关键词： β-地中海贫血   遗传修饰   胎儿血红蛋白   核苷酸多态性  

摘要： 【目的】胎儿血红蛋白（Hb F）含量增加可改善β-地中海贫血患者的临床贫血症状。本研究对HBG1基因的rs368698783（G>A）多态性位点和HBG2基因的rs7482144（C>T）多态性位点与Hb F表达进行关联分析,分析这两个位点与Hb F表达之间的关系;对β-地中海贫血患者中参与调控Hb F表达水平的遗传修饰基因多态性位点进行研究,分析各修饰基因位点多态性与Hb F表达的相关性,探讨这些突变位点对缓解β-地中海贫血患者临床贫血症状的影响。【方法】（1）通过地中海贫血基因检测收集β-地中海贫血纯合子样本（β/β,β/β）、β-地中海贫血复合杂合子样本（β/β）、Hb E/β-地中海贫血样本（β/β,β/β）,总计51例;Hb E纯合子样本（β/β）40例;通过血红蛋白电泳检测收集Hb F>5%样本,根据地中海贫血基因检测结果分为Hb F>5%（β/β）样本113例和Hb F>5%（β/β）样本113例;将血红蛋白电泳及地中海贫血基因检测结果为正常的无亲缘关系样本262例作为对照组。对收集的样本进行基因组DNA提取,使用sanger测序法对rs368698783及rs7482144位点进行基因型鉴定,比较各组的血液学参数、突变基因检出率和最小等位基因频率,分析该多态性位点与Hb F水平之间的关系;选取部分样本进行RNA提取,对γ-珠蛋白转录本进行γ/γm RNA表达含量的分析,分析rs368698783位点与rs7482144位点连锁和不连锁带来的功能影响。（2）通过地中海贫血基因检测收集76例β-地中海贫血患者样本并进行基因组DNA提取。针对参与调控Hb F表达的修饰基因定制基因芯片,设计基因panel,运用高通量测序技术对相关修饰基因进行检测。对测序结果变异位点信息进行全基因组关联分析,比较Hb F表达水平在不同β-地中海贫血个体之间存在的多态性,分析突变位点多态性与Hb F表达的相关性。【结果】（1）非输血依赖型β-地中海贫血患者的rs368698783与rs7482144位点的突变等位基因检出率较正常对照组有显著性差异（P<0.05）,而输血依赖型β-地中海贫血患者无显著差异（P>0.05）;输血依赖型β-地中海贫血患者与非输血依赖型β-地中海贫血患者相比突变等位基因检出率有显著性差异（P<0.05）。Hb E/β-地中海贫血患者和Hb E纯合子样本的rs368698783与rs7482144位点突变检出率与对照组相比有显著性差异（P<0.05）,而β-地中海贫血患者与对照组相比无显著差异（P>0.05）。（2）Hb F>5%（β/β）、Hb F>5%（β/β）样本与对照组rs368698783与rs7482144位点突变检出率相比均有显著性差异（P<0.05）。β地贫患者各组间SNPs位点多态性与Hb F水平的关系不明显。（3）rs368698783突变等位基因使γ/γm RNA表达的比值升高（P<0.05）,存在1例rs368698783为野生型而rs7482144为杂合型样本,γ/γm RNA比值位于rs368698783野生型范围内,表明rs368698783修饰效应强于rs7482144位点。（4）对76例β-地中海贫血患者进行NGS检测参与调控Hb F表达的基因,我们的研究已经确定了不同类型的多态性,共检出17072种突变,包括SNPs、insertions、deletions、indels等结构变异。共检出135个与Hb F水平相关的突变位点（P<0.05）,其中在2、6、9、11、14、15、16、19号染色体上检出15种与Hb F的表达相关程度更高（P<0.001）。包括2个错义突变、2个同义突变、1个3’UTR区突变、8个内含子区突变和2个基因间区突变。【结论】（1）rs368698783与rs7482144位点多态性与Hb F水平升高有关,并且与Hb E突变存在相关性,rs368698783的A等位基因与rs7482144位点的T等位基因可以减轻β-地中海贫血的贫血程度,缓解β-地中海贫血的临床贫血症状,rs368698783位点相比于rs7482144位点对β-地中海贫血的修饰效应更强。（2）β-地中海贫血患者中发现15个SNPs多态性位点与高Hb F水平相关,进一步证实并丰富了地中海贫血的遗传修饰位点,为阐明地中海贫血的分子病理机制、筛选药物靶点和制定诊疗方案提供实验依据和理论基础。

