关键词： 新型冠状病毒   核衣壳蛋白(N)   刺突蛋白(S)   ADCC效应   细胞免疫应答   抗原相互作用  

摘要： 严重急性呼吸综合征冠状病毒 2(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2,以下简称新冠病毒)是引发全球大流行的新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019,COVID-19)的病原体,针对该病原体的疫苗在世界范围内的广泛使用有效控制了 SARS-CoV-2的感染和流行。迄今为止,在全球范围内已经接种的135.9亿剂次疫苗中,几乎半数是COVID-19灭活疫苗。与其他以刺突蛋白(Spike protein,S)为靶点的mRNA、腺病毒载体或亚单位疫苗相比,包含全病毒颗粒的灭活疫苗诱导的S特异性中和抗体水平稍低,但仍然达到了与其他疫苗相似的免疫保护效果,这背后的抗病毒机制尚不清楚。 COVID-19灭活疫苗包含SARS-CoV-2全病毒颗粒,其中核蛋白(Nucleocapsid,N)作为高度保守的病毒结构蛋白占灭活疫苗总蛋白含量的50%,在同源的冠状病毒早期疫苗研发中具有良好的免疫原性,能够诱导强烈的细胞免疫应答。但作为COVID-19灭活疫苗中的重要组分,N蛋白是否参与该类疫苗的免疫应答并发挥免疫保护作用,以及N蛋白是否对靶抗原S的免疫应答产生影响值得探讨。 为回答上述问题,本研究首先在小鼠中评价了N蛋白的独立保护作用,并根据免疫原性研究初步探索N蛋白发挥免疫保护作用的可能机制。随后,本研究通过N和S蛋白联合免疫模拟COVID-19灭活疫苗中N和S共同存在的情况来探讨N蛋白对S抗原免疫应答的影响;同时通过N蛋白预先免疫再进行灭活疫苗的接种,模拟冠状病毒感染后接种灭活疫苗的情况,探索预存的N免疫应答对后续灭活疫苗中靶抗原S蛋白免疫应答的影响;通过先免疫灭活疫苗建立N和S的免疫记忆,再进行N蛋白的刺激,模拟灭活疫苗接种后再次暴露于病毒的情况,探讨病毒复制早期N蛋白的表达对先前S免疫应答的影响。此外,考虑到病毒自然感染和灭活疫苗接种时N和S蛋白是以一个病毒颗粒整体参与抗原的加工和呈递过程,本研究使用mRNA疫苗平台制备N和S抗原位于相同或不同纳米颗粒的疫苗,探索不同抗原递呈模式下N蛋白对S抗体应答的影响,并对其潜在机制进行初步研究。 ***-CoV-2N蛋白的单独免疫保护作用 本部分使用新冠病毒重组N蛋白分别辅以MF59佐剂、卡介苗CpG寡核苷酸(BCG-CpG)佐剂和壳聚糖黏膜佐剂免疫小鼠,小鼠接种两次N蛋白后进行SARS-CoV-2病毒攻击实验。研究结果表明,相较于PBS组,三种N蛋白疫苗均能够显著抑制小鼠感染后的体重下降,降低肺部病毒载量和病理损伤。对抗体的功能研究发现,N特异性抗体在体外可以结合病毒感染后在细胞表面表达的N蛋白,通过介导抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)来抑制病毒的复制和传播。另外,本研究还通过流式细胞实验检测到小鼠脾脏中CD4+T、CD8+T细胞以及长效记忆T细胞的比例的显著增加,并通过ELISpot实验检测到N蛋白特异性IFN-γ和IL-4细胞因子的分泌,提示N蛋白也能通过诱导细胞免疫应答发挥抗病毒作用。 2.N蛋白对SARS-CoV-2灭活疫苗中S抗体应答的影响 本研究通过N蛋白和S蛋白混合后共同免疫小鼠,检测S特异性抗体应答发现,与单独使用S蛋白进行免疫相比,N蛋白与S蛋白共同免疫能够诱导小鼠血清S特异性IgG抗体滴度的显著增加。另外,检测N预先免疫再接种灭活疫苗的小鼠的S抗体应答发现,N免疫应答的预存能够显著提高后续灭活疫苗接种中的S特异性抗体滴度。并且,通过预先接种灭活疫苗再使用N蛋白加强免疫的实验发现,在灭活疫苗接种三个月后S抗体逐渐下降时,N蛋白的暴露刺激能够使先前的S抗体滴度明显回升。本研究进一步分析了上述实验中N特异性T细胞反应与S特异性抗体滴度之间相关性,结果显示,分泌N特异性IFN-γ的T细胞数量与S特异性IgG抗体滴度呈正相关,表明N蛋白诱导的T细胞应答可能是促进S抗体分泌增加的原因。 3.N和S双抗原的不同提呈模式对S免疫应答的影响及初步机制探讨 本研究通过mRNA疫苗平台制备位于同一纳米颗粒的双抗原疫苗mRNA-N&S,另制备mRNA-S和mRNA-N两种抗原纳米颗粒的混合疫苗,分别免疫小鼠,检测在两种疫苗免疫后启动的不同抗原呈递模式下,N蛋白对S抗体应答的差异。研究结果显示,与mRNA-S单独免疫组和mRNA-S+mRNA-N混合免疫组相比,mRNA-N&S免疫组能够诱导更高的S特异性抗体应答,并且该组S特异性抗体应答与N特异性IFN-γ水平具有显著相关性(r=0.7381)。同时,使用mRNA-N对灭活疫苗免疫后抗体下降时的小鼠进行加强免疫,能够使先前的S抗体

