关键词:
小细胞肺癌
优替德隆
活性氧
凋亡
自噬
摘要:
目的探讨优替德隆(UTD1)在小细胞肺癌(SCLC)中的活性及其分子机制。方法采用SCLC H446和H1048细胞系,分别通过细胞计数试剂盒8法、流式细胞术、免疫荧光染色、活性氧(ROS)生成测定和Western blot检测UTD1对细胞增殖、细胞周期、凋亡、自噬及ROS/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路的影响。采用H446细胞构建SCLC裸鼠模型,观察UTD1对移植瘤的治疗效果。结果UTD1以剂量和时间依赖的方式抑制H446和H1048细胞活力,H446和H1048细胞的半数抑制浓度分别为0.675和0.439μg/ml。UTD1作用H446和H1048细胞6、12和24 h,G_(2)/M期细胞比例[H446细胞分别为(53.86±4.54)%、(68.59±5.49)%和60.89±3.26)%,H1048细胞分别为(46.83±2.20)%、(60.67±3.44)%和(57.88±5.11)%]除H1048细胞6 h组外均高于0 h组[分别为(38.99±2.60)%和(40.73±2.50)%,均P<0.05],凋亡率[H446细胞分别为(23.57±0.12)%、(35.79±1.59)%和(46.15±4.57)%,H1048细胞分别为(23.05±2.70)%、(37.73±2.97)%和(43.39±3.31)%]均高于0 h组[分别为(6.44±0.96)%和(6.31±0.75)%,均P<0.05],LC3荧光点数目[H446细胞分别为(56±11)个、(69±8)个和(66±8)个,H1048细胞分别为(39±7)个、(56±12)个和(50±11)个]均高于0 h组[分别为(13±6)个和(12±5)个,均P<0.05],ROS相对荧光强度(H446细胞分别为2.54±0.48、2.85±0.68和5.03±0.72,H1048细胞分别为2.26±0.51、4.17±0.35和4.66±0.51)均高于0 h组(分别为1.00±0.14和1.00±0.02,均P<0.05),H446细胞的cyclin B1、cyclin A2和P21表达水平(cyclin B1:0.63±0.07、0.33±0.05和0.23±0.04;cyclin A2:0.68±0.08、0.46±0.03和0.27±0.06;P21:0.64±0.03、0.32±0.05、0.22±0.03)]均低于0 h组(均P<0.05)。UTD1+Z-VAD-FMK组H446和H1048细胞凋亡率分别为(19.97±3.19)%和(17.68±3.14)%,均低于UTD1组[分别为(40.73±3.35)%和(39.82±2.45)%,均P<0.05]。UTD1+3-MA组H446和H1048细胞在6、12和24 h的吸光度均高于UTD1组(均P<0.05)。UTD1+NAC组H446和H1048细胞p-AMPKα/AMPKα表达水平(分别为1.33±0.09和1.33±0.11)均低于UTD1组(分别为1.98±0.17和2.23±0.23,均P<0.05),LC3-Ⅱ表达水平(分别为1.49±0.16和1.55±0.05)均低于UTD1组(分别为2.81±0.19和2.49±0.38,均P<0.05),凋亡率[分别为(17.24±2.15)%和(19.40±4.28)%]均低于UTD1组[分别为(38.07±3.53)%和(41.20±1.87)%,均P<0.05]。UTD1+si-AMPKα组H446和H1048细胞LC3荧光点数目[分别为(24±5)个和(23±3)个]均低于UTD1组[分别为(46±6)个和(36±6)个,均P<0.05],凋亡率[分别为(18.35±1.15)%和(19.15±3.46)%]均低于UTD1+si-NC组[分别为(39.34±1.77)%、和(39.50±2.15)%,均P<0.05]。2.5 mg/kg UTD1组和5 mg/kg UTD1组SCLC荷瘤裸鼠的抑瘤率分别为46.43%和58.33%,UTD1组凋亡阳性细胞和p-AMPKα阳性细胞比例较对照组明显增加,而Ki-67表达水平降低。结论UTD1抑制了SCLC细胞的增殖,导致G_(2)/M期阻滞,并通过激活ROS/AMPK信号通路触发细胞凋亡和自噬。