关键词： 蝙蝠蛾被毛孢菌丝体   树突状细胞   Th1型免疫反应   模式识别受体  

摘要： 目的:研究蝙蝠蛾被毛孢菌丝体(MHCS)对抗原呈递细胞树突状细胞(Dendritic cells,DCs)成熟和功能的调节作用。方法:利用流式细胞术、实时荧光定量PCR、Western blot和混合淋巴细胞培养等实验方法,检测了MHCS对DCs成熟和功能相关表面分子、细胞因子表达以及Toll样受体(TLR)2、TLR4和Dectin-1相关信号转导通路蛋白活性的调节作用。结果:MHCS显著上调DCs表面分子CD11c、MHCⅠ和MHCⅡ、辅助刺激分子CD40、CD80和CD86以及模式识别受体TLR2、TLR4和Dectin-1的表达;促进Th1型细胞因子IL-12产生,抑制Th2型细胞因子IL-10、IL-13和TGF-β1产生;诱导TAK1和IRF3磷酸化活性增加。MHCS也显著刺激幼稚型Th细胞增殖,诱导幼稚型Th细胞向Th1方向分化。利用中和性抗体,分别阻断DCs细胞TLR2、TLR4或Dectin-1活性,可部分抑制MHCS诱导的DCs成熟。结论:MHCS能促进DCs成熟,诱导Th1型免疫反应。MHCS的这些作用与其激活模式识别受体TLR2、TLR4或Dectin-1有关。

关键词： Artificial roosts   Bactericidal ability   Bats   Immune response   Phytohaemagglutinin  

摘要： Bats have recently been implicated as reservoirs of important emerging diseases. However, few studies have examined immune responses in bats, and even fewer have evaluated these responses in an ecological context. We examined aspects of both innate and adaptive immune response in adult female Brazilian free-tailed bats (Tadarida brasiliensis) at four maternity roosts (two natural caves and two human-made bridges) in south-central Texas. Immune measurements included in vitro bactericidal ability of whole blood and in vivo T cell mediated response to mitogenic challenge. Bactericidal activity in T. brasiliensis varied with roosting ecology, but appears to be sensitive to colony-level effects. Blood from females living at one cave had significantly lower bactericidal ability than blood from females at three other sites. T cell mediated response in this species was associated with variation in roost ecology, with females from two caves having greater responses than females from two bridges. T cell mediated response and bactericidal activity were negatively correlated with one another within individuals that were tested for both. Variation in immunological response of T. brasiliensis is important for understanding the influence of the environment on the frequency and distribution of immunologically competent individuals and for understanding disease-host dynamics in this and other colonial species.

关键词： 尼帕病毒   中国大陆   SARS冠状病毒   蝙蝠   内存   科学家   细胞表面受体   共刺激分子  

摘要： 武汉病毒所石正丽研究组首次发现中国大陆蝙蝠体内存在尼帕病毒或尼帕样病毒抗体，提示我国存在尼帕或类似病毒的自然疫源地，并适时向国家有关部门提出了预警；分析了蝙蝠SARS样冠状病毒和SARS冠状病毒所用细胞表面受体的差异，提示自然界SARS样冠状病毒多样性为新病毒的形成和跨物种感染提供了可能；通过对SARSCoV感染和宿主免疫系统相互作用研究，发现SLCoVVLP能在未成熟的DC细胞内上调节CD40、CD80、CD86和CD83等共刺激分子的表达和增加了IL6、

关键词： 虫媒病毒   蝙蝠   宿主  

摘要： 迄今，已从自然界蝙蝠体内分离到至少70种虫媒病毒。现场和实验室研究还证实，蝙蝠不仅可通过食人感染蚊虫或被感染蚊虫叮咬后获得病毒感染，而且蝙蝠感染病毒后可产生病毒血症，蚊虫也可经叮吸有病毒血症的蝙蝠血后获得感染。大量的研究充分表明，蝙蝠在虫媒病毒保存和扩散中起重要作用。本文就蝙蝠的分类分布及其自然和实验感染虫媒病毒及其宿主作用等方面的研究现状作一综述。

