关键词： EBOLA virus   IMMUNE system   CYTOKINES   GENOMES   MOLECULAR microbiology  

摘要： Natural reservoir hosts are capable of maintaining low-level infection of pathogens without succumbing to severe disease. Several bat species are now known to be hosts of viruses such as Ebola, SARS, and Hendra, spilling these lethal viruses into the human population. These same infections can cause mass-inflammation in humans and other animals while remaining asymptomatic in the bat. Our data, from investigation of primary bat immune cells and studying bat homologs, suggests that inflammasome activation pathways may be altered with dampened activation in response to stimuli. Interrogation of the pathways reveals poor Asc-recruitment and low induction of caspase-activation to natural and synthetic ligand. Initial observations show several key mutations, altered kinetics and a decrease in sensitivity to induce signaling all appear to be involved. From this we can gain understanding into a natural mechanism for controlling excess inflammation. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

关键词： 狂犬病病毒   蝙蝠   伊尔库特河病毒   细胞培养  

摘要： 通过对IRKV-THChina12适应细胞培养前后全基因组序列分析比对及与对不同种属狂犬病病毒氨基酸的比对,鉴定我国狂犬病病毒IRKV-THChina12株适应细胞培养后的分子生物学特性。结果显示,适应细胞培养后共发生11个核苷酸突变点和5个氨基酸突变点,其中1个氨基酸变异发生在P蛋白相互作用的LC8区域,2个氨基酸突变发生在M蛋白编码区,1个氨基酸突变发生在G(333位精氨酸未改变)蛋白编码区,L蛋白仅有1个氨基酸突变。结果表明,可能多个结构蛋白同时决定了病毒在Vero细胞的适应性,明确了本细胞适应毒株的分子生物学特性,为在细胞水平开展相关科学研究奠定了基础。

关键词： 蝙蝠算法   病毒进化   组合优化   背包问题  

摘要： 在蝙蝠算法优化的研究中,为提高蝙蝠算法的种群多样性和局部搜索性能,受病毒进化机制启发,提出一种改进的蝙蝠算法:病毒进化蝙蝠算法。采用病毒群体感染主群体,主群体在历代个体间纵向传递信息以利于全局优化,病毒群体通过感染操作在同代个体间横向传递信息利于局部搜索。利用多个不同规模的算例进行对比仿真,结果表明所提算法的在寻优精度和求解稳定性方面优于量子遗传算法和二进制粒子群等算法,可用于有效求解背包问题等NP难问题。

关键词： 蝙蝠   新发现病毒   储存宿主  

摘要： 蝙蝠是多种新发现病毒的自然储存宿主。近几年的调查研究表明,我国蝙蝠中广泛存在新型SARS样冠状病毒及其他多种类型冠状病毒的自然感染,还从蝙蝠中检测或分离到新型轮状病毒、肝炎病毒、汉坦病毒、腺病毒、呼肠孤病毒和副粘病毒等多种重要病毒以及埃博拉病毒和尼帕病毒抗体。现就我国自然界蝙蝠携带新发现病毒的研究进展做一综述。

关键词： 蝙蝠   乙型脑炎病毒抗体   酶联免疫吸附试验   病毒中和试验  

摘要： 目的：对蝙蝠血清进行乙型脑炎病毒（JEV）抗体的检测，了解蝙蝠感染JEV情况。方法2013年，我们在广东省和海南省采集蝙蝠，对采集到的蝙蝠心脏取血，分离血清，采用间接ELISA试验和病毒中和试验对血清进行JEV抗体的检测。结果间接ELISA检测201份蝙蝠血清，JEV抗体阳性率46.27%（93/201），其中，海南蝙蝠阳性率88.89%（48/54），广东蝙蝠阳性率30.61%（45/147）。在棕果蝠、普通长翼蝠、普通伏翼蝠和大耳菊头蝠血清中均检测到JEV抗体，普通长翼蝠（海南）阳性率最高达95.56%（43/45）。采用病毒中和试验对28份间接ELISA检测阳性的蝙蝠血清进行检测，阳性率53.57%（15/28），中和抗体滴度在1∶10~1∶28.22之间。结论不同地区和多个种类蝙蝠可自然感染JEV，且感染率较高，蝙蝠在JEV循环中的意义值得进一步探讨。

