，连续注射28 d。采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）的含量，采用高通量测序确定靶点基因，采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）和Western blot检测大鼠颌下腺组织中AQP5、TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA水平和蛋白表达情况。结果：在SS数据集GSE406611和GSE84844中，AQP5的mRNA表达明显降低。与Normal组相比，SS组大鼠血清中TNF-α和IL-1β的含量明显升高，TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA和蛋白表达明显升高，AQP5的mRNA和蛋白表达明显降低；过表达AQP5后，SS+pc组大鼠血清中TNF-α和IL-1β的含量明显降低，TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA和蛋白表达明显降低，AQP5的mRNA和蛋白表达明显升高，差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论：AQP5参与SS的进展，AQP5的表达升高能明显抑制炎症性应激，减轻颌下腺组织病理损伤，这可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号的传导有关。