关键词： 白藜芦醇   霉菌毒素   肝损伤   氧化应激   炎症反应   细胞凋亡  

摘要： 霉菌毒素(mycotoxins,MCTs)是由曲霉、镰刀菌等真菌在霉变谷物或饲料中产生的有毒次级代谢物。集约化养殖体系中,超过50%的谷物饲料原料受到MCTs污染。MCTs可经食物链进入家畜体内,引发肝脏、肾脏及免疫系统等多器官损伤,其中,肝脏作为重要的代谢和解毒器官,受到的影响最显著。典型MCTs,如黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEA)和呕吐毒素(DON),可引发肝细胞坏死、脂肪变性、炎症浸润等病理改变,严重影响家畜健康,降低养殖经济效益。白藜芦醇(resveratrol,Res)是一种源自花生、葡萄等植物的天然多酚类化合物,因其显著的抗氧化、抗炎及抗凋亡特性,近年来在缓解MCTs毒性方面显示出巨大潜力。这些功能主要是通过多条通路协同作用实现的,如在抗氧化方面,Res可通过激活Nrf2/Keap1信号通路,上调抗氧化酶(SOD、CAT等)活性,中和毒素诱发的自由基,减轻氧化应激;在抗炎方面,Res通过抑制NF-κB信号通路,上调SIRT1表达,减少促炎因子(TNF-α、IL-6)释放,缓解肝脏炎症损伤;在抗凋亡方面,Res通过调节Bcl-2/Bax值、抑制Caspase级联反应及促进线粒体自噬,抑制肝细胞凋亡,从而保护肝脏。作者系统综述了Res对MCTs致家畜肝损伤的保护作用及分子机制,旨在为Res在缓解MCTs致家畜肝损伤中的应用提供理论依据,并为其成为一种新型饲料添加剂提供科学支持。

关键词： 糖尿病   睡眠障碍   百合地黄汤   耳穴压豆   血糖水平   睡眠质量  

摘要： 目的探讨在糖尿病合并睡眠障碍患者的治疗中采用百合地黄汤加减联合耳穴压豆的临床疗效。方法68例糖尿病合并睡眠障碍患者,采用随机数字表法分为对照组和研究组,每组34例。对照组采取常规西药治疗,研究组在常规西药治疗的基础上服用百合地黄汤加减配合耳穴压豆。对比两组患者治疗效果、血糖指标、睡眠质量、生活质量、中医证候积分。结果研究组治疗总有效率94.12%较对照组的73.53%高(P<0.05)。治疗后,研究组空腹血糖(FPG)(5.21±0.85)mmol/L、餐后2 h血糖(2 h PG)(8.21±1.08)mmol/L、糖化血红蛋白(HbA1c)(6.31±0.58)%较对照组的(6.42±1.08)mmol/L、(9.17±1.52)mmol/L、(7.82±1.03)%低(P<0.05)。治疗后,研究组匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)评分(6.82±0.65)分较对照组的(10.36±1.13)分低,健康状况调查问卷(SF-36)评分(85.13±4.55)分较对照组的(79.45±4.32)分高(P<0.05)。治疗后,研究组心烦不寐积分(1.34±0.18)分、心悸多梦积分(1.18±0.23)分、潮热盗汗积分(0.89±0.13)分、舌红少津积分(0.76±0.11)分较对照组的(2.13±0.35)、(2.05±0.29)、(1.13±0.21)、(1.06±0.16)分低(P<0.05)。结论在糖尿病合并睡眠障碍患者的治疗中服用百合地黄汤加减并配合耳穴压豆可改善其血糖水平,缓解临床症状,提高睡眠质量,疗效显著。