关键词： 狂犬病   家犬   蝙蝠  

摘要： 为了解广西狂犬病病毒（RV）感染与分布情况,本研究对采集自广西境内9个市31个县（区）1 007份犬脑组织、1 324份犬唾液拭子及564只野生蝙蝠进行RV检测,结果显示有6个县的犬脑组织检测出RV,阳性率为0.65%（1/153）～5.38%（5/93）,县（区）阳性率为27.27%（6/22）,广西划分的5个地理区域均有分布。外观健康犬和疑似发病犬脑组织平均阳性率分别为1%（10/1 005）和100%（2/2）。犬唾液拭子和野生蝙蝠均未检测到RV。结果表明广西家犬的RV感染率存在一定的地域性差异,平均感染率较低,但个别县（区）连续几年阳性率均处于较高水平,应加强对犬只的管理和疫苗免疫。

关键词： 蝙蝠甲型流感病毒   H17N10亚型   唾液酸   RNA聚合酶  

摘要： 2012年研究人员在蝙蝠中发现了甲型流感病毒H17N10新亚型。蛋白序列及结构分析显示,HA17蛋白及NA10蛋白与已知的甲型流感病毒的血凝素和神经氨酸酶不同,它们不能与唾液酸结合,表明H17N10亚型病毒的HA17蛋白及NA10蛋白可能具有新功能。本文将扼要介绍有关蝙蝠甲型流感病毒H17N10亚型的研究进展。

关键词： 蝙蝠   SARS样冠状病毒   核苷酸序列   β干扰素   缺失突变体   转录调控  

摘要： SARS-CoV(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus)是造成2002-2003年SARS疫情的病原，造成全球8094人感染和774人死亡。在追踪SARS-CoV溯源的过程中，本实验室在菊头蝠中发现与SARS-CoV相似的病毒，命名为SARS样冠状病毒(SARS-like CoV,SL-CoV)。近期，我们分离到一株与SARS-CoV更接近的SL-CoV WIV1。该病毒可以利用人、果子狸和中华菊头蝠的ACE2作为其功能受体，并且能感染人、猪、猴以及蝙蝠的多种细胞，进一步证实蝙蝠是SARS-CoV的自然宿主。SL-CoV WIV1与人SARS-CoV（Tor2株）的全基因组核苷酸序列同源性为95％，但在其ORF6和ORF7之间存在一个额外的未知功能的ORF，命名为ORFx。在本研究中，我们探讨了SL-CoV WIV1 ORFx的功能，取得了以下结果:\n 1.用Northern blot证实WIV1野生型病毒中有十条亚基因组mRNA，而ORFx缺失突变体病毒中只有九条，由此可以确定位于ORF6与ORF7之间的ORFx可以在WIV1中转录。RT-PCR的实验结果也验证了这一结论并且确定ORFX利用了与其他ORF相同的转录调控序列。\n 2.我们在大肠杆菌中表达了全长ORFx并制备兔多克隆抗体，用间接免疫荧光的方法证明ORFx在WIV1感染的细胞中表达。\n 3.通过反向遗传学技术，我们构建了GFP替代ORFx的突变体病毒，进一步证明ORFx在病毒感染的细胞中表达，但ORFx的缺失并不影响病毒的复制。表明ORFx为一个非必需的辅助蛋白。\n 4.利用荧光素酶双报告系统研究ORFx在调节天然免疫反应中的作用，结果发现ORFx对β干扰素有微弱的抑制作用，但能够剂量依赖性激活ds-RNA介导的NF-κB活化，还可以上调宿主细胞中IL-6、IL-8和TNF的表达，推测其可能参与炎症反应。

