关键词： 量子点   多重检测   侧流免疫层析   呼吸道病毒   新型冠状病毒  

摘要： 目的建立操作流程简便、检测灵敏度高的量子点侧流层析技术,实现集成化检测新型冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、腺病毒的方法。方法1、使用N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)作为活化剂,将量子点荧光微球与病毒抗体进行偶联。2、在硝酸纤维素(NC)膜上以羊抗鼠IgG抗体作为质控线,呼吸道病毒捕获抗体作为检测线,通过优化标记与捕获抗体含量来提升试纸条的性能。3、615nm红色量子点(QBs)分别偶联新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、甲型流感病毒(IAV)、乙型流感病毒(IBV)、腺病毒(ADV)四种抗体并制备相对应的四种免疫层析试纸条,组装至多通道免疫层析柱中集成化检测上述四种呼吸道病毒,使用多通道免疫层析检测仪检测荧光信号。结果1、SARS-CoV-2、IAV、IBV和ADV的抗原线性范围分别为0.01-100ng/mL、0.05-100ng/mL、0.5-100ng/mL、1-1000ng/mL。检测限分别为0.01ng/mL、0.05ng/mL、0.31ng/mL、0.40ng/mL,与胶体金免疫层析相比有较好的灵敏度。2、对4种病毒样本进行重复性检测,变异系数分别为6.09%、2.24%、7.92%和12.43%,表明该方法具有良好的稳定性。每种呼吸道病毒抗原分别进行高、中、低3个浓度检测,回收率为90.67%-105.85%,证明本研究方法具有良好准确性。3、将待测的呼吸道病毒和其他几种呼吸道病原体进行不同组合进行检测,均未发生交叉反应,验证了检测系统具有良好的特异性。4、使用模拟临床咽拭子样本进行PCR和侧流层析技术两个方法检测,临床验证了本实验具有临床可行性。结论量子点侧流免疫层析方法实现了针对SARS-CoV-2、IAV、IBV和ADV四种呼吸道病毒的集成化检测,流程简单、成本较低、检测速度快,灵敏度高,可应用于咽拭子样本,是一种理想的呼吸道病毒筛查方法。

关键词： 新冠肺炎疫情   疫情防控档案   档案归集  

摘要： 2019年12月新型冠状病毒肺炎爆发以来,在党中央的统一部署和领导下,全国人民上下同心、全力以赴,同时间赛跑、与病魔较量,遏制了疫情扩散蔓延势头,并取得了抗击新冠肺炎疫情斗争重大战略成果。2020年2月,国家档案局出台《国家档案局关于新型冠状病毒感染的肺炎疫情防控期间档案工作的通知》,明确提出,要求各级档案部门加强对疫情防控资料收集归档工作,确保新冠肺炎疫情防控档案应收尽收、应归尽归。同时肯定了新冠肺炎疫情防控档案的重要性,指出新冠肺炎疫情防控档案是党和政府在抗击疫情中取得的重要成果,它不仅可以为工作调查研究提供宝贵的参考和经验教训,也可以记录党和政府在抗击疫情方面取得的重大成就。探讨我国新冠肺炎疫情防控档案归集问题与对策,一方面有助于丰富我国新冠肺炎疫情防控档案归集的研究成果,另一方面对于我国各级综合档案馆加强新冠肺炎疫情档案归集工作具有参考作用。 笔者通过网络调研及电话访谈,首先收集了我国疫情防控档案归集的相关资料,其次阐述了新冠肺炎疫情防控档案的概念和新冠肺炎疫情防控档案归集的含义和必要性;再次归纳了我国新冠肺炎疫情防控档案归集工作的要求,梳理了归集工作取得的成效;接着从收集、整理、报送移交、专题建库工作等方面分析我国新冠肺炎疫情防控档案归集工作存在的问题:一收集方面存在范围待扩展、方式待提高、监督待加强的问题;二整理方面存在整理工作不及时、整理标准实施不到位的问题;三报送移交存在不及时、审核待加强的问题;四专题数据库建设存在建库进展缓慢、数据库安全保障不足的问题。为此,本文认为新冠肺炎疫情防控档案收集工作应向收集范围全面化、收集方式现代化、收集监督及时化方向发展;新冠肺炎疫情防控档案的整理应加强科学规范化整理、注重数字化整理;新冠肺炎疫情防控档案移交报送方面应强调报送移交及时化,加强报送移交审核现代化建设;新冠肺炎疫情防控档案专题建库方面应合理规划并加快建设进度、树立安全意识。

