关键词： 无规定马属动物疫病区   蝙蝠   种类   分布   尼帕病毒  

摘要： [目的 ]了解广东从化无规定马属动物疫病区蝙蝠的分布及其尼帕病毒感染情况。[方法 ]采用声频调查结合粘网捕捉和手抄网捕捉方法进行蝙蝠样品的采集,并用荧光定量PCR检测方法对采集的蝙蝠咽/肛拭子进行尼帕病毒进行检测。[结果 ]发现广东从化无规定马属动物疫病区的蝙蝠集群性并不明显,种群密度较低且平均,调查记录的蝙蝠大多是属于小蝙蝠亚目的食虫蝙蝠,并未发现尼帕病毒的自然宿主―狐蝠;对采集的241只蝙蝠进行尼帕病毒检测,结果均为阴性。[结论 ]本次调查未发现蝙蝠携带尼帕病毒,但也发现本地区存在较多数量和种类的蝙蝠,为预防和控制尼帕病毒传入及可能发生的流行,有必要开展对蝙蝠的长期监测。

关键词： 云南省   病毒学   蝙蝠   疾病预防控制中心   军事医学   地方病   研究所   科学院  

摘要： 据2014年5月19日《中国科学报》报道，中国军事医学科学院军事兽医研究所涂长春联合云南省地方病防治所和成都军区疾病预防控制中心，在云南省蝙蝠病毒研究方面取得重要进展。相关成果发表于《病毒学杂志》。

关键词： 甲型流感病毒   甲型流感病毒聚合酶   蝙蝠   适应突变  

摘要： 本研究通过对蝙蝠中高度不同的甲型流感病毒的研究发现了新的、地理位置分散的病毒库。为调查宿主限制性病毒嗜性的分子机制及病毒在人类和蝙蝠之间传播的潜力,本研究将来自不同品种的蝙蝠细胞系与人源甲型流感病毒原型株一起进行试验。结果显示试验用的所有蝙蝠细胞株均对甲型流感病毒易感,蝙蝠细胞中人类和禽类流感病毒的进化导致了病毒的有效复制并产生了高度细胞病变的变种。对适应人类的甲型流感病毒的深度测序揭示了以前未报道过的PA聚合酶亚基M285K的突变。编码PA M285K的重组病毒完全改变适应病毒的表型。禽类病毒的适应导致其他哺乳动物有效复制所需的PB2E627K发生突变。没有一个适应突变发生在为识别唾液酸受体宿主特异性变化而经常发生基因改变的病毒血细胞凝集素上。研究结果发现,人源流感病毒利用典型的唾液酸受体感染蝙蝠细胞,即使蝙蝠流感病毒似乎并没有使用这些受体的病毒入口。结果表明,蝙蝠是支持病毒聚合酶新的或众所周知的适应突变独一无二的宿主。

关键词： 蝙蝠   汉坦病毒   自然宿主  

摘要： 汉坦病毒是一种人兽共患病病原,通过RT-PCR扩增汉坦病毒M片段基因序列检测我国广东蝙蝠,首次在广东地区健康蝙蝠样品中扩增出长度约170 bp的汉坦病毒cDNA片段,测序证实为汉坦病毒的M片段序列,同源性达到99%以上。共检测了5个蝙蝠种类的74只蝙蝠的咽、肛拭子样品,阳性率为12.16%。说明蝙蝠也携带和传播汉坦病毒,是汉坦病毒的宿主动物。鉴于蝙蝠与人类关系越来越密切,提醒我们在畜牧业和种植业工作中要加强防范蝙蝠传播病毒给家养动物和人类。

关键词： 蝙蝠   细小病毒   分离   鉴定   基因型  

摘要： 目的对1株蝙蝠来源病毒进行分离鉴定,进行简单的基因分析。方法从云南沧源县8个居民地附近捕获50只棕果蝠并制作组织标本,采用细胞培养分离病毒,采用cDNA-RAPD方法扩增序列,采用分子克隆进一步扩增序列,将序列在NCBI上进行BLAST比对,采用DNAMAN5.0进行同源性分析,采用MEGA 5建序列进化树。结果 50份接毒细胞中,6份细胞出现细胞病变,cDNA-RAPD扩增得到1份阳性片段,测序大小为614 bp,经比对该病毒株是细小病毒科细小病毒亚科博卡病毒属牛细小病毒种的一个毒株。结论成功分离并鉴定该毒株,确定该病毒是牛细小病毒的一个新的基因型。