关键词： 猫疱疹病毒(FHV)   gB蛋白   gD蛋白   抗原表位预测   多表位疫苗  

摘要： 【目的】设计并开发针对猫疱疹病毒1型(FHV-1)gB、gD蛋白的多表位纳米颗粒疫苗,为FHV-1多表位纳米颗粒疫苗的抗原筛选与优化提供理论依据。【方法】本研究利用多种生物信息学工具对FHV-1 gB、gD蛋白的理化性质、跨膜结构、N-糖基化位点、二级结构、B细胞抗原表位、免疫原性和保守性进行分析。构建重组质粒pET20b-FBDF,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达。经Ni柱亲和层析纯化及透析浓缩处理后得到重组蛋白FBDF,通过SDS-PAGE进行鉴定,BCA法测定蛋白含量,透射电子显微镜(TEM)和动态光散射(DLS)观察自组装纳米颗粒的形态和粒径大小。将制备的FHV-1表位纳米颗粒疫苗皮下免疫BALB/c小鼠,评价其免疫原性。【结果】FHV-1 gB、gD蛋白的多个氨基酸域均表现出优异的亲水性、抗原性、结构柔韧性和表面可及性特征。FHV-1 gB、gD蛋白分别存在11和5个潜在的糖基化位点;蛋白二级结构均主要由α-螺旋、β-折叠、β-转角及无规则卷曲组成,其中无规则卷曲占比最高;分别产生17和6个B细胞线性表位。筛选出3个高抗原性和保守性的优势抗原表位:gB_(1):197-208,gB_(2):314-325,gD:221-232。将表位使用柔性连接子(GGGGS)与Ferritin相连,经密码子优化后,构建pET20b-FBDF重组质粒。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白FBDF在30℃、0.5 mmol/L IPTG诱导16 h时成功可溶性表达。TEM和DLS结果显示,纯化后的FBDF蛋白可自组装成直径为16.55 nm的纳米颗粒。小鼠免疫结果显示,三免后14 d小鼠血清中抗体滴度达到峰值,其中FBDF+Al(OH)_(3)、FBDF+CpG、FRCPV组抗体滴度分别为1∶680000、1∶15600、1∶3500,显著高于PBS和Ferritin组(P<0.05)。接种FBDF可诱导小鼠产生较高水平的γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)和中和抗体,中和抗体水平最高可达1∶2^(5)。【结论】本研究构建的多表位纳米颗粒疫苗FBDF具有较好的免疫原性,可诱导BALB/c小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答,为FHV-1多表位疫苗的研究奠定基础。

关键词： 毛蕊异黄酮   双酚A   睾丸损伤   内质网应激  

摘要： 【目的】毛蕊异黄酮(calycosin,CAL)是从黄芪等植物中提取的天然异黄酮化合物,具有抗氧化、抗炎等多重药理活性。试验旨在探究CAL缓解环境内分泌干扰物双酚A(bisphenol A,BPA)对睾丸功能损伤的作用机制。【方法】选取30只6周龄雄性昆明小鼠作为模型动物,分为空白对照组、BPA组和BPA+CAL组,每组10个重复。BPA、BPA+CAL组小鼠每天灌胃50 mg/kg BPA,1周后BPA+CAL组小鼠每天灌服40 mg/kg CAL,空白组小鼠每天灌胃同等体积玉米油。期间每天测量小鼠体重,灌胃处理后第22天,各组小鼠眼球采血,通过ELISA检测血清中睾酮(testosterone,T)、雌二醇(estradiol,E2)含量,脱颈处死后分离睾丸组织进行HE染色,提取睾丸组织蛋白样品,对内质网应激相关蛋白(Bip、ATF6、p-PERK、eIF2α和ATF4)表达量进行Western blotting分析。【结果】①BPA组小鼠体重在部分试验天数显著低于空白对照组(P<0.05),而BPA+CAL组小鼠体重有高于BPA组的趋势(P>0.05)。②BPA组小鼠睾丸重量显著低于空白对照组(P<0.05),CAL显著改善了BPA导致的睾丸重量降低(P<0.05)。与空白对照组相比,BPA组小鼠睾丸组织中存在明显的损伤性结构变化,但CAL治疗后小鼠睾丸组织结构损伤较BPA组明显改善。③与空白对照组相比,BPA组小鼠血清中T激素水平显著升高(P<0.05),而E2激素水平显著降低(P<0.05);与BPA组相比,BPA+CAL组小鼠血清中T激素水平显著降低(P<0.05),而E2激素水平显著升高(P<0.05)。④Western blotting分析结果显示,BPA组小鼠睾丸组织中Bip、ATF6、p-PERK、eIF2α和ATF4等内质网应激相关蛋白表达水平显著高于空白对照组(P<0.05),而BPA+CAL组小鼠上述蛋白表达水平与BPA组相比有下调趋势,表明CAL可能通过抑制内质网应激反应减轻BPA对睾丸组织的生殖损害。【结论】CAL可缓解BPA暴露导致的小鼠睾丸组织损伤,调节性激素稳态平衡,抑制睾丸组织内质网应激反应,进而改善小鼠生殖功能。