关键词： 地中海贫血   造血干细胞移植   HLA亲缘全相合   HLA非亲缘全相合   新鲜脐血移植   儿童血液病  

摘要： 研究背景地中海贫血是一种常染色体隐性遗传病,目前有输血、祛铁,造血干细胞移植和基因治疗等治疗方法,其中造血干细胞移植是最成熟的治愈方法。临床上进行移植治疗会首先考虑寻找HLA全相合的供者,在HLA全相合的情况下,不同的干细胞来源及移植物仍会导致不同的移植效果。目的比较HLA全合亲缘移植与HLA全合非亲缘移植治疗地贫效果;探讨在亲缘HLA全相合的前提下,进行不同移植物的地贫移植,存活率、无病生存率是否存在明显差异;探讨同胞全相合新鲜脐血移植在治疗地贫方面是否存在一定的优势。方法收集南方医院儿科2009-2020年间所有亲缘及非亲缘HLA全相合地贫移植的相关病例资料,以及2009-2020年间所有亲缘HLA全相合地贫移植的相关病例资料,进行回顾性分析。随访截止时间为2021年12月31日。统计各移植方式移植前患者、供者的移植相关特征,预处理、预防GVHD药物的差异,以及移植后的存活率、无病生存率、疾病相关死亡率、植入情况、移植后感染情况、VOD、GVHD及其它并发症发生情况,对各移植方式进行比较。结果共纳入474例重型β地贫患者。在亲缘及非亲缘HLA全相合地贫移植的比较组中,亲缘HLA全相合移植有154例,非亲缘HLA全相合移植有213例,且均为外周干来源,中位随访时间31个月,中位植入随访时间31个月。在亲缘HLA全相合地贫移植比较组中,新鲜脐血移植为43例、骨髓移植为18例、外周干移植为154例、冷冻脐血+骨髓移植为23例、冷冻脐血+外周干移植为22例,中位随访时间33个月,中位植入随访时间33个月。(1)本中心亲缘HLA全相合移植和非亲缘HLA全相合移植的OS和EFS分别为95.9±1.7%和95.2±1.5%(P=0.71)、95.9±1.7%和 93.8± 1.7%(P=0.34),均无明显差异;亲缘HLA全相合移植的TRM为3.9%,非亲缘HLA全相合移植的TRM为4.7%。(2)亲缘HLA全相合移植和非亲缘HLA全相合移植的植入情况、三系植入时间无明显差异,但非亲缘组较亲缘组的血小板植入情况差(P=0.007)。(3)亲缘HLA全相合移植和非亲缘HLA全相合移植在移植期间的感染情况无明显差异,VOD的发生也无明显差异;但在移植后,非亲缘移植组更容易出现泌尿系统(P=0.005)及耳鼻喉(P=0.02)的并发症。移植后非亲缘移植组更易出现CMV(P=0.047)和多瘤病毒的感染(P=0.003)。(4)移植后1年内出现感染的细菌种类以革兰阳性杆菌和革兰阳性球菌为主。(5)非亲缘移植组较亲缘移植组更容易出现GVHD的发生(P<0.001),无论是急性GVHD(P<0.001)还是慢性GVHD(P=0.007),发生部位在皮肤的情况多(分别为P<0.001和P=0.02)。(6)移植后亲缘HLA全相合移植和非亲缘HLA全相合移植的血清铁蛋白变化情况无明显差异。(7)在亲缘HLA全相合移植中,新鲜脐血移植与其它移植方式相比,其OS更高,EFS更低,但无明显统计学意义。(8)新鲜脐血移植的三系植入时间比其他移植组更长并具有统计学意义,且三系植入情况比外周干移植差(P<0.001、P<0.001、P<0.001)。(9)新鲜脐血移植组移植后感染情况和其他移植组相比并无明显优势,VOD发生情况无明显差异。(10)新鲜脐血移植的GVHD的发生率、急慢性GVHD比例、急性GVHD的严重程度均较其它移植方式更低,但无明显统计学意义。结论HLA全相合亲缘与非亲缘地贫移植的OS和EFS无明显差异,但非亲缘移植的急/慢性GVHD发生率明显更高,且两者均以发生在皮肤为多。亲缘HLA全相合移植中,新鲜脐血移植较其它移植方式并无明显优势。

