关键词:
高尿酸血症
肾小管上皮细胞
焦亡
炎性损伤
谷胱甘肽S转移酶μ3
摘要:
为探讨谷胱甘肽S转移酶μ3(glutathione S-transferase mu 3,GSTM3)对肾小管上皮细胞HK-2焦亡及高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)肾脏炎症的调控作用,利用GSE186871数据集筛选HUA小鼠与正常小鼠肾脏差异表达基因。将小鼠分为正常组、模型组、正常+腺病毒包装的shRNA(正常+Ad-sh-NC)组、模型+Ad-sh-NC组(简称Ad-sh-NC组)和模型+腺病毒包装的shRNA GSTM3组(简称Ad-sh-GSTM3组)。将HK-2细胞分为对照组、模型组、对照+Ad-sh-NC组、Ad-sh-NC组和Ad-sh-GSTM3组。采用CCK-8法检测细胞存活率,H-E染色观察肾脏病理,生化分析仪检测血清尿酸(uric acid,UA)、肌酐(creatinine,Cr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平,ELISA检测IL-1β和IL-18水平,Western blotting检测GSTM3、Caspase-1、NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NOD-like receptor family pyrin domain-containing protein 3,NLRP3)、GSDMD(gasdermin D)-N及Cleaved GSDMD-N表达,免疫组化染色检测肾脏GSTM3和GSDMD-N表达。结果显示,与正常组比较,模型组小鼠肾小管肿胀,局部炎症细胞浸润,肾脏组织GSTM3、Caspase-1、NLRP3、GSDMD-N和Cleaved GSDMD-N蛋白表达显著增加(P<0.05),血清Cr、BUN、UA、IL-1β和IL-18水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,Ad-sh-GSTM3组小鼠肾小管损伤减轻,血清Cr、BUN、UA、IL-1β和IL-18水平显著降低(P<0.01),肾脏组织GSTM3、Caspase-1、NLRP3、GSDMD-N和Cleaved GSDMD-N蛋白表达显著减少(P<0.05)。与对照组HK-2比较,模型组HK-2细胞存活率显著降低(P<0.01),上清液中IL-1β和IL-18水平显著升高(P<0.01),细胞中GSTM3、Caspase-1、NLRP3、GSDMD-N和Cleaved GSDMD-N蛋白表达显著增加(P<0.01);与模型组比较,Ad-sh-GSTM3组HK-2细胞存活率显著升高(P<0.01),上清液中IL-1β和IL-18水平显著降低(P<0.01),细胞中GSTM3、Caspase-1、NLRP3、GSDMD-N和Cleaved GSDMD-N蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。由此,抑制GSTM3可有效抑制肾小管上皮细胞焦亡,减轻HUA引起的肾脏炎性损伤。