关键词： 新型冠状病毒肺炎   新型冠状病毒   抗体   疫苗接种   自身免疫疾病  

摘要： 背景: 新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是由严重急性呼吸道综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)引起的一种传染病。自2019年底新冠爆发以来,该病已经在全球范围传播,对全球人类生活产生重大影响。因此,我们需要继续深入了解这种病毒,以便更好的控制和预防该病进一步流行、减少重症患者与各种并发症。 本文在统计大连地区疫情期间新冠病毒抗体数据有明显变化趋势基础上,选取部分新冠病毒抗体高反应和阴性患者检测其HLA与STR、抗核抗体、抗单纯疱疹1型IgG抗体及抗巨细胞IgG抗体,并对两组人群上述指标的差异进行相关性分析。旨在观察人群在接种疫苗的基础上首次感染新冠病毒后抗体生成的水平差异与STR和HLA的关联,及对自身抗体和其他病毒感染抗体生成的影响,试图寻找引起新冠病毒免疫应答差异的可能基因及其对机体免疫力的影响。 方法: 1.统计分析2022-2023年COVID-19大流行期间关键时间点的SARS-CoV-2抗体阳性率,观察在接种疫苗的基础上首次感染新冠病毒后新冠病毒抗体的生成的水平。 2.观察新冠病毒抗体高反应组(n=30)和阴性(n=30)组STR和HLA等位基因的多态性,并进行组间差异比较和相关性分析。 3.检测新冠病毒抗体高反应组和阴性两组患者的抗核抗体、抗单纯疱疹1型IgG抗体及抗巨细胞IgG抗体三种抗体血清含量并分析其差异。 结果: 1.新冠病毒感染流行3年间普通人群的新冠病毒抗体水平逐年增加,与2022年相比新冠病毒抗体水平显著增高(82.4%vs 46.6%),具有统计学意义。 2.新冠病毒抗体高反应组和阴性组STR与HLA检测结果显示,STR检测7个等位基因有显著性差异:D6S1043-20、D2S1338-24、Pen Ta D8-8、v WA-19、D8S1179-10、D8S1179-16、FGA-20,新冠病毒抗体产生水平可能跟这些基因有关联,其余183个等位基因无显著性差异;HLA检测51个等位基因均未见显著性差异。 3.新冠病毒抗体高反应组抗核抗体高等级程度病例显著多于阴性组(3级:70%vs 43.3%;4级:6.7%vs 0%)。巨细胞病毒IgG抗体和单纯疱疹病毒1型IgG两组间则无显著性差异。 结论: 1.新冠病毒抗体高反应主要来自自然感染,而非疫苗接种。 ***等位基因与抗体产生水平有关,遗传因素可能是影响新冠病毒抗体生成的原因,采用STR等位基因又可以用于评估个体新冠病毒抗体产生的遗传易感性。 3.新冠病毒感染后刺激自身免疫系统激活,具有一定关联性。新冠高反应激发ANA增高而CMV和HSV-1抗体不高,说明特异性激发ANA,引发病理免疫,有增加自身免疫病患病风险

关键词： 新冠肺炎   情感分析   LDA主题模型   舆情演化  

摘要： 自2019年12月以来,由湖北省武汉市开始发现的新型冠状病毒事件(以下简称“一次疫情”)而后不断反复的疫情与防疫政策激发公众在社交平台上大量发表意见。随着网络的发展,公众不再依靠短信与电话进行单一的信息交流,而是通过互联网进行群体式传播,与疫情相关的话题呈现爆发式增长,一度引起公众的恐慌心理。此类突发公共卫生事件具有控制难度大、周期性较长以及不稳定等特点,不仅影响到公众的日常生活,也给相关部门的工作带来巨大的挑战。自2022年2月开始,上海市与吉林省长春市再次突发大规模疫情(以下简称“二次疫情”),虽然变异毒株的毒力较低,但其传播力增强且传播迅速,导致其规模远大于武汉,并且受到一次疫情影响,互联网平台涌现大量公众舆论。在网络发达的时代,当时环境下的公众对于疫情的发展仍然保持着高度注意力,导致公众被厚重的负面情绪所误导,继而在开放社交平台上表达出消极悲观的发言,一定程度上给当时的防疫工作增加了困难。 基于此,本文首先针对在微博平台收集两次舆情事件的评论数据,以情感分析与文本主题两方面分析舆情事件,利用Snow NLP(Simplified Chinese Text Processing)中文语言处理工具与LDA(Latent Dirichlet Allocation)主题模型进行实证分析,其次构建情感与主题结合的模糊综合评价模型,对比分析两次突发公共卫生事件综合评价的结果特征。再次对主题进行可视化并分析其演化特征,基于点积余弦相似度算法绘制话题传导路径图,构建揭示突发公共卫生事件发展脉络和演化规律的事理图谱。 结果表明,公众在面对两次突发公共卫生事件时的情绪有明显改变。根据情感与主题结合的模糊综合评价模型结果可知,公众对一次疫情事件大多数呈积极心态,而公众对于第二次疫情的积极情绪得分明显高于消极情绪。在舆情事件的演化结果的河流图与桑基图中,二次疫情在情绪上和主题上相较于一次疫情,存在更多维、更积极的话题路径,大众的话题倾向更集中。本文紧紧围绕突发公共卫生事件网络舆情演化,提出防范与预防突发公共卫生事件的策略,从而保障了提出策略的严谨性与合理性,同时揭示了在突发公共卫生事件下公众情绪等方面演化的基本规律,并从社会不同层面出发,给予管理者科学有效的管理建议。

