关键词： 冠状病毒   双价纳米抗体   雾化给药   半数抑制浓度  

摘要： 目的:构建新型冠状病毒高亲和力广谱双价纳米抗体A2-A2,了解气雾化后的稳定性及给药效率。方法:原核表达和亲和纯化获得A2-A2。采用假病毒中和实验和生物膜层干涉实验评价A2-A2的中和能力和亲和力。肺部液体雾化给药器对A2-A2进行雾化,利用Western印迹法、ELISA、纳米颗粒跟踪分析技术评价A2-A2雾化前后性能和稳定性,同时通过雾化给药和腹腔注射2种方式对小鼠进行活体成像荧光分析和各器官抗体浓度检测,评估雾化式给药A2-A2在小鼠体内存留情况和递送到肺部的效率。结果:成功构建了新型冠状病毒双价纳米抗体A2-A2。A2-A2与SARS-CoV-WT、Alpha、Beta、Gamma、Delta、Omicron B.1.1.529、Omicron BA.5等毒株均具有良好的广谱中和作用和亲和力,中和活性的半数抑制浓度最低为0.3μg/mL,亲和力最低为10-12。雾化前后A2-A2活性、结构及颗粒大小(100~150 nm粒径范围占比71.3%)均未发生显著改变,具有良好的稳定性。A2-A2雾化式给药在小鼠肺部活体成像中留存近5 h,在小鼠解剖后肺中留存近24 h,浓度可达1.2 mg/mL,显著优于腹腔注射给药方式。结论:双价纳米抗体A2-A2具有良好的稳定性,可通过雾化给药的方式有效到达肺部。相比于腹腔注射方式,A2-A2在肺部存留时间较长且具有更高的浓度。

关键词： 重组新型冠状病毒蛋白疫苗   CHO细胞   疫苗效力检测   不确定度  

摘要： 目的分析重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)效力检测的不确定度,寻找主要的不确定度影响因素,为进一步提高相关检测工作的质量提供参考。方法分别采用待测疫苗和疫苗参比品免疫小鼠,14 d后取血清,采用间接酶联免疫分析测定各血清的抗体滴度。以待测疫苗和疫苗参比品滴度几何平均值的比值作为待测疫苗的效力检测结果。根据检测方法,进行不确定度来源分析,分别量化各不确定度分量,合成后得到重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)效力检测的不确定度。结果通过对不确定度分量的分析和量化得出标准不确定度为0.5,不确定度最大的影响因素是实验动物的个体差异。结论通过实验动物体内试验进行效力检测,通常具有较大不确定度,需要谨慎评估方法和制定限值,以实现对相应药品质量的正确评价,开发体外效力检测替代方法也是提高检测质量的可靠途径。

关键词： 新型冠状病毒感染   儿童   脑病   蛋白质组学  

摘要： 目的检则儿童新型冠状病毒感染(COVID-19)合并脑病者血清样本中蛋白质谱表达的变化,探究其发病机制。方法收集2022年12月1日至2023年1月31日在山东第一医科大学附属省立医院小儿重症医学科收治的COVID-19患儿28例,其中21例合并脑病,为COVID-19合并脑病组,7例不合并脑病,为COVID-19不合并脑病组。两组中各选取3例患儿,采用串联质谱标签标记蛋白质组学技术进行血清蛋白质组学分析。以表达倍数>1.2倍(上调大于1.2倍)或<0.8倍(下调<0.8倍)且P值<0.05为标准,判断组间表达上调、下调蛋白质的种类和数目。对两组间的差异蛋白进行生物信息学注释,包括基因本体和京都基因与基因组百科全书途径富集。此外,使用STRING数据库分析蛋白质-蛋白质相互作用网络,确定差异蛋白之间的关系。最后通过酶联免疫吸附试验验证血清中部分差异蛋白的表达。结果两组间共筛选出41种差异表达蛋白,与不合并脑病的COVID-19患儿相比,合并脑病的患儿血清中,表达上调的蛋白有14种,表达下调的蛋白有27种。生物信息学分析显示,这些蛋白主要富集在补体与凝血级联、中性粒细胞脱颗粒和活化、血小板脱颗粒等重要信号通路中。通过酶联免疫吸附试验验证,进一步证实两组患儿血清中参与凝血调节的部分相关蛋白的表达存在显著差别(合并脑病的COVID-19患儿血管性血友病因子表达上调,血浆纤维蛋白原抑制因子2表达下调)。结论凝血功能异常可能参与儿童COVID-19相关脑病的发生发展,可作为将来该病诊治的新靶点。

