关键词： 脉管复康片   动脉粥样硬化   UHPLC-QE-MS   网络药理学   细胞凋亡  

摘要： 该研究基于UHPLC-QE-MS、网络药理学及动物实验探讨脉管复康片抗动脉粥样硬化（AS）的作用机制。采用UHPLC-QE-MS技术鉴定脉管复康片的有效成分，共筛选出131个化合物。通过网络药理学相关数据库获取药物靶点与疾病靶点，构建“成分-靶点-疾病”网络，交集得到418个潜在治疗靶点。对交集靶点进行蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络筛选、基因本体论（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析，结果显示主要与炎症反应、细胞凋亡过程的负调控、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信号通路等相关。对核心活性化合物和关键靶点进行分子对接，结果显示蛋白激酶B1（AKT1）与木犀草素、甘草素、芹菜素、山柰酚等有较强结合力。采用ApoE-/-小鼠高脂饲料喂养14周构建AS模型，随机分为模型组、脉管复康片高、低剂量组和阿托伐他汀组。结果显示，脉管复康片能够减少AS模型小鼠的主动脉斑块面积、斑块内脂质及泡沫细胞占比，降低血清中总胆固醇（TC）水平，降低促炎因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β和IL-6表达水平；降低主动脉斑块内细胞凋亡率，上调主动脉组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（BCL-2）表达水平，下调BCL-2相关X蛋白（BAX）、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（cleaved caspase-3）表达水平，促进PI3K、AKT的磷酸化。提示脉管复康片可能通过调节PI3K/AKT信号通路，减少斑块内细胞凋亡，降低炎症因子和血脂水平，减少AS斑块面积、斑块内脂质含量及泡沫细胞形成，从而发挥抗AS作用。

关键词： CRM197蛋白   可溶性蛋白   免疫原性   纯化   大肠杆菌   结合疫苗  

摘要： 目的 探究白喉毒素无毒突变体CRM197的可溶性表达，制备出安全有效的CRM197重组蛋白。方法 将密码子优化后的CRM197基因序列克隆到pCold II、pET-28a（+）原核表达载体中，筛选成功克隆的重组质粒并将其转化至大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞中，诱导表达后通过SDS-PAGE分析确定蛋白表达形式，同时优化重组蛋白的可溶性表达条件，再经两次Ni-NTA亲和层析纯化重组CRM197蛋白，将纯化后的重组蛋白进行小鼠免疫，使用ELISA方法测定血清中的抗体水平。结果 序列优化后的密码子适应指数（CAI）由原来的0.72提高到0.93。通过菌液PCR及双酶切鉴定，重组质粒pET-28a(+)-CRM197、pColdⅡ-CRM197均构建成功。表达鉴定结果显示，pET-28a(+)-CRM197主要为包涵体表达，pColdⅡ-CRM197主要为可溶性表达。优化pColdⅡ-CRM197可溶性表达条件，接种量为3%,IPTG浓度为0.4 mmol/L时，20℃诱导表达24 h，可显著提高可溶性目的蛋白表达量。利用Ni-NTA亲和层析纯化pColdⅡ-CRM197重组蛋白上清液，得到的目的蛋白纯度均高于98%。小鼠三次免疫后的ELISA结果显示，免疫小鼠血清中IgG、IgM、IgG1和IgG2a抗体水平均高于对照组。结论 利用pColdⅡ载体实现了CRM197重组蛋白在大肠杆菌表达系统中的可溶性表达，其纯度高、免疫原性良好，为蛋白的推广应用奠定了基础。

关键词： 灸法   痛风性关节炎   炎症反应   神经递质   尿酸代谢   骨代谢   壮医药线点灸   麦粒灸   蜂毒灸  

摘要： 痛风性关节炎的防治是当前迫切需要解决的研究热点，通过查阅国内外文献对中医学灸法治疗痛风性关节炎的作用机制进行综述。诸多动物实验研究发现，灸法可通过调节炎症因子[下调白细胞介素（interleukin，IL）-1β、IL-6、IL-8、IL-18和肿瘤坏死因子α等促炎因子趋化，上调IL-2、IL-4、IL-10、IL-12表达]与炎症相关信号通路（抑制核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3/凋亡相关斑点样蛋白/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1信号通路、Toll样受体/髓样分化因子88信号通路、环氧合酶-2/微粒体前列腺素E2合成酶-1/前列腺素E2转导途径等）减轻炎症反应，改善神经递质及疼痛介质失调发挥镇痛效应，调节肠道菌群及尿酸代谢控制尿酸水平，调节骨代谢、减轻骨破坏及维持骨组织稳态（调节转化生长因子β1、胰岛素样生长因子Ⅰ、热休克蛋白70、嘌呤能2X7受体、骨钙素抗体、骨保护素及基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶组织抑制剂表达）在痛风性关节炎的防治中发挥作用。为中医学灸法多途径防治痛风性关节炎提供了理论依据。

