关键词:
蝙蝠
呼肠孤病毒
蛛蝇
体表寄生虫
系统进化分析
摘要:
目的明确云南省不同地区蝙蝠及其体表寄生虫来源呼肠孤病毒的种群分类情况,分析其与同属其他病毒之间的进化关系,探讨我国西南边境地区蝙蝠携带呼肠孤病毒的基本情况以及蝙蝠源呼肠孤病毒对人的潜在致病性。方法本课题组前期从云南省西双版纳州棕果蝠体表吸血昆虫蛛蝇(2株)和德宏州棕果蝠脾脏组织(1株)中分离获得3株病毒分离物,样本编号为MLBC1302、MLBC1313、WDBP1716。为进一步鉴定和明确这3株病毒所处的分类地位,本研究使用RNA提取试剂盒提取3株病毒分离物中的RNA,通过病毒核酸琼脂糖凝胶电泳实验观察病毒的基因组模式,然后设计合成相关引物进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增3株病毒分离物的全基因序列;得到病毒序列信息后先通过Blast在线软件进行序列同源比对,再利用Clustal X(1.83)软件和DNAStar软件包中的Meg Align完成多序列核苷酸和氨基酸同源性分析;对拼接完整的基因节段使用ORFfinder在线工具寻找开放阅读框,并进行蛋白预测;最后使用MEGA7.0软件完成基于Neighbour-Joining(NJ)方法的进化树绘制,Bootstrap值设定为1 000。结果1.病毒提取RNA后直接进行琼脂糖凝胶电泳,3份病毒样本出现几乎相同的电泳条带类型,并且符合正呼肠孤病毒的基因组迁移模式特征。2.通过RT-PCR扩增实验成功获得WDBP1716病毒株几乎完整的全基因序列,以及MLBC1302和MLBC1313病毒株的部分基因序列,经序列同源性比对,他们与正呼肠孤病毒属中的PRV种群成员相似度最高,各基因节段之间存在序列同源性差异,其中WDBP1716病毒株的S1节段是独特的三顺反子,具有与PRV物种成员相似的蛋白编码排列模式,并且编码细胞黏附蛋白σC的氨基酸序列与感染人类的卡姆帕病毒和HK 46886/09病毒株之间的相似度最高,表明其可能具有感染人类的潜力。3.对MLBC1302、MLBC1313、WDBP1716病毒分离株的系统进化分析表明,3个病毒分离株都和PRV病毒种群成员聚在一起,他们主要和云南省沧源县蝙蝠中分离的沧源病毒和马来西亚人类咽拭子标本中分离的马六甲病毒、卡姆帕病毒、西卡马特病毒等密切相关。结论1.云南省西双版纳州勐腊县棕果蝠体表吸血昆虫蛛蝇(2株)和德宏州畹町镇棕果蝠脾脏组织(1株)中分离获得的3株病毒分离物MLBC1302、MLBC1313、WDBP1716被鉴定为PRV种群成员。2.在云南省与东南亚接壤的勐腊和畹町两个边境县地区,蝙蝠携带的正呼肠孤病毒可能与马来西亚感染人的一些正呼肠孤病毒发生了基因重配。***1716病毒株的全基因特征分析表明其可能具有感染人类的潜力,应加强我国蝙蝠源正呼肠孤病毒引起人和动物感染的调查研究。