关键词： 川芎嗪   PI3K/Akt/NF-_(κ)B信号通路   腰椎间盘突出症   脊髓炎症   大鼠  

摘要： 目的:探讨川芎嗪(TMP)对腰椎间盘突出症(LDH)大鼠脊髓炎症及磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸激酶/核因子-_(κ)B(PI3K/Akt/NF-_(κ)B)信号通路的影响。方法:采用随机数字表法将大鼠分为对照组(Control组)、腰椎间盘突出症组(LDH组)、TMP低、高剂量组(TMP-L、TMP-H组)和TMP高剂量+PI3K抑制剂组(TMP-H+LY294002)。采用自体髓核移植法构建LDH大鼠模型,造模后给予相应药物处理。给药结束后,采用爪触觉测试仪和足底热刺激仪检测各组大鼠疼痛阈值;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠背根神经节组织形态学变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠脊髓背角组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)水平;免疫组化检测脊髓背角组织离子钙接头蛋白1(Iba-1)和c-Fos表达;采用Western blot检测PI3K/Akt/NF-_(κ)B信号通路相关蛋白表达并计算p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt和p-NF-_(κ)B p65/NF-_(κ)B p65的比值。结果:干预前24 h,LDH组较Control组机械刺激缩足反射阈值(PWMT)和热刺激缩足反射潜伏期(PWTL)降低(P<0.05);干预后24 h,LDH组较Control组神经元细胞核偏移严重,核仁模糊,大量炎性细胞浸润,细胞肿胀明显,PWMT、PWTL、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt降低,TNF-α、IL-1β和IL-6水平及Iba-1、c-Fos、p-NF-_(κ)B p65/NF-_(κ)B p65表达升高(P<0.05);TMP-L和TMP-H组较LDH组神经元细胞核偏移现象减轻,核仁逐渐清晰,细胞肿胀及炎性细胞浸润明显减少,PWMT、PWTL和p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt依次升高,TNF-α、IL-1β和IL-6水平及Iba-1、c-Fos和p-NF-_(κ)B p65/NF-_(κ)B p65表达依次降低(P<0.05);TMP-H+LY294002组较TMP-H组神经元病理损伤加重,核偏移明显,核仁模糊,细胞肿胀及炎性细胞浸润明显,PWMT、PWTL和p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt降低,TNF-α、IL-1β和IL-6水平及Iba-1、c-Fos和p-NF-_(κ)B p65/NF-_(κ)B p65表达升高(P<0.05)。结论:TMP可抑制小胶质细胞激活和Iba-1、c-Fos表达,改善LDH大鼠脊髓炎症,其机制可能与调节PI3K/Akt/NF-_(κ)B信号通路有关。

关键词： 高危人乳头瘤病毒   L1蛋白   L2蛋白   宫颈癌   自噬  

摘要： 自噬是细胞用来维持体内平衡的一种自我消耗机制,部分研究提示,高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papillomavirus,HR-HPV)通过作用于宿主细胞自噬促进宫颈癌的发生。HR-HPV具有将病毒基因组整合到宿主DNA中进而感染宿主细胞的能力,HR-HPV L1、L2蛋白协助病毒进入细胞,并通过与靶细胞膜上的细胞表面受体相互作用激活PI3K/AKT/mTOR信号通路以抑制自噬过程,使得病毒颗粒不间断地向细胞内运输。HR-HPV L1、L2蛋白可在细胞质中表达并转移到细胞核,通过影响细胞自噬协助病毒逃避免疫监视。虽然目前已有针对HR-HPV L1、L2蛋白的HPV预防性疫苗,但明确HR-HPV L1、L2蛋白对宫颈癌自噬具体的调节方式,或能为宫颈癌的防治拓展新思路。

关键词： 慢性乙型肝炎   肝硬化   双歧杆菌三联活菌胶囊   肝纤维化  

摘要： 目的 探讨活菌制剂在慢性乙型肝炎(CHB)合并肝硬化(LC)患者中的应用效果。方法 选取2022年1月—2023年1月我院收治的80例CHB合并LC患者,采用随机数字表法将其分为对照组和观察组(每组各40例)。两组应用不同的治疗方案,对比各项指标。结果 观察组总有效率更高;两组治疗后的Child-Pugh评分、乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)定量、血清各指标水平均降低,且观察组均优于对照组(均P<0.05)。结论 双歧杆菌三联活菌胶囊治疗CHB合并LC有利于改善患者肝纤维化状态及肝脏储备功能,同时抑制炎症反应。

