关键词： 胃类器官   胃上皮体外模型   三维培养   胃干细胞   胃类器官   鹅去氧胆酸   单细胞测序   胆汁酸   胃促生长素   小肠类器官   小肠上皮体外模型   三维培养   小肠干细胞   避水应激   内脏高敏感   肠易激综合征   长双歧杆菌   小肠类器官   共培养   转录组测序  

摘要： 第一部分C57BL/6小鼠胃类器官培养体系的建立目的:体外三维培养小鼠胃类器官（gastroids）,作为可靠的模拟胃上皮结构、功能的体外模型,用于后续胃疾病研究。方法:迅速分离小鼠胃窦、体粘膜腺体,种植于基质胶,加入含有生长因子的培养基进行培养,动态观察gastroids的形态学变化,并进行gastroids传代、冻存、复苏,通过免疫荧光、q PCR检测gastroids细胞标志物,确认培养是否成功。结果:本实验所培养的gastroids形态学上与文献报道一致,可有效地进行传代、冻存、复苏,具有MUC5ac、MUC6、Pepsinogen、H+-K+ATPase、Lgr5等胃窦、体粘膜等多种细胞标志物,而不表达肠上皮标志物MUC2,可用于后续研究。结论:本实验成功建立小鼠胃来源的gastroids,在形态特点及所含细胞标志物上与文献报道一致,为后续体外研究提供了可靠的模型。第二部分鹅去氧胆酸对gastroids生长、增殖、凋亡、分化及Ghrelin表达的影响目的:观察胆汁的成分之一鹅去氧胆酸（Chenodesoxycholic Acid,CDCA）对小鼠gastroids的生长、增殖、凋亡、分化及胃促生长素Ghrelin m RNA表达的影响。方法:选取gastroids生长状态较好的时间点进行干预,分别采用不同浓度的CDCA刺激gastroids,通过倒置显微镜观察gastroids的直径、形态变化;流式细胞术（PI染色）检测gastroids中细胞增殖情况;流式细胞术（Annexin V/PI染色）检测gastroids中细胞凋亡情况;q PCR方法检测ghrelin m RNA表达变化;采用单细胞测序方法分析CDCA对gastroids中细胞分化的影响。结果:倒置显微镜下可以观察到CDCA浓度达200μmol/L时,gastroids变小、死亡。CDCA浓度在0～100μmol/L时,随着浓度增加,gastroids增殖活性无明显改变;而CDCA浓度在30、100μmol/L时gastroids早期凋亡、晚期凋亡细胞比例增加。CDCA 10μmol/L浓度刺激24h可导致gastroids小凹细胞的各个亚群比例发生变化,表现为促进处于细胞分裂周期的亚群凋亡。随着CDCA浓度增加,gastroids中Ghrelin m RNA表达水平逐渐下降。结论:初级胆汁酸CDCA能够促进gastroids中小凹细胞群中处于细胞分裂周期亚群的凋亡,抑制小凹细胞的更新。同时,CDCA能使gastroids中内分泌细胞ghrelin m RNA的表达下调。这部分解释了长期胆汁反流中胆汁酸刺激胃黏膜上皮所致的小凹上皮细胞增生及胆汁反流性胃炎患者胃肠激素水平的紊乱。第三部分C57BL/6小鼠小肠类器官培养体系的建立目的:体外三维培养小鼠小肠类器官（enteroids）,作为可靠的能够模拟肠上皮结构、功能的体外研究模型,用于后续实验研究。方法:迅速分离雄性C57BL/6小鼠小肠粘膜隐窝,接种于基质胶及含有生长因子的培养基中,动态观察enteroids的形态学变化,并进行enteroids传代、冻存、复苏,通过免疫荧光验证enteroids中所含有的细胞类型。结果:本实验所培养的enteroids形态学上与文献报道一致,可有效地进行传代、冻存、复苏。免疫荧光能够观察到上皮细胞、潘氏细胞、增殖细胞、Tuft细胞,可用于后续研究。结论:本研究成功建立小鼠小肠隐窝来源的enteroids,在形态特点及所含细胞种类与文献报道一致,为后续enteroids体外研究提供了可靠的模型。第四部分长双歧杆菌调控肠上皮增殖活性并改善IBS模型大鼠内脏高敏感目的:观察避水应激（WAS）所致的肠易激综合征（IBS）大鼠肠道上皮增殖活性、潘氏细胞的分泌功能、肠道菌群改变,观察长双歧杆菌（***）对WAS所致的IBS大鼠肠道上皮增殖活性、潘氏细胞功能、肠道菌群的调控作用。建立***与小肠类器官（enteroids）共培养体系,观察***对enteroids中细胞增殖的调控作用。方法:通过WAS 10天建立IBS大鼠模型。HE染色观察回肠末端隐窝-绒毛结构,扫描电镜观察***定植情况。FITC-D4000观察肠道通透性;western-blot检测肠道上皮紧密连接蛋白Occludin表达;免疫荧光、q PCR观察肠道上皮增殖活性;免疫荧光、q PCR、westernblot观察潘氏细胞数目及溶菌酶表达情况;16S r RNA测序分析肠道细菌变化。观察***干预对WAS所致大鼠肠道上皮增殖活性及潘氏细胞溶菌酶表达、肠道菌群的调控作用。用***菌粉接种、培养、传代并进行鉴定。取生长状态较好的enteroids与1.0～1

