关键词： 白纹伊蚊   致倦库蚊   蝙蝠   乙型脑炎病毒   感染  

摘要： 目的了解蝙蝠乙脑病毒分离株GD1和HN2株对白纹伊蚊和致倦库蚊的易感性。方法通过病毒液饲喂法使白纹伊蚊和致倦库蚊经口感染蝙蝠乙脑病毒GD1株和HN2株,采用TaqMan real-time RT-PCR方法,检测GD1株和HN2株感染白纹伊蚊及致倦库蚊后第4、6、8、10、12、14、16、18、20天病毒存在情况与病毒载量的动态变化。结果两株蝙蝠乙脑病毒在感染白纹伊蚊、致倦库蚊后4~20 d内均能被检测到。Ct值的动态变化规律显示白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染乙脑病毒GD1株和HN2株,但致倦库蚊的易感性高于白纹伊蚊;两株毒株的毒力可能不同,HN2株毒力大于GD1株。结论白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染蝙蝠乙脑病毒分离株。

关键词： ARTIBEUS   INFLUENZA viruses  

摘要： The article reports on a report claiming the capability of Fruit bats in carrying influenza virus.

关键词： 严重急性呼吸道综合症   SARS冠状病毒   遗传进化   受体利用  

摘要： 严重急性呼吸道综合症(Severe Acute Respiratory Syndrome,SARS)是一种动物源性疾病,其病原体是一种新型的冠状病毒-SARS冠状病毒(SARScoronavirus,SARS-CoV)。在蝙蝠体内发现的蝙蝠SARS样冠状病毒(SARS-likecoronavirus,SL-CoV)与SARS-CoV基因组高度相似,但是不能利用SARS-CoV的受体ACE2入侵细胞,说明目前发现的蝙蝠SL-CoV还不是SARS-CoV的直接祖先。本论文进一步对SARS-CoV的直接来源、蝙蝠SL-CoV基因组遗传进化和受体利用进行了研究,取得结果如下:\n 1.调查了中国大陆南方蝙蝠中冠状病毒的流行情况,发现了一株与SARS-CoV同源性极高的新型蝙蝠SL-CoV,命名为SHC014。SHC014基因组的全长为29769nt,其结构与2b类代表性冠状病毒非常相似。与已知蝙蝠SL-CoV相比,SHC014拥有一个较长的ORF3b;与人SARS-CoV相比,SHC014有一个完整的ORF8。SHC014的基因组全核苷酸序列与人或果子狸SARS-CoV相似性最高,达到了95.2%,其pla、S、ORF3、N基因与人或果子狸SARS-CoV最近,而plb、E、M、ORF6、ORF7、ORF8和3’末端茎环结构样基序(Stem-loop2-likemotif,s2m)与蝙蝠SL-CoV最相似。在主要变异区中,SHC014的S蛋白受体结合区(Receptor Binding Domain,RBD)无其它蝙蝠SL-CoV特有的缺失,ORF3b在114个氨基酸中与人SARS-CoV只有一个位点的差异。系统进化分析表明,SHC014是目前已知蝙蝠SL-CoV中与SARS-CoV亲缘关系最近的一株。重组分析显示SARS-CoV不是由SHC014与已知的蝙蝠SL-CoV直接重组而来。此外,在菊头蝠、鼠耳蝠和翼蝠中检测到了与蝙蝠存在一定宿主特异性的冠状病毒,系统进化上隶属于α冠状病毒属的1b类和β冠状病毒属的2b类冠状病毒。\n 2.构建了SHC014S蛋白的假病毒系统,以及基于人SARS-CoV BJ01和蝙蝠SL-CoV Rp3的S为骨架,嵌合有SHC014 RBD区的嵌合体和点突变体,研究了这些假病毒利用人ACE2入侵细胞的能力。假病毒感染实验表明SHC014不能利用人ACE2分子,但是嵌合有SHC014 RBD区的BJ01 S可以介导假病毒的入侵,从分子水平上证明了SHC014与SARS-CoV的RBD区具有相似的功能。