关键词： 蝙蝠   乙脑病毒   血清抗体   病毒血症   实验  

摘要： 研究背景和目的流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV,简称乙脑病毒)属于黄病毒科黄病毒属病毒,首次于1935年在日本从患者脑组织中分离获得(Nakayama病毒株,简称NAK),故又称日本脑炎病毒。乙脑病毒为单股正链RNA病毒,大小约为11 kb,只含一个长的开放阅读框架(open reading frame, ORF),编码3个结构蛋白(C蛋白、PrM or M蛋白、E蛋白)和7个非结构蛋白(NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5),分五个基因型(GⅠ、GⅡ、 GⅢ、GIV和GV)。常用的敏感实验动物是乳鼠,脑内接种乙脑病毒后3-4天发病,一周左右死亡,脑组织内含大量感染性病毒,是分离病毒、大量制备抗原的可靠方法。乳仓鼠肾细胞(Baby hamster syrian kidney cells,BHK-21)、白纹伊蚊细胞(A mosquito cells,C6/36)及鸡胚成纤维细胞则是常用的敏感细胞,病毒在这些细胞内增殖可引起细胞圆缩、颗粒增多及细胞脱落等。乙脑病毒所致的疾病为流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis B,JE,简称乙脑),又称日本脑炎。乙脑流行于热带及亚热带地区,经蚊媒传播,主要侵犯人及某些动物的中枢神经系统,是威胁人群特别是儿童健康的重要人兽共患传染病,其潜伏期一般在10-14天左右,在临床上主要表现为高热、剧烈头痛、恶心、呕吐及意识障碍等症状,重者可出现强直痉挛、惊厥及脑膜刺激征,甚至出现呼吸衰竭而死亡等。人被带毒蚊叮咬后,大多数呈隐性感染,只有少数人发病为脑炎,发病率一般在2/10-10/10万之间,但其病死率达20%～30%,且30%～50%的幸存者有神经系统后遗症。因此,乙脑是社会和家庭的巨大疾病负担,是重要的公共卫生问题。乙脑首先于1871年在日本被发现,随后扩展到了印度、巴基斯坦、中国、澳大利亚、新加坡等国家和地区,但其主要还是流行于亚洲东南部。我国是乙脑高发地区之一,全国除了青海以外的省、市均有乙脑病例的报道,在1957年、1966和1971年曾先后发生三次乙脑暴发流行,后两次发病人数分别高达15万和17万多,发病率达20/10万以上。20世纪80年代以后,随着对适龄儿童进行乙脑疫苗尤其是减毒活疫苗的接种,我国乙脑发病率有了较大幅度的下降,并长期维持在相对较低水平,但每年的病例数仍波动于10000例左右,而且局部地区时有暴发流行。野生鸟类和猪是乙脑病毒的主要储存宿主,猪还是扩增宿主,三带喙库蚊是主要的传播媒介,而人类是乙脑病毒的终宿主。另外,一些其他种类的脊椎动物也被证明可以自然感染乙脑病毒,其中包括蝙蝠。迄今为止,已经在蝙蝠体内检测、分离到80多种病毒,例如亨德拉病毒、埃博拉病毒、冠状病毒、尼帕尔病毒,其中也包括乙脑病毒,所以蝙蝠已被认为是多种人畜共患病病毒的重要储存宿主。中国和日本的研究均表明在蝙蝠体内能检测到乙脑病毒和/或乙脑病毒的血清抗体。2008-2009年期间,本课题组亦从广东、海南及湖南的蝙蝠体内分离出4株乙脑病毒(GD1、HN2、YY87和YY158),其中GD1和HN2的全基因组序列已发表,均属于GIII型。我们课题组通过对比发现蝙蝠来源的乙脑病毒株(GD1和HN2)和人来源的乙脑病毒株(NAK)的核苷酸和氨基酸序列具有高度相似性,但是这些乙脑病毒株对蝙蝠的感染力(如毒力、免疫性反应等)是否存在差异尚不清楚。果蝠以水果为食,体型较大,易于饲养,与人类和蚊子关系密切,且曾有研究表明果蝠可通过人工注射途径而实验感染乙脑病毒。因此,为探讨人来源及蝙蝠来源乙脑病毒株对蝙蝠的感染性是否存在差异,我们选择果蝠为实验动物,进行了本实验。研究方法1.蝙蝠的捕获与处理分别于2013年6月和2014年6月,在广东和海南省部分地区捕获果蝠,捕获蝙蝠的地点主要为废旧房屋和公园棕榈树。怀孕和哺乳期的蝙蝠放生,其余的果蝠则带回实验室动物房饲养。每天喂养新鲜的水果(香蕉、番石榴、苹果和梨子等)。2.病毒株在实验中使用了1株人来源的乙脑病毒株(NAK)和2株蝙蝠来源的乙脑病毒株(HN2和GD1)。NAK病毒株为乙脑病毒原型株,于1935年从一个日本乙脑死亡病人脑组织中分离到,HN2病毒株于2008年分离自海南地区的长翼蝠,GD1病毒株于2009年分离自广东地区的大足鼠耳蝠。3株乙脑病毒在注射果蝠之前均通过BHK-21细胞进行病毒扩增,并分别计算其扩增后病毒液的半数组织培养感染剂量(Tissue culture infective dose, TCID50)。3.蝙蝠感染乙脑病毒研究中包括了2个实验。实验一有8只果蝠,随机分成3组(NAK1, HN2-1和GD1-1组),其中NAK1组有3只果蝠(bat1,bat2和b

