关键词： 肾移植   淋巴细胞亚群   新型冠状病毒   肺部感染  

摘要： 【目的】 研究淋巴细胞亚群水平与肾移植术后新型冠状病毒感染严重程度的相关性,探讨淋巴细胞亚群在肾移植术后新型冠状病毒感染的诊断与治疗中的应用价值。 【方法】 本研究选择2022年10月至2023年6月期间于南华大学附属第二医院肾移植科就诊的80例感染新型冠状病毒的肾移植术后患者行前瞻性分析。根据新型冠状病毒感染诊疗方案（试行第十版）将研究对象分为轻型、中型、重型和危重型四组。通过流式细胞技术测定患者淋巴细胞亚群,并收集血红蛋白浓度、白细胞计数、血小板计数、中性粒细胞数、淋巴细胞数、NLR、CRP、PCT、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、胆红素、血清白蛋白、D-二聚体、肺部CT等结果及一般临床病历资料。四组新冠病毒感染组间的淋巴细胞亚群及相关资料使用方差分析、非参数Kruskal-Wallis检验、卡方检验进行分析,各组间总体分布有统计学差异者进一步行两两组间比较,相关分析采用Spearman相关系数,使用多元Logisitic回归分析肾移植受者新冠病毒感染的独立危险因素。以P值<0.05为差异具有统计学意义。以上数据均利用统计软件SPSS 26.0进行统计学分析。 【结果】 1.轻型、中型、重型、危重型四组受者的年龄、是否合并慢性呼吸系统疾病、肺部CT病变范围等变量差异具有统计学意义;在性别、有无接种新冠疫苗、是否罹患高血压病、糖尿病、冠心病等方面差异无统计学意义。 2.轻型、中型、重型、危重型四组受者在CRP、PCT、血红蛋白、血小板计数、淋巴细胞数、NLR、血清白蛋白、血肌酐等变量方面存在统计学差异;在白细胞计数、中性粒细胞数、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、直接胆红素、间接胆红素等方面未见统计学差异。 3.轻型、中型、重型、危重型四组受者的NK细胞、B淋巴细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD3+T细胞和CD45+淋巴细胞绝对计数及CD4+T/CD8+T分布具有统计学差异。经Spearman相关分析,四组受者的NK细胞数目（r=-0.648,P<0.001）、B淋巴细胞数目（r=-0.624,P<0.001）、CD3+T细胞数目（r=-0.738,P<0.001）、CD4+T细胞数目（r=-0.781,P<0.001）、CD8+T细胞数目（r=-0.631,P<0.001）、CD45+淋巴细胞数目（r=-0.758,P<0.001）及CD4+T/CD8+T（r=-0.672,P<0.001）与新冠病毒感染严重程度均呈现负相关。 4.多因素Logistic回归分析轻型、中型、重型、危重型四组受者与NK细胞、B淋巴细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞等自变量,发现低水平的CD4+T细胞为新冠病毒感染的独立危险因素。 【结论】 1.肾移植术后新型冠状病毒感染严重程度与淋巴细胞亚群水平密切相关,NK细胞、B淋巴细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD3+T细胞和CD45+淋巴细胞绝对计数及CD4+T/CD8+T比值越低,感染程度越重。 2.淋巴细胞亚群对肾移植术后新冠病毒感染有着较好的预测价值;低水平的CD4+T细胞是肾移植受者新冠病毒感染的独立危险因素,CD4+T细胞是预测新冠病毒感染效果最佳的指标;提示当淋巴细胞亚群水平降低尤其是CD4+T细胞降低,且合并新冠病毒感染时,应积极进行抗病毒治疗以预防感染加重。