关键词： 酯蟾毒配基   Neddylation修饰   细胞增殖   细胞凋亡  

摘要： 目的:鉴定中药来源通过靶向抑制拟素化(Neddylation)-Cullin-Ring泛素连接酶(CRL)通路发挥抗肺癌效应的活性成分。方法:利用酯蟾毒配基(RBG)处理肺癌细胞A549和H1299。通过三磷酸腺苷(ATP)发光检测试剂盒(ATPlite)进行细胞增殖实验确定RBG对肺癌细胞的半数抑制浓度(IC50),细胞计数试剂盒(CCK-8)进行细胞增殖实验检测其抑制肺癌细胞增殖能力;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(AnnexinⅤ-FITC/PI)染色、流式细胞术检测其诱导肺癌细胞凋亡情况;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测其引起肺癌细胞相关死亡标志物表达情况。结果:ATPlite实验确定RBG在A549和H1299的IC50分别为0.136 6μmol/L和0.221 4μmol/L;CCK-8检测结果显示RBG显著抑制肺癌细胞生长;AnnexinⅤ-FITC/PI染色结果显示,RBG诱导肺癌细胞发生显著凋亡;Western blot结果显示,RBG显著抑制Neddylation关键催化酶的表达和Cullins蛋白家族的Neddylation修饰,并引起CRL经典底物佛波醇-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯诱导蛋白1(Noxa)、凋亡标志物蛋白剪切的多聚ADP核糖聚合酶(CleavedPARP)和DNA损伤应答相关蛋白磷酸化H2AX(p-H2AX)等的显著积聚。结论:RBG通过下调Neddylation关键催化酶表达抑制CRL泛素连接酶活性,导致DNA损伤应答和细胞凋亡,从而杀伤肺癌细胞。

关键词： 牙髓炎   细胞焦亡   线粒体功能   活性caspase-3  

摘要： 目的:探讨细胞焦亡在牙髓炎中的表达和调控机制。方法:利用GSE77459和GSE92681分析细胞死亡在牙髓炎中的激活情况。收集牙髓炎(有感染)和健康(无感染)的牙髓组织和龈沟液样本(n=10),通过RT-qPCR和Western blot检测GSDMD、NLRP3和caspase-1以及焦亡蛋白的水平;通过ELISA检测IL-1β和IL-18水平;通过探针法检测活性氧(ROS)和线粒体膜电位水平。结果:GSE77459和GSE92681中牙髓炎患者的细胞焦亡水平均显著高于对照组(P<0.05)。RT-qPCR和Western blot检测发现,与对照组比较,GSDMD、NLRP3和caspase-1在牙髓炎中的表达显著升高(P<0.05);IL-1β、IL-18、ROS和线粒体膜电位水平在牙髓炎中显著升高(P<0.05);活性caspase-3、caspase-8和caspase-9的水平显著升高(P<0.05)。结论:牙髓炎中细胞焦亡水平升高促进炎症水平可能与线粒体功能障碍有关。

关键词： 输卵管炎性不孕   通管方   细胞凋亡   PI3K/Akt   ROS  

摘要： 目的:探究通管方含药血清对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症的影响,从而明确通管方治疗输卵管炎性不孕的细胞机制。方法:选用脂多糖(LPS)刺激RAW264.7巨噬细胞建立体外模型,检测细胞氧化应激ROS水平、细胞凋亡水平和PI3K/Akt信号通路蛋白表达。CCK-8检测通管方含药血清对细胞炎症的影响。将细胞分为对照组、LPS炎症细胞模型组和不同浓度的通管方含药血清处理LPS炎症细胞模型组。qPCR检测各组细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达水平。免疫荧光和Western blot检测PI3K/Akt信号通路的磷酸化水平,同时检测细胞凋亡基因Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白水平。利用Hoechst 33342/PI染色和流式细胞术检测通管方含药血清对细胞凋亡的影响。利用DCFH-DA探针检测通管方含药血清对细胞ROS含量的影响。结果:①通管方含药血清减轻LPS对细胞的损伤,具有剂量依赖性;②通管方含药血清降低LPS诱导的促炎细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α的产生;③通管方含药血清减少了LPS诱导的细胞内ROS产生;④通管方含药血清预处理激活了PI3K/Akt信号通路;⑤通管方含药血清促进了细胞凋亡。结论:通管方含药血清处理可以减轻细胞损伤和炎症反应,并通过激活PI3K/Akt信号通路和促进细胞凋亡来保护细胞免受LPS的损伤,进一步降低细胞炎症水平。