关键词： 岩青兰   2型糖尿病   老年脑病变   生信分析   神经炎症  

摘要： 以岩青兰化学成分为基础， 生信分析筛选岩青兰改善老年糖尿病小鼠脑神经病变的关键靶点及通路， 并通过小鼠实验进行验证， 明确其作用机制。通过Gene Cards搜集神经炎症靶点， GEO数据库筛选老年糖尿病患者脑相关差异基因 (DEGs); 用Venny软件得到岩青兰的核心成分靶点与神经炎症交集靶点为56个、与DEGs交集靶点31个; 通过STRING数据库构建蛋白相互作用 (PPI) 网络， 利用Cytoscape软件进行PPI及药物–成分–靶点网络的可视化处理， 并通过Maximum Clique Centrality (MCC) 筛选Top10核心靶点; 用DAVID数据库进行GO (gene ontology) 功能富集和KEGG (Kyoto encyclopedia of genes and genomes) 通路分析， 发现岩青兰主要通过神经炎症相关的丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)、核转录因子 (NF-κB) 等通路蛋白改善老年糖尿病神经病变; 使用分子对接软件对核心活性成分与核心靶点进行对接发现岩青兰中的绿原酸、香叶木素、山柰酚与蛋白激酶B (AKT1)、白细胞介素-1β (IL-1β)、B淋巴细胞瘤2 (BCL2)、血红素加氧酶1 (HMOX1) 等靶点均有较好的结合活性。动物实验显示， 岩青兰可以降低小鼠血糖、血脂水平， 改善肝脏组织细胞排列紊乱， 脂肪空泡的现象， 减少血清促炎细胞因子的水平; 下调脑肿瘤坏死因子α (TNF-α)、IL-1β、Toll样受体4 (TLR4)、核NF-κB蛋白的表达， 抑制小鼠脑离子钙结合衔接分子1 (Iba-1) 的过度激活， 降低NOD样受体热蛋白结构域蛋白3 (NLRP3) 炎症小体的激活。该研究初步揭示了岩青兰对老年糖尿病脑神经病变的治疗作用可能与调控TLR4/NF-κB、抑制炎症小体等炎症信号通路有关。本实验经过沈阳药科大学伦理委员会批准 (No. SYPU-IACOC-2024-1016-103)。

关键词： 糖尿病肾病   阳化气   阴成形   补肾益气   化浊通络   综述  

摘要： 糖尿病肾病是终末期肾脏病的主要原因，其防治仍是临床一大难题。中医药调控疾病具有多层次、多靶点、不良反应少的优势，对糖尿病肾病的防治具有极大的优势，但其具体作用机制有待进一步研究明确。《素问·阴阳应象大论篇》中提出：“阳化气，阴成形”理论，其是生命物质如至精至微的气及有形可察的精、血、津液等的具体化。糖尿病肾病初期阳气虚损、进展期阴浊内生、终末期脉络瘀阻的病理变化符合“阳化气，阴成形”中的阴阳理论，阳化气不足，阴成形太过，构成糖尿病肾病的核心病机。文章提出补肾益气化浊通络法为糖尿病肾病的治疗原则，希望为临床防治糖尿病肾病提供新的理论依据。

关键词： 胰岛类器官   1型糖尿病   干细胞治疗   临床转化  

摘要： 胰岛类器官（pancreatic islet organoids， PIOs）可以在体外由干细胞诱导分化得到，当受到高浓度葡萄糖刺激时能够分泌胰岛素，因此被认为是治疗1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus， T1DM）的可行方案。本文通过系统梳理PIOs治疗T1DM的前沿探索和临床应用，旨在为后续研究提供全面参考，推动该领域不断发展，加速PIOs治疗T1DM的临床应用转化，以期为患者带来更有效的治疗选择，改善其生活质量和预后。

