摘要： 与新型冠状病毒(新冠病毒)感染相关的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)与高病死率和较长的机械通气时间相关。近期法国学者进行了一项多中心、开放标签、平行组、随机试验, 旨在评估超低潮气量(ULTV)通气与低潮气量(LTV)通气对新冠病毒感染相关ARDS患者的有效性。研究在法国的10个重症监护病房(ICU)中进行, 包括18岁或以上的患者, 诊断为新冠病毒感染并需要有创机械通气, 诊断依据柏林定义的ARDS, 即氧合指数(PaO2/FiO2)在150 mmHg(1 mmHg≈0.133 kPa)或以下, 潮气量(VT)依据6.0 mL/kg预计体质量, 并接受持续静脉镇静治疗。将患者按1 : 1比例随机分配至接受目标VT为4.0 mL/kg预计体质量的ULTV组(干预组)和目标VT为6.0 mL/kg预计体质量的LTV组(对照组)。主要终点为90 d全因病死率和第60天存活患者无呼吸机天数。结果显示, 该研究共纳入215例患者, 其中27%为女性, 73%为男性;中位年龄68(60, 74)岁;106例患者被分配至ULTV组, 109例被分配至LTV组。ULTV组与LTV组的主要研究结局差异无统计学意义。至第90天, ULTV组105例患者中有46例(44%)死亡, LTV组109例患者中有43例(39%)死亡〔绝对差异(AD)=4%, 95%可信区间(95%CI)为-9%～18%, P=0.52〕。ULTV组前28 d严重呼吸性酸中毒的发生率高于LTV组〔33%(35例)比13%(14例);AD=20%, 95%CI为9%～31%, P=0.000?4〕。研究人员据此得出结论:在中度至重度新冠病毒感染相关ARDS患者中, 基于全因病死率和第60天存活患者无呼吸机天数的综合评估, ULTV与LTV通气策略无明显差异。上述结果不支持在新冠病毒感染相关ARDS患者中常规使用ULTV。

关键词： 新型冠状病毒感染   发热门诊   社区获得性肺炎   病原谱  

摘要： 目的 探讨新型冠状病毒感染疫情前后成人社区获得性肺炎(CAP)患者的病原体分布特点，为CAP诊疗及防控提供理论依据。方法 纳入2017年6月至2022年7月就诊于北京大学第三医院发热门诊的CAP患者，按照时间节点(2020-01-24北京进入新型冠状病毒一级防控)分为疫情前组和疫情后组。用实时荧光定量聚合酶链反应检测方法对采集的呼吸道样本进行病原体核酸检测，对病原体的检出情况及分布情况进行分析。结果 纳入415例CAP患者，分为疫情前组(312例)和疫情后组(103例)。肺炎支原体、肺炎链球菌、甲型流感病毒是疫情前CAP组患者最常见的3种病原体。而乙型流感病毒、肺炎克雷伯菌、肺炎链球菌是疫情后社区获得性肺炎中最常见的3种病原体。甲型流感病毒、副流感病毒、肺炎支原体在疫情前的发生率均显著高于疫情后，2组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 疫情前后，流感病毒均为CAP患者主要致病菌，对今后经验性的治疗，保护易感人群和防控传染病具有重要意义。