关键词： IBD   EpCAM   连接分子   肝发育   双氢青蒿素  

摘要： 研究背景:炎症性肠病(IBD)被认为是一种遗传与环境相互作用的慢性肠道炎症性疾病,主要包括克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC),临床上表现为严重腹泻、腹痛,甚至可能出现血便。IBD发生时,肠上皮组织完整性受损。肠道上皮组织的完整性是由上皮细胞间的细胞连接维持的,包括紧密连接、粘附连接、间隙连接、桥粒连接等连接结构。肠道是机体最大的粘膜免疫场所,天然免疫作为第一道防线,在肠道稳态平衡中起着重要的作用。深入了解肠道的完整性及其稳态平衡机理对于人类健康的发展很有必要。有研究表明,小鼠结肠中敲低EpCAM后更容易形成葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的IBD小鼠模型,但具体分子机制仍不完全明确。肝脏和肠道上皮在胚胎发育期来源于同一胚胎层,是肠的一种附属腺体。在胚胎发育阶段,肝细胞中有大量的EpCAM基因表达。当小鼠出生后,肝细胞中EpCAM基因表达降低,甚至消失,而在肝细胞发生癌变时EpCAM基因表达会又升高,但是EpCAM基因在肝脏发育及癌变过程中的功能仍不是很清楚。因此,探讨EpCAM基因缺失对肝脏发育的影响十分重要。由于IBD发病率高、治愈难,因此寻找治疗IBD的药物已经成为当前迫切的任务。而双氢青蒿素作为一种抗疟疾药青蒿素的衍生物,在临床上能够迅速控制疟疾发作及症状。除了抗疟疾作用,还有治疗红斑狼疮、抑制血管生成、神经保护、抗炎等特性,因此有必要探讨其在其它疾病防治方面的扩大应用。研究目的:1.本研究通过分析EpCAM基因打靶小鼠模型,探讨EpCAM基因对肠道及肝脏发育的调控机制;2.通过分析EpCAM基因打靶小鼠模型,探讨EpCAM基因缺失与IBD的关系;3.通过建立葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的IBD模型,探讨双氢青蒿素对IBD的改善作用及分子机制。研究方法:1.以借助CRISPR-Cas9技术建立的EpCAM基因打靶小鼠为模型,探究上皮细胞连接分子(EpCAM)功能缺失与IBD的关系;2.探究上皮细胞连接分子(EpCAM)功能缺失,对小鼠肠道上皮细胞连接结构的影响;3.探究上皮细胞连接分子(EpCAM)功能缺失,对小鼠肝脏表观遗传学产生影响;4.以借助RNA干涉技术敲低EpCAM基因的Caco-2细胞为模型,验证体内外结果是否一致,从而确认体内的变化是否为细胞自主性调控。5.C57/BL雄性小鼠经葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导成IBD模型小鼠,自由分成正常组、DSS模型组、双氢青蒿素给药组。为了诱导IBD模型的建立(主要是结肠炎模型),给予硫酸葡聚糖钠(DSS)组、双氢青蒿素剂量组自由饮用一周硫酸葡聚糖钠(DSS)后,换成自由饮用纯水5天后,再次用DSS刺激小鼠肠道6天,同时给予双氢青蒿素剂量组小鼠灌胃双氢青蒿素治疗。研究结果:***基因缺失引起肠道炎症发生,而IBD鼠中EpCAM基因表达量减少,由此推测EpCAM基因缺失可视为IBD的一种遗传因素;***基因缺失导致肠上皮细胞紧密连接分子发生改变;***基因缺失,肝糖原变化可能通过调节肝脏糖原代谢、肝脏circRNA,从而对肝发育产生影响;4.与DSS模型组小鼠相比,DHA可以缓解IBD的炎症以及改善IBD对连接分子的影响研究结论:EpCAM基因缺失对细胞连接分子尤其是紧密连接分子产生影响;同时可能通过调节肝脏糖原代谢、肝脏circRNA,从而对肝发育产生影响;DHA可以缓解IBD产生的炎症及对连接分子产生的影响。