关键词： 心脏骤停后心肺复苏   全脑缺血/再灌注损伤   sigma-1受体   线粒体   内质网应激  

摘要： 目的初步探索sigma-1受体(Sig-1R)对心脏骤停复苏后大鼠脑组织功能的影响。方法将大鼠随机分为假手术组(sham组,n=20)、复苏后6 h(PR 6 h组,n=20),12 h(PR 12 h组,n=20)和24 h组(PR 24 h组,n=20)。后3组以窒息法诱导大鼠心脏骤停,心脏骤停6 min后进行心肺复苏。分别于复苏后6、12和24 h对大鼠进行神经功能缺损评分;之后处死大鼠,Western blot及免疫组化检测脑组织中Sig-1R蛋白、线粒体功能指标、内质网应激指标、细胞凋亡指标表达,并评估Sig-1R与线粒体、内质网应激和凋亡指标的相关性。结果与假手术组相比,大鼠在PR 6、12和24 h时,神经功能缺损评分、Sig-1R蛋白表达、脑组织腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)浓度和线粒体膜电位(MMP)水平逐渐降低(P<0.05);CHOP蛋白、激活型cleaved caspase-12和cleaved caspase-3蛋白表达均持续升高(P<0.05)。此外,Sig-1R分别与脑组织内质网应激和细胞凋亡呈负相关(P<0.05)、与线粒体膜电位水平呈正相关(P<0.05)。结论大鼠脑组织Sig-1R蛋白表达与心肺复苏后脑损伤相关,可能通过调节线粒体功能和内质网应激发挥神经元保护作用。

关键词： 2型糖尿病   自我管理认知   治疗方案  

摘要： 目的 探讨3种不同治疗方案的2型糖尿病患者自我管理认知水平的差异并分析其影响因素。方法 便利抽取515例就诊于重庆市两所三甲医院内分泌门诊的2型糖尿病患者,采用量表进行调查。根据治疗方式的不同将患者分为口服药物组(OADs组)、口服药物+胰岛素注射组(OADs+Ins组)和口服药物+胰高血糖素样肽-1受体激动剂注射组(OADs+GLP-1组)。采用方差分析比较3组患者自我管理认知水平的差异,使用多元线性回归分析3组患者自我管理认知水平的影响因素。结果 共485例患者纳入研究,OADs+Ins组和OADs+GLP-1组2型糖尿病患者自我管理认知量表总分高于OADs组(P<0.05);OADs组自我管理认知受年龄、文化程度、体重指数及2型糖尿病患者疾病知识掌握情况的影响,OADs+Ins组自我管理认知与居住方式、病程及2型糖尿病患者疾病知识掌握情况有关,OADs+GLP-1组的自我管理认知受家庭人均月收入和糖尿病家族史影响(P<0.05)。结论 不同治疗方案的2型糖尿病患者自我管理认知存在群体差异,应提高对口服药物治疗患者的关注度,建立分类指导系统,以提高患者疾病认知水平,改善其治疗依从性。