关键词： 新型冠状病毒感染后咳嗽   中医证型   中医体质  

摘要： 目的研究新型冠状病毒感染后咳嗽患者中医证型和中医体质类型,为中医药治疗新型冠状病毒感染后咳嗽提供思路。方法制定中医证型调查表和中医体质量表,统计分析102例新型冠状病毒感染后咳嗽患者的中医证型和中医体质。结果102例新型冠状病毒感染后咳嗽中医证型以风盛挛急证(51.0%)最常见,其次是痰湿蕴肺证(11.8%)和痰热郁肺证(9.8%)。中医体质以平和质(23.5%)、阳虚质(19.6%)和痰湿质(15.7%)为主。结论新型冠状病毒感染后咳嗽以风盛挛急证为首要证型,平和质、阳虚质为主要体质。因此,治疗应疏风止咳,兼以温补阳气。

关键词： 新型冠状病毒感染   血液透析   衰弱  

摘要： 目的探究老年维持性血液透析(MHD)患者合并新型冠状病毒感染后衰弱的变化轨迹及其影响因素。方法前瞻性队列研究。选取2022年12月1日至2022年12月31日在北京友谊医院进行血液透析治疗≥3个月,完成基线衰弱评估(T0),并且合并新型冠状病毒感染的老年患者。衰弱评估采用Fried衰弱表型,将患者分为无衰弱、衰弱前期及衰弱。随访6个月,分别于感染后1个月(T1)、3个月(T2)及6个月(T3)进行衰弱评估。应用重复测量数据的方差分析探究衰弱变化轨迹。采用logistic回归模型分析非衰弱患者进展为衰弱的影响因素。结果研究共纳入幸存老年MHD患者130例,年龄66(63,71)岁,男性62例(47.7%)。感染后6个月时,幸存患者的衰弱评分基本恢复至基线水平,其中72例(55.4%)患者能够维持或改善至无衰弱或衰弱前期,9例(6.9%)患者进展为衰弱前期,18例患者(13.8%)进展为衰弱,31例(23.8%)患者维持衰弱状态。多因素logistic回归分析结果显示,低握力(OR=6.30,95%CI:1.48~26.73)及全因住院(OR=5.01,95%CI:1.19~21.03)是非衰弱患者进展为衰弱的危险因素(P<0.05)。结论多数幸存老年MHD患者在合并新型冠状病毒感染后6个月时衰弱状态恢复至基线水平或较前改善。低握力及全因住院的非衰弱患者更容易进展为衰弱期。

关键词： 2型糖尿病   25-羟维生素D   胰岛素抵抗   新型冠状病毒  

摘要： 目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者感染新型冠状病毒(SARS-CoV-2)后25-羟维生素D[25(OH)D]与胰岛素抵抗(IR)的相关性。方法选取2023年1月1日至12月31日南京中医药大学附属医院T2DM合并SARS-CoV-2感染的住院患者892例,根据25(OH)D四分位数水平将其分为D1组(≤12 ng/mL)、D2组(13~16 ng/mL)、D3组(17~20 ng/mL)和D4组(≥21 ng/mL),每组223例。比较各组患者临床资料[包括总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)、空腹血糖(FPG)、尿酸(UA)、糖化血红蛋白(HbA1c)、24 h尿蛋白定量(24 hUTP)、空腹胰岛素(FINS)等]。分析稳态模型IR指数(HOMA-IR)的影响因素,以及25(OH)D水平与IR关系。结果D2、D3、D4组患者年龄、HOMA-IR及TC、FPG、FINS、HbA1c、LDL-C、24 hUTP水平低于D1组,而HDL-C水平高于D1组;D4组患者TC、FPG水平低于D2、D3组,HOMA-IR低于D2组,而HOMA-IR及UA、HDL-C、LDL-C水平高于D3组,差异均有统计学意义(P<0.05)。25(OH)D水平与年龄、UA水平呈正相关(P<0.05),与HbA1c、FPG、HOMA-IR、FINS、24 hUTP水平呈负相关(P<0.05)。HbA1c、TG、HDL-C、24 hUTP、25(OH)D水平与HOMA-IR独立相关(P<0.05)。D2、D3、D4组发生IR的风险分别是D1组的0.948(P=0.032)、0.941(P=0.025)、0.854(P=0.001)。结论感染SARS-CoV-2后,T2DM患者25(OH)D水平与IR密切相关。

