关键词:
加味桂枝茯苓丸
糖尿病肾病
自噬
网络药理学
动物实验
摘要:
目的基于网络药理学及实验验证探究加味桂枝茯苓丸调控自噬治疗糖尿病肾病(DKD)的作用机制。方法通过TCMSP数据库筛选加味桂枝茯苓丸活性成分及作用靶点,GeneCards、TTD、DrugBank、PharmGKB数据库获取DKD相关自噬靶点,利用STRING网站构建蛋白相互作用网络,DAVID数据库进行GO和KEGG通路富集分析,采用AutoDock Tools 1.5.7对关键成分与核心靶点进行分子对接。制备DKD大鼠模型,将大鼠随机分为正常组、模型组、缬沙坦组(50 mg/kg)及加味桂枝茯苓丸低、中、高剂量组(9.9、19.8、39.6 g/kg),并予相应干预,连续8周。记录大鼠体质量、饮水量,计算肾脏指数,检测空腹血糖、24 h尿蛋白总量(24 hUTP)及尿白蛋白/肌酐比值(UACR),HE染色、Masson染色观察肾组织形态,Western blot检测肾组织AMPK/FOXO1通路p-AMPK、AMPK、FOXO1及自噬标志物Beclin-1、p62蛋白表达,实时荧光定量PCR检测肾组织AMPK、FOXO1 mRNA表达。结果筛选出加味桂枝茯苓丸活性成分146个、治疗DKD的主要靶点33个,核心靶点为FOXO1、BCL2、TP53、PTEN,KEGG通路富集分析提示,AMPK/FOXO信号通路、AGE-RAGE及胰岛素信号通路可能起核心调控作用;加味桂枝茯苓丸可显著降低DKD大鼠体质量,减少饮水量,降低肾脏指数,降低空腹血糖及24 hUTP、UACR(P<0.05,P<0.01),改善肾组织病理损伤,升高AMPK、FOXO1、Beclin-1蛋白表达及AMPK、FOXO1 mRNA表达(P<0.05),降低p62蛋白表达(P<0.05)。结论加味桂枝茯苓丸可能通过调控AMPK-FOXO1-自噬轴发挥治疗DKD的作用。