关键词： 脑梗死   炎症反应   TNFSF15   氧化应激  

摘要： 目的:探究肿瘤坏死因子配体超家族成员-15(TNFSF15)是否能够抑制小鼠脑梗死后的炎症反应、氧化应激及脑损伤。方法:基于小鼠的脑梗死模型,通过腹腔注射TNFSF15组,利用行为学测试、Nissl染色、TUNEL染色、免疫组织化学染色及RT-PCR评估梗死灶相关情况。结果:相比于生理盐水组,TNFSF15明显改善脑梗死后小鼠的行为学评分,在转角测试中,TNFSF15组小鼠向左转身的频率明显降低(62.50%VS 68.00%,P<0.05);在黏合剂去除试验中,TNFSF15组的小鼠去除右前爪上黏性胶布的时间明显减少(20.0s VS 23.2s,P<0.01);TNFSF15明显减少脑梗死体积(13.57mm^(3) VS 20.57mm^(3),P<0.01);显著抑制梗死灶周围神经元的凋亡(24.75%VS 40.38%,P=0.003);明显抑制巨噬细胞的浸润(14.4%VS 7.7%,P<0.01);RT-PCR证实,TNFSF15增加抗氧化酶基因(GPX1、SOD1)的表达,减少NADPH氧化酶基因(NOX2、p22phox)的表达。结论:TNFSF15可能是通过调节小鼠脑梗死后的氧化应激反应,改善脑梗死后小鼠的行为学评分,减少梗死灶面积和体积,抑制梗死灶周围神经元的凋亡,抑制巨噬细胞的浸润。

关键词： 糖尿病足   生肌三法   煨脓长肉  

摘要： 糖尿病足作为糖尿病最严重的慢性并发症之一,因其致残、致死等后果,给个人、家庭以及公共卫生系统带来沉重的心理、陪护以及经济负担。煨脓长肉理论在中医外科领域被广泛应用,在创面修复中具有重要意义。吕培文基于煨脓长肉理论,扩大其应用范围,结合生肌三法,通过内服及外用中药,改善患者全身状态,增加糖尿病足局部抗菌能力,改善局部组织细胞功能,调动机体主动修复创面的能力,促进肉芽生长,避免有限手术。

关键词： 长链非编码RNA-EPS   BV-2细胞   牙龈卟啉单胞菌脂多糖   炎症反应  

摘要： 目的:探究基因间区长链非编码RNA-EPS(long intergenic non-coding RNA-EPS,lincRNA-EPS)对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.g-LPS)诱导下小胶质细胞炎症反应的影响。方法:体外用P.g-LPS刺激小鼠小胶质细胞系(BV-2细胞),实时定量聚合酶链反应(real‐time quantitative polymerase chain reaction,RT‐qPCR)检测lincRNA-EPS的表达变化。通过质粒转染构建lincRNA-EPS过表达的BV-2细胞,划痕实验观察lincRNA-EPS过表达对P.g-LPS诱导下BV-2细胞迁移能力的影响,RT‐qPCR、酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)及蛋白质印迹法检测其炎症相关基因白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、精氨酸酶-1(arginase-1,Arg1)、核因子κB蛋白家族成员p65(nuclear factor kappa B protein family member p65,NF-κB p65)及磷酸化p65(phosphorylated p65,pp65)的mRNA和蛋白表达水平变化。免疫荧光染色法观察lincRNA-EPS过表达后BV-2细胞中p65的亚细胞定位。结果:对BV-2细胞进行体外P.g-LPS诱导后,lincRNA-EPS的表达下调(P<0.05)。过表达lincRNA-EPS可显著抑制P.g-LPS刺激后的BV-2细胞迁移及IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS的表达(P<0.05),上调静息状态时的Arg1表达(P<0.05)。过表达lincRNA-EPS后,BV-2细胞中总p65表达未见明显改变,p65入核减少,pp65表达水平降低(P<0.05)。结论:LincRNA-EPS可通过抑制p65磷酸化和核转位,减轻BV-2细胞在体外P.g-LPS刺激后的炎症反应。

关键词： 玉屏风散   弗氏佐剂性关节炎   炎症因子  

摘要： 以弗氏完全佐剂(FCA)建立大鼠类风湿性关节炎模型,利用试剂盒、流式细胞仪技术分析血液中的白细胞介素-33(IL-33)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与脾淋巴细胞。通过实验,可以观察到给药组大鼠的足肿胀程度小于模型组。经过分析,给药组的大鼠血液中IL-33与TNF-α较模型组有明显的降低,脾淋巴细胞中CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+T细胞比例有所下降。