关键词： 蝙蝠蛾被毛孢   免疫调节  

摘要： 目的研究蝙蝠蛾被毛孢对小鼠免疫功能的影响。方法以KM种小鼠为研究对象,将小鼠分为空白对照组、低剂量组(110mg/kg)和中剂量(220mg/kg)、高剂量组(450mg/kg),连续灌胃用药28d,进行小鼠碳粒廓清试验、血清溶血素试验和二硝基氟苯(DNFB)诱导小鼠迟发性变态反应(DTH)。结果与空白对照组相比,蝙蝠蛾被毛孢在220、450mg/kg剂量下,能明显增强小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能、体液免疫功能和细胞免疫功能。结论蝙蝠蛾被毛孢有明显的免疫促进作用。

关键词： 乙脑病毒   蝙蝠   分离   鉴定   基因组   序列分析  

摘要： 研究背景和目的流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis B,JE,简称乙脑)也称日本脑炎,是由流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV,简称乙脑病毒)引起,经蚊传播的人畜共患的中枢神经系统急性传染病。乙脑病毒是热带和亚热带地区最普遍的节肢动物媒介病毒之一,属于黄病毒科,黄病毒属病毒,为单股正链RNA病毒,RNA大小约为11kb,含有一个长的开放阅读框架(ORF)编码3个结构蛋白(C蛋白、PrM/M蛋白、E蛋白)和7个非结构蛋白(NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5),分五个基因型,一个血清型。乙脑流行于亚洲东部、南部及太平洋沿岸,全球每年大约有35000～50000例病例,其中约10000～15000例死亡。乙脑的受害者大多是儿童,约50%的幸存者有神经系统后遗症。乙脑在世界许多国家均有流行,我国是高发地区,全国除了青海以外的省市均有乙脑病例的报道,局部地区有爆发或者流行。乙脑病毒的动物储存宿主主要是猪和鸟。蝙蝠已经被认识到是一种重要的病毒储存宿主。中国和日本的一些研究表明在蝙蝠体内能检测到乙脑病毒或乙脑病毒的血清抗体。中国学者有从蝙蝠体内分离出乙型脑炎病毒的报道。近年来,中国云南省的4株乙脑病毒蝙蝠分离株(B58、GB30、HB49和HN97)的基因组序列已被确认,这4株乙脑病毒蝙蝠分离株均属于GⅢ型。然而,蝙蝠在人畜乙脑传播中的作用尚不清楚。鉴于乙脑病毒的基因型有一定的地区和时间分布特征,对蝙蝠乙脑病毒株的基因型以及其与人、猪、蚊分离株的基因同源性进行分析,可有助于探讨蝙蝠在乙脑病毒传播中的作用。本研究中,我们对本实验室采集自中国广东、海南、湖南的普通长翼蝠、小黄蝠、中华菊头蝠、大足鼠耳蝠这4个蝙蝠种的9份可疑乙脑病毒阳性标本进行了乙脑病毒分离、鉴定以及基因组序列的确定及分析。同时,我们从GenBank中选取了代表不同时间、地域、宿主的其他乙脑病毒株,包括23个乙脑病毒基因组全序列、12个E蛋白的基因序列、6个M蛋白的基因序列及1个NS5蛋白的基因序列,与我们的分离株一起进行基因序列的比较和分析。本研究目的是通过上述分析,初步阐明蝙蝠在乙脑病毒传播的作用。研究方法1蝙蝠乙脑病毒株的分离单层BHK-21细胞接种9份可疑蝙蝠乙脑病毒阳性标本(GD1、HN1、HN2、HN3、YY1、YY2、YY3、SY87、YY158),持续观察7天,并设本实验室保存的中山株(Nakayama)为阳性对照,正常细胞为空白对照。7天后收取细胞病毒液,于-80℃冰箱中冻存。每组5只2～3日龄NIH乳鼠分别经颅接种0.02ml可疑蝙蝠乙脑病毒阳性标本(GD1、HN1、HN2、HN3、YY1、YY2、YY3、SY87、YY158),设Nakayama株作阳性对照,阴性对照接种DEPC水。观察记录乳鼠是否出现拒乳、弓背、行动迟缓、侧卧、抽搐、嗜睡、偏瘫等症状以及死亡情况。接种后24h内每2h观察1次,24h后一天观察3次,持续14天。无菌操作解剖乳鼠取脑组织保存于RNAlater,置于-80℃冰箱。2蝙蝠乙脑病毒株的鉴定2.1蝙蝠乙脑病毒特异性核酸的检测将染毒BHK-21细胞悬液和染毒乳鼠脑组织进行RNA提取、逆转录、PCR,可疑阳性PCR产物送公司测全序。2.2蝙蝠乙脑病毒滴度的测定采用毒力稳定的第三代盲传病毒细胞液,用细胞全培液将病毒液作连续10倍的稀释从10-1到10-8,每一稀释度接种8孔,设阳性对照和空白对照。显微镜下观察记录病变孔数。采用Reed-Muench法计算TCID50。2.3间接免疫荧光参照文献以及抗体试剂盒说明书(Abcam)选择抗体工作浓度进行检测。2.4蝙蝠乙脑病毒半数致死量(LD50)的测定乳鼠以窝为单位分成12组,每组5～6只,采用经颅接种0.02ml的方式。一组为阳性对照组接种中山株(Nakayama),一组为阴性对照组接种5%MEM细胞培养液,另外十组分别接种GD1和HN2株10-0～10-4的病毒液。观察记录死亡情况,采用改良寇氏法计算半数致死量。取10-2组死亡鼠脑进行RNA的提取,RT-PCR检测乙脑病毒E基因的目的片段。2.5病理组织观察10-0GD1、10-0HN2组、阳性对照组和阴性对照组乳鼠死亡后立即取脑保存于10%福尔马林中,制成石蜡切片进行观察。3蝙蝠乙脑病毒株基因组的分析根据分离的国家、年份、宿主从Genbank中选出23个乙脑病毒基因组序列、12个E蛋白的基因序列、6个M蛋白的基因序列及1个NS5蛋白的基因序列作为比较的基因序列。采用MEGA4.0软件进行多序列比对。采用MegAlign软件对核苷酸的相似性、氨基酸序列的相似性进行计算。采用DNAMAN软件预测RNA二级结构。采用Geneious 5.5.6显示基