关键词： 新冠肺炎疫情   爆发期   平台期   医疗产品贸易   封控措施   对外关系  

摘要： 2019年底爆发了规模空前的新冠肺炎疫情,给世界经济、人类健康造成了强烈的负面影响,也阻碍了国际贸易的自由化进程。然而疫情也促进了医疗产品贸易的增长,作为国际社会合作对抗疫情的重要手段,对疫情期间医疗产品贸易的研究具有很强的现实意义。 本文回顾了新冠肺炎疫情期间世界与中国的医疗产品贸易发展趋势,并从进口国、出口国、其他贸易伙伴国三个角度考察,利用月度面板数据模型和工具变量法检验,实证研究了2020年1月到2022年9月期间,新冠肺炎疫情对中国向世界其他各国出口医疗产品的影响,分析了这种影响对不同产品类别的差异,并重点关注了当疫情进入平台期后,这种影响的变化情况。此外,本文还关注了两国的政治关系和经济关系在疫情背景下的医疗产品进出口中的调节作用,以考察医疗产品出口作为一种对外援助形式的驱动因素。研究的主要发现可以总结如下: 第一,总体来看,进口国疫情促进了世界各国从中国的医疗产品进口,其中关键医疗产品受到的影响最大,其次是药品、医疗设备;中国国内疫情会限制其医疗产品出口能力,对出口额产生负面效应;进口国其他贸易伙伴国的疫情会限制其出口,从而发生贸易转移效应,增加医疗产品从中国的进口。 第二,分时期来看,疫情进入平台期后,三个方面的疫情对非关键医疗产品进口的影响相对于之前显然减小,而对关键医疗产品的影响依旧延续了下来;出口国中国的疫情对出口的负面效应完全消失,甚至会促进中国的医疗产品出口。 第三,政治关系对疫情影响医疗产品进出口的作用是负面的,与大多数国家的出口偏向不同,中国在疫情期间更倾向于向与自己政治立场相差较大的国家出口医疗产品,中国政府有利用医疗贸易手段改善国际关系的迹象。 本文从公共卫生治理领域落脚,从国际贸易行业切入,融合政治经济学视角,做到了多学科的交叉。所采用的工具变量,有效保证了因果识别的准确性,为该领域实证研究的内生性问题的解决做出了一定的创新贡献。

关键词： 全球卫生治理   卫生外交   公共卫生   新冠肺炎  

摘要： 全球卫生治理是国际体系内不断发展的话题,受到全球化及其相关风险的推动。公共卫生已成为各国外交政策的重要组成部分。全球卫生生态系统以多方参与者、多层次和多因素的谈判为特征。中国和印度是两个深度融入全球资本主义体系的角色,对全球卫生治理、全球卫生治理和全球卫生治理等各种相互关联的类别产生影响。作为全球卫生领域的重要参与者,这两个国家在全球卫生治理方面具有重要影响力。本论文对中国与印度在南亚的卫生外交进行了比较分析,重点关注两国在全球卫生治理中的角色、区域卫生援助的方式以及对COVID-19大流行等卫生危机的应对。

