关键词:
环磷酰胺
早发性卵巢功能不全
小鼠模型
SIRT5-FOXO3a通路
摘要:
目的观察比较不同浓度环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)诱导小鼠早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)模型的效果并探讨损伤机制。方法32只6~8周龄的C57BL/6J雌性小鼠按体重随机区组法分为4组,每组8只,分别用75 mg/kg CTX、120 mg/kg CTX、120 mg/kg CTX+12 mg/kg白消安(Busulfan)和同体积生理盐水腹腔单次注射来建立POI模型,测定每组小鼠的卵巢系数、血清中雌二醇(estradiol,E_(2))和卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)水平,并通过蛋白质印迹法检测不同造模浓度条件下卵巢组织内NAD依赖性蛋白脱酰酶5(NAD-dependent deacetylase sirtuin-5,SIRT5)和叉头框蛋白O3a(forkhead box protein O3a,FOXO3a)蛋白表达水平的变化规律。筛选最佳造模浓度后,将40只6~8周龄的C57BL/6J雌性小鼠按体重随机区组法分为5组,每组8只;以生理盐水作为对照,用120 mg/kg CTX造模后第1、2、7、14天,通过蛋白质印迹法检测不同造模时间内卵巢组织中SIRT5和FOXO3a蛋白表达水平的变化规律。结果与生理盐水对照组比较,不同浓度的CTX(75 mg/kg和120 mg/kg)和120 mg/kg CTX+12 mg/kg Busulfan均可以诱导小鼠出现POI损伤,其中120 mg/kg CTX造模小鼠的卵巢系数(P<0.001)和E_(2)水平变化较小(P<0.05),120 mg/kg CTX+12 mg/kg Busulfan组小鼠被毛粗糙,光泽度下降,反应迟钝,状态最差。与生理盐水对照组相比,75 mg/kg CTX造模组小鼠的卵巢组织中FOXO3a表达显著下调(P<0.05),SIRT5表达没有显著变化(P>0.05),而120 mg/kg CTX造模组的SIRT5(P<0.05)和FOXO3a(P<0.05)表达均显著下调。120 mg/kg CTX造模后第2和7天,SIRT5(P<0.01)和FOXO3a(P<0.001)表达均显著下调,且第7天时表达水平变化最大(SIRT5,P<0.0001;FOXO3a,P<0.0001)。结论120 mg/kg CTX诱导小鼠POI模型的卵巢损伤小于75 mg/kg CTX诱导的POI模型,并且120 mg/kg CTX造模第7天的SIRT5和FOXO3a表达变化最为显著,其作用机制可能与SIRT5-FOXO3a通路活性受抑制相关。