关键词： 新型冠状病毒   中和抗体   有效性   安全性   临床应用进展  

摘要： 新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)在全球范围内持续流行，严重威胁人类生命健康，开发有效治疗药物尤为重要。中和抗体作为一种特异性抗病毒治疗药物，药品研发和临床应用都取得较快进展，目前已有部分中和抗体获得紧急使用授权，应用于COVID-19患者的治疗。因此本文对中和抗体类新型冠状病毒治疗药物的临床应用及有效性、安全性进行综述，以期为临床用药提供参考。

关键词： COVID-19   急性心肌梗死   PCI   临床诊疗  

摘要： 目的:本文是关于新型冠状病毒感染(COVID-19)合并急性心肌梗死(AMI)的病例分析及文献复习。COVID-19不仅影响呼吸系统,还可能对心血管系统产生严重影响,增加心血管疾病的风险。本文通过分析两例COVID-19合并AMI的病例,探讨了新冠病毒感染与AMI之间的潜在联系,并回顾了相关文献,以提高对此类病例的认识并为临床诊疗提供参考。 方法:入选2023年1月至2023年6月大连市友谊医院和大连市中心医院收治的新型冠状病毒感染合并急性心肌梗死患者2例。通过对其临床资料进行分析,并检索复习国内外相关最新文献,阐述COVID-19合并急性心肌梗死的患者的潜在发病机制与临床诊疗特点。 结果:(1)例1老年女性,既往除2型糖尿病无其他特殊病史,也没有明显的发热、咳嗽等前期感染症状。急性起病,无确切诱因突发胸骨后闷痛及呼吸困难,症状持续加重不缓解遂立即就诊,急诊心电图符合急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)表现,紧急行冠状动脉造影(CAG)显示有多处严重狭窄,预行经皮冠状动脉介入治疗(PCI)血运重建,但患者中途喘憋严重、难以平卧,无法耐受继续手术,暂时转入病房保守治疗,化验提示新型冠状病毒核酸阳性,心肌损伤标志物和心衰标志物明显升高,双肺CT多发渗出样改变。随后数小时内患者症状进一步加重,高流量吸氧状态下指脉氧仍不断下降,血管活性药物维持下血压仍偏低,出现心源性休克和急性呼吸窘迫综合征(ARDS),转入重症监护室行气管插管呼吸机辅助通气及抗病毒、抗感染、抗血小板、抗凝、对症支持等综合治疗,生命体征逐渐恢复正常,病人状态和相关辅助检查指标有所好转,双肺CT渗出较前吸收,最终病情稳定出院。其急性心衰引起的肺水肿和COVID-19的炎症渗出在肺部影像学上共存不易区分,在治疗过程中吸收较快,应与急性心衰的逐渐缓解和抗病毒治疗有关。出院后规律口服冠心病二级预防药物治疗,4个月后随诊有劳力性心前区不适,复查冠脉造影提示前降支血管闭塞,侧枝循环供血,由于管壁弥漫性狭窄细小伴钙化,支架难以通过,继续药物保守治疗。(2)例2老年男性,既往糖尿病、冠心病史未规律服药,此次以呼吸道感染症状起病,肺炎进行性加重,院内突发急性心肌梗死,立即行冠脉造影,提示右冠状动脉急性闭塞,冠脉三支病变,闭塞处可见血栓影,行血栓抽吸、球囊扩张及支架植入术,术后造影示血流部分恢复(TIMI2-3级)。患者感染症状一度好转,但突发急性心肌梗死导致各脏器急性缺血损伤,炎症反应爆发并多脏器功能损害,最终发生恶性心律失常,抢救无效,心跳呼吸骤停死亡。 结论:(1)COVID-19可能通过多种机制共同作用增加AMI的风险,包括免疫反应过度激活、血液高凝状态和氧供需失衡。(2)COVID-19合并AMI的患者起病形式多样。如果在非COVID-19流行高发期,新冠病毒检测不作为常规筛查时,COVID-19潜在发生但表现不典型的患者可能在后续出现的心肌梗死的急重病情掩盖下遗漏诊断,影响后续治疗。而对于已发现COVID-19的患者,尤其是伴随相关危险因素的,需要警惕急性心肌梗死的发生。(3)冠状动脉造影(CAG)对于冠状动脉粥样硬化病变和冠脉内血栓性质的识别有限。对于临床上发生COVID-19合并心肌梗死的案例,单凭其结果不足以推断病毒感染因素与原本基础病变因素在发病过程中的关系和所占比重,需要结合患者的临床特点具体分析,通过其他手段如血管内超声(IVUS)和光学相干断层成像(OCT)也可能有所帮助。(4)治疗策略上应综合考虑COVID-19的治疗和AMI的标准治疗给予适当的抗病毒治疗、抗血小板治疗、抗凝治疗、抗心肌缺血药物治疗和血运重建。同时注意监测凝血、炎症等相关指标,并注意药物的相互作用。(5)COVID-19合并AMI的患者可能存在远期心功能受损的风险,COVID-19对AMI患者长期预后的影响也需进一步研究。

关键词： 多发性硬化   严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型   新型冠状病毒感染   病程   疾病修饰治疗  