关键词： 肿瘤相关性贫血   特异性CD8+ T细胞   记忆CD8+T细胞   新型冠状病毒   MHC-抗原肽-四聚体  

摘要： 研究背景: 恶性肿瘤是我国居民的主要死亡原因之一,其发病率与死亡率呈逐年上升趋势。在恶性肿瘤患者的疾病管理中,肿瘤并发症是影响患者疾病控制和生活质量的重要因素。肿瘤相关性贫血（Cancer related anemia,CRA）是恶性肿瘤患者常见的并发症,据统计,高达30%～90%的肿瘤患者在病程中合并不同程度贫血。多项研究发现,相较于无贫血肿瘤患者,合并贫血的肿瘤患者病毒感染风险进一步增加,而病毒感染是导致肿瘤患者病情加重和死亡率增高的重要原因。因此,深入探究CRA患者病毒易感性增高的机制不仅有助于减少患者感染,也将提高患者肿瘤控制效果与生活质量。 抗原特异性CD8+ T细胞是机体对抗病毒感染的核心要素,病毒的控制主要依赖抗原特异性效应CD8+ T细胞对被感染细胞的杀伤能力,同时机体预存的抗原特异性记忆CD8+ T细胞丰度与病毒易感性及感染后疾病严重程度呈负相关。本课题组前期工作发现,CRA可诱导机体发生髓外造血,产生CD45+红系前体细胞,系统性抑制效应CD8+ T细胞免疫应答,进而削弱患者病毒感染控制效果,而CRA是否可能通过影响抗原特异性记忆CD8+ T细胞的丰度导致患者病毒易感性增高目前尚不清楚。 在新冠病毒大流行背景下,大量肿瘤患者经历病毒感染与康复,体内留存新冠病毒特异性记忆T细胞,为研究记忆CD8+ T细胞提供了良好条件。基于此,本研究拟通过分析肿瘤患者血红蛋白浓度与新冠病毒特异性记忆CD8+ T细胞丰度的相关性,并比较不同贫血程度患者新冠病毒特异性记忆CD8+ T细胞丰度的差异,揭示CRA患者病毒易感性增高的原因,进而为CRA患者病毒感染防控策略的制定提供新的理论依据。 方法: 1.新冠病毒特异性记忆CD8+ T细胞的扩增及检测 1.1确定HLA-A*11:01阳性人群作为研究对象,预测新冠病毒来源的HLA-A*11:01限制性T细胞表位,合成表位肽。 1.2对新冠康复健康志愿者进行HLA分型,筛选HLA-A*11:01阳性志愿者,采集志愿者外周抗凝全血,获取外周血单个核细胞（PBMC）。 1.3利用多种新冠病毒表位肽刺激志愿者PBMC,随后培养PBMC,使新冠病毒特异性记忆CD8+ T细胞扩增。 1.4使用单一表位肽刺激扩增后的细胞,并进行ELISPOT,鉴定阳性反应表位。 1.5通过肽置换获得HLA-A*11:01-表位肽单体,聚合HLA-A*11:01-表位肽单体,构建MHC-抗原肽-四聚体（Tetramer）。 1.6使用Tetramer对志愿者扩增后的细胞进行染色,通过流式细胞术检测新冠病毒特异性CD8+ T细胞。 2.分析肿瘤相关性贫血与新冠病毒特异性记忆CD8+ T细胞丰度的相关性 2.1鉴定新冠康复肿瘤患者HLA基因型,纳入HLA-A*11:01基因阳性患者。 2.2收集入组患者有关临床信息,依据血红蛋白浓度将患者分为无贫血组,轻度贫血组以及中重度贫血组。同时采集患者外周静脉抗凝全血,提取PBMC。 2.3利用新冠病毒表位肽刺激并培养患者PBMC,扩增新冠病毒特异性记忆CD8+ T细胞。 2.4使用Tetramer对患者扩增后的细胞进行染色,通过流式细胞术检测Tetramer+细胞比例及数量。使用单一表位肽刺激患者扩增后的细胞,并进行ELISPOT,记录斑点数。用Tetramer+细胞比例、数量及ELISPOT斑点数反映新冠病毒特异性记忆CD8+ T细胞的丰度。 2.5分析患者血红蛋白浓度与新冠病毒特异性记忆CD8+ T细胞丰度的相关性。比较各组患者新冠病毒特异性记忆CD8+ T细胞丰度的差异。 结果: 1.成功扩增并检测N361与N134两种抗原特异性记忆CD8+ T细胞 1.1预测并合成了10种新冠病毒表位肽。 1.2纳入2名HLA-A*11:01阳性新冠康复健康志愿者。 1.3志愿者PBMC受新冠病毒表位肽刺激,发生扩增。 1.4鉴定N361及N134两种表位可刺激扩增后的细胞产生阳性反应。 1.5成功构建N361Tetramer及N134Tetramer。 1.6使用N361Tetramer与N134Tetramer对志愿者扩增后的细胞进行染色,通过流式细胞术成功检测抗原特异性CD8+ T细胞。 2.新冠病毒特异性记忆CD8+ T细胞的丰度与贫血严重程度相关 2.1共纳入34例HLA-A*11:01阳性肿瘤患者,其中无贫血组14例,轻度贫血组14例,中重度贫血组6例。 2.2新冠病毒特异性记忆CD8+ T细胞的丰度与患者血红蛋白浓度呈正相关。与无贫血患者相比,中重度贫血患者新冠病毒特异性记忆CD8+ T细胞的丰度显著降低。 结论: 肿瘤相关性贫血患者病毒易感性增高可能与外周血中病毒特异性记忆CD8+ T细胞的丰度降低有关。