关键词： 刺突蛋白   受体结合功能域   蝙蝠SARS样冠状病毒   杆状病毒  

摘要： 目的:在昆虫细胞表达系统中表达蝙蝠SARS样冠状病毒Spike蛋白的受体结合域,并探讨其表达动力学和纯化条件。方法:以PCR扩增蝙蝠SARS样冠状病毒Spike基因的受体结合域片段,产物连接到pMD-T载体,再亚克隆至供体质粒pFAST-HTB,经序列测定确认基因正确克隆,进一步将其转座入Bacmid中,在昆虫细胞Sf9中进行表达,采用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行分析,并通过镍离子螯合树脂纯化重组蛋白。结果:在昆虫细胞表达系统中表达出蝙蝠SARS样冠状病毒Spike蛋白的受体结合域片段,当感染复数(multiplicity of infectiin,MOI)为2时,重组病毒感染细胞56 h后,重组蛋白的表达量达到峰值。结论:蝙蝠SARS样冠状病毒Spike蛋白的受体结合域片段在昆虫细胞表达系统中得到了有效表达,并可通过镍离子螯合树脂纯化重组蛋白。

关键词： 蝙蝠蛾被孢菌丝体   多糖   淋巴细胞   巨噬细胞  

摘要： 目的探讨蝙蝠蛾被孢菌丝体多糖免疫调节作用的机理。方法将不同剂量的蝙蝠蛾被孢菌丝体多糖加入体外培养的小鼠淋巴细胞中,观察其对淋巴细胞增殖的影响。另外取CPSM培养的巨噬细胞RAW264.7,观察CPSM对巨噬细胞增殖、NO释放及吞噬中性红功能的影响。结果 CPSM具有促进体外培养的小鼠脾脏淋巴细胞增殖及促进巨噬细胞RAW264.7增殖、释放NO及吞噬功能。结论本研究为冬虫夏草增强免疫机能作用提供了依据。