摘要： 目的: 2019年12月出现了新型冠状病毒感染(COVID-19 infection),其首先对一些地区产生了影响,然后迅速蔓延至全球,引起全球密切关注。由于良好的防疫政策中国人群新冠病毒的感染率较低。因此,关于中国多发性硬化(MS)患者感染严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型(SARS-Co V-2)的数据较为缺乏。本研究旨在探讨新冠病毒感染期间中国北方MS患者的表现以及新冠病毒感染对MS预后的影响。 方法: 本项研究的研究对象为截至2023年3月31日于中国北方相邻三省(吉林省、黑龙江省、辽宁省)居住且登记在册的诊断明确的MS患者,采用在线自填问卷方式对其进行调查。收集并整理研究对象的一般临床资料,MS病情基本资料,包括:用于控制MS复发的药物、服药时间、诊断时间,以及新冠病毒感染期间的资料,包括:接种新冠病毒感染疫苗的次数、本次疫情前MS病情是否稳定、是否感染新冠病毒、感染后的症状、感染后MS病情是否自觉加重、MS是否复发、自觉疾病加重的具体表现。采用SPSS25.0进行统计分析,分析新冠病毒感染以来中国北方地区MS人群新冠病毒感染的临床相关性及预后。 结果: 1.共纳入164名患者,平均年龄为38.9±12.2岁,其中82例(59.9%)病程不超过5年。46例(33.5%)接种了新冠疫苗。143例(87.2%)接受了疾病修正治疗(DMT),所有患者接受免疫治疗的平均持续时间为1.9±1.6年。 2.83.5%的患者感染过新冠病毒,14.6%的患者在感染后原有病情恶化,5.1%的患者MS复发。7例复发患者平均年龄(38.3±9.1)岁,女性5例(71.4%),特立氟胺5例(71.4%),治疗1年以上5例(71.4%),未接种疫苗4例(57.1%)。 3.单因素和多因素Logistic分析的结果显示:较短的MS病程与新冠病毒感染风险独立相关[病程≤5 vs>15,82(59.9%)vs 8(5.8%),P=0.046],而年龄增加与感染后行为表现加重相关(加重vs未加重,44.1±8.3 vs 31.2±9.7,P=0.008)。然而,性别、疫苗接种、DMT与新冠病毒易感风险或MS不良预后无关。 结论: 1.病程较短的MS患者感染新冠病毒的风险较病程长的患者高。较短的病程是感染新冠病毒风险上升的独立危险因素。 2.年龄越大的MS患者感染新冠病毒后更容易出现行为表现的加重。 3.在新冠病毒感染期间,接受免疫治疗和不同的DMT药物治疗似乎是安全的。然而,对于B细胞耗竭剂,需要谨慎对待。因此,应建议MS患者采取个人防护措施以降低暴露风险,并接受标准化治疗。

