关键词： 流感病毒   血凝素   神经氨酸酶   中和抗体   晶体结构   酶活机制  

摘要： 流感是由流感病毒引起的，在人群及多种动物之间流行的急性、高度传染性的疾病。流感病毒大流行和季节性流感的发生给人类健康带来了很大威胁，造成了重大的经济损失，对流感病毒的预防和控制一直是科学研究的重要内容。流感病毒属于正黏液病毒科，是单股负链RNA病毒，其膜表面有两种重要的糖蛋白，血凝素和神经氨酸酶，在流感病毒生命周期中都具有重要的功能。　　血凝素（Hemagglutinin，HA）是病毒表面重要的糖蛋白，参与受体结合、膜融合，帮助病毒粒子进入宿主细胞。HA受体结合的偏好性是病毒宿主范围的决定因素之一。HA是中和抗体作用的主要靶标，抗体可以通过阻断受体结合和阻断膜融合来抑制病毒。了解各种HA亚型结构特点及其受体结合偏好性对流感病毒的预防和控制具有重要指导意义。　　神经氨酸酶(Neuraminidase，NA)的主要功能是促使新生病毒颗粒释放并帮助病毒颗粒在呼吸道粘液中迁移。NA结构中有保守的酶活位点，是抑制剂作用的重要靶点，基于NA晶体结构设计的药物Zanamivir和Oseltamivir是目前治疗流感最有效的药物，是基于结构的药物设计的成功范例。NA晶体结构的解析和酶活机制的研究对于新型抑制剂的研究具有重要指导意义。　　2012年研究人员从蝙蝠体内发现了一个新的流感样病毒基因组H17N10，这对流感病毒的起源和进化都提出了新的疑问。氨基酸序列分析发现H17和N10与已有亚型差异性很大，它们具有怎样的结构功能特点，我们对H17和N10进行了研究。解析了H17的晶体结构，H17具有典型的三聚体结构，但受体结合位氨基酸发生了很多改变使得受体结合槽构象变化，通过功能试验发现对α2，3和α2，6唾液酸受体都不结合。研究解析了N10的结构，发现N10具有四聚体蘑菇样结构。体外酶活实验发现N10不具有传统NA的酶活活性。结构分析发现N10中酶活位点的保守氨基酸发生了很多改变，使得酶活位点构象变化，不利于唾液酸受体的结合和切割。总结研究表明H17不结合传统的唾液酸受体，N10不具有酶活活性，蝙蝠来源的流感病毒可能使用不同的入侵机制，为蝙蝠流感病毒感染的分子机制研究提供了思路。　　在已有的NA亚型中，N7是唯一一个结构尚未解析的亚型， N6的结构分析也没有相关文章报导。本研究中分别解析了N7和N6的晶体结构。对所有NA结构进行比较发现，N7和N6属于典型的第二组NA，不具有150洞，在酶活位点旁边具有一个由340环形成的洞。对所有NA的N-糖基化，钙离子结合位点，第二唾液酸结合位点等进行了全面的比较分析。这些研究对于全面分析NA以及NA新型抑制剂的研究具有重要的指导意义。　　此外，本研究还对1977年造成流行的H1N1病毒的H1蛋白进行了相关结构和功能的研究，发现其对人源受体具有很好的亲和力，对禽源受体具有比较低的结合，其与受体结合的结构基础及相关晶体结构目前正在研究中。本研究还对流感病毒HA蛋白与广谱中和抗体作用的结构基础进行了相关研究，期望找到具有广谱效果的抗体及其保守的抗原表位，对流感病毒的治疗和疫苗开发提供基础，由于复合物晶体生长限制，研究目前还在进行中。　　总之，本论文使用体外结合实验和X-射线晶体学方法阐明了新型蝙蝠流感基因组H17和N10的结构功能特点，并对最后一个结构尚未解析的NA亚型N7进行了结构功能研究，为各种亚型流感病毒HA和NA结构功能特点的全面认识提供了基础。

关键词： Chiroptera   Immune function   Leukocyte profiles   Sewage pollution   Desert  