关键词： 慢性阻塞性肺疾病   呼出气冷凝液   微生物   代谢物   慢性阻塞性肺疾病   呼出气冷凝液   新型冠状病毒   微生物  

摘要： 第一部分 呼出气冷凝液微生物和代谢物与COPD演进的关系及临床预测价值 目的:微生物及代谢物与慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)的发生发展密切相关,但是研究仍然有限。本研究拟通过表征健康对照和COPD患者呼出气冷凝液(exhaledbreath condensate,EBC)中的微生物、代谢物和临床数据,来探索EBC微生物及代谢物与COPD演进的关系及临床预测价值。 方法:这项前瞻性、多中心研究纳入2022年4月至2022年11月在武汉协和医院车谷院区和汉口院区门诊就诊以及在社区健康服务中心就诊的健康对照和新诊断的轻度和中度COPD患者,收集他们的人口统计学信息、临床数据和EBC标本。通过定量分析所有受试者的肺部计算机断层扫描数据,并描述EBC微生物和代谢物特征。最后经过统计分析探讨EBC微生物和代谢物与COPD演进的关系及临床预测价值。 结果:本研究最终纳入40名健康对照、20名新诊断的轻度和15名新诊断的中度COPD患者。与健康对照相比,轻度和中度COPD患者中吸烟者的比例均明显升高。此外,中度COPD患者的年龄更大,男性患者的比例也更高(P值均<0.05)。其余指标包括身体质量指数和合并症在各组之间均无统计学差异(P值均>0.05)。随着疾病进展,几乎所有肺功能参数包括FEV1占预计值百分比、FEV1/FVC、MEF50占预计值百分比、MEF25占预计值百分比和MMEF75/25占预计值百分比均逐渐降低(P值均<0.05);在肺结构指标方面,肺气肿占比和气道壁厚度(airway wall thickness,AWT)逐渐升高(P值均<0.05)。相关性分析的结果显示,多个肺功能参数与肺结构指标均显著相关。此外,基于调整年龄、性别和吸烟史的基础上,与健康对照相比,轻度和中度COPD患者中分别有32和23个差异微生物(P值均<0.05),其中4个差异微生物是共有的,包括粪肠球菌(Enterococcus＿faecium)、青枯雷尔氏菌(Ralstonia＿solanacearum)、Pseudomonas＿sp＿PE＿S1G1＿和Alphaproteobacteria＿bacterium＿ADurb＿BinA305。相关性分析结果显示,以上差异微生物与多个肺功能和肺结构指标均显著相关。同样地,在调整年龄、性别和吸烟史的基础上,与健康对照相比,轻度和中度COPD患者中分别有27和56个差异代谢物,其中11个差异代谢物是共有的,包括磷脂酰乙醇胺＿PE(O-20:1＿20:1)、磷脂酰乙醇胺＿PE(O-20:0＿22:4)、磷脂酰乙醇胺＿PE(18:0＿22:1)、磷脂酰乙醇胺＿PE(O-18:2＿24:1)、磷脂酰乙醇胺＿PE(22:1＿18:0)、磷脂酸＿PA(20:0＿21:0)、磷脂酸＿PA(21:0＿24:1)、泛酸、鞘氨醇＿SPH(d18:2)、2-萘磺酸和N-(3-羟丙基)邻苯二甲酰亚胺。相关性分析结果也显示,以上差异代谢物与多个肺功能和肺结构指标均显著相关。进一步的综合网络分析发现,多个微生物、代谢物和临床数据(肺功能和肺结构指标)之间构成复杂且较多的显著相关性关系。其中假单胞菌属的部分成员(尤其是Pseudomonassp PES1G＿1)和甘油磷脂的部分成员(尤其是磷脂酰乙醇胺＿PE(O-20:1＿20:1))可能在COPD演进中具有重要作用。最后,建模结果显示,包括磷脂酰乙醇胺＿PE(O-20:1＿20:1)、磷脂酰丝氨酸＿PS(21:0＿24:1)、糖鞘脂＿HexCer(t14:1/17:0(2OH))、泛酸、3-氨基-2-甲萘甲酸和Pseudomonas＿sp＿PE＿S1G＿1在内的无创性通用模型能有效识别健康对照和不同肺功能分级的COPD患者,内部验证结果显示该模型在健康对照和轻至中度COPD患者,健康对照和轻度COPD患者,以及健康对照和中度COPD患者中的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别达到0.98、0.96和0.98;包括磷脂酰乙醇胺＿PE(O-20:1＿20:1)、磷脂酰丝氨酸＿PS(21:0＿24:1)、4-羟基色胺、蔗糖6'-单磷酸、反式-3-羟基可替宁、粪肠球菌(Enterococcus＿faecium)、Prevotella herbatica、Pseudomonas lactis、Pseudomonas＿entomophila和Pseudomonas＿PE＿S1G＿1在内的通用模型(内部验证)在识别低肺气肿组和中至高肺气肿组、低肺气肿组和中肺气肿组以及低肺气肿组和高肺气肿组中的AUC分别达到0.85、0.81和0.83;而包含磷脂酰乙醇胺＿PE(O-20:1＿20:1)、磷脂酰