关键词： 新型冠状病毒感染   稳定性   时滞   Hopf分支   规范型  

摘要： 自2019年12月中国武汉出现新型冠状病毒以来,新型冠状病毒感染逐渐蔓延至全球,引发严重的公共卫生安全问题,并对世界各国造成严重影响。数学模型的建立与分析在理解与控制传染病传播方面至关重要,研究人员与卫生专家通过对流行病模型的动力学性质分析,模拟与预测传染病在不同人群之间的传播规律,并制定有效的控制措施。因此,研究新型冠状病毒感染传染病模型的动力学性质对于预防疾病大流行具有重要意义。 首先,基于SEIR传染病模型建立了一类含时滞和双线性发生率的新型冠状病毒感染模型。选择感染病毒到病发的时间延迟作为参数,分析平衡点的存在性与稳定性,运用分支理论判定出现Hopf分支的条件。最后通过MATLAB数值模拟验证理论分析的正确性。研究结果表明:由于新型冠状病毒感染病发的延迟性使其在人群中难以识别,因此无症状感染者相较于有症状感染者对于公众更具潜在传播风险。 然后,基于SEIQR传染病模型建立了一类含时滞和饱和发生率的新型冠状病毒感染模型。选择感染病毒到病发的时间延迟作为参数,分析基本再生数与平衡点存在性和稳定性的关系,用多尺度方法推导出系统约化在中心流形上的Hopf分支规范型,数值模拟验证理论分析的正确性。研究结果表明:由于新型冠状病毒具有潜伏期的特性,在流行阶段会感染健康人群,建议加强早期的监测和预警。

关键词： 新型冠状病毒肺炎   抗纤维化药物   胸部CT严重程度评分  

摘要： 目前新型冠状病毒肺炎（coronavirus disease 2019,COVID-19）大流行已经结束,现有研究对COVID-19患者的长期随访表明,当患者感染严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2）后,一部分患者的肺部病变可以恢复,仍有一部分患者出现不同程度的炎症后纤维化。对于患有重症肺炎的患者,病毒引发的炎症导致肺部组织结构和功能受损,发生肺纤维化的情况可能更加明显。肺纤维化是一种不可逆的肺部疾病,主要特征为成纤维细胞增殖和细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的过度积累,进而引起肺功能受损,患者表现为咳嗽、呼吸困难、喘息等症状。在一些COVID-19患者中,即使病毒被清除后,患者仍然存在肺部组织纤维化的可能,为COVID-19痊愈后遗留的后遗症之一。对于新型冠状病毒肺炎后肺纤维化（post COVID-19 pulmonary fibrosis,PCPF）,能否借鉴现有的肺纤维化治疗经验呢?研究表明,一些抗纤维化药物在治疗PCPF方面显示出一定的疗效,如吡非尼酮、尼达尼布和乙酰半胱氨酸,目前关于这些药物的使用和安全性仍在进一步研究中,本研究初步探索了抗纤维化药物在PCPF的治疗中是否发挥一定的作用,为疾病的临床用药和治疗方案提供参考和方向。 目的: 研究抗纤维化药物对PCPF是否具有积极修复作用,探索抗纤维化药物在治疗过程中出现的相关不良反应,为COVID-19相关肺部疾病的治疗提供新的思路和方法。 方法: 该研究是一项回顾性研究。收集2022年12月1日至2023年12月1日在吉林大学第一医院呼吸与危重症医学科诊断为COVID-19的患者,按照纳入和排除标准筛选出应用抗纤维化药物的用药组和未应用抗纤维化药物的对照组患者。收集患者的临床资料,包括性别、年龄、首发症状、治疗药物、吸烟史、饮酒史、合并症、白细胞计数、血红蛋白、血小板、肝功、肌酐、C反应蛋白、改良版英国医学研究委员会呼吸困难问卷（Modified Medical Research Council,m MRC）、高分辨电子计算机断层扫描（high resolution computed tomography,HRCT）等。分析应用抗纤维化药物（吡非尼酮或尼达尼布）的用药组和未应用抗纤维化药物的对照组的临床特征差异,观察两组治疗1个月后的疗效差异,此外,根据《新型冠状病毒感染诊疗方案（试行第十版）》[1],将两组患者分为轻症组、重症组,分别比较用药组及对照组轻症、重症患者治疗1个月后的疗效差异,同时对出院后第2个月继续应用抗纤维化药物（吡非尼酮或尼达尼布）的用药组和未应用抗纤维化药物的对照组进行随访,比较两组治疗1个月和治疗2个月的疗效差异。主要疗效观察指标为胸部电子计算机断层扫描严重程度评分（chest computed tomography severity score,CT-SS）;次要疗效观察指标:m MRC分级。同时, 我们进一步探索了抗纤维化药物的安全性。结果: 1.随访至出院后第1个月的用药组患者和对照组患者均为46例,经抗纤维化治疗1个月后,用药组患者的m MRC分级前后差值、CT-SS前后差值均大于对照组患者,两组患者m MRC分级前后差值相比,差异有统计学意义（P<0.05）,两组患者的CT-SS前后差值相比,差异有统计学意义（P<0.05）,用药组的腹泻、食欲不振发生率高于对照组,两组患者不良事件发生率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。 2.用药组患者和对照组患者各分为轻症组、重症组,用药组重症患者为32例,对照组重症患者为17例,经抗纤维化治疗1个月后,两组重症患者的m MRC分级前后差值相比,差异无统计学意义（P>0.05）,用药组重症患者的CT-SS前后差值大于对照组重症患者,两组患者CT-SS前后差值比较,差异有统计学意义（P<0.05）。 3.用药组轻症患者为14例,对照组轻症患者为29例,经抗纤维化治疗1个月后,两组轻症患者的m MRC分级前后差值相比,差异无统计学意义（P>0.05）,用药组轻症患者的CT-SS前后差值大于对照组轻症患者,两组患者CT-SS前后差值比较,差异有统计学意义（P<0.05）。 4.随访至出院后第2个月的用药组患者为18例,对照组患者为12例,经抗纤维化治疗2个月后,与抗纤维化治疗1个月相比,两组患者m MRC分级前后差值相比,差异无统计学意义（P>0.05）。用药组患者的CT-SS前后差值大于对照组患者,两组患者CT-SS前后差值比较,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论: 1.经抗纤维化药物（包括吡非尼酮及尼达尼布）治疗后,PCPF