关键词： ACE2受体   SARS   样冠状病毒   分离   鉴定  

摘要： 2002年3月由严重急性呼吸综合征冠状病毒（severeacuterespiratorysyndromecoronavirus，***）导致的疫情大流行无疑是当代最受关注的公共卫生事件。近来中东呼吸综合征冠状病毒（MiddleEastrespiratorysyndromecoronavirus）疫情的爆发表明这类病毒仍然具有很大威胁，而且其分布比预期的更加广泛。尽管蝙蝠被认为是这2种冠状病毒的自然宿主，但是目前仍未能从蝙蝠中分离出SARS-CoY的祖先病毒（progenitorvires）。据报道，在中国、欧洲和非洲的蝙蝠中曾经发现了多种SARS样冠状病毒（SARS-likecomnavimses，SL-CoVs），但是它们都不是SARS冠状病毒的直接祖先，。因为其系统发生与SARSCoY不一致，而且其突起蛋白都不能利用***的细胞受体分子，

关键词： 流感病毒   血凝素   神经氨酸酶   中和抗体   晶体结构   酶活机制  

摘要： 流感是由流感病毒引起的，在人群及多种动物之间流行的急性、高度传染性的疾病。流感病毒大流行和季节性流感的发生给人类健康带来了很大威胁，造成了重大的经济损失，对流感病毒的预防和控制一直是科学研究的重要内容。流感病毒属于正黏液病毒科，是单股负链RNA病毒，其膜表面有两种重要的糖蛋白，血凝素和神经氨酸酶，在流感病毒生命周期中都具有重要的功能。\n 血凝素（Hemagglutinin，HA）是病毒表面重要的糖蛋白，参与受体结合、膜融合，帮助病毒粒子进入宿主细胞。HA受体结合的偏好性是病毒宿主范围的决定因素之一。HA是中和抗体作用的主要靶标，抗体可以通过阻断受体结合和阻断膜融合来抑制病毒。了解各种HA亚型结构特点及其受体结合偏好性对流感病毒的预防和控制具有重要指导意义。\n 神经氨酸酶(Neuraminidase，NA)的主要功能是促使新生病毒颗粒释放并帮助病毒颗粒在呼吸道粘液中迁移。NA结构中有保守的酶活位点，是抑制剂作用的重要靶点，基于NA晶体结构设计的药物Zanamivir和Oseltamivir是目前治疗流感最有效的药物，是基于结构的药物设计的成功范例。NA晶体结构的解析和酶活机制的研究对于新型抑制剂的研究具有重要指导意义。\n 2012年研究人员从蝙蝠体内发现了一个新的流感样病毒基因组H17N10，这对流感病毒的起源和进化都提出了新的疑问。氨基酸序列分析发现H17和N10与已有亚型差异性很大，它们具有怎样的结构功能特点，我们对H17和N10进行了研究。解析了H17的晶体结构，H17具有典型的三聚体结构，但受体结合位氨基酸发生了很多改变使得受体结合槽构象变化，通过功能试验发现对α2，3和α2，6唾液酸受体都不结合。研究解析了N10的结构，发现N10具有四聚体蘑菇样结构。体外酶活实验发现N10不具有传统NA的酶活活性。结构分析发现N10中酶活位点的保守氨基酸发生了很多改变，使得酶活位点构象变化，不利于唾液酸受体的结合和切割。总结研究表明H17不结合传统的唾液酸受体，N10不具有酶活活性，蝙蝠来源的流感病毒可能使用不同的入侵机制，为蝙蝠流感病毒感染的分子机制研究提供了思路。\n 在已有的NA亚型中，N7是唯一一个结构尚未解析的亚型， N6的结构分析也没有相关文章报导。本研究中分别解析了N7和N6的晶体结构。对所有NA结构进行比较发现，N7和N6属于典型的第二组NA，不具有150洞，在酶活位点旁边具有一个由340环形成的洞。对所有NA的N-糖基化，钙离子结合位点，第二唾液酸结合位点等进行了全面的比较分析。这些研究对于全面分析NA以及NA新型抑制剂的研究具有重要的指导意义。\n 此外，本研究还对1977年造成流行的H1N1病毒的H1蛋白进行了相关结构和功能的研究，发现其对人源受体具有很好的亲和力，对禽源受体具有比较低的结合，其与受体结合的结构基础及相关晶体结构目前正在研究中。本研究还对流感病毒HA蛋白与广谱中和抗体作用的结构基础进行了相关研究，期望找到具有广谱效果的抗体及其保守的抗原表位，对流感病毒的治疗和疫苗开发提供基础，由于复合物晶体生长限制，研究目前还在进行中。\n 总之，本论文使用体外结合实验和X-射线晶体学方法阐明了新型蝙蝠流感基因组H17和N10的结构功能特点，并对最后一个结构尚未解析的NA亚型N7进行了结构功能研究，为各种亚型流感病毒HA和NA结构功能特点的全面认识提供了基础。