关键词： 芒柄花素   髓核间充质干细胞   炎症   椎间盘退变   核因子κB  

摘要： 背景:芒柄花素具有抗炎、抗氧化能力,但其对髓核间充质干细胞是否有保护作用尚不清楚。目的:探讨芒柄花素对炎症微环境下髓核间充质干细胞的作用及机制。方法:①从SD大鼠尾椎椎间盘中提取髓核间充质干细胞,流式细胞术鉴定间充质干细胞表面标志;②CCK-8法检测脂多糖、芒柄花素对髓核间充质干细胞增殖活力的影响,以确定后续处理细胞应用的芒柄花素浓度;③在DMEM/F-12完全培养基中添加5μg/mL脂多糖模拟炎症微环境,然后用不同浓度芒柄花素处理髓核间充质干细胞24 h,通过Western blot、实时荧光定量PCR、免疫荧光检测炎症标志物表达,Western blot检测核因子κB信号通路蛋白水平。结果与结论:①贴壁培养的髓核间充质干细胞呈梭形,生长状态良好,流式细胞术结果显示间充质干细胞表面标志物CD29、CD44、CD90呈阳性,造血干细胞表面标志物CD34、CD45呈阴性。②12.5,25,50,100,200μmol/L芒柄花素处理24 h对髓核间充质干细胞无明显增殖抑制效果。与脂多糖组相比,12.5,25,50μmol/L芒柄花素处理24 h后髓核间充质干细胞活力显著提高,因此后续选用12.5,25,50μmol/L为芒柄花素低、中、高浓度处理髓核间充质干细胞。③与脂多糖组相比,芒柄花素低、中、高浓度组髓核间充质干细胞中基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶13、肿瘤坏死因子α蛋白和mRNA表达均明显降低(P<0.05),且具有剂量依赖性。④与脂多糖组相比,芒柄花素低、中、高浓度组髓核间充质干细胞中磷酸化核因子κB和磷酸化核因子κB抑制蛋白的表达显著降低(P<0.05),且具有剂量依赖性。上述结果说明芒柄花素可能通过抑制核因子κB信号通路减轻脂多糖诱导的大鼠髓核间充质干细胞炎症。

关键词： 非动脉炎性前部缺血性视神经病变   针刺   中药   随机对照试验  

摘要： 目的系统评价针刺联合中药治疗非动脉炎性前部缺血性视神经病变(NAION)的临床疗效及证据等级。方法检索PubMed、Web of Science、Embase、中国知网、万方、维普、中国生物医学文献数据库中应用针刺联合中药治疗NAION的文献,检索时间为建库至2024年1月31日。由2名研究者按纳入与排除标准进行筛选,提取相关信息、数据和结局指标[总有效率、平均视野缺损(MD)、最佳矫正视力(BCVA)、平均视野敏感度(MS)、视网膜神经纤维层(RNFL)厚度],采用Cochrane协作网的风险偏倚评估工具评估纳入研究的方法学的质量,GRADE proGDT软件对结局指标进行证据分级推荐标准(GRADE)评价,RevMan 5.4软件进行数据分析。结果共纳入16项研究,1,027例患者(1,138只眼)。其中,试验组522例(586只眼)均以针刺联合中药为主要疗法,对照组505例(552只眼)采用西药或中药治疗。Meta分析结果表明,试验组在总有效率[OR=3.600,95%CI(2.550,5.080),Z=7.300,P=0.000]、平均视野缺损[MD=-2.940,95%CI(-4.190,-1.690),Z=4.600,P=0.000]、BCVA[MD=0.080,95%CI(0.040,0.110),Z=4.380,P=0.000]、平均视野敏感度[MD=2.070,95%CI(1.010,3.130),Z=3.830,P=0.000]、RNFL厚度[MD=12.380,95%CI(8.150,16.610),Z=5.730,P=0.000]方面均优于对照组。GRADE评价显示,总有效率为中级质量证据,RNFL、BCVA作为结局指标为低质量证据,视野指标(MS、MD)为极低质量证据。结论针刺联合中药治疗NAION较单纯西药、中药相比,能有效提升患者视力,扩大视野,是值得推广的联合疗法。