关键词： encephalitis   European bat lyssavirus   mouse   rabies   viral infection  

摘要： European bat lyssaviruses (EBLVs) types 1 (EBLV-1) and 2 (EBLV-2) cause rabies in terrestrial species, but the pathological changes associated with neuroinvasion have yet to be fully elucidated. Swiss OF-1 mice were inoculated peripherally with strain RV61 (classical rabies Virus), RV 1423 (EBLV-1) or RV 1332 (EBLV-2) to compare the nature and extent of histopathological changes produced. Inoculated animals developed varying degrees of non-suppurative encephalitis, and lyssavirus infection was confirmed by the detection of viral antigen. The lesions produced, which included perivascular cuffs and gliosis, were more severe after RV1423 or RV1332 infection than after RV61 infection. Perivascular cuffs were mainly localized to caudal brain regions, irrespective of the infecting strain;after RV1332 infection, however, they were particularly abundant, being composed of large numbers of inflammatory cells. T cells were the predominant lymphocytic component of the inflammatory infiltrate in both the Virchow-Robin space and the brain parenchyma. Viral antigen, which was widespread throughout the brain, was apparently unrelated to the degree of cuffing. The study suggested that there was increased immune activation after inoculation with strain RV1423 or RV 1332, particularly the latter, but that this did not affect the final outcome. Crown Copyright (C) 2008 Published by Elsevier Ltd. All rights reserved.

关键词： Rabies virus   Glycoprotein   Non-haematophagous bat   Brazil  

摘要： The amino acid R or K at position 333 on the glycoprotein of the rabies virus is considered necessary for virulence in adult mice. Although some exceptions exist, substitution at this position causes expression of a phenotype that is either less pathogenic or non-virulent. To date, such substitutions have only been found in fixed strains of rabies virus. In this study, the authors found 333H, 333N, and 333Q substitutions at this position in rabies virus street strains isolated from non-hematophagous bats in Brazil. These strains showed pathogenicity and lethality on passage using adult mice with the intracerebral route and were confirmed rabies-positive by immunofluorescent assay. This suggests that these strains maintain virulence. Our findings indicate that rabies virus street strains with these substitutions exist in the field and may result in infection cycles.

关键词： 尼帕病毒   中国大陆   蝙蝠   体内   科学家   SARS   病毒流行病学   细胞表面受体  

摘要： 作为中科院武汉病毒所研究布局的重要研究方向和发展的优势学科领域，石正丽研究员领导的学科组主要开展了自然界最大的病毒储存库蝙蝠所携带病毒流行病学及SARS跨物种传播的机理的研究。该研究组首次发现中国大陆蝙蝠体内存在尼帕病毒或尼帕样病毒抗体，提示我国存在尼帕或类1以病毒的自然疫源地，并适时向国家有关部门提出了预警；分析了蝙蝠SARS样冠状病毒和SARS冠状病毒所用细胞表面受体的差异，提示自然界SARS样冠状病毒多样J性为新病毒的形成和跨物种感染提供了可能；通过对SARSCoV感染和宿主免疫系统相互作用研究，

关键词： Bats   Immune system   Multilevel models   Rabies   Viral infection  

摘要： The ecology and life history of rabies viruses in bats suggest a need for an integrated modelling treatment that extends beyond traditional epidemiological approaches. We modify our adaptive modelling approach to investigate the effects of immune system structure and immunological mixing events on the disease profile of the bat colony and subsequently on the dynamics of rabies viruses in bats. Our theoretical framework, which is based on individual (intra-host) models of the response of the host to a viral challenge and virus-specific disease mechanisms, integrates the individual components to provide information about the disease structure and the demographic composition of the bat colony. We focus on the changes in dynamics at the population level due to two processes: (1) immunological diversity in a biological process, reproduction, and (2) immunological diversity in a physical-physiological process, migration. The results suggest that immunotypic mixing plays a critical role in the disease progression within populations and it is an important factor in determining the persistence of rabies in exposed bat colonies. © 2009 Taylor & Francis Group, LLC.

