关键词： 蝙蝠   病原   宏基因组   流行病学  

摘要： 蝙蝠是数量仅次于啮齿类动物的翼手目(Chiroptera)类哺乳动物,共包含19个科962种,在全球范围内广泛分布。蝙蝠携带病原种类繁多,其中检测到病毒137种,涉及人畜共患病病毒61种。值得注意的是这其中包括一些对人高致病性的病毒,如SARS样冠状病毒(SARS-like coronavirus)、埃博拉病毒(Ebola virus)、马尔堡病毒(Marburg virus)、狂犬病毒(Rabies virus)、登革病毒(Dengue virus)等。近期研究结果表明一些新病毒正陆续从蝙蝠体内被发现,包括肝炎病毒(Hepatitis virus)、呼肠孤病毒(Retrovirus)、博卡病毒(Bocavirus)、圆环病毒(Circovirus)、星状病毒(Astrovirus)等均发现一些新的种。2003年的“非典”疫情,共造成全球8,000多人感染,至少800人死亡,使冠状病毒在全球范围内引起关注。2014年西非的埃博拉疫情,导致6,388人丧生,确诊或疑似感染病例17,942个。2016年阿根廷的登革病毒疫情,造成15,000人感染。引发这几次疫情的病原有一个共同的动物宿主——蝙蝠。因此,蝙蝠作为自然界贮存病原的巨大病原库,引起了越来越多科研工作者的关注。病毒宏基因组学是在宏基因组学理论基础上,结合传统病原检测技术新兴的学科分支,其应用迅速展示出巨大的优越性,尤其是在新发病毒的发现和预警方面,突破了传统方法依赖病毒保守基因序列的局限性。本研究基于病毒宏基因组学策略,系统分析2015年7-8月从我国东南沿海部分地区共收集的5种210只蝙蝠。对采集的蝙蝠的肠和肺组织进行高通量测序,对测序结果进行分类整理,发现获得的序列信息共涉及38个病毒科。其中包括16个脊椎动物病毒科、4个植物病毒科、5个昆虫病毒科。感染脊椎动物的病毒包括冠状病毒科(Coronaviridae)、腺病毒科(Adenoviridae)、疱疹病毒科(Herpesviridae)、双小RNA病毒科(Picornaviridae)、逆转录病毒科(Retroviridae)、非洲猪瘟样病毒病毒科(Asfarviridae)、星状病毒科(Astroviridae)、杯状病毒科(Caliciviridae);圆环病毒科(Circoviridae)、肝炎病毒科(Hepeviridae)、乳头瘤病毒科(Papillomaviridae)、细小病毒科(Parvoviridae)、呼肠孤病毒科(Retroviridae);黄病毒科(Flaviviridae)、痘病毒科(Poxviridae)和披膜病毒科(Togaviridae)。通过序列分析比较发现,不同地区和不同蝙蝠种类在注释到的病毒种类、序列方面存在同源性和丰度差异。初步掌握了东南沿海部分地区蝙蝠携带病毒的生态学状况,为下一步验证工作的开展提供了方向。根据宏基因组注释信息,选取了圆环病毒、博卡病毒、软腐病毒等设计简并引物,应用特异性RT-PCR检测方法,获取了上述病毒在蝙蝠体内和不同地域的携带和分布情况。结果显示在舟山、岱山、长乐、连江蝙蝠体内各检测到1株圆环病毒,分别命名为Bt CV-ZS62、Bt CV-DS13、BtCV-CL6、BtCV-LJ22;在岱山蝙蝠体内检测到2株博卡病毒,命名为:Bt Bov-DS9和Bt Bov-DS10;在厦门蝙蝠体内检测到2株软腐病毒,命名为BtIFA-XM9和BtIFA-XM10。基于宏基因测序注释信息,借助已知同源序列保守区设计系列简并套式引物,经反向PCR扩增、序列测定和拼接,进一步获得了其中4株圆环病毒的全基因序列(1,873bp、1,910bp、2,051bp、1,806bp)和1株博卡病毒的大部分序列(3,921bp)。依据国际病毒分类委员会(International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV)关于圆环病毒新种的判定标准,初步判断BtCV-ZS62、BtCV-DS13、Bt CV-CL6、BtCV-LJ22是四种新的蝙蝠圆环病毒,属于圆环病毒科,圆环病毒属。根据ICTV关于博卡细小病毒新种的判定标准,初步判断Bt Bov-DS10是一株全新的博卡细小病毒。在获得上述病毒基因组信息基础上,选取圆环病毒、博卡病毒进行重组结构蛋白制备和血清流行病学初步分析,选择结构蛋白Bt BOV-DS10-NP和Bt CV-DS13-Cap进行原核表达和纯化,探索从血清学水平初步验证蝙蝠携带病毒情况,以期完善病毒感染的流行病学证据链。我国蝙蝠种类丰富,有7科130种,分布广泛,其生态圈与人类活动圈有较大交叉。因此开展我国蝙蝠携带病毒的自然本底调查对于预防新发传染病具有重要的公共卫生学意义。本研究借助病毒宏基因组生态调查方法,获得东南沿海