关键词： 乙脑病毒   蝙蝠   血清抗体   病毒检测  

摘要： 研究背景和目的流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE,简称乙脑)也称日本脑炎,是由流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV,简称乙脑病毒)引起,经蚊传播的人畜共患的中枢神经系统急性传染病。乙脑的病死率高达20%～30%,30%～50%存活者患有神经系统后遗症,仅25%存活者最终能够完全康复,乙脑给社会和家庭带来了巨大的疾病负担。乙脑病毒属于黄病毒科黄病毒属,为单股正链RNA病毒,大小约为11kb,含有一个长的开放阅读框架(open reading frame,ORF),其ORF编码3个结构蛋白(C蛋白、PrM/M蛋白、E蛋白)和7个非结构蛋白(NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5)。乙脑病毒一共分为五个基因型(GⅠ、GⅡ、GⅢ、GⅣ和GⅤ)。GⅠ型乙脑病毒主要分布在印度、澳大利亚、韩国、日本和东南亚地区;GⅡ型分布在韩国、泰国、印度尼西亚、马来西亚、澳大利亚和巴布亚新几内亚;GⅢ型分布在印度尼西亚、马来西亚、斯里兰卡、尼泊尔、韩国、日本和中国;GⅣ型主要分布在印度;GV分布在新加坡、马来西亚和中国。最新的进化发育分析发现近年在亚洲,如中国、泰国、韩国、日本、马来西亚、越南、泰国等,存在GⅠ取代GⅢ成为亚洲主要流行株的趋势。乙脑流行于亚洲东部、南部及太平洋沿岸,全球每年大约有67900例报告病例,其中约33900(50%)例发生在中国(中国台湾除外);近51000(75%)例患者为0～14岁的儿童(发病率5.4/100000)。我国是乙脑高发地区之一,全国除了青海以外的省、直辖市、自治区均有乙脑病例的报道,局部地区有暴发或者流行。我国乙脑高流行区(发病率>0.5/100000)包括河南、重庆、四川、贵州及云南,尽管其人口只占全国人口的26%,但50%以上的乙脑病例来自这些地区。中流行区(发病率为0.2/100000～0.5/100000)包括陕西、安徽、湖北、湖南、江西及广西省。其他省份(不包括青海)均为低流行区(发病率<0.2/100000)。已知猪是乙脑病毒主要的动物储存和扩散宿主。除猪以外,有些动物也被认为是乙脑病毒的宿主,其中包括蝙蝠。蝙蝠被认为是重要的病毒储存宿主,迄今为止已在蝙蝠体内分离出80多种病毒,例如冠状病毒、亨德拉病毒、埃博拉病毒,其中也包括乙脑病毒。中国和日本的研究表明在蝙蝠体内能检测到乙脑病毒或乙脑病毒的血清抗体。近二十年来,中国云南省的4株乙脑病毒蝙蝠分离株(B58、GB30、HB49和HN97)及本课题组分离出的广东、湖南及海南乙脑病毒蝙蝠分离株(GD1、HN2、YY87和YY158)的基因组序列已被确认,这8株乙脑病毒蝙蝠分离株均属于GⅢ型。然而,目前中国大陆主要流行的乙脑病毒株为GⅠ型。蝙蝠在乙脑传播环节中的作用尚不清楚。为了进一步探讨蝙蝠在乙脑病毒传播中的作用,我们在广东省和海南省部分地区收集蝙蝠标本,了解蝙蝠乙脑病毒携带率及血清抗体阳性率情况。研究方法1.蝙蝠标本的收集与处理2013年6月至2013年11月期间,在广东和海南省部分地区收集蝙蝠标本,进行编号后请广州大学生命科学院蝙蝠研究专家吴毅教授和海南师范大学生命科学院陈忠教授进行种类鉴定。蝙蝠收集地点主要为野外阴湿的山洞。蝙蝠乙醚麻醉,心脏采血后无菌解剖,取脑组织标本,保存在含有RNAlater的冻存管中,与血样一起置于密封的冰袋泡沫盒中,12 h内运输回实验室,放入-80℃冰箱保存,待检测。2.蝙蝠血清乙脑抗体的检测蝙蝠血液离心后取血清,用间接ELISA法检测蝙蝠血清中的乙脑病毒抗体。3.蝙蝠脑组织乙脑病毒的检测首先用Roche High Pure Viral RNA Kit提取蝙蝠脑组织RNA病毒核酸,然后用Roche Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit进行逆转录合成cDNA,之后以逆转录产物cDNA为模板,利用TaqMan Real-time PCR法检测乙脑病毒。4.蝙蝠乙脑病毒株的分离单层BHK-21细胞分别接种5份TaqMan Real-time PCR检测蝙蝠乙脑病毒阳性标本(HK21、GD189、GD190、GD219、GD220),并设乙脑病毒Nakayama株为阳性对照,正常细胞为空白对照。持续观察7天,7天后收取细胞病毒液,于-80℃冰箱中冻存。期间,若细胞形态出现明显变化,如细胞圆缩、颗粒增多、融合或碎裂死亡判断为阳性,阳性标本做分子生物学检测及进一步培养分离;未观察到细胞形态变化者,利用TaqMan Real-time PCR检测是否有病毒增殖。连续盲传三代,若细胞形态仍无变化,且TaqMan Real-time PCR检测结果为阴性,则判断为阴性。每组5只2～3日龄N