关键词： β-地中海贫血   基因突变类型   罕见突变   血液学特征  

摘要： 目的:分析174例β-地中海贫血杂合子病例,了解地中海贫血突变类型情况和临床特征,探讨单纯β-地中海贫血杂合子和β-地中海贫血杂合子复合α-地中海贫血病例在血液学特征上的差异,分析罕见β-珠蛋白基因突变导致β-地中海贫血的血液学特征。方法:研究对象来源于2021年1月至2021年12月在广西医科大学第一附属医院进行地中海贫血诊疗的病例。通过血常规和血红蛋白分析进行地中海贫血筛查,通过Gap-PCR方法、荧光PCR熔解曲线法和DNA测序进行α-和β-地中海贫血基因分析。应用SPSS 20.0软件进行统计学分析。结果:1.一般资料:在诊疗病例中检出174例β-地中海贫血杂合子病例,男性75例,女性99例,年龄介于7个月至99岁。2.基因分析结果:（1）β-地中海贫血基因分析结果共检出174例β-地中海贫血杂合子病例,包含14种β-珠蛋白基因突变类型,其中2种为罕见β-珠蛋白基因突变,分别为1例CD114（CTG>CCG,HBB:c.344T>C）突变杂合子和1例CD121（GAA>TAA,HBB:c.364G>T）突变杂合子。及12种其他β-珠蛋白基因突变杂合子,分别为69例CD41-42（-TTCT）/N,61例CD17（A>T）/N,14例IVS-Ⅱ-654（C>T）/N,8例CD71-72（+A）/N,8例-28（A>G）/N,3例CD26（G>A）/N,3例CD27-28（+C）/N,2例IV S-Ⅰ-1（G>T）/N,1例CD43（G>T）/N,1例IVS-Ⅱ-5（G>C）/N,1例-29（A>G）/N,1例-90（C>T）/N。本研究检出的14种β-地中海贫血基因突变类型中,基因频率较高的突变为CD41-42（-TTCT）、CD17（A>T）、IVS-Ⅱ-654（C>T）和CD71-72（+A）突变,对应等位基因频率分别为39.6%、35.0%、8.1%和4.6%。（2）α-地中海贫血基因分析结果174例β-地中海贫血杂合子病例中,140例未检出α-地中海贫血基因突变,34例检出合并α-地中海贫血基因突变。涉及的α-地中海贫血基因型有5种,分别为--/αα、-α/αα、-α/αα、αα/αα和αα/αα,包括12例合并--/αα,9例合并-α/αα,4例合并-α/αα,6例合并αα/αα,3例合并αα/αα。3.血常规结果:（1）2例罕见β-地中海贫血杂合子病例血常规结果:CD114（CTG>CC G）杂合子病例血常规结果为:RBC 3.65×10/L,Hb 78.3 g/L、MCV 66.52 f L,MCH 21.48pg,MCHC 322.9g/L,HCT 0.243 L/L;CD121（GAA>T AA）杂合子病例血常规结果为:RBC 4.86×10/L,Hb 100.1g/L,MCV 64.04f L,MCH 20.62pg,HCT 0.311 L/L。（2）174例β-地中海贫血杂合子病例血常规结果:其中140例单纯β-地中海贫血杂合子血常规结果为:RBC 3.65～7.34×10/L,Hb 76.3～153g/L,MCV 55.95～82.5f L,MCH 16.13～28.1pg,MCHC 273.9～341g/L,HCT0.24～0.49L/L;34例β-地中海贫血合并α-地中海贫血病例血常规结果:RB C 4.14～7.16×10/L,Hb 82.0～147.0g/L,MCV 56.48～85.68f L,MCH 17.38～27.19pg,MCHC 299.1～338.0g/L,HCT 0.26～0.46L/L。（3）比较单纯β-地中海贫血杂合子病例组和β-地中海贫血复合α-地中海贫血病例组的血常规结果,发现单纯β-地中海贫血杂合子组MCV、MCH较β-地中海贫血复合α-地中海贫血组低,差异有统计学意义（P<0.05）。4.血红蛋白分析结果:（1）2例罕见β-地中海贫血病杂合子病例血红蛋白分析结果:CD114（CTG>CCG）杂合子病例血红蛋白分析结果为:Hb A4.4%,Hb F 2.6%;CD121（GAA>TAA）杂合子病例血红蛋白分析结果为:Hb A 3.9%,Hb F1.2%。（2）174例β-地中海贫血杂合子病例血红蛋白分析结果:其中140例单纯β-地中海贫杂合子血红蛋白分析结果:Hb A3.5～26.5%,Hb F 0.4～8.3%;34例β-地中海贫血合并α-地中海贫血复合杂合子:Hb A 4.50～7.70%,Hb F 0.40～3.7%。（3）比较单纯β-地中海贫血杂合子突变病例组和β-地中海贫血复合α-地中海贫血病例组血红蛋白分析结果,两组之间Hb A、Hb F差异无统计学意义（P>0.05）。结论:1.首次在国内发现罕见β-珠蛋白基因CD114（CTG>CCG）突变导致β-

