关键词:
糖尿病视网膜病变
miR-155-5-p
SIRT1
自噬
炎症
摘要:
目的 探讨miR-155-5p在糖尿病视网膜病变(DR)中的作用机制。方法 收集锦州医科大学附属第一医院眼科12份外周血标本,其中健康人6例血标本设为对照组,DR患者血标本6份设为DR组。RT-PCR验证两组血液中miR-155-5p的表达水平;在高糖(100 mmol·L^(-1))诱导的DR细胞模型中观察miR-155-5p对细胞增殖、凋亡以及自噬和炎症相关蛋白(P62、LC3B、NLRP3、IL-1β、pro-caspase-1)的影响,使用miR-155-5p-inhibitor或其阴性对照抑制剂NC-inhibitor干预ARPE-19细胞,分别设为HG+miR-155-5p-inhibitor组与HG+NC-inhibitor组,不含葡萄糖的培养液培养的细胞设为Control组;使用miR-155-5p-mimics或其阴性对照抑制剂NC-mimics干预细胞,分别设为HG+miR-155-5p-mimics组与HG+NC-mimics组。双荧光素酶报告基因分析miR-155-5p和SIRT1的相互作用,HG+miR-155-5p-mimics组与HG+NC-mimics组细胞分别共转染SIRT1-3’ UTR-WT或SIRT1-3’ UTR-MUT,检测两组细胞荧光素酶表达水平。回复实验验证miR-155-5p通过调控SIRT1表达影响DR模型细胞自噬和炎症反应,共转染miR-155-5p-mimics和pcDNA3.1-SIRT1过表达质粒的细胞设为HG+miR-155-5p-mimics+SIRT1组,仅转染miR-155-5p-mimics或其阴性对照抑制剂的细胞设为HG+miR-155-5p-mimics组与HG+NC-mimics组,检测各组细胞的增殖、凋亡水平及相关凋亡和自噬蛋白表达水平。结果 DR组外周血标本中miR-155-5p表达水平高于对照组(t=-8.078,P<0.001)。与HG+NC-inhibitor组相比,HG+miR-155-5p-inhibitor组细胞的增殖能力增强,细胞中miR-155-5p表达水平降低,细胞凋亡水平下降,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。与HG+NC-mimics组细胞相比,HG+miR-155-5p-mimics组细胞增殖能力降低,细胞中miR-155-5p表达水平上升,细胞凋亡水平增加,细胞中自噬蛋白P62表达水平下降,自噬蛋白LC3B表达水平上升,炎症蛋白NLRP3、IL-1β及pro-caspase-1表达水平均上升,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。与HG+NC-mimics组细胞相比,HG+miR-155-5p-mimics组细胞SIRT1 mRNA和蛋白表达水平均下降,转染SIRT1-3’ UTR-WT时,HG+miR-155-5p-mimics组细胞荧光素酶活性下降,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。与HG+miR-155-5p-mimics组相比,HG+miR-155-5p-mimics+SIRT1组细胞增殖水平上升,细胞中miR-155-5p表达水平下降,细胞凋亡水平下降,细胞中SIRT1蛋白与P62蛋白表达水平均上升,LC3B蛋白表达水平下降,同时炎症蛋白NLRP3、IL-1β及pro-caspase-1表达水平均下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05),SIRT1确定为miR-155-5p的下游靶点。结论 miR-155-5p通过靶向SIRT1抑制DR细胞模型细胞的增殖水平,促进视网膜上皮细胞的凋亡、自噬和炎症反应。