关键词： 传染病模型   疫苗接种   无症状感染者   媒体效应   时滞   稳定性分析   Hopf分支  

摘要： 研究传染病动力学模型时常常会忽视无症状感染者的疾病传播,相对于有症状感染者症状明显,无症状感染者的疾病传播更加隐蔽且难以防范,故无症状感染者的疾病传播会在一定程度上扩大疾病传播的规模,同时疫苗接种和媒体信息报道对预防和控制疾病有着不容忽视的作用,但是媒体信息的滞后性会在一定程度上加大群众被病毒感染的风险.因此本文借助传染病建模思想构建了两类具有无症状感染者的新冠肺炎模型,并研究了它们的动力学性态. 第一章,介绍了两类具有无症状感染者疾病传播的新冠肺炎模型研究背景、研究意义和研究现状,给出了本文的主要研究内容及所需的理论知识. 第二章,为了研究疫苗接种和无症状感染者疾病传播对疫情扩散的影响,基于新冠肺炎开放的实际背景,本章节建立并研究了一类具有疫苗接种和无症状感染者疾病传播的新冠肺炎动力学模型.首先,验证了模型解的正性和有界性.其次,计算了模型的无病平衡点和基本再生数0,并证明了当0>1时,模型存在唯一正的地方病平衡点,随后利用基本再生数证明了无病平衡点的局部稳定性.最后,通过La Salle不变集原理和构造Lyapunov函数依次证明无病平衡点和地方病平衡点的全局稳定性.根据本章节基本再生数的表达式和理论性证明可得:我们可以通过研发有针对性的高效疫苗、扩大疫苗接种覆盖率、减少人群大规模聚集、佩戴口罩等方式降低基本再生数0的大小,从而更好的预防和控制疫情的扩散. 第三章,为了研究媒体信息报道的滞后性和无症状感染者疾病传播对疫情扩散的影响,本章节建立并研究了一类具有媒体报道和无症状感染者的新冠肺炎动力学模型,并在模型中加入了媒体信息报道时滞.首先验证了模型解的正性和有界性.其次,计算了模型的无病平衡点和基本再生数0,并证明了当0>1时,模型存在唯一正的地方病平衡点,随后利用基本再生数和构造Lyapunov函数分别证明了无病平衡点的局部稳定性和全局稳定性.接着利用Routh-Hurwitz准则给出了=0时,地方病平衡点局部稳定性条件,并讨论了>0时,模型Hopf分支的存在性条件.最后通过数值模拟对模型的参数进行了敏感性分析.通过数值模拟发现:无症状感染者的接触感染系数越高,有症状感染者数量的上升速度越快且峰值越高;媒体信息的贯彻率与有症状感染者的数量成反比,并且媒体信息报道的时间延迟会在一定程度上扩大疫情爆发的规模,因此媒体应及时发布信息的同时保障信息的质量,群众在接受有效的媒体信息后,应从心理上重视疾病危害性并从行为上采取科学正确的方式去预防疾病. 第四章,总结了本文的主要工作,并简述下一步可能研究的方向.