关键词： ATRX   α-地中海贫血   智力障碍   新发突变   全外显子组测序  

摘要： 背景与目的:X连锁α-地中海贫血/精神发育迟滞综合征(Alpha-Thalassemia X-Linked Intellectual Disability Syndrome,OMIM301040)又称ATR-X综合,是一种罕见的X连锁显性遗传性综合征。ATR-X综合征患者具有特征性临床表现,临床特征主要包括:中重度智力发育障碍,生长发育迟缓,癫痫发作,特征性面容,常伴有胃肠功能障碍,部分患者伴有α-地中海贫血。ATRX基因突变导致ATR-X综合征,定位于Xq21.1。ATRX蛋白属于染色质重塑蛋白的SWI/SNF家族,是染色质重塑因子,包含一个与DNA结合的锌指结构域和一个解旋酶结构域,参与广泛的生物学功能:转录调控,DNA修复和染色体分离。ATRX蛋白是一种异染色质相互作用蛋白,与其相互作用的蛋白有MeCP2、HP1和DAXX,ATRX基因的异常表达,影响蛋白的相互作用,导致智力发育障碍。目前已有127种ATRX基因突变被报道,包括无义突变、缺失、插入、剪接突变。本文针对一个ATR-X综合征家系,通过全外显子组测序(whole exome sequencing,WES)结合Sanger验证查找致病位点,对致病基因突变进行功能研究,为该家系的临床精准诊断和遗传咨询提供依据。材料和方法:1.研究对象:收集一个ATR-X综合征家系,共两代人,先证者为男性,5岁8月,临床表现符合该综合征特征。2.实验方法:收集家系信息,对家系成员进行临床检验及ATRX突变基因功能分析实验。临床检验包括以下项目:血常规、血红蛋白电泳、性激素和生长激素。ATRX突变基因功能分析实验:WES,Sanger验证,逆转录及实时荧光定量多聚酶链式反应(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR),qRT-PCR产物测序,蛋白印迹实验(Westernblot)。3.生物信息学分析:使用Mutation Taster对突变位点的致病性进行预测,LUMC Mutalyzer3对氨基酸序列改变进行预测,I-TASSER预测ATRX蛋白变异后的结构,MaxEntScan进行剪接位点有害性预测。结果:先证者临床表现为严重智力障碍、体格发育迟缓,特殊面容、双侧隐睾等多发先天异常。临床检验结果提示先证者存在红细胞平均体积下降,睾酮值降低,WES发现ATRX基因第3、4外显子剪接供点插入突变(NM00489:c.189+1dupG)。Sanger测序验证突变遗传自携带杂合突变的母亲,父亲未携带该突变。mRNA水平验证表明,该变异可导致ATRX基因转录产物下降(P<0.05)。qRT-PCR产物Sanger测序提示先证者cDNA第189位与第190位碱基之间插入碱基G,导致异常剪切,编码至第65位氨基酸提前终止翻译,形成一个截短蛋白。在线软件预测,变异所在剪接区核苷酸高度保守,有害性预测结果显示为有害。结论:该家系中发现了一个ATRX基因新的突变,功能研究显示该突变是导致该家系呈现ATR-X综合征的致病原因。本研究拓展了 ATRX基因的突变谱,并为该家系的临床确诊和遗传咨询提供了依据。