关键词： 气溶胶   一体化快速检测   新型冠状病毒  

摘要： 新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的传播给世界各国带来前所未有的挑战,也让更多人认识到大流行病带来的危害。对于这种传播速度极快、症状相似的病毒更需要有效且高特异性识别病毒的检测手段。常见的检测方法需要较高的实验室要求,并且实验操作繁杂不能应用于即时检测中。 针对上述问题,本研究中以SARS-CoV-2气溶胶为例,构建了一套新型检测体系,检测过程由采样和检测两步构成。主要研究内容包括: (1)根据SARS-CoV-2的保守序列设计合成阳性标准品,测试实时荧光聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q PCR)引物和探针。使用Primer Explorer V5设计可用于实时荧光环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)引物并进行筛选。再通过筛选单酶获得LAMP体系,对体系中的组分进行优化。与商用试剂盒进行对比,最终建立了基于实时荧光LAMP扩增检测SARS-CoV-2的试剂盒,检测限为10～0copies/μL该试剂盒对SARS-CoV-2有较强的特异性,较高的灵敏度,能在50分钟内检测出阳性模拟样本。 (2)使用一台基于卡盒的一体化检测仪器,采用磁珠法提取和LAMP体系结合的方式进行检测。提取部分涉及磁珠选择、裂解和洗脱过程,用q PCR体系扩增提取后的每个组分,分别比较得到的荧光阈值筛选磁珠粒径,对提取温度和时间进行优化,最终得到了最佳的提取体系。多次与商用荧光定量扩增仪进行对比,检测限都为10～0 copies/μL。从扩增曲线图中显示该仪器在60分钟内可以完成提取得出结果。证明该仪器整体均一性较好,重复性结果接近。 (3)搭载一个密闭且透明的采样现场,对SARS-CoV-2气溶胶进行封闭环境的模拟被动呼吸,同时使用气旋式采样器采集病毒气溶胶,将原液和采样液进行一体化系统的检测,与数字PCR(digital polymerase chain reaction,d PCR)、q PCR、和LAMP三种常规检测方式对比,可以看出采样后一体化系统、LAMP和d PCR扩增采样液的检测限是一致的为10～1 copies/μL,比q PCR采样液检测限低了两个数量级。因此这套新型检测体系能够在保证检测准确性和灵敏度的前提下,对微量的气溶胶样本实现快速、低要求的检测。 综上,本研究所构建的一套新型检测病毒气溶胶体系可以用于微量样本进行痕量检测,并且可以作为大流行呼吸道疾病预警的手段,可以应用于快速检测的现场或者资源贫瘠的地区,为生命安全提供保障。