关键词： 肛肠疾病   术后换药   VAS疼痛评分   创面愈合  

摘要： 目的 研究中医外治综合疗法对肛肠疾病术后换药疼痛及创面愈合的疗效.方法 研究时段:2018年04月至2019年04月,研究对象:我院62肛肠病术后患者,按治疗方式分类:对照组(n=31,口服药物治疗),观察组(n=31,中医外治综合疗法),对比换药疼痛、创面愈合情况.结果 观察组患者术后换药(1、3、5d)时VAS评分均显著低于对照组(P<0.05);且观察组创面愈合及住院时间显著短于对照组(P<0.05).结论 肛肠疾病术后患者采用中医外治综合疗法效果显著,可缓解换药疼痛,促进创面的愈合,改善预后,可在临床中的应用、推广.

关键词： 肛肠疾病   尿潴留   发生原因   护理   研究进展  

摘要： 肛肠疾病的临床发病率较高,手术为此类疾病的常用治疗方式,但是在术后很多患者会出现尿潴留,这是手术常见并发症。发生尿潴留之后,不但加重患者痛苦,影响手术效果以及康复进程,也会增加患者的心理负担。为了降低尿潴留的发生率,需要加强对尿潴留发生原因的分析,并制定针对性的护理措施。本研究对肛肠疾病术后尿潴留原因进行了分析,并对护理研究进展进行综述,以期提升对此类患者的临床护理效果。

摘要： 近年来,肛肠疾病越来越多的出现在人们的生活中,给人们带来了很多的不便和痛苦,肛肠疾病指的是发生在肛门、肛管以及大肠上的各种疾病.因为肛门及其周围通常见不到阳光,而且还要不断的排泄身体产生的废物,所以要是我们不注意卫生的话,细菌就容易滋生,进而引发不同的肛肠疾病.因为肛肠疾病的产生跟我们平时的生活是密不可分的,所以日常做好预防和保健工作十分重要.那么肛肠疾病日常该如何保健才能预防和减少肛周疾病的发生呢?

关键词： Epstein-Barr virus   Infection   Intestinal mucosa   Inflammatory bowel disease   Chinese  