关键词： 新型冠状病毒   新型冠状病毒感染   重症   危险因素  

摘要： 目的分析老年(60岁以上)中型新型冠状病毒(新冠病毒)感染患者的临床特点,探讨其进展为重症的危险因素。方法回顾性分析2022年12月1日至2023年3月1日在柳州市人民医院住院的1126例老年(60岁以上)中型新型冠状病毒感染患者的临床资料,患者住院过程中或出院时病情发生进展者分为进展组,病情好转者分为好转组,比较两组患者人口学特征、临床资料和实验室检查等指标。计量资料比较采用t检验或Mann-Whitney U检验,计数资料比较采用χ^(2)检验,采用二元logistic回归分析影响患者进展为重症的危险因素,利用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评价模型的预测效果。结果1126例老年新冠病毒感染中型患者中,经治疗后进展为重症患者有103例,重症率为9.15%,单因素分析结果显示两组患者在男性人数(χ^(2)=5.041,P=0.025)、合并基础疾病人数(χ^(2)=8.772,P=0.003)、激素治疗人数(χ^(2)=9.872,P=0.002)、年龄(t=-3.847,P<0.01)、白细胞计数(U=40109,P=0.001)、C-反应蛋白(U=33880,P<0.01)、D-二聚体(U=16880,P<0.01)、新冠病毒核酸检测CT值N基因(t=4.419,P<0.01)、新冠病毒核酸检测CT值O基因(t=4.238,P<0.01)、淋巴细胞绝对值(U=32197,P<0.01)、CD4+T淋巴细胞计数(U=384.5,P<0.021)、接种新冠病毒疫苗人数(χ^(2)=6.586,P=0.010)、抗病毒治疗人数(χ^(2)=11.252,P=0.001)方面差异有统计学意义。logistic回归分析结果显示,合并基础疾病(OR=3.106,95%CI:1.165~8.284)、白细胞计数升高(OR=1.106,95%CI:1.033~1.184)是老年新冠病毒感染患者病情进展的独立危险因素,而淋巴细胞绝对值升高(OR=0.409,95%CI:0.200~0.837)、新冠病毒核酸CT值N基因升高(OR=0.892,95%CI:0.837~0.951)是老年新冠病毒感染患者病情进展的保护因素。建立老年新冠病毒感染患者重症化的预测模型,绘制ROC曲线AUC值为0.738,截断值为1.5。结论老年新型冠状病毒感染患者病情易进展,若患者同时合并基础疾病,入院时检测新冠病毒核酸CT值低、白细胞升高、淋巴细胞绝对值下降4项中的2项及以上,患者发生重症及病情进展的风险增加。

关键词： 新型冠状病毒肺炎   重症肺炎   膈肌超声   肺超声  

摘要： 目的探讨肺超声联合膈肌超声与COVID-19严重程度的相关性及其对无创通气治疗的指导价值。方法收集2022年12月至2023年2月在本院接受治疗的69例新型冠状病毒重症肺炎患者的临床资料。回顾性分析患者肺超声十二分区法评分(LUBS评分)、膈肌移动度(DE)、膈肌增厚分数(DTF)与重症肺炎临床预后的相关性。结果非重症组与重症组相比,LUBS评分(9分VS.15分),DE(1.2 cm VS.0.9 cm)与DTF(44.75%VS.37.98%),提示LUBS评分越高、DE与DTF越低,COVID-19病情越严重,差异均具有统计学意义(P<0.05)。LUBS评分的cut-off值为14、DE的cut-off值为1.0 cm、DTF的cut-off值为38%,三者联合评估更具价值。其中LUBS评分>14、DTF<38%、合并呼吸衰竭及糖尿病是COVID-19重症的独立危险因素。结论肺超声(LUBS评分)与COVID-19严重程度呈正相关,膈肌超声(DE、DTF)与COVID-19严重程度呈负相关,三者联合评估更具价值。LUBS评分>14、DTF<38%、合并呼吸衰竭及糖尿病是COVID-19重症的独立危险因素。

