关键词:
不孕症
重复控制性卵巢刺激
囊胚
内质网应激
细胞凋亡
补肾调经方
摘要:
目的探讨补肾调经方对重复控制性卵巢刺激(COS)早期胚胎质量的影响及其可能作用机制。方法150只ICR雌性小鼠随机分为正常组、模型组、抑制剂组和补肾调经方低、高剂量组,每组30只。正常组、抑制剂组和模型组小鼠每日以蒸馏水0.25 ml灌胃,补肾调经方低、高剂量组分别给予补肾调经方25.6、51.2 g/(kg·d)灌胃,均每日灌胃1次,持续13天为1个周期。正常组小鼠于灌胃第11天腹腔注射生理盐水0.1 ml,其余4组小鼠建立COS模型,抑制剂组在造模前1 h注射内质网应激抑制剂4-苯基丁酸0.2 ml。各组灌胃及腹腔注射连续3个周期,每个周期间隔4天。各组小鼠均于第3次腹腔注射后立即与同品系雄鼠以2∶1的比例合笼,次日8:00检查阴栓,见栓或阴道涂片见精子者记为妊娠。于妊娠第4天下午处死小鼠,倒置显微镜下获取囊胚,观察囊胚形态并记录总囊胚数、优质囊胚数,计算优质囊胚率;Tunel法检测囊胚细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率;免疫荧光法及RT-qPCR法分别检测内质网分子伴侣蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Caspase-12)蛋白荧光信号强度及其mRNA表达。结果正常组囊胚形态规整,形态发育好,碎片率少;模型组囊胚发育较差,细胞形态不规则,碎片率高,有部分停滞;抑制剂组及补肾调经方高、低剂量组可见细胞形态发育较好,形态较规则,碎片率较少。与正常组比较,模型组优质囊胚率降低,囊胚细胞凋亡率升高,囊胚中GRP78、CHOP、Caspase-12、Caspase-3、Bax蛋白荧光信号强度及其mRNA表达升高,Bcl-2蛋白荧光信号强度及其mRNA降低(P<0.01)。与模型组比较,抑制剂组及补肾调经方高、低剂量组优质囊胚率升高,囊胚细胞凋亡率降低,囊胚中GRP78、CHOP、Caspase-12、Caspase-3、Bax蛋白荧光信号强度及其mRNA表达降低,Bcl-2蛋白荧光信号强度及其mRNA表达升高(P<0.01)。与抑制剂组比较,补肾调经方高剂量组GRP78、CHOP、Caspase-12、Bax蛋白荧光信号强度及其mRNA表达升高,补肾调经方低剂量组Caspase-12、Caspase-3、Bax蛋白荧光信号强度及其mRNA表达升高(P<0.05或P<0.01)。结论补肾调经方可能通过改善内质网应激,抑制重复控制性卵巢刺激导致的囊胚细胞凋亡,以发挥提高早期胚胎质量的作用。