关键词： 新型冠状病毒   高通量筛选   病毒入侵宿主细胞   人鞘脂激活蛋白原   中和抗体样活性  

摘要： 目的由严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型(新型冠状病毒)(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染引起的大流行对世界公共卫生和经济产生了前所未有的影响。尤其是病毒传播过程中出现的一系列的病毒突变对于机体免疫反应形成一定程度的免疫逃逸。针对于S蛋白相关的病毒变异尤其影响病毒入侵宿主细胞过程,进而影响病毒的致病性。自病毒暴发流行以来,基于病毒的病原学、致病机制等的研究相继展开。针对于新冠病毒治疗相关的抗病毒策略通常作用于病毒生命周期的各个环节,相当一部分研究者致力于新冠病毒入侵阶段的抗病毒策略研究,这其中主要包括了中和抗体以及病毒融合阶段抑制剂等。对于新冠病毒入侵阶段的相关受体、宿主因子或抗病毒宿主蛋白的筛选同样引起关注。入侵作为病毒整个生命周期的早期阶段,对于病毒后期的存活及繁殖至关重要。因此影响病毒入侵的宿主基因在抗病毒研究中可能是更好的靶标,这对于新冠病毒抗病毒治疗具有重要意义。方法发现影响新冠病毒感染复制的相关宿主蛋白主要基于高通量筛选策略来实现。目前主要利用高通量筛选来寻找影响新冠病毒感染复制的相关宿主蛋白。基于基因操作的筛选策略主要分为两种:功能获得(gain of function,GOF)和功能缺失(loss of function,LOF)。功能获得主要包括cDNA文库质粒的过表达、CRISPRa基因激活以及转座子基因激活等;功能缺失主要包括RNA干扰(RNAi)、CRISPR-Cas9基因敲除等。目前现有的研究大多通过基因敲除策略进行筛选,从而富集到一些有利于病毒复制的宿主因子。而cDNA过表达往往仅限于相同生物学功能的基因文库(如干扰素刺激基因ISGs)筛选。因此,覆盖更广的人基因组cDNA文库筛选具有显著优势。本研究中,我们基于功能获得的高通量筛选策略,应用人全基因组cDNA文库过表达,经由新冠病毒假病毒感染进行高通量筛选,获得影响病毒入侵的潜在候选基因,并进一步应用分子生物学、细胞生物学、免疫学、病毒学等研究方法验证候选基因影响病毒入侵的分子机制。结果根据抑制病毒入侵表型的验证,重点关注人鞘脂激活蛋白原(prosaposin,PSAP)抑制新冠病毒入侵的作用和机制。PSAP蛋白在细胞内发挥调节溶酶体功能的作用,也可分泌至细胞外具有神经保护和胶质保护作用。我们的结果显示全长分泌形式的PSAP蛋白显著抑制新冠病毒假病毒以及活病毒的感染。进一步研究显示PSAP蛋白通过RBD结构域与S蛋白相互作用,并具有较高的亲和力。在机制上,我们发现PSAP蛋白通过与S蛋白相互作用促进S1亚基的释放进而抑制病毒入侵。分子对接模拟显示PSAP蛋白与S1蛋白在空间结构上存在相互作用,S1蛋白的分子间相互作用氨基酸均位于RBD结构域的RBM区域外。而在新冠病毒相关研究中同样存在着一类ACE2非竞争性的具有中和活性的中和抗体。其主要结合S蛋白RBD结构域与ACE2受体结合区域外的空间表位,并同样通过促进S1亚基释放的方式抑制病毒入侵。因此,我们认为PSAP蛋白在抑制新冠病毒入侵过程中具有中和抗体样(neutralizing antibody-like)活性。意义本研究发现人全长分泌型鞘脂激活蛋白原能够以细胞外分泌形式与新冠病毒S蛋白结合,并通过促进S1亚基释放的方式抑制病毒入侵,首次阐明一种神经系统相关的宿主蛋白具有中和抗体样活性的抗新冠病毒作用。总之,我们发现了神经系统领域相关宿主蛋白直接参与对新冠病毒入侵和感染的抑制,PSAP可以作为新冠病毒感染的限制性宿主因子,为治疗新冠病毒感染提供新的视角。