摘要： Environmental pollutants may negatively affect the immune system of animals. Yet, this phenomenon has not been studied thoroughly in terrestrial animals that use polluted water for drinking and/or foraging. We experimentally tested the hypothesis that exposure to sewage water would affect the activation of the immune response in the bat Pipistrellus kuhlii that drinks from bodies of open water. We selected two water sources where bats forage in the Negev desert, Israel: natural springs and a sewage-polluted man-made reservoir. We captured 13 non-reproductive female bats in the vicinity of the natural springs and offered seven of them water from the sewage-polluted source for 30 days (treatment) and the remaining six bats were offered water from the natural spring (control). Consumption of contaminated water did not alter the bactericidal ability of blood plasma or the proportions of monocytes circulating in the blood. However, our data provided evidence that the 30-day treatment can cause a decrease in the relative levels of neutrophils and an increase in the levels of lymphocytes. Our study provides a first account for the effect of sewage pollution on bat immune response which may be important in desert environments. where water sources are scarce. We suggest hypotheses for future, more focused studies. (C) 2013 Deutsche Gesellschaft fur Saugetierkunde. Published by Elsevier GmbH. All rights reserved.

关键词： 乙脑病毒   蝙蝠   血清抗体   病毒检测  

摘要： 研究背景和目的流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE,简称乙脑)也称日本脑炎,是由流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV,简称乙脑病毒)引起,经蚊传播的人畜共患的中枢神经系统急性传染病。乙脑的病死率高达20%～30%,30%～50%存活者患有神经系统后遗症,仅25%存活者最终能够完全康复,乙脑给社会和家庭带来了巨大的疾病负担。