关键词： 新型冠状病毒   刺突蛋白蛋白   单链抗体  

摘要： 目的:构建抗新型冠状病毒S蛋白单链抗体(scFv)重组基因。方法:采用基因工程抗体技术,对BALB/c小鼠利用新型冠状病毒S蛋白抗原进行免疫接种,通过提取脾脏总RNA取得抗体可变区(V)重链(VH)和轻链(VL)基因序列,经过多种引物PCR扩增并筛选得到对应的VH和VL基因序列,再经过提纯回收后,通过Linker将带有限制性酶切位点的抗新型冠状病毒S蛋白VH和VL引物基因与VH、VL基因用重叠延伸PCR方法成功连接得到scFv重组基因,测序结果通过NCBI网站使用BLAST在基因库对比分析。结果:成功获得抗新型冠状病毒S蛋白VH和VL基因,并通过重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)方法连接得到scFv,scFv经过BLSAT分析显示其基因同源性大于80%。间接ELISA检测结果显示,原核表达上清有明显的结合。结论:本研究为新型冠状病毒的诊治及研发新型相关抗体提供技术基础。

关键词： 新型冠状病毒   弱阳性核酸质控品   均一性   稳定性  

摘要： 目的:本研究旨在通过实验室内稀释法自配新型冠状病毒弱阳性质控品,并对其性能进行评价以满足新冠病毒核酸检测的质量控制需求。方法:使用阴性临床样本、样本保存液和去离子水三种基质将强阳性假病毒核酸质控品稀释成弱阳性质控品,采用逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)进行核酸扩增,评价其分装后的均一性以及其在反复冻融、室温放置、2~8℃、-20℃、-70℃的不同条件下的稳定性。结果:三种基质配制的质控品分装后均一性良好,使用阴性临床样本制备的弱阳性质控品能在反复冻融4次、室温放置20小时、2~8℃暂存6天、-20℃冻存8周和-70℃冻存16周保持稳定;而使用样本保存液配制的弱阳性质控品能在室温放置16小时、2~8℃暂存6天、-20℃冻存6周和-70℃冻存20周保持稳定;去离子水组则在冻融1次不能稳定。结论:阴性临床样本和保存液均是实验室内稀释法自配新型冠状病毒弱阳性质控品理想的基质,并且稳定性能满足临床日常检测需求。建议根据实验室实际条件选择,并结合所使用扩增试剂检测靶基因覆盖范围,确定最佳的使用条件,保证检测质量。

关键词： 新型冠状病毒感染   维生素C   甘草酸   网络药理学   作用机制  

摘要： 基于网络药理学技术,探索维生素C(VC)和甘草酸(GA)联合防治新型冠状病毒感染(COVID-19)的作用机制.通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、SuperPred、SEA Search Server(SEA)、DrugBank、Comparative Toxicogenomics Database(CTD)和SwissTargetPrediction数据库综合相关文献获得VC和GA功能靶标,以及Genecards等数据库获取COVID-19治疗靶点;构建“药物-疾病-靶点”网络,并进行基因本体论(GO)富集分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析和蛋白互作网络分析(PPI);运用Autodock Vina软件进行分子对接.筛选出VC功能靶标667个、GA功能靶标154个、COVID-19靶点1 586个,VC与GA共有45个靶标与COVID-19致病靶点相关.关键靶点包括ALB、MAPK3、EGFR、IL2、MAPK1和CTLA4等. GO分析显示靶点富集于肽基丝氨酸磷酸化、蛋白结合等生物过程,KEGG分析提示靶点主要作用于5-羟色胺能突触通路.分子对接表明,VC和GA与SARS-CoV-2 3CL水解酶、ACE2等靶点具有较强结合能力.研究表明,VC和GA可能通过调节免疫系统的激活,在COVID-19预防和治疗中发挥协同作用.

关键词： 新型冠状病毒感染   咳逆   咳嗽   喘证   小青龙加石膏汤  

摘要： 纪立金教授认为新冠寒毒伤肺后,以本虚加肺气阳不足,标实为肺闭与痰饮并存为表现,可致郁气上冲之咳逆症,其病位关键在肺。辨治以开宣肺气、温肺化饮、清除郁热为要,咳逆之治,选小青龙加石膏汤加减辨证治疗,其中重用石膏清透郁热,疗效显著。

关键词： 疾控体系   新型冠状病毒   突发公共卫生事件   公共卫生应急响应  

摘要： 对比中国香港与美国和英国疾控体系对新型冠状病毒感染(corona virus disease 2019,COVID-19)疫情的应对特点和表现,为未来疾控体系的改革提供可借鉴的经验。本研究采用了综合性的方法论框架,其中包括文献分析法、专家访谈法和比较研究,深入探讨和比较中国香港、美国、英国、在应对COVID-19等重大公共卫生事件时的策略和挑战。结果显示,中国香港卫生署采取了紧急措施来保护高龄和易感人群,与社会组织紧密合作,联合社区应对疫情。美国疾病控制与预防中心关键地推动了疫苗的快速研发和普及,并根据不同人群需求,提供针对性建议。英国卫生安全局增强了国家的检测及接触者追踪系统,在志愿者支援下成功实行了规模较大的疫苗接种计划。成熟和专业化的卫生体系是确保社会在突发公共卫生危机中具备复原力的基础。先进的科技和公益性团体在疫情中提供了支持,但英美国家面临政治化等挑战,也突显了科学决策的重要性。现代疾控体系的改革优化应当借鉴国际经验,结合具体情境,为未来公共卫生挑战做好准备。