关键词： 新型冠状病毒疫苗   记忆B细胞   诺曼图   灭活疫苗   免疫原性  

摘要： 目的:这项研究的目的是评价新冠肺炎灭活疫苗在胃肠道癌患者中的安全性和免疫原性。此外,还研究了记忆B细胞(MBCs)在新冠肺炎疫苗体液反应中的作用; 方法:在这项前瞻性观察研究中,我们收集了胃肠道肿瘤患者和接种了2剂新冠肺炎灭活疫苗的健康人。前瞻性的收集了不良反应、血清抗受体结合域(RBD)-Ig G、中和抗体(NAbs)和MBCs频率的数据; 结果:新冠肺炎灭活疫苗的安全性,耐受性是良好的。肿瘤患者血清抗-RBD-Ig G和NAbs水平较低。高龄、高ASA评分和接受积极化疗是低抗体滴度的危险因素。在随访期间,患者血清抗体滴度逐渐下降,但在接种加强疫苗后,血清抗体滴度上升。这项研究提供了两个诺模图,每个诺模图代表新冠肺炎疫苗的一种抗体,可以预测胃肠道癌症患者的血清学反应; 结论:胃肠道肿瘤患者对新冠肺炎灭活疫苗耐受性良好,但免疫原性较低。肿瘤患者的B细胞亚群紊乱,应该优先考虑接种加强疫苗。