乙脑病毒属于黄病毒科黄病毒属,为单股正链RNA病毒,大小约为11kb,含有一个长的开放阅读框架(open reading frame,ORF),其ORF编码3个结构蛋白(C蛋白、PrM/M蛋白、E蛋白)和7个非结构蛋白(NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5)。乙脑病毒一共分为五个基因型(GⅠ、GⅡ、GⅢ、GⅣ和GⅤ)。GⅠ型乙脑病毒主要分布在印度、澳大利亚、韩国、日本和东南亚地区;GⅡ型分布在韩国、泰国、印度尼西亚、马来西亚、澳大利亚和巴布亚新几内亚;GⅢ型分布在印度尼西亚、马来西亚、斯里兰卡、尼泊尔、韩国、日本和中国;GⅣ型主要分布在印度;GV分布在新加坡、马来西亚和中国。最新的进化发育分析发现近年在亚洲,如中国、泰国、韩国、日本、马来西亚、越南、泰国等,存在GⅠ取代GⅢ成为亚洲主要流行株的趋势。乙脑流行于亚洲东部、南部及太平洋沿岸,全球每年大约有67900例报告病例,其中约33900(50%)例发生在中国(中国台湾除外);近51000(75%)例患者为0～14岁的儿童(发病率5.4/100000)。我国是乙脑高发地区之一,全国除了青海以外的省、直辖市、自治区均有乙脑病例的报道,局部地区有暴发或者流行。我国乙脑高流行区(发病率>0.5/100000)包括河南、重庆、四川、贵州及云南,尽管其人口只占全国人口的26%,但50%以上的乙脑病例来自这些地区。中流行区(发病率为0.2/100000～0.5/100000)包括陕西、安徽、湖北、湖南、江西及广西省。其他省份(不包括青海)均为低流行区(发病率<0.2/100000)。已知猪是乙脑病毒主要的动物储存和扩散宿主。除猪以外,有些动物也被认为是乙脑病毒的宿主,其中包括蝙蝠。蝙蝠被认为是重要的病毒储存宿主,迄今为止已在蝙蝠体内分离出80多种病毒,例如冠状病毒、亨德拉病毒、埃博拉病毒,其中也包括乙脑病毒。中国和日本的研究表明在蝙蝠体内能检测到乙脑病毒或乙脑病毒的血清抗体。近二十年来,中国云南省的4株乙脑病毒蝙蝠分离株(B58、GB30、HB49和HN97)及本课题组分离出的广东、湖南及海南乙脑病毒蝙蝠分离株(GD1、HN2、YY87和YY158)的基因组序列已被确认,这8株乙脑病毒蝙蝠分离株均属于GⅢ型。然而,目前中国大陆主要流行的乙脑病毒株为GⅠ型。蝙蝠在乙脑传播环节中的作用尚不清楚。为了进一步探讨蝙蝠在乙脑病毒传播中的作用,我们在广东省和海南省部分地区收集蝙蝠标本,了解蝙蝠乙脑病毒携带率及血清抗体阳性率情况。研究方法1.蝙蝠标本的收集与处理2013年6月至2013年11月期间,在广东和海南省部分地区收集蝙蝠标本,进行编号后请广州大学生命科学院蝙蝠研究专家吴毅教授和海南师范大学生命科学院陈忠教授进行种类鉴定。蝙蝠收集地点主要为野外阴湿的山洞。蝙蝠乙醚麻醉,心脏采血后无菌解剖,取脑组织标本,保存在含有RNAlater的冻存管中,与血样一起置于密封的冰袋泡沫盒中,12 h内运输回实验室,放入-80℃冰箱保存,待检测。2.蝙蝠血清乙脑抗体的检测蝙蝠血液离心后取血清,用间接ELISA法检测蝙蝠血清中的乙脑病毒抗体。3.蝙蝠脑组织乙脑病毒的检测首先用Roche High Pure Viral RNA Kit提取蝙蝠脑组织RNA病毒核酸,然后用Roche Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit进行逆转录合成cDNA,之后以逆转录产物cDNA为模板,利用TaqMan Real-time PCR法检测乙脑病毒。4.蝙蝠乙脑病毒株的分离单层BHK-21细胞分别接种5份TaqMan Real-time PCR检测蝙蝠乙脑病毒阳性标本(HK21、GD189、GD190、GD219、GD220),并设乙脑病毒Nakayama株为阳性对照,正常细胞为空白对照。持续观察7天,7天后收取细胞病毒液,于-80℃冰箱中冻存。期间,若细胞形态出现明显变化,如细胞圆缩、颗粒增多、融合或碎裂死亡判断为阳性,阳性标本做分子生物学检测及进一步培养分离;未观察到细胞形态变化者,利用TaqMan Real-time PCR检测是否有病毒增殖。连续盲传三代,若细胞形态仍无变化,且TaqMan Real-time PCR检测结果为阴性,则判断为阴性。每组5只2～3日龄N