关键词： 新型冠状病毒   S蛋白   N-糖苷酶   靶向去糖基化编辑   膜融合   病毒侵染  

摘要： 新型冠状病毒（SARS-Co V-2）是导致新型冠状病毒肺炎（COVID-19）的病原体,新型冠状病毒感染宿主细胞主要由病毒表面的刺突蛋白（Spike,S蛋白）介导,由于其外观上类似王冠也被称为冠状蛋白。S蛋白是高度糖基化的病毒膜蛋白,新冠病毒通过S蛋白识别并结合宿主细胞表面的ACE2受体（血管紧张素转化酶2）将病毒的遗传物质注入到宿主细胞内,此外新冠病毒还依靠S蛋白表面的糖基化修饰躲避机体免疫系统的追击,造成“免疫逃逸”。 肽N-糖苷酶（PNGase）也被称作肽-N-天冬酰胺酶,是可以从糖蛋白中完整切割N-糖链的一类酰胺酶,主要参与蛋白质的内质网降解过程,可以识别错误折叠蛋白质并对其进行去糖基化修饰,随后介导蛋白质的降解。酿酒酵母来源的肽N-糖苷酶（PNG1）是由363个氨基酸组成的去糖基化酶,PNG1结构中存在一个Rad23p结合结构域,由4个α-螺旋（H1、H2、H3、H4）组成,已有研究表明分别删除这4个α-螺旋后所表达的蛋白中,只有PNG1ΔH1提高了其对变性糖蛋白的酶活性,并且出乎意料地,对天然正确折叠的糖蛋白也表现出高度的去糖基化活性。 论文的主要研究内容及结果如下: （1）在PNG1的N-末端分别连接两个已经经过验证的对S蛋白受体结合结构域（Receptor-binding Domain,RBD）具有高亲和力的靶向肽“LCB1”和“23mer-A2N”,中间通过刚性连接子和柔性连接子进行连接。通过前期筛选,获得3个具有去糖基化活性的靶向编辑器,命名为:LCB1-GGGGS-Sc PNG1ΔH1;LCB1-（EAAAK）2-Sc PNG1ΔH1;23mer-A2N-Sc PNG1ΔH1。 （2）对构建好的编辑器进行去糖基化编辑效果验证发现。在表达S1蛋白和表达全长S蛋白的两种细胞系中,靶向编辑器都表现出了明显的去糖基化效果,尤其是融合了LCB1靶向肽和柔性连接子的靶向嵌合体LCB1-GGGGS-Sc PNG1ΔH1去糖基化效果最显著,说明LCB1靶向效果优于23mer-A2N,并且五个氨基酸残基的GGGGS柔性连接子起到了很好的连接作用,使得靶向编辑器即使对于结构更加复杂的全长S蛋白仍具有较为明显的去糖基化效果。在膜融合以及病毒侵染实验中,LCB1-GGGGS-Sc PNG1ΔH1使病毒的膜融合能力降低50%左右并且使假病毒的侵染能力降低70%左右,在蛋白质的稳定性分析中,转入靶向编辑器LCB1-GGGGS-Sc PNG1ΔH1后S蛋白的半衰期明显缩短,说明去糖基化编辑造成S蛋白不稳定,加速了其降解过程,并且验证了去糖基化形式的S蛋白主要通过蛋白酶体途径降解。 综上所述,本文成功构建了靶向新型冠状病毒S蛋白的去糖基化编辑器,并且对新型冠状病毒的膜融合和侵染都表现出了显著的抑制效果。