摘要： Objective To analyze the epidemiological and clinical characteristics of patients infected with different subtype of2019-nCoV Omicron variants BA.2 and BA.5in Xi'an *** A retrospective observational study was conducted to collect data of 168 patients infected with Omicron variant admitted to the designated hospital for COVID-19 charged by Xi'an Chest Hospital during *** were collected includingepidemiological,clinical features,

关键词： 新冠肺炎疫情   泰国   应急语言服务   多语种  

摘要： 2020年初新冠肺炎疫情爆发,应急语言服务研究恰逢其时。新冠肺炎疫情对东南亚地区的医疗、政治和经济等方面造成了巨大影响。泰国自2020年3月26日启动疫情应急管理工作,2022年9月30日结束疫情应急管理工作。目前,泰国尚未形成与应急语言服务相关的理论体系,但相关的实践活动在此次疫情中已经开展起来。利用我国的理论框架来研究泰国的应急语言服务实践情况,将为我国研究其他国家的应急语言服务提供案例参考。本研究采用文献分析法和案例分析法,以王立非等提出的的应急语言服务理论作为理论框架,包联群对日本应急语言服务的研究范式和李宇明的应急语言服务的“三个领域”作为分析框架,以2020年3月26日至2022年9月30日作为时间跨度,研究新冠肺炎疫情下泰国的应急语言服务实践情况。第一章节,陈述选题缘由和研究意义,从语言服务和应急语言服务两个领域梳理归纳国内外研究现状,对紧急状态、弱势群体和应急语言服务等核心概念进行界定,阐明本研究的研究方法和思路。第二章节,概述新冠肺炎疫情下泰国的应急管理体系,梳理《紧急状态行政管理法令》的发展历史,阐明新冠肺炎疫情对于泰国的严重性,并分析应急管理法治建设和运行机制。第三章节,划分政府部门、教育学术机构、媒体、非政府组织、政府间组织和民间组织等应急语言服务实施主体,研究新冠肺炎疫情下泰国的应急语言服务实践情况。第四章,总结并分析新冠肺炎疫情下泰国应急语言服务的特点,(1)趋于完善的法治建设,为防疫工作指明了方向;(2)联合协作的运行机制,提升了应急语言服务的效率;(3)多元的服务展示形式,得益于信息技术的发展,信息图形的应用程度最为广泛;(4)丰富的语种服务,反映了泰国少数民族群体和跨国劳工的语言问题,和泰国社会对多元语言文化态度的转变;(5)非政府组织和政府间组织的深度参与,分担了泰国政府的防疫压力。原因分析在于:(1)长期以来“单一化语言政策”对多元语言文化现实的影响;(2)东盟一体化进程扩大了泰国邻国语言的需求;(3)以“多元包容”为核心要义的语言政策的出台。第五章,总结新冠肺炎疫情下泰国应急语言服务的三条路径,一是独立行动的路径,二是联合协作的路径,三是先联合后独立的路径,并对后疫情时代的语言服务提出展望。当前,我国学者除了研究国内的应急语言服务实践情况,还聚焦发达国家的案例,例如美国、日本、韩国等,而对于发展中国家案例的观察相对较少。泰国的应急语言服务案例对于审视我国应急语言服务发展情况具有现实意义,也将为构建我国应急语言服务话语体系助力。