关键词： 蝙蝠   冠状病毒   沙特阿拉伯   呼吸系统   解剖学   中东  

摘要： 自从2012年9月份报道了中东呼吸系统综合征(MERS)以来,全世界范围已经有90例这样的病历,其中70个就来自沙特阿拉伯。引起该疾病的β-冠状病毒还没有确定,但是该病毒的死亡率极高,大约为65%。人传染人的情况已被记录在案,但是人类感染中东呼吸系统综合症冠状病毒的来源还不清楚。从2013年10月到2013年8月,沙特阿拉伯卫生部及美国哥伦比亚大学的研究人员从发现中东呼吸系统综合症的地方的蝙蝠身上收集了一些病毒样品并进一步进行了鉴定。随后他们调查了那些感染该病毒的病人和家属以及他们住所小于12公里范围内的蝙蝠样品,包括一个无人看管的海枣园和他工作1公里范围的一个五金店前边的一个花园。尽管无

关键词： 蝙蝠   细胞色素b   轮状病毒   分离与鉴定  

摘要： 蝙蝠种类众多，其携带的病毒具有一定的物种特异性。为了更好地开展蝙蝠携带病毒的病原生态学研究，建立了一种在核酸水平上准确鉴定蝙蝠种类的方法非常必要。为此，实验通过扩增部分细胞色素b基因序列，准确鉴定了蹄蝠科、菊头蝠科、蝙蝠科、狐蝠科内13种不同的蝙蝠，基于细胞色素b基因序列的系统进化分析支持小蝙蝠亚目的双系起源学说。 蝙蝠是携带人兽共患病毒最多的一种哺乳动物，调查蝙蝠携带病毒的病原生态学本底对防范蝙蝠病毒威胁人类健康具有重要意义。利用病毒宏基因组学分析及RT-PCR方法，本研究在云南勐远县的三叶蹄蝠组织样品中，检测到一份A群轮状病毒（Group ARotaviruses，RVA）阳性肠道组织样品。利用Marc145细胞从阳性样品中，成功分离到一株新的轮状病毒，命名为RVA/Bat-tc/MYAS33/2013/G3P[10]，测序获得了该毒株近乎全长的序列，序列分析表明该毒株基因型为G3-P[10]-I8-R3-C3-M3-A9-N3-T3-E3-H6。多序列比对的结果表明，与MYAS33毒株11个基因片段同源性最高的基因片段主要集中在蝙蝠轮状病毒MSLH14，人轮状病毒CMH079，马轮状病毒E3198，猴轮状病毒TUCH。与MSLH14毒株同源性最高的片段为VP3(94.7%)、 NSP1(93.7%)、 NSP2(95.3%)、NSP5(97.4%)；与CMH079同源性最高的为VP4(94.8%)、VP6(94.3%)、NSP4(97.6%)；与E3198同源性最高的为VP7(92.9%)、VP2(95.4%)；与TUCH同源性最高的为VP1(92.9%)、NSP3(91.4%)。新分离到的MYAS33毒株，与国际上首次报导的蝙蝠轮状病毒KE4582没有任何一个片段的基因型相同；除VP4基因外，其它十个片段与第一株分离的蝙蝠轮状病毒MSLH14基因型相同。收集病毒细胞培养物，在电镜下看到了聚堆的典型轮状病毒粒子。通过PAGE电泳，将新分离到的MYAS33毒株与之前分离的MSLH14毒株基因组11个核酸片段全部分开，并观察到两个毒株的VP6、NSP3、NSP4片段大小差异明显。通过免疫青年昆明鼠，制备了特异性抗MYAS33毒株的多克隆抗体，为后续实验奠定了基础。本研究发现的G3P[10]型蝙蝠轮状病毒，丰富了蝙蝠携带轮状病毒的多样性，且稀有的G3P[10]型轮状病毒是首次在动物体内发现。本研究的发现突显了蝙蝠作为轮状病毒自然宿主的潜在威胁，为轮状病毒的研究提供了重要的数据，对更好的防控轮状病毒病具有重要意义。