关键词： 新冠病毒   谱系划分   分子进化   适应性变异   流行趋势  

摘要： 由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-Co V-2)引起的2019冠状病毒病(coronavirusdisease2019,COVID-19)大流行给人类生命安全和全球经济造成了巨大冲击。SARS-Co V-2基因组的快速变异引起了广泛关注,基因组中几乎每个位点都发生过单核苷酸变异(single nucleotidevariants,SNVs),其中刺突蛋白上的变异在病毒的适应性进化和传播中起着尤为关键的作用。本文综述了SARS-Co V-2及非人类动物中相关冠状病毒的系统发生关系,并深入分析了SARS-Co V-2的谱系划分以及关键氨基酸变异对病毒生物学特性的影响。此外,本文还概述了当前面临的挑战,并展望了深度突变扫描(deep mutational scanning,DMS)结合人工智能方法在预测新冠病毒变异株流行趋势中的广阔应用前景。

关键词： 脊柱关节疼痛   新型冠状病毒感染   三痹汤   蠲痹汤   身痛逐瘀汤   谢林   验案  

摘要： 新型冠状病毒(以下简称新冠病毒)感染经治疗康复后,部分患者仍会遗留不同程度脊柱关节痛。谢林教授指出辨治新冠病毒感染后脊柱关节疼痛的核心在于“审虚实,理寒湿,通血络,止痹痛”,补虚祛实,虚实兼杂者补泻兼施。寒湿疫邪外袭,气血瘀滞者治以三痹汤加减;平素体虚,疫毒侵袭,虚实兼夹者宜选蠲痹汤加减;夙疾而痰瘀留伏,病后初愈,又感疫毒者,当予身痛逐瘀汤加减。

关键词： 新型冠状病毒   血清淀粉样蛋白A   T淋巴细胞计数   死亡风险   预测  

摘要： 目的评估外周血血清淀粉样蛋白A(serum amyloid protein A,SAA)和CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞计数水平对评估新型冠状病毒感染(corona virus disease 2019,COVID-19)患者死亡风险的意义,为临床早期识别死亡高危患者提供依据。方法回顾性选取2023年1—2月在浙江省金华市人民医院诊治的382例COVID-19患者为研究对象,依据其确诊后30天内死亡情况分为死亡组(29例)和存活组(353例),记录其入院时外周血SAA和CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞计数水平。采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线研究上述指标预测COVID-19患者死亡风险的最佳阈值及相应的灵敏度和特异度。结果死亡组COVID-19患者外周血SAA水平高于存活组患者,外周血CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞计数低于存活组患者,其差异均具有统计学意义(均P<0.05)。外周血SAA预测COVID-19患者死亡风险的ROC曲线下面积为0.897,最佳截断值261.7 mg/L时灵敏度为85.2%、特异度为81.6%,Youden指数为0.668;外周血CD4^(+)细胞计数预测COVID-19患者死亡风险的ROC曲线下面积为0.909,最佳截断值192.4个/μL时灵敏度为89.3%、特异度为84.0%,Youden指数为0.733;外周血CD8^(+)细胞计数预测COVID-19患者死亡风险的ROC曲线下面积为0.934,最佳截断值167.7个/μL时灵敏度为92.9%、特异度为85.9%,Youden指数为0.788。结论外周血SAA和CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞计数水平可以作为COVID-19患者死亡风险预测的生物学指标。

关键词： 藏药组合方案   新型冠状病毒感染   高原地区   临床观察  

摘要： 目的:观察藏药组合方案对高原地区人群感染新型冠状病毒轻症患者核酸转阴率及症状消失率的影响。方法:试验纳入方舱患者653例,根据患者住舱区域和服药意愿分为藏药组(催汤颗粒+流感丸+仁青芒觉胶囊+达斯玛保丸)和对照组(未服用藏药),治疗后评估核酸转阴率和症状消失率。结果:藏药组在核酸转阴率和住舱时间上与对照组无明显差异(P>0.05),在发热、咳嗽、头痛、咽干咽痛、鼻塞、乏力等方面疗效优于对照组(P<0.01)。结论:藏药组合方案在缓解发热、咳嗽、头痛、咽痛、鼻塞等新型冠状病毒感染引起的症状方面有一定优势。

关键词： 发热门诊   清洁   消毒   证据总结  

摘要： 目的评价与总结发热门诊应对新型冠状病毒环境与设备清洁和消毒管理的最佳证据。方法通过计算机检索BMJ Best Practice、NGC、RNAO等指南网、疾病预防控制中心及数据库中所有国内外发表的与发热门诊清洁和消毒相关的指南、专家共识、证据总结、系统评价等。由3名研究者对文献质量进行评价和资料提取,对符合质量标准的文献进行证据提取。结果本项目共纳入9篇文献,总结28条最佳证据。内容包括环境清洁和消毒用品的选择、环境清洁和消毒用品的制备及储存、环境清洁工具的使用及处理、环境清洁时的个人防护设备、室内空间、空气消毒、地面消毒、床罩等纺织品处置、设备与诊疗器具消毒和常规物体表面消毒。结论目前的证据在发热门诊场景下涉及新型冠状病毒感染后不同物体表面的清洁和消毒,缺乏对诊疗设备、消毒有效性评价等相关证据,医疗人员可进一步展开高质量原始研究,完善证据内容,为临床实践提供可参考的证据。