摘要： Aims: This cross-sectional study is to investigate the presence of Epstein-Barr virus (EBV) in colonic mucosa of inflammatory bowel disease (IBD) patients and its correlation with the clinical disease activities and therapeutic regimens. Methods: Subjects undergoing colonoscopy for screening of polyps were recruited as control. EBV DNA load was analyzed by means of quantitative real-time polymerase chain reaction and EBV-encoded RNAs were tested by in situ hybridization in intestinal mucosa of IBD patients. EBV infection was defined as positive with either method. Clinical disease activity was assessed using the Mayo Clinic Score for ulcerative colitis and Crohn's disease activity index for CD. Results: EBV was detectable in 33 out of 99 IBD patients (33.3%). In controls, EBV prevalence was 7.5% (3/40). We found a significant correlation between EBV prevalence and clinical disease activities (mild [10.71%, 3/28] versus moderate [32.73%, 18/55], severe [75.00%, n = 12/16], p < 0.001). However, no significant difference was found in EBV preva-lence between patients who received immunosuppressive therapy and those who did not. Conclusions: EBV infection is common in colonic mucosa of IBD patients. There is a significant correlation between EBV infection and clinical disease activities of IBD. However, prospective studies are still needed to explore the exact role of EBV in IBD. (C) 2018 S. Karger AG, Basel

关键词： Hepatic steatosis   inflammatory bowel disease   non-alcoholic fatty liver disease   antitumor necrosis factor  

摘要： Background Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) is common in patients with inflammatory bowel disease (IBD). This study evaluated the prevalence of NAFLD and the associated risk factors among IBD patients who received anti-tumor necrosis factor (TNF) therapy. Methods Adult IBD patients receiving anti-TNF therapy (infliximab, adalimumab, certolizumab, golimumab) were enrolled. Hepatic steatosis was assessed by abdominal ultrasound. Patients with a history of excessive alcohol or recent steroid use were excluded. Univariate and multivariate analysis were performed. Results Eighty patients, 55% male, mean age 42 +/- 15 years, were enrolled. The sonographic prevalence of NAFLD was 54% (43/80), significantly higher than the general prevalence in the US adult population (30%) (P<0.0001). NAFLD patients had a significantly higher proportion of males, as well as greater body weight and body mass index, compared to non-NAFLD. The Crohns disease activity index (CDAI) was significantly higher among patients with NAFLD. Multivariate analysis demonstrated that a higher CDAI was independently associated with NAFLD, with an odds ratio of 1.6 (95% confidence interval 1.05-2.44;P=0.03). Conclusions The presence of IBD is strongly associated with NAFLD. We identified a high prevalence of NAFLD among IBD patients receiving anti-TNF. CDAI was independently associated with hepatic steatosis. Further studies arc still needed to evaluate the pathophysiology of NAFLD development and disease progression among IBI) populations.