关键词： 蝙蝠蛾被孢霉菌丝体   多糖   抑瘤   免疫调节  

摘要： 目的:观察蝙蝠蛾被孢霉菌丝体多糖(CPSM)对荷瘤小鼠抑瘤及免疫功能的影响。方法:应用水提醇沉法从蝙蝠蛾被孢霉虫草菌丝体(CSM)中获得CPSM,将荷瘤小鼠分组并灌胃不同剂量CPSM(11、33、100 mg/(kg.d))10d,观察药物抗肿瘤及免疫增强的作用。结果:CPSM33 mg/(kg.d)CPSM对H22荷瘤小鼠有明显的抑瘤作用,抑瘤率为43.49%,且能促进小鼠的胸腺指数和脾指数。33、100 mg/(kg.d)剂量能显著提高小鼠的血清溶血素水平(P<0.01),增强小鼠的碳粒廓清能力(P<0.05)。结论:蝙蝠蛾被孢霉菌丝体多糖能明显抑制H22肝癌,并调节机体体液免疫功能,促进巨噬细胞的吞噬能力。

关键词： 蝙蝠冠状病毒   S蛋白表达   抗体制备   假病毒感染  

摘要： 2002-2003年暴发的SARS(Severe Acute Respiratory Syndrome)是由一类新型冠状病毒引起的高致死率的呼吸道疾病，在SARS冠状病毒溯源工作中，在蝙蝠体内发现一类与SARS冠状病毒在基因组上有很高相似性的冠状病毒，命名为SARS样冠状病毒(SL-CoV)。随后又在蝙蝠体内发现了多种冠状病毒的存在。本论文对蝙蝠冠状病毒S基因进行研究，内容如下:\n 1，构建了两株分别属于Alphacoronavirus属和Betacoronavirus属的蝙蝠冠状病毒672株和1292株的S蛋白全长真核表达克隆(pCDNA3.1-672S和pCDNA3.1-1292S)及两株蝙蝠冠状病毒RP3株和1292株截短真核表达克隆(pHCMV-RP3S1-his,pHCMV-1292S1-his,pET32a-1292S1)，并以BJ01株SARS-CoV和RP3株SL-CoV为骨架构建了其与BM48-31株RBD区域的嵌合体S蛋白(pCDNA3.1-RP3-BM48S和pCDNA3.1-BJ01-BM48S)\n 2，选取了中华菊头蝠和中华鼠耳蝠两种蝙蝠制备蝙蝠原代细胞，成功制备了来源于肾、肺、心、脑、肠组织的原代细胞共九株，并将其中七株永生化，进行了三种蝙蝠冠状病毒S蛋白的假病毒感染实验，结果显示制备的蝙蝠细胞并不能被所用的假病毒感染。

关键词： 色觉   行为学   免疫组织化学   视觉诱发电位   蝙蝠  

摘要： 蝙蝠(翼手目,Chiroptera)作为哺乳动物的第二大类群,是唯一真正具有飞行能力的兽类,行夜行性生活,这种进化上的优势使它们利用了兽类中一个全新的生态位。蝙蝠具有极其丰富的物种多样性,在生态系统中扮演着不可或缺的角色,因此对蝙蝠的保护和研究具有很重要的意义。因其具有独特的回声定位能力,目前对蝙蝠的研究主要集中在听觉领域,而对其视觉尤其是色觉的研究很少。 本研究首次运用行为学、免疫组织化学和神经电生理学三种技术手段对四类蝙蝠的色觉进行了研究。结果表明,调频小蝙蝠和树栖的大蝙蝠具有紫外视觉,而恒频小蝙蝠和洞栖的大蝙蝠不具有紫外视觉,进一步验证了前期分子学研究的结论(Zhao et al.,2009)。大蝙蝠原本生活在树上,进化过程中有小部分栖息地变为基本无光的洞穴,其结果导致了这部分旧大陆果蝠视觉发生退化。对恒频蝙蝠而言,视觉退化的根本原因在于它具有一种更发达的回声定位能力。发达的听觉使恒频蝙蝠不再需要发达的视觉,进而引起视觉退化。这也与前人提出的感觉代偿理论相符合(Speakman,2001). 我们还发现,调频小蝙蝠、恒频小蝙蝠和洞栖大蝙蝠的视觉诱发电位都在中/长波段550nm附近出现一个反应峰值,树栖大蝙蝠的视觉诱发电位虽没有在此波段出现明显的反应峰值,但中/长波段反应的最大值也出现在550nm附近。这与分子学证据,即中/长波长视蛋白(M/LWS)基因在哺乳动物中高度保守,大部分蝙蝠M/LWS的最大光吸收值在553nm相符(Zhao et al.,2009)。