关键词： 新型冠状病毒感染   黄芩–茵陈   药对   网络药理学   分子对接  

摘要： 目的:利用网络药理学和分子对接研究黄芩–茵陈治疗新型冠状病毒感染(Corona Virus Disease 2019,COVID–19)的潜在活性成分和分子机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)检索黄芩、茵陈的活性化学成分及作用靶点。运用Cytoscape 3.9.1软件构建活性成分–关键靶点网络,并在GeneCards、DrugBank、TTD、OMIM数据库获得与COVID–19靶点相匹配的关键靶点,并通过拓扑分析获得核心靶点。通过DAVID数据库对关键靶点进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。预测黄芩–茵陈药对的作用机制。对核心成分与关键靶点进行分子对接验证。结果:共得到59个共同作用靶点,GO生物过程409条、细胞组分31条、分子功能66条,KEGG通路126条,包括晚期糖基化终末产物–晚期糖基化终末产物受体(Advanced Glycation End–Product–Receptor for Advanced Glycation End Product,AGE–RAGE)、白细胞介素(Interleukin,IL)–17、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)、缺氧诱导因子(Hypoxia Inducible Factor,HIF)–1等信号通路,筛选得到槲皮素、β–谷甾醇、汉黄芩素、黄芩素、异鼠李素等核心活性化合物,TNF、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(Akt Serine/Threonine Kinase 1,AKT1)、IL–6、IL–1B、肿瘤蛋白p53(Tumor Protein p53,TP53)等关键靶蛋白。分子对接结果表明槲皮素、β–谷甾醇、汉黄芩素、黄芩素、异鼠李素等活性成分与TNF、AKT1、IL–6、IL–1B、TP53等关键靶点有较强的结合能力。结论:本研究初步阐明了黄芩–茵陈药对可能通过槲皮素、β–谷甾醇、汉黄芩素、黄芩素、异鼠李素等活性成分作用于TNF、AKT1、IL–6、IL–1B、TP53等关键靶点,通过AGE–RAGE、IL–17、TNF、HIF–1等信号通路对COVID–19起到治疗作用,体现了中药多组分、多目标、多通路的特点,为进一步证明其机制奠定了良好的基础。

关键词： 新型冠状病毒   流感病毒   联合疫苗   佐剂   体液免疫   细胞免疫  

摘要： 目的评价分别用Al(OH)3、MF59、AS03和QS21佐剂配伍的新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)和流感病毒联合疫苗在小鼠中的免疫原性。方法分别用Al(OH)3、MF59、AS03和QS21佐剂配制SARS-CoV-2(灭活)和四价流感病毒(裂解)联合疫苗,在第0、14天分别腹腔注射免疫BALB/c小鼠,第14、28天采血检测血清抗SARS-CoV-2抗体滴度和流感血凝抑制滴度,并在第28天分离脾脏淋巴细胞检测针对SARS-CoV-2和流感病毒的细胞免疫应答。结果不同佐剂的SARS-CoV-2和流感病毒联合疫苗均能诱导小鼠产生抗原特异性的抗体和细胞免疫应答。初次免疫后28 d,MF59佐剂组诱导了较高的抗SARS-CoV-2结合抗体和中和抗体,几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)分别为89144和5418;MF59佐剂组也诱导了较高的针对四价流感病毒(H1N1、H3N2、BV、BY)的血凝抑制抗体,GMT分别为4457、5120、1470和5881;MF59和AS03佐剂组诱导了较强的针对SARS-CoV-2的Th1型(IFN-γ、IL-2)细胞免疫应答,与正常对照组的斑点形成单位差异均有统计学意义(IFN-γ:H=16.69,P<0.01;IL-2:H=15.21,P<0.05);AS03佐剂组诱导了较强的针对H1N1、H3N2、BV、BY流感病毒的Th1型(IFN-γ、IL-2)细胞免疫应答,与正常对照组的斑点形成单位差异均有统计学意义(IFN-γ:H=12.93、12.17、11.82、13.61,P<0.05;IL-2:H=12.24、12.42、11.72、12.43,P<0.05)。结论不同佐剂配方的SARS-CoV-2和流感病毒联合疫苗的免疫原性及抗原特异性抗体和细胞免疫应答均不同,证明了联合疫苗配方研究中佐剂的重要性。