关键词： 蝙蝠   病毒宏基因组学   病毒组   基因组鉴定   细胞分离  

摘要： 蝙蝠是世界上仅次于啮齿类的第二大类哺乳动物，其分布于除两极以外的地方，同时也是许多病毒的自然宿主。我国云南省地处西南边陲，与缅甸、老挝、越南等东南亚国家接壤，战略意义突出。该地区是多种疾病的疫源地，研究发现该地区蝙蝠携带有多种人兽共患病毒，如尼帕病毒(Nipah virus)、乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus)、基孔肯雅病毒(Chikungunya virus)、狂犬病毒(Rabiesvirus)、圆环病毒(Circovirus)等。为了有效地监控云南省及周边地区新发传染病(emerging infectious diseases, EID)，防止野生动物(特别是蝙蝠)疫病，跨种和跨境传播给其它动物甚至是人类，保障边境地区人民生命安全，彻底调查该地区蝙蝠病毒生态学具有重要的意义。而基于第二代高通量测序(High-throughputsequencing)的病毒宏基因组学(Viral metagenomics, ViralMeta)则为调查已知和未知病毒提供了高效的工具。 本研究于2008年到2011年间，共收集到1,219份外表健康蝙蝠样品，收集地点涵盖邻近云南省的缅甸的昔懂坝县和吴涛县以及我国云南省的6个市县。蝙蝠涉及3个科：蝙蝠科（Vespertilionidae）、菊头蝠科（Rhinolophidae）和假吸血蝠科（Megadermatidae）共5个属11种。经过ViralMeta处理一共得到326,318,951个碱基(nt)，总共5,864,636个读长（reads），经过拼接得到3,605,620个重叠序列（contigs），其中2%的序列注释到了病毒（Virus-like contigs，59,661/3,605,620）。这些病毒中可以进一步分为27个科（包含细小病毒科中的细小病毒亚科和浓核病毒亚科），49个病毒属，包含16个哺乳动物病毒科22个属、5个昆虫病毒科8个属、3个植物病毒科4个属、3个噬菌体科15个属。在哺乳动物病毒中，有腺病毒科中的哺乳动物腺病毒属，疱疹病毒科中的细胞巨化病毒属、马立克病病毒属、玫瑰疹病毒属，异样疱疹病毒科中的鱼疱疹病毒属，乳头瘤病毒科中的甲型乳头瘤病毒属，多头瘤病毒科中的多头瘤病毒属，小双节RNA病毒科中的小双节RNA病毒属，嗜肝病毒科中的正嗜肝病毒属，圆环病毒科中的圆环病毒属，痘病毒科中的正痘病毒属，逆转录病毒科中的γ逆转录病毒属、Δ逆转录病毒属，细小病毒亚科中的依赖病毒属、博卡病毒属，星状病毒科中的哺乳动物星状病毒属，呼肠孤病毒科中的A型轮状病毒，冠状病毒科中的α冠状病毒属、β冠状病毒属，小RNA病毒科中的嵴病毒属、肠道病毒属，黄病毒科中的丙肝病毒属。通过比较发现，蝙蝠种群和地域之间病毒组具有显著的差异，主要体现在病毒的种类、病毒序列与已知序列的同源性差异、病毒序列的丰度等方面。通过该方法充分反应了该地区蝙蝠携带病毒组的情况。 根据病毒宏基因组学结果，针对有意义的新发现的腺病毒、正嗜肝病毒、星状病毒、冠状病毒、轮状病毒、软腐病毒等，建立了特异性PCR/RT-PCR检测方法，获得了这些病毒在蝙蝠体内的带毒率情况，结果发现缅甸吴涛县1%（1/84）的大蹄蝠（Hipposideros armiger）携带腺病毒，缅甸昔懂坝县2%(7/320)和吴涛县5%(15/320)的亚洲长翼蝠(Miniopterus fuliginosus)以及我国云南省普洱市20%(4/20)果树蹄蝠(Hipposideros pomona)携带正嗜肝病毒，缅甸吴涛县2%(2/84)的马铁菊头蝠(Rhinolophus ferrumequinum)携带星状病毒，祥云11%(13/120)、宾川7%(7/100)、景洪的6%(2/34)的鼠耳蝠为α冠状病毒（Coronavirus, CoV）阳性，而来自保山的14%(2/14)的中菊头蝠(Rhinolophus affinis)为β冠状病毒阳性，德宏6%（1/16）的小菊头蝠(Rhinolophus hipposideros)携带轮状病毒，而软腐病毒则广泛分布在蝙蝠体内。对扩增的部分片段进行遗传分析，发现这些病毒同已知病毒的核苷酸同源性不足85%，提示这些病毒为新型的蝙蝠病毒。 针对以上检测结果，挑选了肝炎病毒、冠状病毒和轮状病毒进行深入的分析。获得了3株缅甸和3株云南蝙蝠肝炎病毒的全基因组序列，分析发现缅甸和云南省的蝙蝠肝炎病毒基因组呈现典型的环状结构，且具有明确的进化差异，两者间核苷酸同源性仅为70%，同已知的正嗜肝病毒均具有显著的差异性，核苷酸同源性不足60%，说明发现了两株新型的肝炎病毒；抗原性分析推测该病毒可能与人的乙肝病毒发生交叉反应；直接从样品中电镜观察到了大量的澳大利亚抗原，进一步证实蝙蝠