关键词： 蝙蝠   冠状病毒   沙特阿拉伯   呼吸系统   解剖学   中东  

摘要： 自从2012年9月份报道了中东呼吸系统综合征(MERS)以来,全世界范围已经有90例这样的病历,其中70个就来自沙特阿拉伯。引起该疾病的β-冠状病毒还没有确定,但是该病毒的死亡率极高,大约为65%。人传染人的情况已被记录在案,但是人类感染中东呼吸系统综合症冠状病毒的来源还不清楚。从2013年10月到2013年8月,沙特阿拉伯卫生部及美国哥伦比亚大学的研究人员从发现中东呼吸系统综合症的地方的蝙蝠身上收集了一些病毒样品并进一步进行了鉴定。随后他们调查了那些感染该病毒的病人和家属以及他们住所小于12公里范围内的蝙蝠样品,包括一个无人看管的海枣园和他工作1公里范围的一个五金店前边的一个花园。尽管无

关键词： 蝙蝠   病毒宏基因组学   病毒组   基因组鉴定   细胞分离  

摘要： 蝙蝠是世界上仅次于啮齿类的第二大类哺乳动物，其分布于除两极以外的地方，同时也是许多病毒的自然宿主。我国云南省地处西南边陲，与缅甸、老挝、越南等东南亚国家接壤，战略意义突出。该地区是多种疾病的疫源地，研究发现该地区蝙蝠携带有多种人兽共患病毒，如尼帕病毒(Nipah virus)、乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus)、基孔肯雅病毒(Chikungunya virus)、狂犬病毒(Rabiesvirus)、圆环病毒(Circovirus)等。为了有效地监控云南省及周边地区新发传染病(emerging infectious diseases, EID)，防止野生动物(特别是蝙蝠)疫病，跨种和跨境传播给其它动物甚至是人类，保障边境地区人民生命安全，彻底调查该地区蝙蝠病毒生态学具有重要的意义。而基于第二代高通量测序(High-throughputsequencing)的病毒宏基因组学(Viral metagenomics, ViralMeta)则为调查已知和未知病毒提供了高效的工具。 本研究于2008年到2011年间，共收集到1,219份外表健康蝙蝠样品，收集地点涵盖邻近云南省的缅甸的昔懂坝县和吴涛县以及我国云南省的6个市县。蝙蝠涉及3个科：蝙蝠科（Vespertilionidae）、菊头蝠科（Rhinolophidae）和假吸血蝠科（Megadermatidae）共5个属11种。经过ViralMeta处理一共得到326,318,951个碱基(nt)，总共5,864,636个读长（reads），经过拼接得到3,605,620个重叠序列（contigs），其中2%的序列注释到了病毒（Virus-like contigs，59,661/3,605,620）。