关键词： 科学数据   元数据   知识本体   数据科学   新冠肺炎  

摘要： 随着新时代的发展,科学技术与互联网技术在不同阶段取得了新的突破与成就,社会的信息化与智能化程度也随之加深,大量的科学数据资源诞生于此。于科学研究而言,科学数据的价值不言而喻,高质量的科学数据不仅能够提高科学研究的效率,同时也能够帮助科研人员生成研究成果。科学数据平台是能够有效帮助科研人员实现共享利用科学数据的有效途径,快速实现科学数据的价值最大化,从而促进各领域的科学研究。自新冠肺炎疫情出现以来,围绕新冠肺炎所展开的科学研究也逐渐深入,与其相关的科学数据、概念骤增。因此,将不同平台的新冠肺炎科学数据有序组织整合,建立相关元数据框架,并实现其可视化,同时保证术语间的互操作性具有现实意义。本研究以目前的医学科学数据集以及新冠肺炎知识图谱研究成果为基础,对现有新冠肺炎科学数据信息资源的研究概况进行归纳总结,以***与Data MED中的新冠肺炎科学数据集为研究样本,参考并借鉴现有的元数据标准,构建出新冠肺炎科学数据集元数据框架,对新冠肺炎科学数据集进行知识提取、本体建模,最终实现可视化形式展示。首先,调研国内外医学、新冠肺炎科学数据集和知识组织研究现状;其次,通过梳理科学数据相关概念定义、元数据、本体、知识图谱等相关理论以及厘清科学数据平台***与Data MED的结构与其元数据标准结构;再次,对新冠肺炎科学数据集的内容特征进行归纳分析,总结出科学数据集资源外部特征间的共性属性,构建出新冠肺炎科学数据集元数据框架,分别从核心元数据与扩展元数据两部分来对其进行描述。在此基础之上,对新冠肺炎科学数据集的内容特征进行进一步挖掘后,通过参考借鉴已有本体模型与根据研究特征对象自定义相结合的方式构建了本体模型,在一定程度上实现了科学数据资源的细粒度描述;最后,利用Neo4j图数据库深度揭示不同平台间新冠肺炎科学数据集的关联关系,从“科学数据集”、“机构”、“政策”、“类别”等维度进行分析,将关联数据间的拓展由狭义延伸至广义,为未来基于关联数据的资源研究提供了参考,给科学数据集资源的发展与研究提供了更多的可能性。