关键词： 蝙蝠   分子流行病学   高通量测序   序列分析   Nested RT-PCR   狂犬病毒  

摘要： 蝙蝠种类多,分布广泛,与人类接触密切,是一些重要动物源性疾病的传染源。迄今为止,已在蝙蝠体内分离或者检测到就有70多种病毒。因此,研究蝙蝠携带病毒的种类以及对人可能的危害很有必要。传统的研究方法对于核酸信息未知的病毒往往束手无策,随着分子生物学技术的发展及挖掘新病毒的需求增大,一些不依赖于已知核酸序列研究病毒的方法不断出现,其中一种基于高通量测序的病毒宏基因组学方法越来越成熟。对海量高通量测序数据进行分析是一种挑战,很多实验动辄产生几个TB的数据量,但因为处理能力和存储能力的不足,研究者不得不把绝大部分未经处理的数据丢弃掉或仅做初步分析,对高通量测序数据的深入验证分析仍然是一个难点。近五年来已有5份关于蝙蝠病毒宏基因组学的研究,其中2份研究来自美国,3份来自中国。这5份研究通过454测序或者Solexa测序,发现了大量的蝙蝠新病毒,大大的加深了人们对蝙蝠携带病毒多样性的了解,但是研究蝙蝠种类和数量非常有限。本课题组自2006年在广东、海南、湖南等地蝙蝠携带病毒进行流行病学调查,发现了这些地区的一些蝙蝠能携带一些人类传染病病毒,但逐个病毒检测工作量巨大,也受到常规检测方法敏感性的影响,而且不能发现未知的病毒。因此本研究拟建立基于Solexa高通量测序的蝙蝠组织病毒宏基因组学分析方法,对来自广东的1只大足鼠耳蝠和来自海南的1只长翼蝠的脑、血清以及直肠部位的病毒群落进行探索,以期发现蝙蝠携带的可能与人有关的已知和未知病毒;此外,通过基于高通量测序结果,对蝙蝠样品中的几种重要病毒进行初步验证研究,并开展蝙蝠样本相关病毒的分子流行病学调查。1研究方法1.1蝙蝠标本的采集在广东、海南和湖南部分地区捕捉蝙蝠,进行编号后,请广州大学生命科学院蝙蝠研究专家吴毅教授进行鉴定。通过无菌操作解剖蝙蝠,取完整脑组织和肠道近肛门段标本,用无菌注射器心脏采血,每种组织一式两份。采集的脑、直肠样本存放于含200ulRNAlater储存液的冻存管中,心脏采血收集全血装于EP管中,置放于密封的冰袋泡沫盒中当天运回实验室,放于-80℃冰箱贮存,待检。1.2病毒宏基因组学方法1.2.1组织样本的准备将组织样本旋涡、离心后,收集组织病毒液进行去背景核酸处理,分别采用RNA和DNA病毒提取试剂盒提取病毒核酸后,进行cDNA和单链DNA的补平后混合,应用随机引物对混合病毒核酸进行随机扩增,对扩增产物进行检测后送样建库测序。1.2.2高通量测序由深圳华大基因公司完成,首先采用超声法Covaris将长片段PCR产物随机打断并产生主带小于等于800bp的一系列DNA片段,添加特殊接头后连接,并制成文库,随后应用四种荧光标记的核苷酸通过桥式PCR进行边合成边测序获得原始Reads数据。1.2.3病毒注释和丰度分析首先将获得的重叠序列使用BLASTn和BLASTx在GenBank的非冗余核苷酸序列数据库和美国能源部联合基因组研究所JGI数据库中进行比对,分别取Evalue<10-5或者nt>100的序列作为有意义的序列,然后按照物种注释信息,去除细菌及真核类等其他非病毒序列。1.3几种重要病毒的PCR扩增和初步序列分析在样本RNA提取、逆转录获得cDNA后。根据人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)、塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus,SFV)、人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)、甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,ScMV)标准序列和宏基因学分析近源参考株设计引物,根据引物特点摸索PCR反应条件,经琼脂糖电泳检测,可疑阳性PCR产物送公司测全序。将测序成功可疑病毒序列用GenBank的BLAST软件进行在线同源性分析,并从GenBank上下载其他相关病毒序列,利用ClustalW进行多序列比对分析。用MEGA4.0软件,采用Neighbor-Joining(邻近连接法),Jukes-Cantor模型做进化树分析,所得进化树用Bootstrap(1000 replicates)法进行检验。1.4蝙蝠狂犬病毒(Rabies virus,RV)的检测参照本课题组马莉珍等已建立的狂犬病毒RT-LAMP方法快速筛查蝙蝠脑组织样本,应用nested RT-PCR方法扩大样本检测蝙蝠脑组织狂犬病毒,以获得狂犬病毒序列,其中nested RT-PCR方法参考文献中引物,以狂犬病毒核蛋白(N)基因最保守区域为目的扩增基因。用狂犬病毒减毒活疫苗作为阳性对照,同时添加空白对照。1.5狂犬病毒N基因片段分析1.5.1狂犬病毒的细胞培养和乳鼠接种实验:将蝙蝠的脑组织悬液经滤器过滤后各取0.20ml接种于BHK-21细胞上,持续观察7天,并设正常细胞为空白对照,盲传3代以稳定毒力。每代