关键词： 妊娠期糖尿病   血脂水平   不同孕期   糖代谢异常   相关性  

摘要： 目的　探讨妊娠期糖尿病（GDM）患者孕中期至晚期血脂水平与产后糖代谢异常的关系。方法　纳入2018年1月－2023年1月南京医科大学第四附属医院收治的180例GDM患者，根据产后2个月75 g口服葡萄糖耐量试验（OGTT）结果将其分为糖代谢正常组（n=55）与糖代谢异常组（n=125）。比较两组一般资料[年龄、糖尿病家族史、孕期体重增长率、吸烟史、文化程度、产次、不良孕产次、产后体重指数（BMI）、母乳喂养、产后每天锻炼时间]、血压和实验室指标[舒张压、收缩压、OGTT空腹血糖（OGTT FPG）、OGTT 2 h血糖（OGTT 2hPG）、白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白、血小板计数、糖化血红蛋白(HbA1c)、血糖标准差（SDBG）、血糖波动频数（NEGE）]及孕中期、晚期血脂水平；采用多因素logistic回归模型分析GDM患者产后糖代谢异常的独立危险因素，并对独立危险因素进行聚集性分析；采用分层交互检验分析GDM患者孕期血脂水平与糖代谢指标的关系；采用限制性立方样条（RCS）法探讨GDM患者孕晚期血脂水平与产后糖代谢异常的相关性。对GDM患者采用倾向性评分匹配法按照1:1匹配，通过多因素logistic回归分析影响其产后糖代谢异常的独立危险因素。结果　180例GDM患者产后糖代谢异常发生率为26.2%（55/180）；糖代谢异常组年龄≥35岁、伴有糖尿病家族史、孕期体重增长率≥30%、接受胰岛素治疗、母乳喂养、产后每天锻炼时间<1 h者占比，产后BMI，以及OGTT FPG、OGTT 2hPG、HbA1c、SDBG、NEGE水平高于糖代谢正常组，差异均有统计学意义（P<0.05）。与糖代谢正常组相比，糖代谢异常组孕中期、晚期TC、LDL-C、TG水平均明显增高，而HDL-C水平明显降低（P<0.05）。多元logistic回归模型分析结果显示，年龄≥35岁、伴有糖尿病家族史、孕期体重增长率≥30%、接受胰岛素治疗、TG≥4.03 mmol/L、LDL-C≥3.69 mmol/L、TC≥6.34 mmol/L、HDL-C<1.89 mmol/L是GDM患者产后糖代谢异常的独立危险因素（P<0.05）。分层交互作用分析结果显示，模型调整后TC、TG、LDL-C、HDL-C水平与HbA1c、SDBG、NEGE仍具有明显相关性（P<0.05）；RCS法分析结果显示GDM患者孕晚期TC、TG、LDL-C水平与产后糖代谢产生呈负相关，与HDL-C水平呈正相关。按倾向性评分匹配患者后，多因素logistic回归分析的结果显示，TG≥4.03 mmol/L、LDL-C≥3.69 mmol/L、TC≥6.34 mmol/L、HDL-C<1.89 mmol/L仍是影响GDM患者产后糖代谢异常的独立危险因素（P<0.05）。结论　GDM患者产后糖代谢异常与血脂水平具有相关性，临床诊疗中可重点关注，以降低GDM患者产后糖代谢异常发生率。

关键词： 饮食指导   糖尿病   临床护理  

摘要： 文章旨在探讨针对性饮食指导在糖尿病临床护理中的应用。采用随机对照试验设计,将 76 个护理对象平均分为两组:对照组实施饮护 食指导方案,普通组采用常规饮食护理。监测两组人员的空腹血糖、餐后 2 小时血糖水平变化情况及护理满意度等指标,评估干预效果。结果理 显示,与普通组相比,对照组的血糖水平改善效果更佳,护理对象空腹血糖与餐后血糖更接近正常水平,同时护理服务的满意度也更高。研究中 发现,在糖尿病临床护理中实施针对性的饮食指导措施,能够有效帮助护理对象加强血糖控制,建议在临床护理工作中重视并推广个性化的饮的 食干预方案,以优化糖尿病患者的整体管理效果。

