关键词:
内科学
聚酰胺-胺型树状高聚物
自发性高血压大鼠
shRNA
结缔组织生长因子
摘要:
目的 研究聚酰胺- 胺型树状高聚物(PAMAM)载体介导结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA(pCTGFshRNA)质粒对自发性高血压大鼠心肌纤维化因子表达的影响.方法 设计并构建质粒pCTGF-shRNA 和阴性对照pHK-shRNA,利用酶切和测序验证序列.将24 只自发性高血压大鼠分为pCTGF-shRNA 转染组、pHK-shRNA转染组和对照组,分别应用G9 PAMAM 将质粒转染至大鼠心肌组织.定期测量血压变化,4 周后处死大鼠留取心肌和血液标本.通过称量计算左室质量/ 体质量(LVM/BM)反应左室肥厚程度,RT-PCR 和 Western blot 检测心肌组织 CTGF 和TGF-β的 mRNA 和蛋白表达,免疫组化技术分析 CTGF、TGF-β和层连蛋白(LN)的表达.结果 干预4 周后,pCTGF-shRNA 转染组、pHK-shRNA 转染组和对照组的血压分别为196±5.7mmHg、199±2.6mmHg 和196±6.8 mmHg,无显著性差异 ( P > 0.05),三组的左室肥厚程度也无统计学差异(P>0.05).自发性高血压大鼠有基础水平的CTGF 表达,pCTGF-shRNA 转染组的CTGF 的mRNA 和蛋白表达均明显低于对照组和pHK-shRNA 转染组(P<0.05),而pHK-shRNA 与对照组无显著性差异(P>0.05).三组的TGF-β1 的mRNA 和蛋白表达无显著性差异(P>0.05).免疫组化结果显示,pCTGF-shRNA 转染组的CTGF、LN 表达均明显低于其他2 组,但TGF-β1 表达无统计学差异.结论 PAMAM 载体成功介导pCTGF-shRNA 转染自发性高血压大鼠,能降低心肌组织CTGF 及LN 的表达,提示PAMAM 介导的pCTGF-shRNA 可有效地用于心肌纤维化的基因治疗.