关键词： 新型冠状病毒肺炎   新型冠状病毒   抗体   疫苗接种   自身免疫疾病  

摘要： 背景: 新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是由严重急性呼吸道综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)引起的一种传染病。自2019年底新冠爆发以来,该病已经在全球范围传播,对全球人类生活产生重大影响。因此,我们需要继续深入了解这种病毒,以便更好的控制和预防该病进一步流行、减少重症患者与各种并发症。 本文在统计大连地区疫情期间新冠病毒抗体数据有明显变化趋势基础上,选取部分新冠病毒抗体高反应和阴性患者检测其HLA与STR、抗核抗体、抗单纯疱疹1型IgG抗体及抗巨细胞IgG抗体,并对两组人群上述指标的差异进行相关性分析。旨在观察人群在接种疫苗的基础上首次感染新冠病毒后抗体生成的水平差异与STR和HLA的关联,及对自身抗体和其他病毒感染抗体生成的影响,试图寻找引起新冠病毒免疫应答差异的可能基因及其对机体免疫力的影响。 方法: 1.统计分析2022-2023年COVID-19大流行期间关键时间点的SARS-CoV-2抗体阳性率,观察在接种疫苗的基础上首次感染新冠病毒后新冠病毒抗体的生成的水平。 2.观察新冠病毒抗体高反应组(n=30)和阴性(n=30)组STR和HLA等位基因的多态性,并进行组间差异比较和相关性分析。 3.检测新冠病毒抗体高反应组和阴性两组患者的抗核抗体、抗单纯疱疹1型IgG抗体及抗巨细胞IgG抗体三种抗体血清含量并分析其差异。 结果: 1.新冠病毒感染流行3年间普通人群的新冠病毒抗体水平逐年增加,与2022年相比新冠病毒抗体水平显著增高(82.4%vs 46.6%),具有统计学意义。 2.新冠病毒抗体高反应组和阴性组STR与HLA检测结果显示,STR检测7个等位基因有显著性差异:D6S1043-20、D2S1338-24、Pen Ta D8-8、v WA-19、D8S1179-10、D8S1179-16、FGA-20,新冠病毒抗体产生水平可能跟这些基因有关联,其余183个等位基因无显著性差异;HLA检测51个等位基因均未见显著性差异。 3.新冠病毒抗体高反应组抗核抗体高等级程度病例显著多于阴性组(3级:70%vs 43.3%;4级:6.7%vs 0%)。巨细胞病毒IgG抗体和单纯疱疹病毒1型IgG两组间则无显著性差异。 结论: 1.新冠病毒抗体高反应主要来自自然感染,而非疫苗接种。 ***等位基因与抗体产生水平有关,遗传因素可能是影响新冠病毒抗体生成的原因,采用STR等位基因又可以用于评估个体新冠病毒抗体产生的遗传易感性。 3.新冠病毒感染后刺激自身免疫系统激活,具有一定关联性。新冠高反应激发ANA增高而CMV和HSV-1抗体不高,说明特异性激发ANA,引发病理免疫,有增加自身免疫病患病风险