关键词： T细胞表位   新型冠状病毒   细胞毒性T淋巴细胞   树突状细胞   疫苗  

摘要： 自2019年末以来,由严重急性呼吸综合征冠状病毒2（Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-CoV-2）感染引起的新型冠状病毒肺炎（Coronavirus disease-19,COVID-19）在全球爆发严重的疫情流行,致病病原体SARS-CoV-2是继SARS-CoV和MER-CoV之后报道的第三种人高致病性冠状病毒。截止目前,全球已有超过7亿人感染SARS-CoV-2,超过700万人因感染而死亡。同时,随着SARS-CoV-2突变株的不断出现,全球各地不断爆发由突变株引起的新的疫情流行,截止目前,人类仍没有打赢这场对SARS-CoV-2病毒的阻击战,SARS-CoV-2病毒已出现30余种代表性变异株,对人类健康造成了极大的影响。病毒突变可能造成关键抗原信息的改变,从而降低已有预防性疫苗和治疗抗体的效果。研究表明,一些关键的病毒突变如N501Y、D614G、N439K等可以显著增强病毒的传染力、免疫逃逸能力。 T细胞免疫应答,尤其是CD8+T细胞反应,是人体抗病毒免疫应答的主要类型,在抗病毒感染以及疫苗诱导免疫保护的过程中发挥了重要作用。CD8+T细胞的特异性细胞毒作用是清除病毒感染细胞和减少循环病毒负荷的主要机制,同时,对自然感染个体的研究表明,人体内B细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞之间的协同相互作用提供了更完善且更有效的抗病毒免疫反应,感染者体内更高水平的病毒特异性CD4+和CD8+T细胞与较轻程度的COVID-19症状具有相关性,且可能与长期的免疫保护有关。近期研究亦表明,CD8+T细胞免疫应答也是m RNA疫苗诱导机体产生早期免疫保护的主要介质。 人体内,CD4+和CD8+T细胞的T细胞受体（TCRs）能够识别由MHC I/II类分子递呈的病毒表位肽,从而引发针对病毒感染的强烈细胞免疫应答保护。其中,对于由保守性的T细胞抗原表位所诱导的T细胞免疫应答则可以针对不同的病毒变体产生广谱的免疫保护作用。因此,鉴定MHC I/II类分子呈递的SARS-CoV-2相关T细胞抗原表位,尤其是保守性的MHC I型T细胞抗原表位,并构建表位相关疫苗或优化疫苗研发策略,可以为接种人群提供更为强大的抵抗不同SARS-CoV-2突变株感染的T细胞免疫保护。 综上,本课题聚焦筛选、鉴定并明确SARS-CoV-2结构蛋白中具有强免疫原性且保守的HLA-A*0201限制性CD8+T细胞抗原表位,探究其应用于疫苗研发的价值潜力,从而为提高疫苗疗效提供理论指导和科学依据,同时建立并完善病毒、肿瘤等相关特异性抗原表位筛选、检测、体内外鉴定及药效学研究的技术平台体系,为以多肽表位为基础的预防及治疗性疫苗的研发提供理论及技术支撑。 本研究主要分为四个部分: 第一部分:SARS-CoV-2结构蛋白中HLA-A*0201限制性CD8+T细胞表位的预测和初步筛选及检测 通过两款MHC I-Pepetide在线预测工具Net MHCpan4.0和Meta MHCpan-1.0,对SARS-CoV-2的S、M、E、N四种结构蛋白序列进行HLA-A*0201限制性CD8+T细胞表位预测,结果获得18个来自S蛋白的预测表位（SSp-1～18）,18个来自M蛋白的预测表位（SMp-1～18）,13个来自E蛋白的预测表位（SEp-1～13）,以及14个来自N蛋白的预测表位（SNp-1～14）。我们选择突变率低且组成丰富的M蛋白,根据算法评级结果从M蛋白中选择10个最优预测表位进行了ELISA和T2细胞结合实验以评估预测表位与HLA分子的亲和力强弱。最终筛选得到在亲和力实验中表现优异的5个预测表位（SMp-1、SMp-2、SMp-3、SM p-5、SMp-11）,并将其纳入下一步的筛选中。 第二部分:SARS-CoV-2 M蛋白HLA-A*0201限制性候选表位的HLA-A2.1/Kb转基因小鼠体内免疫原性的研究 通过第一部分的信息学预测和亲和力初筛,筛选得到5个候选表位。本部分实验中,我们使用负载混合候选表位肽的BMDC免疫HLA-A2.1/Kb转基因小鼠,构建了免疫小鼠模型。ELISPOT法检测了免疫小鼠脾细胞在不同候选表位肽刺激下的特异性IFN-γ分泌情况,由此筛选得到SMp-2和SMp-11两个反应阳性的候选表位。随后,进一步构建了偶联SMp-2和SMp-11的Tetramer检测试剂,用以检测免疫小鼠脾细胞中的两个候选表位特异性的CD8+T细胞。结果发现,免疫小鼠脾细胞中存在较高水平的SMp-2特异性CD8+T细胞,但并未观察到显著的SMp-11特异性CD8+T细胞的存在。由于SMp-11能够激发T细胞特异性分泌IFN-γ,我们并未排除SMp-11,留待后续实验继续验证。