这些病毒中可以进一步分为27个科（包含细小病毒科中的细小病毒亚科和浓核病毒亚科），49个病毒属，包含16个哺乳动物病毒科22个属、5个昆虫病毒科8个属、3个植物病毒科4个属、3个噬菌体科15个属。在哺乳动物病毒中，有腺病毒科中的哺乳动物腺病毒属，疱疹病毒科中的细胞巨化病毒属、马立克病病毒属、玫瑰疹病毒属，异样疱疹病毒科中的鱼疱疹病毒属，乳头瘤病毒科中的甲型乳头瘤病毒属，多头瘤病毒科中的多头瘤病毒属，小双节RNA病毒科中的小双节RNA病毒属，嗜肝病毒科中的正嗜肝病毒属，圆环病毒科中的圆环病毒属，痘病毒科中的正痘病毒属，逆转录病毒科中的γ逆转录病毒属、Δ逆转录病毒属，细小病毒亚科中的依赖病毒属、博卡病毒属，星状病毒科中的哺乳动物星状病毒属，呼肠孤病毒科中的A型轮状病毒，冠状病毒科中的α冠状病毒属、β冠状病毒属，小RNA病毒科中的嵴病毒属、肠道病毒属，黄病毒科中的丙肝病毒属。通过比较发现，蝙蝠种群和地域之间病毒组具有显著的差异，主要体现在病毒的种类、病毒序列与已知序列的同源性差异、病毒序列的丰度等方面。通过该方法充分反应了该地区蝙蝠携带病毒组的情况。 根据病毒宏基因组学结果，针对有意义的新发现的腺病毒、正嗜肝病毒、星状病毒、冠状病毒、轮状病毒、软腐病毒等，建立了特异性PCR/RT-PCR检测方法，获得了这些病毒在蝙蝠体内的带毒率情况，结果发现缅甸吴涛县1%（1/84）的大蹄蝠（Hipposideros armiger）携带腺病毒，缅甸昔懂坝县2%(7/320)和吴涛县5%(15/320)的亚洲长翼蝠(Miniopterus fuliginosus)以及我国云南省普洱市20%(4/20)果树蹄蝠(Hipposideros pomona)携带正嗜肝病毒，缅甸吴涛县2%(2/84)的马铁菊头蝠(Rhinolophus ferrumequinum)携带星状病毒，祥云11%(13/120)、宾川7%(7/100)、景洪的6%(2/34)的鼠耳蝠为α冠状病毒（Coronavirus, CoV）阳性，而来自保山的14%(2/14)的中菊头蝠(Rhinolophus affinis)为β冠状病毒阳性，德宏6%（1/16）的小菊头蝠(Rhinolophus hipposideros)携带轮状病毒，而软腐病毒则广泛分布在蝙蝠体内。对扩增的部分片段进行遗传分析，发现这些病毒同已知病毒的核苷酸同源性不足85%，提示这些病毒为新型的蝙蝠病毒。 针对以上检测结果，挑选了肝炎病毒、冠状病毒和轮状病毒进行深入的分析。获得了3株缅甸和3株云南蝙蝠肝炎病毒的全基因组序列，分析发现缅甸和云南省的蝙蝠肝炎病毒基因组呈现典型的环状结构，且具有明确的进化差异，两者间核苷酸同源性仅为70%，同已知的正嗜肝病毒均具有显著的差异性，核苷酸同源性不足60%，说明发现了两株新型的肝炎病毒;抗原性分析推测该病毒可能与人的乙肝病毒发生交叉反应;直接从样品中电镜观察到了大量的澳大利亚抗原，进一步证实蝙蝠携带肝炎病毒;这是