关键词： 清肺排毒汤   新型冠状病毒感染   斑马鱼模型   抗炎   网络药理学  

摘要： 新型冠状病毒感染(COVID-19),是一种由新发现的冠状病毒—严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(SARS-COV-2)引发感染的急性传染性肺炎,新冠感染的主要风险之一是由严重炎症引起的细胞因子风暴。目前新型冠状病毒感染仍然存在高传染性和致病性,因此,有效治疗新型冠状病毒感染是全世界面临的重大健康难题。我国治疗新型冠状病毒感染的手段中,除疫苗和西药外,中药方剂发挥重大的作用。清肺排毒汤(Qingfei Paidu Decoction,QFPDD)是目前广泛应用于治疗新型冠状病毒感染的中药复方,临床效果良好,但其治疗新型冠状病毒感染的机制尚不明确。为解决上述问题,本研究通过构建斑马鱼动物模型评价清肺排毒汤治疗新型冠状病毒感染,通过超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-ESI-MS/MS)检测其主要活性成分,并对主要活性成分进行网络药理学分析和分子对接,最后从分子机制的层面,阐明清肺排毒汤治疗新型冠状病毒感染的潜在机理。具体结果如下: 1)为研究清肺排毒汤的体内抗炎作用,采用斑马鱼尾鳍损伤试验构建斑马鱼炎症模型。在清肺排毒汤处理后,尾鳍切断处中性粒细胞和巨噬细胞的数量显著减少,并且细胞数量的减少与清肺排毒汤的浓度呈正相关。在浓度100μg/mL时,清肺排毒汤对中性粒细胞和巨噬细胞迁移的抑制作用最强,损伤部位的中性粒细胞和巨噬细胞数量减少40%左右,与阳性对照药物吲哚美辛的抑制作用相同。表明清肺排毒汤能够抑制断尾导致的斑马鱼体内炎症。 2)通过斑马鱼新型冠状病毒感染模型,评估清肺排毒汤的抗炎效果。在10-100μg/mL的浓度范围内,清肺排毒汤处理后能显著抑制注射部位——后脑处中性粒细胞和巨噬细胞的增加,在清肺排毒汤浓度在100μg/mL时,注射6小时和12小时后统计细胞数量,中性粒细胞和巨噬细胞的抑制率都能达到50%以上。并且在头部和全身细胞数量也显著下降。这些结果表明,清肺排毒汤能够抑制斑马鱼注射S1γ引起的局部和系统性炎症。 3)通过UPLC-ESI-MS/MS法检测清肺排毒汤水提物的化合物成分,得到活性成分975个,其中,主要成分288个,与其他方法相比得到的成分增加30%,与数据库检索药物成分相比更加精确。 4)在斑马鱼体内发现清肺排毒汤抑制注射S1γ引发的炎症的表型,通过网络药理学分析获得清肺排毒汤治疗新型冠状病毒感染的潜在核心靶点为IL-6、TNF、STAT3、IFNG、TP53、IL-1β、AKT1、RELA、IL-10、ESR1、CXCL8、IL-4。利用Auto Dock软件对清肺排毒汤的主要成分与核心靶点进行分子对接,得到核心成分与核心靶点的结合能力良好。 5)通过qRT-PCR分析在斑马鱼注射S1γ后药物处理12 hpi时头部和全身核心基因的表达情况。注射S1后,与正常对照组相比,转录水平显著提升,且清肺排毒汤处理后转录水平随浓度呈显著下降趋势的基因,为清肺排毒汤治疗新型冠状病毒感染的核心靶点,包括:IL-6、TNF-α、IFNG、IL-1β、RELA、CXCL8。并得出清肺排毒汤可能通过JAK/STAT信号通路的调节以及抑制TNF信号通路信号传导下游分子NF-κB的激活,调节细胞炎症以及对感染的免疫应答,调控斑马鱼体内的炎症水平,发挥抗炎效应来治疗新型冠状病毒感染。 综上所述,通过斑马鱼模型验证清肺排毒汤能够通过抑制炎症来治疗新型冠状病毒感染,通过UPLC-ESI-MS/MS法得到清肺排毒汤的活性成分,并通过网络药理学得到清肺排毒汤治疗新型冠状病毒感染的核心靶点及通路,探究潜在作用机理。本研究的结果为清肺排毒汤的临床应用提供重要的实验证据与科学依据。