关键词： 蝙蝠蛾拟青霉   发酵   菌粉   免疫调节  

摘要： 蝙蝠蛾拟青霉（Paecilomyces hepiali）一种冬虫夏草的无性型，其有效成分与天然虫草类似，对其进行深入开发与研究具有重要意义。本研究采用化学计量学方法和满意度函数对本实验室选育的蝙蝠蛾拟青霉菌种SY02进行发酵条件的优化。首先，采用单因素法优化蝙蝠蛾拟青霉SY02发酵培养基中的碳、氮源和无机盐的种类和浓度，然后进行部分因子试验考察培养基组分对菌株发酵的影响，并应用中心组合设计试验进一步优化培养基配方，经神经网络结合遗传算法分析获得最佳培养基配方为(％)：葡萄糖3.35%，蛋白胨1.686%，酵母浸粉1.80%，KH2PO4·3H2O0.20%，MgSO4·7H2O0.40%，ZnCl20.002%和VB10.01%。按照一定比例组成的最佳培养基配方。在此最优培养基配方下蝙蝠蛾拟青霉的发酵期望值为0.5124，较未优化期望值提高了41.925%。 然后采用Plackett-Burman设计实验筛选蝙蝠蛾拟青霉5L罐发酵条件中对产量影响显著的因素，然后对筛选出的影响显著的因素进行单因素实验优化。通过以上研究，筛选得到影响显著的因素为搅拌转速，其最佳值为300r/min。最终得到蝙蝠蛾拟青霉的5L发酵罐发酵条件为：温度26℃，接种量7%，装液量3L，种龄3d，转速300r/min，通气量150L/h，pH值自然，发酵时间4d，在此最佳条件下，蝙蝠拟青霉各有效成分的产量分别为菌丝体干重15.09g/L、多糖1.04g/L、腺苷0.07g/L、虫草酸1.81g/L、蛋白质9.40g/L。 在此基础上对蝙蝠蛾拟青霉菌粉进行了质量标准的研究，采用性状鉴别，薄层色谱法鉴别，基因鉴别的方法对样品进行了定性鉴别，从水分测定、灰分测定、重金属检查几方面对样品进行了一般杂质检查，拟将水分含量不超过7%，总灰分含量不超过1.3%，酸不溶性灰分含量不超过0.15%列入本品质量标准正文检查项下；采用高效液相色谱法对本品腺苷含量进行测定，暂定本品腺苷含量不得少于2.53mg/g. 对SY02菌粉的初步免疫活性进行研究，受试小鼠的NK细胞杀伤活性证实本菌粉可增强机体非特异性免疫功能。其次，菌粉可以使迟发型超敏反应加剧，使淋巴细胞转化率增加，二者共同证明了菌粉可以提高机体的细胞免疫功能。蝙蝠蛾拟青霉菌粉对IL10、IL12、IL12R、IFN-α等因子水平有上调效果，蝙蝠蛾拟青霉菌粉可能具有提高机体免疫功能的效果，具体的作用机制有待进一步实验研究。急性毒性试验初步证实本菌粉无毒性，可作为保健食品原料进行开发。