关键词： 免疫层析检测   新型冠状病毒   高灵敏度   水溶性聚合物屏障  

摘要： 背景和意义 免疫层析检测技术作为一种即时诊断手段,其具有实时、快速、准确、便携、成本低和无需专业人员操作的优点,广泛适用于家庭、学校、办公室和机场等人群密集的非专业检测场所。在新冠疫情全球大流行期间,已经有大量的研究证实,基于免疫层析技术的抗原快速检测试剂能够在感染初期作为核酸检测的替代品,用于疾病的早期诊断。然而,相较于核酸检测等方法,抗原快速检测试剂存在灵敏度低的局限性,使其在临床诊断上的应用受到限制。 目前,尽管众多学者已经对提高免疫层析检测灵敏度的方法进行探索,但是这些方法以增加复杂操作步骤、延长测试时间、使用仪器设备报告结果和加重生产成本为代价,不适合作为即时诊断试剂使用。本研究旨在基于水溶性高分子聚合物建立高敏型新型冠状病毒抗原快速检测方法,以该方法研制的试剂生产成本低,灵敏度高,一步加样即可在15-30min内通过肉眼判读结果完成测试。方法的普适性为新发和突发传染病的高敏抗原即时诊断提供可能。 研究方法 1.基于胶体金作显色标签,建立免疫层析检测方法。 2.基于水溶性高分子聚合物构建高敏型免疫层析检测方法。 3.高敏型免疫层析检测方法用于新型冠状病毒抗原快速检测。 研究结果 1.基于胶体金建立的免疫层析检测方法,用于检测以核衣壳蛋白为抗原靶标的新型冠状病毒,检测灵敏度是500 pg/mL。 2.将水溶性高分子聚合物在硝酸纤维素膜上建立一道可溶性屏障,该屏障位于试纸条上的检测线和质控线之间,且使用的水溶性高分子聚合物是15%接枝度的甲基丙烯酸酯聚合物,显著提升检测灵敏度。 3.利用高敏型免疫层析检测方法研制新型冠状病毒抗原快速检测试剂,测试核衣壳蛋白的灵敏度是50 pg/mL。该试剂特异性好,检测7种新型冠状病毒株均为阳性,检测5种呼吸道病毒均为阴性。 结论 本研究已建立基于胶体金的免疫层析检测方法,该方法用于检测新型冠状病毒的核衣壳蛋白,灵敏度是500pg/mL。在此基础上开展提升灵敏度检测方法的研究,以15%接枝度的甲基丙烯酸酯聚合物在硝酸纤维素膜上的检测线和质控线之间构建一道可溶性屏障可显著提升检测灵敏度,成功构建高敏型免疫层析检测方法。将高敏型免疫层析检测方法用于研制新型冠状病毒抗原快速检测试剂,测试病毒的核衣壳蛋白灵敏度达到50 pg/mL,实现灵敏度10倍的提升。