关键词： SARS-CoV-2疫苗   腺病毒载体   细胞免疫   体液免疫  

摘要： 目的 研究融合表达新型冠状病毒（Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2）Omicron变异株受体结合域蛋白（RBD）与衣壳蛋白（N）的非复制型5型重组腺病毒的免疫原性，旨在为开发针对SARS-CoV-2 Omicron变异株的高效疫苗提供理论依据和实验基础。方法 利用重叠PCR方法获得RBDgs3N片段，同源重组得到质粒pKAd5ESRBDgs3N，重组质粒转染HEK293细胞后收获和扩增重组病毒，氯化铯密度梯度离心法纯化病毒，有限稀释分析法测定病毒滴度，Western Blot方法鉴定融合蛋白表达情况。将重组腺病毒肌注免疫BALB/c小鼠，利用间接ELISA方法和酶联免疫斑点技术检测小鼠特异性免疫应答。结果 体外纯化获得滴度为1.168×1010IU/mL的重组腺病毒AdV5-RBDgs3N。重组腺病毒体外感染HEK293细胞可成功表达RBDgs3N融合蛋白。单剂肌注免疫能显著诱导小鼠产生针对新冠野毒株（WT）和变异株（Delta,Omicron）RBD的IgG抗体，抗体滴度分别为103.677 8,103.878 5,104.454 9，针对保守的N蛋白产生的特异性抗体滴度为104.942 2。RBD特异性细胞免疫的IFN-γ水平为1 452 SFC/10～6个细胞。结论 本研究构建的RBD和N基因融合的非复制型5型重组腺病毒能在BALB/c小鼠体内分别诱导高水平的针对RBD和N蛋白的特异性抗体及RBD特异的细胞免疫，为进一步评价该重组腺病毒作为潜在新冠疫苗提供了研究基础。

关键词： 糖尿病肾病   针刺   足细胞自噬   LncRNA SOX2OT/mTORC1/ULK1通路  

摘要： 目的：观察针刺对糖尿病肾病（DKD）大鼠足细胞自噬及长链非编码核糖核酸性别决定相关基因簇2重叠转录本（LncRNASOX2OT）/雷帕霉素靶蛋白C1（mTORC1）/ Unc-51样激酶 1（ULK1）通路的影响，探究针刺降低尿蛋白的作用机制。方法：将40只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组（10只）和造模组（30只）。造模组以高脂高糖喂养联合腹腔注射链脲佐菌素（STZ）溶液方法建立DKD大鼠模型。将造模成功的20只大鼠随机分为针刺组和模型组，各10只。针刺组采用“调理脾胃针法”针刺干预，穴取双侧足三里、丰隆、阴陵泉及中脘，每次30 min，每日1次，每周5次，共干预4周。比较各组大鼠干预前后一般情况、空腹血糖（FBG）、餐后2小时血糖（2hPG）、血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）、24 h尿蛋白定量和尿液蛋白含量/血肌酐比率；干预后，采用ELISA法检测大鼠尿液足细胞损伤标志物（SPON2）水平，透射电镜观察大鼠肾组织足细胞自噬体和基底膜超微结构，TUNEL染色观察肾组织足细胞凋亡情况，Western blot法检测肾组织微血管相关蛋白 1 轻链3-Ⅱ（LC3-Ⅱ）、mTORC1、ULK1、自噬调控蛋白（Beclin-1）、螯合体1（P62）蛋白表达，实时荧光定量PCR法检测大鼠肾组织LncRNA SOX2OT表达。结果：干预后，与空白组比较，模型组大鼠出现饮食水摄入量、小便量增加并伴形体消瘦，大便稀溏等；与模型组比较，针刺组大鼠饮食水量、小便量、大便溏稀等症改善明显。与空白组比较，模型组大鼠FBG、2hPG、血SCr、血BUN、24小时尿蛋白定量、UACR、尿液SPON2升高（P＜0.01）；与模型组比较，针刺组大鼠FBG、2hPG、血SCr、血BUN、24小时尿蛋白定量、UACR、尿液SPON2降低（P＜0.01）。与空白组比较，模型组大鼠肾脏足细胞自噬小体减少、基底膜增厚；与模型组比较，针刺组自噬小体增多、基底膜增厚。与空白组比较，模型组大鼠足细胞凋亡指数（AI）升高（P＜0.01）；与模型组比较，针刺组大鼠足细胞AI降低（P＜0.01）。与空白组比较，模型组大鼠ULK1、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达降低（P＜0.01），mTORC1、P62蛋白表达升高（P＜0.01）；与模型组比较，针刺组大鼠ULK1、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达升高（P＜0.01），mTORC1、P62蛋白表达降低（P＜0.01）。与空白组比较，模型组大鼠肾组织LncRNA SOX2OT表达降低（P＜0.01）；与模型组比较，针刺组LncRNA SOX2OT表达升高（P＜0.01）。结论：“调理脾胃针法”可改善DKD大鼠肾功能，降低血糖及尿蛋白排泄，减轻足细胞损伤，提高足细胞自噬水平，其机制可能与调节肾脏LncRNA SOX2OT/mTORC1/ULK1通路相关。