摘要： Emerging infectious diseases remain a significant threat to public health. Most emerging infectious disease agents in humans are of zoonotic origin. Bats are important reservoir hosts of many highly lethal zoonotic viruses and have been implicated in numerous emerging infectious disease events in recent years. It is essential to enhance our knowledge and understanding of the genetic diversity of the bat-associated viruses to prevent future outbreaks. To facilitate further research, we constructed the database of bat-associated viruses (DBatVir). Known viral sequences detected in bat samples were manually collected and curated, along with the related metadata, such as the sampling time, location, bat species and specimen type. Additional information concerning the bats, including common names, diet type, geographic distribution and phylogeny were integrated into the database to bridge the gap between virologists and zoologists. The database currently covers >4100 bat-associated animal viruses of 23 viral families detected from 196 bat species in 69 countries worldwide. It provides an overview and snapshot of the current research regarding bat-associated viruses, which is essential now that the field is rapidly expanding. With a user-friendly interface and integrated online bioinformatics tools, DBatVir provides a convenient and powerful platform for virologists and zoologists to analyze the virome diversity of bats, as well as for epidemiologists and public health researchers to monitor and track current and future bat-related infectious diseases. © The Author(s) 2014.

关键词： Desmodus rotundus   zoonotic disease   host-pathogen dynamics   spatial processes   wildlife culling  

摘要： Bats are important reservoirs for emerging infectious diseases, yet the mechanisms that allow highly virulent pathogens to persist within bat populations remain obscure. In Latin America, vampire-bat-transmitted rabies virus represents a key example of how such uncertainty can impede efforts to prevent cross-species transmission. Despite decades of agricultural and human health losses, control efforts have had limited success. To establish persistence mechanisms of vampire-bat-transmitted rabies virus in Latin America, we use data from a spatially replicated, longitudinal field study of vampire bats in Peru to parameterize a series of mechanistic transmission models. We find that single-colony persistence cannot occur. Instead, dispersal of bats between colonies, combined with a high frequency of immunizing nonlethal infections, is necessary to maintain rabies virus at levels consistent with field observations. Simulations show that the strong spatial component to transmission dynamics could explain the failure of bat culls to eliminate rabies and suggests that geographic coordination of control efforts might reduce transmission to humans and domestic animals. These findings offer spatial dynamics as a mechanism for rabies persistence in bats that might be important for the understanding and control of other bat-borne pathogens.

关键词： 蝙蝠   轮状病毒   分离鉴定   系统进化分析  

摘要： 蝙蝠是携带人兽共患病毒最多的一种哺乳动物,调查蝙蝠携带病毒的病原生态学本底对防范蝙蝠病毒威胁人类健康具有重要意义。本研究采集云南省部分地区蝙蝠进行病毒宏基因组学分析,在一组食虫蝙蝠样品中发现了A群轮状病毒(Group A rotaviruses,RVA)序列,经过进一步RT-PCR筛查验证及病毒的分离鉴定,最终从勐远县的1只三叶蹄蝠中分离出一株轮状病毒。扩增该毒株的VP7与VP4基因进行分型与系统进化分析,结果表明其VP7基因为G3型,与来自阿根廷的1株马轮状病毒的同源性最高,为93%;其VP4基因为P[10]型,与来自泰国的1株人轮状病毒同源性最高,为94.8%。通过与本实验室之前分离的首株蝙蝠G3P[3]型轮状病毒MSLH14的比较,确定该毒株为一株新的蝙蝠轮状病毒,命名为RVA/Bat-tc/MYAS33/2013/G3P[10],简称MYAS33。本研究结果进一步证明了蝙蝠轮状病毒的多样性,突显了蝙蝠作为轮状病毒潜在宿主的重要性。