关键词： 磷酸西格列汀   格列本脲   2型糖尿病   药效学   血糖控制  

摘要： 目的分析联合应用磷酸西格列汀与格列本脲治疗2型糖尿病患者的药效学及血糖控制效果。方法研究对象选取2型糖尿病患者130例,入院治疗时间均为2022年1月~2023年12月,入院后根据治疗方案的差异性将其分成两组。对照组(n=65例)仅采用格列本脈治疗,研究组(n=65例)则接受磷酸西格列汀与格列本脈联用治疗。比较两组的Nesfatin-1及视黄醇结合蛋白4(RBP4)水平,胰岛细胞功能,血糖控制效果,并发症发生情况。结果研究组治疗后的Nesfatin-1(3.92±0.88)μg/L、RBP4(8.73±2.14)mg/L均明显低于对照组的(4.71±1.32)μg/L、(11.41±2.75)mg/L(P<0.05)。与治疗前相比,两组治疗后的胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)、空腹胰岛素(FINS)均明显升高,而胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)则明显降低(P<0.05);研究组治疗后的HOMA-β(5.79±0.93)、FINS(10.12±3.03)mU/L均明显高于对照组的(4.83±0.72)、(8.87±2.71)mU/L,而HOMA-IR(2.06±0.88)则明显低于对照组的(2.88±1.21)(P<0.05)。与治疗前相比,两组治疗后的糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 h PG)水平均明显降低(P<0.05);研究组治疗后的HbA1c(6.45±0.38)%、FPG(5.68±0.41)mmol/L、2 h PG(8.27±1.62)mmol/L均明显低于对照组的(9.16±0.94)%、(7.52±0.83)mmol/L、(15.61±2.17)mmol/L(P<0.05)。与对照组相比,研究组的糖尿病肾病、心血管并发症、低血糖发生率均更低(P<0.05)。结论联合应用磷酸西格列汀与格列本脲治疗2型糖尿病患者能取得显著疗效,能对胰岛细胞功能进行显著改善,让胰岛素抵抗的发生风险明显降低,显著控制血糖水平,而且并发症少,具有较高的安全性,值得推广。

关键词： 当归芍药散   神经炎症   血管性痴呆   环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)-干扰素基因刺激因子(STING)  

摘要： 目的:探讨当归芍药散改善血管性痴呆(VaD)中的抗炎作用及作用机制。方法:70只8周龄的C57BL/6J雄性小鼠,并将其随机分为7组,即空白组,模型组,假手术组,阳性药组(多奈哌齐10 mg·kg^(-1))、当归芍药散水煎剂低、中、高剂量组(12、24、36 g·kg^(-1)生药),每组10只。给药结束后进行行为学评估和脑血流检测,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组大脑组织的干扰素-α(IFN-α)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、C-X-C基序趋化因子配体10(CXCL10)水平变化,苏木素-伊红(HE)染色观察当归芍药散对海马形态的影响,转录组学预测当归芍药散改善神经炎症的潜在机制,并用蛋白免疫印迹法(Western blot)、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)验证。结果:与空白组、假手术组比较,VaD模型小鼠在新物体识别实验的识别指数、Morris水迷宫实验目标象限的运动路程和时间及穿越平台次数下降(P<0.05,P<0.01),脑血流、突触后密度蛋白95(PSD95)、闭合蛋白(Occludin)蛋白表达下降(P<0.05,P<0.01),空白组与假手术组之间比较差异无统计学意义。与模型组比较,DSS各剂量组对新物体识别指数、在目标象限的路程比、时间比及穿越平台次数、脑血流增加(P<0.05,P<0.01)。在脑组织损伤相关蛋白表达和炎症因子含量水平中,当归芍药散中剂量组效果最佳,表现为PSD95、Occludin蛋白表达明显升高(P<0.05),IFN-α、TNF-α、IL-6显著降低(P<0.01)。海马HE染色发现,VaD模型小鼠出现细胞丢失、细胞排列紊乱等病理表现,DSS各剂量组给药后可以改善海马区的病理变化。转录组学结果提示,干扰素调节因子7(IRF7)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)、骨髓基质细胞抗原2(BST2)是空白组、当归芍药散水煎剂中剂量组相对于模型组出现下调的差异基因。同时在KEGG富集通路发现,RIG-Ⅰ样受体信号通路、Toll样受体信号通路、细胞质DNA传感通路及下游的STING均是影响IFN表达的上游信号通路。Real-time PCR结果显示,与假手术组比较,模型组的环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)、干扰素基因刺激蛋白(STING)、IRF7、STAT3、BST2的mRNA表达量明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,当归芍药散水煎剂中剂量组给药后各mRNA表达量明显下降(P<0.05,P<0.01)。Western blot结果显示,与假手术组比较,模型组的cGAS、STING、磷酸化(p)-IRF7、p-STAT3、BST2蛋白相对表达量明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,当归芍药散水煎剂中剂量组的cGAS、STING、p-IRF7、p-STAT3、BST2蛋白明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论:当归芍药散抑制cGAS-STING/IRF7/STAT3介导的神经炎症,是改善血管性痴呆模型小鼠认知障碍的关键机制。