关键词： 蝙蝠   丝状病毒   核蛋白   间接ELISA   交叉反应  

摘要： 丝状病毒(Filovirus)属于单股负链RNA病毒目(Mononegavirales),目前包括三个属,分别为埃博拉病毒属(Ebolavirus)、马尔堡病毒属(Marburgvirus)和库瓦病毒属(Cuevavirus),前二个属主要分布于非洲,后一个属分布于欧洲。丝状病毒,对人具有高度的传染性和致死性,所以国际上将该科一些成员列为潜在的生物战剂,例如扎伊尔埃博拉病毒(Zaire Ebola virus,ZEBOV)和马尔堡病毒(Marburgvirus,MARV)。除了雷斯顿埃博拉病毒(Reston Ebolavirus,REBOV)的自然宿主是猪以外,其余已知的埃博拉病毒、马尔堡病毒以及库瓦病毒的自然宿主是蝙蝠。我们实验室于2015年首次在亚洲(中国云南省)发现了新型蝙蝠丝状病毒,说明亚洲地区的蝙蝠也有丝状病毒的分布,但其种类、感染率以及公共卫生意义尚不明确,而我国蝙蝠种类和数量繁多,因而建立一种快速、高效和准确的蝙蝠丝状病毒感染血清的检测方法并以此开展血清流行病学调查具有十分重要的科学意义。本研究为了建立检测MARV、REBOV、ZEBOV、库瓦病毒(Lloviu cuevavirus,LLOV)以及新型丝状病毒DH04株的血清抗体间接ELISA方法,首先构建以上五种病毒核蛋白(NP)羧基端的原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行原核表达,结果MARV、REBOV、ZEBOV和DH04四种病毒NP蛋白表达成功,鉴定为可溶性蛋白,并可与Anti-His单抗进行特异性反应,说明蛋白表达正确。然后,分别以纯化的目的蛋白为抗原包被96孔ELISA板,建立了检测四种病毒血清抗体的间接ELISA方法:优化抗原包被量为2μg/ml、封闭液为5%脱脂奶粉、二抗稀释度为1:20000。建立的ELISA方法与一种蝙蝠轮状病毒、三种蝙蝠和人的布尼亚病毒(来宾病毒、汉城病毒、春山病毒)蝙蝠感染血清均无交叉反应,证明特异性良好;并能检测1∶1 600稀释的阳性血清,说明敏感性良好;试验的批内及批间变异系数均小于10%,重复性良好。用建立的间接ELISA方法检测了云南、广西以及浙江3个地区的蝙蝠血清,总体阳性率为45.2%(141/312),其中云南阳性率明显高于其它两个省份(P<0.05),浙江与广西的阳性率无明显的统计学差异。云南阳性率为65.7%(94/143),其中与DH04、REBOV、ZEBOV和MARV反应的血清分别占46.9%、36.4%、29.4%和21.0%;广西阳性率26.2%(32/122),与REBOV反应的血清最多,占16.4%,其次是DH04和ZEBOV,分别占10.7%和9.8%,MARV最少,仅占4.1%;浙江阳性率为31.9%(15/47),有27.7%的血清针对DH04反应,6.4%的血清针对ZEBOV反应,4.3%的血清针对MARV反应,2.1%的血清针对REBOV反应。根据ELISA检测结果,挑选75份蝙蝠血清,其中59份阳性血清,16份阴性血清,进行Western blot(WB)检测,发现ELISA检测为阳性的蝙蝠血清与WB检测的符合度在80%-100%之间,ELISA检测为阴性的血清与WB检测的符合度在78%-94%之间。使用单抗进行交叉反应确定,证明DH04不与REBOV、ZEBOV、MARV的抗体反应,MARV与REBOV、ZEBOV之间有较弱的交叉反应,REBOV和ZEBOV之间有很强的交叉反应。本研究成功表达了DH04、MARV、REBOV和ZEBOV的NP羧基端蛋白,在此基础上建立了检测四种丝状病毒感染血清抗体的间接ELISA方法,并对我国南方蝙蝠血清进行了丝状病毒的血清流行病学调查,结果表明我国蝙蝠存在比较广泛的丝状病毒感染,而且可能存在多种丝状病毒混合感染的情况,同时不同病毒在不同地域和蝙蝠种类上具有一定的特征:在云南和浙江DH04流行最广,而在广西REBOV流行最广;棕果蝠阳性率显著高于其它四种蝙蝠,马铁菊头蝠中针对DH04反应的血清最多,小黄蝠中针对REBOV反应的血清最多,而在南长翼蝠中未检测到阳性血清。本研究提示我国面临蝙蝠将自身携带的丝状病毒传播给其它动物的潜在风险,为了防范蝙蝠源丝状病毒病未来需要加大对蝙蝠丝状病毒病原的监测和防范措施的研究力度。