关键词： 蝙蝠   狂犬病毒   检测方法   调查   免疫荧光技术   巢式RT-PCR  

摘要： 1.研究背景和目的: 狂犬病（Rabies）是人畜共患的自然疫源性疾病,可引起人和所有温血动物急性致死性脑脊髓炎,一旦发病,患者或病畜几乎100%死亡。狂犬病可在世界范围内分布,是全球性的严重公共卫生问题。狂犬病毒（Rabies virus）是人和动物狂犬病的病原,已知动物宿主众多,且随着研究的深入,越来越多的物种都能分离出狂犬病毒。自1953年美国首次发现食虫蝙蝠咬伤引起的人狂犬病以来,蝙蝠携带狂犬病毒及其与人狂犬病的关系引起人类的广泛关注,近年来许多国家和地区不断地从蝙蝠体内分离出狂犬病毒。 狂犬病的主要传染源是野生动物,主要包括:狼、狐、豹、野狗、猴、猫、臭鼬、浣熊和蝙蝠等。狂犬病的流行一般先出现在野生动物中间,通过家养动物波及人类。家养动物是野生动物狂犬病和人类狂犬病的联系环节。犬虽然非最敏感动物,但是由于世界大多数地区的城市和农村养犬密度很高,所以犬已成为病毒的长期宿主和媒介。家猫亦有同样的趋势。 狂犬病的传染源在不同地区有所不同,如非洲85%以上的国家、南美大多数国家和亚洲地区国家（除以色列和孟加拉以外）以犬狂犬病为主,而南非、欧洲、美国和加拿大等北美地区则主要是野生动物狂犬病。圭亚那、巴拿马和多哥则是以蝙蝠传播狂犬病。荷兰、德国和西班牙的蝙蝠狂犬病仅次于野生动物狂犬病。我国绝大多数的狂犬病为犬所致,偶有猫、牛等其他动物的报道。 近年来,野生动物狂犬病的比重不断增加,时有野生动物狂犬病传给人的报道出现,野生动物携带狂犬病毒带来的危害日趋严重。野生动物不仅直接传播疾病,而且可能通过破坏畜牧业间接地影响人类健康,而野生动物的管理比较困难,一般地难于对其进行免疫预防。尤其是某些蹄类野生动物具有迁徙的本能,能周期性地、替换方向地改变栖息地以获得最佳的环境条件。鉴于这个特点,野生动物作为狂犬病毒的贮存宿主和媒介,能给传播狂犬病毒带来更大地危害。 蝙蝠属翼手目（Chiroptera）动物,是哺乳类中分布最广、数量最多的动物之一,全世界大约有17科180属,约960种,其中我国有7科29属107种。翼手目分两个亚目:大蝙蝠亚目（Megachiroptera）,又称狐蝠,我国有1科5属7种;小蝙蝠亚目（Microchiroptera）,即通常所说的蝙蝠,我国有6科24属100种。 除南北极外,蝙蝠在世界各地都有分布,包括在高纬度地区、荒凉的沙漠和孤立的岛屿上,甚至在撒哈拉大沙漠也有蝙蝠的活动。然而,大多数蝙蝠种类生活在热带和亚热带地区。蝙蝠物种丰富,分布广泛,寿命长,并有很强的飞行能力,其中一些蝙蝠种类还有长途迁移的习性。 蝙蝠与人类接触密切。有些蝙蝠就栖息在屋檐下,或是房屋的裂缝中;另外蝙蝠在觅食时经常会误闯入居民家中;一些旅游景点的岩洞中也居住有蝙蝠。在中医里面,菊头蝠的粪便被做成“夜明沙”用于治疗眼疾;在广东,果蝠被一些餐馆作为野味摆上餐桌;湖南一些地区则相信蝙蝠可以用来治疗癫痫。 狂犬病病毒（Rabies virus）为弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病毒属（Lyssavirus）,形态呈弹状（60～400 nm×60～85 nm）,一端纯园,一端平凹,有囊膜,内含衣壳呈螺旋对称。核酸是单股负链不分节段RNA,基因组长约12 kb,从3′到5′端依次为N、P、M、G、L的5个基因,各个基因间还含非编码的间隔序列。分别编码核蛋白（N）、磷蛋白（P）、基质蛋白（M）、糖蛋白（G）、转录酶大蛋白（L）。完整的病毒颗粒由核衣壳及包膜两部分构成,核衣壳由RNA与核蛋白、磷蛋白和转录酶大蛋白构成,而包膜由糖蛋白和基质蛋白构成。在狂犬病毒的5个基因中,N基因有高度保守性。1993年Bourhy等根据核蛋白基因N端500个碱基的同源性将狂犬病毒属分为6个基因型,基因1～4型分别对应于血清Ⅰ～Ⅳ,而血清Ⅴ型的欧洲狂犬病毒EBL1株和EBL2株为基因型5、6。1998年澳大利亚报道分离出新的蝙蝠狂犬病病毒,被定为基因7型,澳大利亚蝙蝠狂犬病病毒（ABLV）。近年来,新基因型别的狂犬病病毒（Lyssavirus）不断发现,在蝙蝠身上分离到Aravan virus,Khujand virus,Irkutsk virus,以及WestCaucassian bat virus（WCBV）几种狂犬相关病毒。基因1型病毒为狂犬病毒,其他基因型病毒称为狂犬病相关病毒。这些基因型又进一步合并为2个遗传谱系（phylogroup）:基因型1、4、5、6和7为遗传谱系Ⅰ;基因型2和3为遗传谱系Ⅱ。蝙蝠是狂犬病较独特的宿主和媒介,除基因3型狂犬相关病毒外狂犬病毒属各基因型均可在蝙蝠体内分离得到。 我国是受狂犬病危害最为严重的国家之一,我国华南地区及部分华中地区近几年狂犬病的发病数呈