关键词： 胃腔液体充盈超声   胃镜   胃十二指肠疾病   胃癌   癌前疾病  

摘要： 目的:观察、对比胃腔液体充盈超声检查与胃镜对同一疾病的诊断,探讨胃腔液体充盈超声诊断胃及十二指肠疾病的临床应用价值。方法:收集2016年11月-2019年1月因上腹不适等症状就诊于我院的门诊及住院患者以及身体健康检查者293人,患者同期完成胃镜及胃腔液体充盈超声检查,就两种检查对常见胃十二指肠疾病的检出情况对比分析。对于可疑胃癌及癌前疾病患者156例,两种检查分别与病理结果金标准对比分析,计算其诊断符合率,并计算两种检查诊断相应疾病的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。对于经病理确诊的良、恶性疾病,统计分析彩色多谱勒血流显像诊断的血流分级是否能有效区别疾病良、恶性程度。结果:1.胃腔液体充盈超声检查对293人中胃食管反流、慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、胃息肉、胃溃疡、胃癌、十二指肠-胃反流、十二指肠球部溃疡、十二指肠球炎的疾病检查阳性率分别为19.11%、92.83%、5.46%、12.68%、11.95%、7.50%、21.50%、5.12%、15.36%,而胃镜对以上人群的疾病相同疾病的检查阳性率分别为15.02%、96.23%、14.67%、16.38%、13.99%、8.19%、17.04%、9.21%、19.80%。对比各个疾病的阳性率,进行统计学分析,发现萎缩性胃炎、十二指肠球炎阳性率比较p<0.05,差异有统计学意义,其余疾病阳性率比较p>0.05,无明显统计学差异;2.可疑胃癌及癌前疾病患者以活体组织病理学检查为金标准,胃腔液体充盈超声检查诊断萎缩性胃炎的灵敏度、特异度、阳性阳性预测值、阴性预测值分别为31.57%、96.61%、75.00%、81.43%;诊断胃息肉分别为71.74%、96.36%、89.19%、89.08%;诊断胃溃疡分别为72.09%、96.46%、88.57%、90.08%;诊断胃癌分别为86.36%、97.76%、86.36%、97.76%。而胃镜诊断萎缩性胃炎灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别100%、95.76%、88.37%、100%;诊断胃息肉分别为100.00%、98.18%、95.83%、100.00%;诊断胃溃疡分别为93.02%、99.11%、97.56%、97.39%;诊断胃癌分别为90.91%、97.01%、83.33%、98.48%;3.胃腔液体充盈超声诊断与病理诊断相符95例,其诊断符合率为60.89%,胃镜诊断与病理诊断相符144例,其诊断符合率为92.31%,对比胃腔液体充盈超声及胃镜的诊断符合率,运用统计学分析,p<0.05,差异有明显统计学意义;4.经手术及病理证实的早期胃癌5例,进展期胃癌17例;胃腔液体充盈超声检出早期胃癌与病理检查相符者3例,进展期胃癌与病理检查相符14例。胃腔液体充盈超声检查对早期胃癌其诊断灵敏度为60%,特异度为82.35%;对进展期胃癌其诊断灵敏度为82.35%,特异度为60%;5.结合彩色多普勒血流显像对疾病血流进行分度,良性病变的血流信号较少分级多为0Ⅰ级,恶性病变的血流信号丰富多为ⅡⅢ级。癌前疾病指有可能发展为癌的良性病变,选取胃腔液体充盈超声检查与病理相符的95例患者的血流信号进行分析,p<0.05,差异有统计学意义,癌前疾病与癌变的血流信号分级不同。结论:1.对于反流情况,胃腔液体充盈超声可实时观察助显剂的反流状态,能避免胃镜检查下的假阴性结果;2.胃腔液体充盈超声检查可以观察病灶浸润、淋巴结及腹腔脏器转移,为患者的围手术期诊疗提供较为可靠的指导意见;3.胃腔液体充盈超声检查结合彩色多普勒血流显像技术,可以较有效的区别胃良、恶性病变;4.对于非反流情况的其他疾病,胃腔液体充盈超声检逊色于胃镜检查,仍需联合胃镜共同诊断,作为胃镜的有效补充。

关键词： 胃肠超声造影   胃十二指肠疾病   胃镜   诊断价值  

摘要： 目的:将胃肠超声造影对胃十二指肠疾病的研究价值进行研究.方法:采纳2018年2月份至2019年2月份我院接收的胃十二指肠疾病患者100例,并随机分为对照组与观察组各50例,对照组患者行胃镜检查,观察组行胃镜检查与胃肠超声造影检查,将两组患者诊断准确率进行对比.结果:观察组患者诊断准确率明显更高(P＜0.05).结论:胃肠超声诊断造影检查诊断价值较高,将胃镜检查与胃肠超声造影结合,可有效提升总体诊断准确率,最大程度避免临床医生出现误诊、漏诊等情况.

摘要： 1 什么是肛肠疾病 肛肠疾病是一种人体常见的疾病,同时发病率极高,从广义方面来讲,只要是出现在肛门及大肠上的所有疾病统称为肛肠病,共计 180 多种.从狭义方面来讲,出现在肛门和直肠上的所有疾病统称为肛肠疾病,常见的共计 30 多种,其中人们较为熟知的是外痔、内痔、混合痔、直肠炎、肛瘘、肛裂、肛周肿胀等等.具有关资料显示,肛肠疾病的发病率在 59.1%左右,发病率最高的肛肠疾病是痔疮,占总比例的 87.25%左右.目前,大多数人没有意识到肛肠疾病的危害性,通常觉得这是小病而觉得无关紧要,在肛肠疾病发作时,自行购买药物进行缓解.但事实是肛肠疾病不能得到有治疗,会造成患者出现更为严重的情况,轻度则是便血、便秘、脱肛,重度则会血管破裂、不能排便、疼痛难忍,会对患者日常生活带来极大的不便.