摘要： 蝙蝠是百余种病毒的天然宿主,但它们并不会因此而染病,其原因何在?一项新研究发现,这或许与蝙蝠独特的"全天候"免疫系统有关.这一特性未来有可能为人类所用,以更好地保护人类健康. 有研究显示,蝙蝠这种飞行哺乳动物很可能是多种病毒在自然界的最初宿主.其中就包括近年来在全球多地引发疫情的"非典"病毒、中东呼吸综合征病毒、埃博拉病毒等,但蝙蝠自身却从没有受到这些病毒影响.

关键词： 流感病毒   H17N10   H18N11   公共卫生   蝙蝠  

摘要： 甲型流感病毒能感染多种宿主。最近,在蝙蝠中鉴定出流感病毒两种新亚型:H17N10和H18N11,扩大了流感病毒宿主范围。与已知毒株不同的是,这两种蝙蝠病毒有着独特的复制特性。进化分析表明,这两种病毒在蝙蝠中长期独立进化,血清学检测阳性率极高。蝙蝠占已分类哺乳动物的20%,暗示有大量未定型的甲型流感病毒存在于这些庞大的隐形宿主中,其潜在流行可能性凸显了这些新病毒的公共卫生学意义。

关键词： 狂犬病病毒   流感病毒   跨膜蛋白   干扰素   诱导性   细胞内   蝙蝠   野猪  

摘要： 干扰素诱导性跨膜蛋白3（ IFITM3）是一种限制因子，它能阻止通过酸性内涵体进入途径的大多数病毒进入细胞内。在人类和小鼠中， IFITM3可以降低流感病毒引起的发病率和死亡率。尽管对 IF-ITM3敏感的大部分病毒引起人畜共患病，但是对于除了哺乳纲中人和小鼠之外的其他物种而言， IF-ITM3是否发挥了抗病毒限制因子的功能，这一机制不得而知。在此，微型蝙蝠（鼠耳蝙蝠属）和猪（野猪）体内IFITM3的直向同源基因利用cDNA末端快速扩增的方式已被鉴定出来。在猪和微型蝙蝠的同源基因中对IFITM3的功能起重要作用的氨基酸残基是保守的。在猪和微型蝙蝠体内， IFITM3异位表达的是由转铁蛋白（早期内涵体）和CD63分子（晚期内涵体/多泡体）共局限化的。

关键词： 特定蛋白质   禽流感传播   蝙蝠   病毒   风险图   出炉   科学家   预测   白血病  

关键词： 蝙蝠   人畜共患病毒  

摘要： 蝙蝠是多种重要人兽共患病毒的储存宿主，迄今为止已在蝙蝠体内分离到80多种病毒，随着二代测序等技术的发展，新的蝙蝠病毒还将不断被发现。研究显示，有25个病毒科病毒能够感染脊椎动物，其中有10个科被证实与蝙蝠有关，包括黄病毒科、布尼亚病毒科、副粘病毒科、丝状病毒科、弹状病毒科、冠状病毒科、披膜病毒科、正粘病毒科、呼肠孤病毒科等。除此之外，蝙蝠还被证实可携带禽流感病毒、森林脑炎病毒等。大部分病毒曾引起人或动物间的疾病流行，有些病毒还会导致蝙蝠个体的发病和死亡。因此，从人类健康和蝙蝠生态保护角度来看，研究蝙蝠携带病毒的病毒谱、蝙蝠和病毒的关系、可能的传播途径以及潜在危害性等，对我们全面认识蝙蝠携带病毒特性及加强蝙蝠传播病毒的防治十分重要。