关键词： 新型冠状病毒   野生株   德尔塔株   奥密克戎株   临床特征   新型冠状病毒   奥密克戎   周期阈值   达标时间  

摘要： 第一部分不同新冠病毒株亚型的临床特征分析 目的:分析新型冠状病毒野生株、德尔塔株(Delta)株和奥密克戎(Omicron)株感染者的临床特征。 方法:本研究采用回顾性研究方法,共纳入228名患者,其中48例野生株感染者及91例Delta感染者分别来源于2020年1月11至2020年1月28日及2021年5月19日至2021年7月9日的深圳市第三人民医院住院患者,89例Omicron感染者临床信息来源于2022年4月23日至2022年10月11日在江门市中心医院住院的患者,收集相关人口统计学数据及临床检验结果进行统计分析。 结果:不同病毒株亚型感染者在性别及糖尿病上无统计学差异(P>0.05)。在临床症状上,上呼吸道感染症状在三组患者中均有表现,但野生株感染者在入院时更容易出现发热(P<0.001),而Omicron株感染者更容易出现咽部不适症状(P<0.001)。在基础疾病上,高血压在Omicron感染者中更为少见。野生株感染者年龄大于Delta株及Omicron株感染者(61.5岁vs 41岁vs 38岁,P均<0.001),且重症的比例明显高于变异株感染者(41.7%vs 2.2%,41.7%vs 0%,P均<0.001)。对比Delta株和Omicron株感染者,野生株感染者更容易引起白细胞、淋巴细胞计数、红细胞计数、血红蛋白、血小板降低(均P<0.05),D-二聚体升高(均P<0.05)。与Delta株感染者相比,野生株感染者发生低白蛋白比例更高,出现丙氨酸氨基转移酶异常比例更低,且T淋巴细胞及杀伤性T淋巴细胞水平更低。与Delta株感染者相比,Omicron感染者白细胞计数、中性粒细胞计数及中性粒细胞淋巴细胞比值更低,差异有统计学意义。 结论:与原始株相比,Delta株及Omicron变异株感染群体可能趋向年轻化,重症率降低。野生株感染者更易导致白细胞、淋巴细胞、红细胞、血红蛋白、血小板、T淋巴细胞和杀伤性T淋巴细胞计数降低,D-二聚体升高;Omicron感染者天冬氨酸氨基转移酶出现异常比例最低。 第二部分周期阈值在奥密克戎感染者中的临床意义及应用价值 目的:探讨未进行抗病毒治疗的新型冠状病毒奥密克戎(Omicron)变异株感染患者在病程中首次及最低周期阈值与性别、年龄、基础疾病、临床症状、疫苗接种及达标时间之间的关系,同时评估Ct值在临床中的应用价值。 方法:采用回顾性研究方法,收集2022年4月3日至2022年11月27日于江门市中心医院住院的551名Omicron感染者的临床资料,评估未进行抗病毒治疗的Omicron感染者周期阈值的临床特征及应用价值。 结果:男性患者中位Ct值均低于女性患者,有临床症状患者首次Ct值及最低ORF1ab基因Ct值中位数、最低N基因Ct值平均数均低于无临床症状患者。与无基础疾病患者相比,有基础疾病患者在首次及最低ORF1ab基因及N基因Ct值更低。18-59岁人群患者中位Ct值较其他年龄组更高。与其他组对比,完全接种及加强针接种组中位Ct值更高。Omicron感染者达标时间与性别、基础疾病及疫苗接种情况上无显著的统计学差异(P均>0.05)。与18-59岁感染者相比,年龄小于18岁的感染者核酸达标时间明显延长,差异具有统计学意义(P<0.05);有症状感染者与无症状感染者相比,核酸达标时间延长(P=0.031);Ct值<25的感染者核酸达标时间延长(P均<0.001)。Spearman相关分析结果显示,核酸达标时间与Ct值存在负相关关系。Cox回归分析发现最低Ct值分组≥25、年龄组为18-59岁、未治疗的患者28天核酸达标情况分别是最低Ct值分组<25、年龄<18岁、接受对症治疗患者的1.575倍(95%CI:1.290-1.923)、1.565倍(95%CI:1.092-2.245)及0.751倍(95%CI:0.575-0.982)。 结论:在本研究中,男性、有临床症状、有基础疾病患者中位及平均Ct值更低,提示该部分病人病毒拷贝数更高;18-59岁、完全接种疫苗及加强针接种患者中位Ct值更高,提示该部分病人病毒拷贝数更低;Ct值与核酸达标时间呈反比;临床症状、年龄、Ct值分组及治疗情况对核酸达标时间有显著影响;在Ct值中,仅最低Ct值分组可作为28天核酸达标情况的预测指标,对评估疾病进程具有重要意义,但还受年龄的影响。

关键词： 新型冠状病毒灭活疫苗   步行时间   抗体   孕妇  

摘要： 目的 探索孕妇步行时间与维持新型冠状病毒灭活疫苗抗体水平之间的关系，为新型冠状病毒肺炎疫情常态化管理期间预防孕妇感染，促进母婴健康提供参考依据。方法 在广东省内一项多中心横断面研究纳入854名接种新型冠状病毒灭活疫苗的孕妇，调查孕妇的人口学特征和身体活动情况，并检测其血清中新型冠状病毒抗体水平。运用多因素logistic回归模型对孕妇步行时间和新型冠状病毒抗体阳性率进行关联性分析。结果 血清新型冠状病毒中和抗体、IgG和IgM阳性率分别为44.6%、46.1%、3.4%。不同步行时间孕妇的新型冠状病毒中和抗体阳转率存在差异(P<0.05),这种差异在IgG、IgM抗体水平未显现(P>0.05)。相较于步行时间>30 min/d的孕妇，步行15～30 min/d的孕妇NAb阳转率更高(OR=1.56,95%CI:1.09～2.23)。结论 孕妇步行时间与维持新型冠状病毒疫苗抗体水平存在关联，步行时间15～30 min/d孕妇抗体水平更高，孕妇步行运动对免疫系统有益处，建议孕妇每日进行适量运动，以保持良好的健康状况。