关键词： 新型冠状病毒   细菌样颗粒   肌肉注射免疫   滴鼻免疫   免疫保护  

摘要： 新型冠状病毒感染（Corona Virus Disease 2019,COVID-19）是2019年底由严重急性呼吸综合征冠状病毒2（Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-Co V-2）感染引发的大流行传染病。COVID-19传播范围广、传播速度快、传染性强。2020年1月30日,世界卫生组织（World Health Organization,WHO）宣布COVID-19为突发公共卫生事件,截止到2023年3月,全球COVID-19确诊人数超过7.5亿例,死亡人数超过685万例。安全有效的疫苗是预防和减少疾病传播的重要手段之一,根据WHO公布的数据,183种COVID-19疫苗已进入临床研究中,COVID-19疫苗探索性研究是当前的重点工作。本研究利用一种新型抗原制备技术GEM-PA表面展示系统制备SARS-Co V-2细菌样颗粒,构建一种表达SARS-Co V-2受体结合域（Receptor Binding Domain,RBD）蛋白的人用亚单位疫苗候选株,使用Adda Vax佐剂和Al（OH）3佐剂肌肉注射免疫C57BL/6N小鼠并滴鼻免疫C57BL/6N小鼠,评价免疫原性及攻毒保护效果。***-RBD-GEM的构建及鉴定选取SARS-Co V-2武汉株的RBD区域进行密码子优化,与T4F基序进行连接,使其形成三聚体为主的高聚集态,再通过柔性Linker（GGGGS）与锚定蛋白（Protein Anchor,PA）相连接,并连接在p Fastbac1载体上。将P4代病毒进行间接免疫荧光鉴定和Western blot鉴定,间接免疫荧光结果显示感染P4代病毒的Sf9细胞可以看到绿色荧光信号;经过还原处理的P4代病毒上清和沉淀在55 KDa和70 KDa之间可以检测到目的蛋白,经过非还原处理后的上清和沉淀在100 KDa和130 KDa之间可以检测到目的蛋白,结果表明目的蛋白成功表达;经过煮沸的三氯乙酸（Trichloroacetic acid,TCA）处理的乳酸乳球菌（Lactococcus lactis,***）形成革兰氏阳性增强基质（Gram-positive enhancer matrix,GEM）,与Trim-RBD蛋白结合后,经过SDS-PAGE、Western blot和间接免疫荧光鉴定后,表明Trim-RBD-GEM成功表达;经过透射电子显微镜（Transmission electron microscopy,TEM）的超薄切片鉴定后,可见***有细胞壁和均匀的内容物,经过TCA处理而得的GEM颗粒可见肽聚糖结构,但内容物变少,而结合后的蛋白附着在肽聚糖骨架上;经过薄层色谱法（Thin layer chromatography,TLC）鉴定Trim-RBD-GEM的纯度超过97%。以上结果表明Trim-RBD-GEM构建成功,并成功表达目的蛋白。***-Co V-2细菌样颗粒Trim-RBD-GEM的实验免疫研究Trim-RBD-GEM联合Adda Vax佐剂和Al（OH）3佐剂在第0、14和28天肌肉注射免疫C57BL/6N小鼠后,检测免疫后第10、24和38天血清中特异性Ig G、Ig G1、Ig G2a、Ig G2b和Ig G3抗体水平,结果发现Trim-RBD-GEM&Adda Vax组小鼠血清中特异性Ig G、Ig G1、Ig G2a、Ig G2b和Ig G3抗体水平均显著高于Trim-RBD-GEM&Al（OH）3组、Trim-RBD-GEM、Trim-RBD组、GEM&Adda Vax组、GEM&Al（OH）3组和Mock组,在首次免疫后第38天Trim-RBD-GEM&Adda Vax组小鼠血清中检测到特异性Ig G抗体效价最高为1:102400。使用SARS-Co V-2毒株检测各组小鼠血清中中和抗体水平,结果发现Trim-RBD-GEM&Adda Vax组小鼠血清中中和抗体水平显著高于其他组,在首次免疫后第38天Trim-RBD-GEM&Adda Vax组小鼠血清中检测到中和抗体效价最高为1:160。首次免疫后直到第四个月检测小鼠血清,结果发现在首次免疫后第60、90和120天后可见Trim-RBD-GEM&Adda Vax组小鼠血清中特异性Ig G抗体水平显著高于其他组,在首次免疫后第120天Trim-RBD-GEM&Adda Vax组小鼠血清中检测到特异性Ig G抗体效价最高为1:25600。在首次免疫后第60和90天的结果中可以看到Trim-RBD-GEM&Adda Vax组小鼠血清中中和抗体水平显著高于其他组。ELISpot结果发现,Trim-RBD-GEM&Adda Vax组小鼠脾淋

