关键词:
肝纤维化
肝损伤
动物模型
B淋巴细胞诱导成熟蛋白1
摘要:
目的:探讨敲减转录因子B淋巴细胞诱导成熟蛋白1(B lymphocyte induced maturation protein 1,Blimp1)基因对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl_(4))诱导的小鼠肝纤维化模型早期肝损伤的保护作用。方法:采用C57BL/6小鼠腹腔注射5%(体积分数)CCl_(4)橄榄油溶液制备肝纤维化小鼠模型,采用小鼠腹腔注射短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)敲减Blimp1基因表达。将小鼠随机分为3组,空白实验组(n=10),无意义RNA对照组(n=10)和Blimp1敲减组(n=10)。CCl_(4)诱导的小鼠肝纤维化模型制备27 d后取材,通过Western blot和real-time PCR检测小鼠肝组织Blimp1蛋白、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠalpha 1,COL1A1)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen typeⅢalpha 1,COL3A1)及其mRNA表达水平;测定各组小鼠血清中天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT)水平;采用苏木素-伊红染色、Masson染色和天狼星红染色法鉴定小鼠肝组织的病理变化及肝纤维化程度。结果:与空白实验组相比,无意义RNA对照组小鼠肝脏Blimp1蛋白表达水平显著升高(2.036±0.244,t=3.690,P=0.002),Blimp1敲减组小鼠Blimp1蛋白表达降低至基础水平(0.783±0.249,t=6.223,P=0.003)。与无意义RNA对照组小鼠血清ALT[(1957.8±633.6)U/L]和AST[(1808.8±260.1)U/L]相比,Blimp1敲减组小鼠血清ALT[(894.0±360.1)U/L,t=3.998,P=0.003]和AST[(820.0±100.6)U/L,t=6.141,P=0.004]水平均显著降低,肝组织炎性细胞浸润减少、纤维化程度减轻,肝脏α-SMA(0.676±0.064,t=7.930,P=0.001)、COL1A1(1.426±0.143,t=6.364,P=0.003)、COL3A1(1.124±0.198,t=3.440,P=0.026)蛋白表达水平降低,且mRNA表达与蛋白水平变化一致。结论:Blimp1在CCl_(4)诱导的小鼠肝纤维化中发挥重要作用,敲减Blimp1表达有利于保护小鼠的早期肝损伤。