关键词： 蝙蝠SARS样冠状病毒   刺突蛋白   受体结合功能域   杆状病毒  

摘要： 目的: SARS冠状病毒表面的刺突蛋白(Spike,S蛋白)可与宿主细胞上的病毒受体血管紧张素转化酶2(Angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)结合,介导病毒进入细胞。S蛋白上的受体结合功能域(Receptor Binding Domain,RBD)是能与ACE2稳定结合的最小功能片段,在病毒的跨宿主传播中发挥了关键作用。 在SARS冠状病毒溯源的研究中,研究人员在蝙蝠体内发现SARS样冠状病毒(Bat SARS-LcoV),但由于Bat SARS-LCoV不能在现有的细胞培养体系中有效扩增和分离,限制了直接利用活病毒对细胞或动物模型感染从而进行跨宿主传播机制的研究工作。本研究利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统对蝙蝠SARS样冠状病毒(Bat SARS-LcoV)S蛋白的RBD片段进行融合表达,并初步探索其表达动力学和纯化条件,旨在为进一步研究Bat SARS-Like-CoV在动物间的传播路线和跨种属传播机制提供实验基础,亦为进一步研究Bat SL-CoV S蛋白的抗原性和免疫原性提供基础材料。 方法: 1、pFAST-Bat-RBD供体质粒的构建:以蝙蝠SARS样病毒S蛋白基因第964-1542位核苷酸为目的片段设计引物,在反向引物上引入FLAG融合蛋白标签,通过PCR获取大量目的基因,并通过T-A克隆连接到pMD18-T载体,再通过亚克隆手段将目的基因正确插入到pFAST-HTB的多克隆位点,以构建出pFAST-Bat-RBD重组供体质粒。 2、重组杆状病毒的产生和滴度测定:以重组供体质粒pFAST-BAT-RBD转化E. coliDH10Bac感受态细胞,可使其所带的目的基因BAT-RBD与E. coli DH10Bac细胞内的杆状病毒基因组(Bacmid)发生转座重组。将重组的杆状病毒基因组Bacmid-BAT-RBD转染sf9昆虫细胞,即可产生重组的杆状病毒。通过检测病毒的半数致死计量(TCID50),确定病毒的滴度。 3、重组蛋白BAT-S-RBD的产生和鉴定:用高滴度的病毒液以合适的感染复数(MOI)感染昆虫细胞,72小时后收集细胞和培养上清液作SDS-PAGE及Western Blot检测以明确蛋白表达的定位。并对重组蛋白的表达作时间和MOI优化,通过镍离子螯合树脂纯化重组蛋白。 结果: 1、质粒pFAST-Bat-RBD经双酶切、PCR鉴定和基因测序,结果证实克隆的目的基因正确插入到供体质粒,其序列与蝙蝠SARS样病毒S蛋白基因964-1542片段完全吻合,提示供体质粒pFAST-Bat-RBD构建成功。 2、重组杆状病毒基因组Bacmid-BAT-RBD的PCR检测结果表明,目的基因已正确插入到杆状病毒基因组中;细胞转染杆状病毒基因组后产生典型病变,以及稀释的培养上清液能使正常细胞产生相同病变,表明重组病毒成功产生;通过测定病毒的半数致死计量(TCID50),得出P1病毒的浓度为8.6×106 PFU/ml,P2病毒液的浓度为5.3×107 PFU/ml,P3病毒液的浓度为2.1×108 PFU/ml。 3、SDS-PAGE及Western Blot检测结果表明,昆虫细胞感染重组杆状病毒后,成功产生了重组蛋白BAT-S-RBD,其分子量约26kDa,且重组蛋白只在细胞内表达,并不能分泌到培养基中。重组蛋白表达的最适合MOI为2;表达峰值在感染病毒56小时到64小时之间;可通过镍离子螯合树脂纯化重组蛋白。 结论: 本研究成功构建了包含目的基因的重组杆状病毒,可以在昆虫细胞系中有效产生重组蛋白,并初步优化了重组蛋白的产生和纯化条件。为进一步研究蝙蝠SARS样冠状病毒在动物间的传播路线和跨种属传播机制提供了实验基础。亦为进一步研究Bat SL-CoV S蛋白的抗原性和免疫原性提供了基础材料。