关键词： 新型冠状病毒   XBB.1.16   刺突蛋白   病毒学特征   线粒体病理学特征  

摘要： 新型冠状病毒(SARS-CoV-2)Omicron变异株XBB.1.16出现并流行,在全世界范围内迅速引起了广泛关注。以往研究报道,新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染后会损伤宿主细胞线粒体,进而影响细胞抗病毒感染的反应。本研究比较了XBB.1.16与Omicron亚系BA.1和BA.2在感染性和致病性方面的差异,并评估了它们对宿主线粒体的影响。与BA.1和BA.2相比,XBB.1.16显示出更有效的S蛋白切割,更强的介导合胞体形成能力,更弱的宿主线粒体损伤能力,以及更低的致病性。综上所述,本研究表明,基于关键位点的突变,XBB.1.16变异株的感染性增强但致病性减弱。这为进一步开展XBB.1.16关键突变位点生物学功能的研究奠定了基础。 研究目的: 自SARS-CoV-2出现并引起流行以来,随着其新的突变株不断出现,累积变异不断增加,SARS-CoV-2的致病性和感染性改变总体符合病毒进化的规律,即新的变异株致病性、重症率和致死率不断下降,感染性、传播性不断增强。进入后疫情时代,新的变异株仍然对人们存在健康威胁,对公共卫生造成不小挑战。在SARS-CoV-2感染宿主的过程中,线粒体发挥了重要作用。在病毒不断变异这一形势下,研究新变异株的病毒学特征和线粒体病理学特征具有重要意义。本研究的主要目的是研究XBB.1.16变异株在体内体外的感染情况以及相应的线粒体病理学特征,进一步解析新变异株的病毒学特征,以帮助科研人员和医务工作者应对潜在的卫生健康威胁。 研究方法: 本文深入研究了XBB.1.16刺突蛋白的病毒学特征,并将其亲本SARS-CoV-2、BA.1变异株和BA.2变异株的刺突蛋白进行了比较。本文研究了刺突蛋白在体外感染宿主细胞、启动膜融合和造成线粒体损伤的能力。此外,本研究还揭示了XBB.1.16刺突蛋白在体内的致病性。 1.利用线上数据库,筛选感兴趣的变异株,通过文献调研对比感兴趣的突变位点。根据GISAID数据库数据,分析出现频率最高的变异株,增长率最快的变异株,确定感兴趣的变体作为研究对象。得到后续研究需要的刺突蛋白突变载体。 2.准备实验所需的假病毒,将刺突蛋白突变载体转染至293T细胞中,在指定时间收取上清,通过纯化操作获得假病毒颗粒,冻存保存留待后续实验使用。 3.分析变异株刺突蛋白病毒学特征:用制得的假病毒感染稳定表达ACE2受体的细胞。通过观察病毒诱导合胞体形成情况分析突变后刺突蛋白介导膜融合的能力,检测荧光素酶活性来评估突变后刺突蛋白的感染能力改变情况。通过Western blot分析突变后刺突蛋白切割能力,比较变异株刺突蛋白的感染能力。 4.分析变异株刺突蛋白感染宿主细胞后的线粒体病理学特征:利用流式细胞仪检测被感染细胞的线粒体膜电位、细胞活性氧(ROS)水平和线粒体耗氧率(OCR)等指标,并利用激光共聚焦显微镜观察宿主细胞被感染后的线粒体形态及融合分裂情况,以评估新型冠状病毒变异株感染的线粒体病理学特征。 5.研究变异株体内病毒学特征:利用假病毒对K18-hACE2-2A-CreERT2小鼠进行滴鼻感染,通过PET/CT观察小鼠肺部炎症情况,通过H&E染色观察小鼠肺部组织病理变化,以评估XBB.1.16刺突蛋白的体内病毒学特征。 研究结果: 1.通过线上数据库数据和文献调研比较分析,选取得到出现频率和增长速度较高的Omicron变异株XBB.1.16作为感兴趣的变异株,将其与亲本SARS-CoV-2、BA.1和BA.2进行对比研究。 ***.1.16刺突蛋白的病毒学特性的研究结果:相比于BA.1和BA.2的刺突蛋白,XBB.1.16的刺突蛋白具有更强的膜融合能力、更强的感染能力复制性和更高的S1/S2切割效率。 ***.1.16刺突蛋白损伤宿主细胞线粒体的特性研究结果:相比于亲本SARS-CoV-2、BA.1和BA.2,XBB.1.16刺突蛋白引起的宿主细胞线粒体分裂、线粒体膜电位下降、细胞ROS水平升高以及线粒体有氧呼吸功能障碍的严重程度最为轻微。 4.动物体内实验结果:相比于亲本SARS-CoV-2、BA.1和BA.2,XBB.1.16刺突蛋白假病毒感染的小鼠其肺部感染症状最轻,小鼠肺部PET信号最低,肺组织病理切片的炎症细胞浸润、出血和肺泡损伤等组织病理学评分最低。 研究结论: 相比于亲代SARS-CoV-2、BA.1变异株以及BA.2变异株,XBB.1.16变异株的刺突蛋白表现出了更强的感染性以及更弱的致病性,这些性质变化与其刺突蛋白上的关键突变位点密切相关。本研究为进一步研究新冠病毒刺突蛋白的关键突变位点的生物学功能奠定了重要基础。