关键词： 蝙蝠腺病毒   长E3基因   G+C含量   CpG双核苷酸   腺病毒载体  

摘要： 腺病毒能普遍感染人和多种脊椎动物，并引起疾病。腺病毒也是一种常用的基因载体，在疫苗和基因治疗等领域有着广泛应用。腺病毒还是一种重要模式病毒，曾揭示过多种重要分子生物学机制。蝙蝠作为一种非常重要的病原宿主，携带种类繁多的病毒，包括一些与人类重要新发疾病密切相关的RNA病毒。虽然我们和其他实验室曾在一些蝙蝠中报道了高流行率和遗传多样性的腺病毒，但蝙蝠物种数量庞大，许多蝙蝠种类的腺病毒还有待发现和研究。本研究利用前期采集的蝙蝠粪便样品开展了腺病毒的分离、鉴定，全基因组测序分析以及蝙蝠腺病毒载体构建等工作，获得如下结果： （一）首次从中华菊头蝠（Rhinolophus sinicus）分离到3株新的蝙蝠腺病毒（bat adenoviruses WIV9?11, BtAdV-WIV9?11）。其基因组分别为37545、37566和38073 bp，这些基因组彼此相似性很高，但与已知腺病毒基因组差异显著。值得注意的是，这三株病毒基因组E3转录单元中均包含一个极长的编码基因。根据系统发育分析和病毒学分类标准，这些蝙蝠腺病毒很可能代表哺乳动物腺病毒属（Mastadenovirus）的一个新种。细胞敏感性试验表明它们具有广谱细胞嗜性，暗示其潜在的广谱宿主范围。 （二）首次从长翼蝠（Miniopterus schreibersii）分离到2株蝙蝠腺病毒（BtAdV-WIV12、13）。它们很可能代表Mastadenovirus属两个不同种。然而，相比已知同属成员，其基因组较短，分别为29581和29162 bp；它们的G+C含量仅34.2%和31.3%，明显低于同属其他成员。统计分析表明，CpG双核苷酸受甲基化后突变为TpG（互补链为CpA）是造成低G+C的主要原因之一，因为腺病毒科内成员的CpG相对频率（即频率的比值比：odds-ratio）与TpG+CpA相对频率以及G+C含量存在显著相关性。有趣的是，腺病毒基因组G+C含量和CpG相对频率并不像其他许多病毒一样依赖宿主种类，而是呈现病毒种特异性。另外，其G+C含量和CpG相对频率分别与基因组长度呈现了中等和强的正相关性，表明了新的进化模式。 （三）从棕果蝠（Rousettus leschenaultii）分离到两株新的蝙蝠腺病毒（BtAdV-WIV17、18）。与WIV12、13类似，这两株腺病毒的基因组分别为29923和29812 bp，G+C含量分别为34.3%和34.2%。WIV17、18基因组彼此相似性较高，但与已知腺病毒差异明显。系统发育分析表明，它们可能代表Mastadenovirus属的一个新种。它们与其它感染食果蝙蝠（特别是棕果蝠）的腺病毒显示出较近的亲缘关系，表明了棕果蝠腺病毒与宿主之间的共同进化关系。 （四）建立了腺病毒载体构建的一种简单、经济的重组技术。利用该技术，成功构建了BtAdV-TJM和WIV9的感染性克隆。用EGFP表达盒替换TJM感染性克隆的E3A基因，获得了高效表达EGFP的重组病毒。感染该重组病毒后，可在MsKi 细胞中观察到强烈的绿色荧光，体现了TJM对外源基因的表达能力。

关键词： 噪音   免疫   蝙蝠   研究人员   布朗大学   小动物  

摘要： 噪音对多种动物都是有害的，但有一种小动物似乎对此早有防备。美国布朗大学的研究人员发现，蝙蝠对噪音带来的伤害免疫。

关键词： 蝙蝠   BDV   磷蛋白   蛋白免疫印迹  

摘要： 研究贵州省遵义地区野生蝙蝠脑组织中BDV自然感染情况。方法:采用蛋白免疫印迹检测贵州省遵义地区82只野生蝙蝠脑组织中BDV磷蛋白表达情况。结果:82只蝙蝠脑组织中BDV磷蛋白阳性9例(11%)。结论:贵州省遵义地区蝙蝠存在BDV自然感染。