关键词： COVID-19   新型冠状病毒   证候   证素   淋巴细胞亚群  

摘要： 目的: 通过回顾性分析COVID-19患者入院时的临床资料,研究COVID-19临床表现特征、证素及证型分布情况和淋巴细胞亚群特点,为中医药辨治COVID-19的临床实践和研究提供参考依据。 方法: 1.采用横断面调查方式,选取2020年01月17日至2020年03月07日湖北省中西医结合医院收治住院的符合COVID-19诊断标准的患者106例,从医院病历系统及检验系统中收集患者入院时的一般资料、主诉、现病史、刻下症、体格检查及实验室检查等资料,使用SPSS25.0建立数据库并进行统计学分析。采用证素辨证的方法,对各症状、体征、实验室检查等指标进行简化权值计量,最终得到病位、病性证素诊断。通过对已诊断的证素进行聚类分析,归纳总结证素组合规律并对每一类别进行证型命名。对不同证型间一般资料进行差异性检验。 2.选取上述符合COVID-19诊断标准且相关资料完整的患者106例,从医院检验系统中收集患者入院48h内所检测的淋巴细胞亚群结果,使用SPSS25.0建立数据库并进行统计学分析。分析淋巴细胞亚群特点及不同证型间淋巴细胞亚群差异性。 结果: ***-19中医证候学特点研究部分 1.1在一般资料上,106例COVID-19患者中男女比例为1:1.36,最小年龄为22岁,最大年龄为87岁,平均年龄54.75±13.04岁。中年人占比最高,老年人次之,青年人占比最低,三个年龄段分布比例具有统计学差异（P<0.05）。有基础性疾病者48例（45.28%）,以心脑血管系统疾病、内分泌系统疾病等多见。所有患者均有湖北省居住史,其中以武汉居住史为主。最短住院天数为3天,最长住院天数为49天,住院中位天数为14.5天。 1.2在临床表现特征上,106例COVID-19患者主要症状为发热、咳嗽、精神欠佳、乏力,其次为胸闷、喘气、咳痰、纳差、睡眠欠佳、全身酸痛及腹泻等,少数患者可有气短、心慌、胸痛、恶心、呼吸困难、头晕头痛等表现。主要舌象为舌红、舌淡,苔黄、苔薄白、苔白,以及苔腻。 1.3在中医证素分布上,106例COVID-19患者病位证素主要为肺、表、脾、心等,病性证素主要为热、湿、痰、气虚等。 1.4在中医证型分布上,106例COVID-19患者主要证型为肺热炽盛证（47例,占比44.34%）、肺脾气虚湿困证（32例,占比30.19%）和痰热壅肺证（27例,占比25.47%）。 1.5三种证型间性别、年龄、基础疾病史、流行病学史及住院天数均无统计学差异（P>0.05）。 ***-19淋巴细胞亚群特点研究部分 2.1 106例COVID-19患者淋巴细胞亚群可见不同程度下降,其中以淋巴细胞计数（93例,占比87.74%）、CD3+T淋巴细胞计数（65例,占比61.32%）、CD4+T淋巴细胞计数（63例,占比59.43%）及CD8+T淋巴细胞计数（56例,占比52.83%）下降为主。 2.2三种证型COVID-19患者CD3+T淋巴细胞计数比较具有显著差异（P<0.05）。痰热壅肺证>肺热炽盛证>肺脾气虚湿困证。其中肺脾气虚湿困证分别与肺热炽盛证、痰热壅肺证具有显著差异（P<0.05）。 2.3三种证型COVID-19患者CD4+T淋巴细胞计数比较具有显著差异（P<0.05）。痰热壅肺证>肺热炽盛证>肺脾气虚湿困证。其中痰热壅肺证分别与肺热炽盛证、肺脾气虚湿困证具有显著差异（P<0.05）。 2.4三种证型COVID-19患者CD4+T淋巴细胞百分数比较具有显著差异（P<0.05）。痰热壅肺证>肺热炽盛证>肺脾气虚湿困证。其中痰热壅肺证分别与肺热炽盛证、肺脾气虚湿困证具有显著差异（P<0.05）。 2.5三种证型COVID-19患者淋巴细胞计数比较具有显著差异（P<0.05）。其中肺脾气虚湿困证分别与肺热炽盛证、痰热壅肺证比较具有显著差异（P<0.05）,但结果经过FDR校正后显示无显著差异（P>0.05）,可能是样本量偏少所致,有待进一步增加样本量后再行统计研究,本次研究对三种证型间淋巴细胞计数不作出差异性结论。 2.6三种证型COVID-19的B淋巴细胞计数、NK细胞计数、CD8+T淋巴细胞计数、CD8+T淋巴细胞百分数、CD4+/CD8+比较均无显著差异（P>0.05）。 结论: ***-19属于中医学“湿热疫”范畴。 ***-19病位主要在肺,其次为表、脾、心;病机特点主要为热、湿、痰、气虚。 ***-19临床表现以肺系及脾系表现为主,其中发热、咳嗽、乏力是典型表现。 ***-19证型有肺热炽盛证、肺脾气虚湿困证和痰热壅肺证。 ***-19淋巴细胞亚群水平总体降低,尤其是CD3+T淋巴细胞计数、CD4+T淋巴细胞计数、CD8+T淋巴细胞计数水平,这些指标水平越低,提示患者免疫水平越