关键词： 重型β-地中海贫血   终末期红细胞   全基因组DNA甲基化测序   单细胞转录组测序  

摘要： 目的和意义:β-地中海贫血主要由于β-珠蛋白基因发生突变导致正常β-珠蛋白链合成减少或缺乏,多余的α-珠蛋白沉积在红细胞膜上,造成红细胞损坏及髓内无效造血。重型β-地中海贫血患者因贫血、长期输血导致的并发症使多数患儿夭折,目前具临床治愈效果的异基因造血干细胞移植(Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)受限于供者来源、移植相关并发症等问题。因此基因编辑治疗应运而生。本课题利用全基因组DNA甲基化测序及单细胞转录组测序技术,对重型β-地中海贫血患者移植前与移植后以及健康供者进行差异DNA甲基化及差异转录组分析,旨在为研究地中海贫血疾病的红细胞分化进程的分子机制提供基因靶点。 方法: 1、收集33例因重型β-地中海贫血行HSCT患者外周血,分析其移植后2周、1个月、2个月、3个月和6个月的血红蛋白含量、珠蛋白基因以及红细胞特异性相关基因的表达变化。 2、收集2例重型β-地中海贫血患者移植前、移植后1个月及2例相关供者骨髓样本,以目前存在的体外分化方法培养足够数量的人红系细胞,再利用全基因组DNA甲基化测序及单细胞转录组测序对其进行研究。 3、对骨髓来源的红系细胞进行全基因组DNA甲基化测序研究,比较重型β-地中海贫血疾病状态与移植后及供者的甲基化水平差异,使用生物信息学方法分析不同组间差异甲基化区域(Differentially methylated regions,DMRs)、DMRs转录因子结合基序以及DMRs相关基因GO功能。 4、对骨髓来源的红系细胞进行单细胞转录组测序研究,使用10×Genomics平台对终末期红细胞进行文库构建及测序。利用Monocle重建细胞分化轨迹,同时结合已报道的终末期红细胞特征表达基因数据,对终末期红细胞各阶段细胞进行注释。分析基因在不同组样本间在分化过程中表达水平的变化趋势差异。最后对DMR相关基因(DMGs)和差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)进行联合分析。 结果: 1、重型β-地中海贫血患者在移植后6个月内,存在造血恢复波动,通常在移植第6个月时恢复至供者水平。以供者作为参照,患者移植后1个月的HBB、KLF1及BCL11A的表达均较其他时间点的显著增高,而移植后1个月的HBG表达则较其他时间点的降低。 2、免疫磁珠法分选到高纯度的骨髓CD34+细胞,二阶段无血清培养体系可获得高扩增率、高比例的终末期红细胞,在定向分化过程中,红细胞特异性相关基因的表达符合正常生理过程。 3、全基因组DNA甲基化谱显示,CG环境下的DNA甲基化发生频率和甲基化水平占绝大部分;对不同基因功能区的DNA甲基化水平进行比较,外显子区和内含子区的甲基化水平最高,转录起始位点(transcription start site,TSS)附近的基因体区域达到最低值,而供者所有基因功能区域的甲基化水平均高于患者移植前及移植后的。鉴定了重型β-地中海贫血患者与移植后及健康供者之间的DMRs,它们捕获了许多与造血分化以及红系分化相关的转录差异,尤其是在转录启动子结合区。最后,我们还对患者疾病状态与移植后状态或健康供者之间的DMR相关基因做了GO富集分析,结果显示,有丝分裂细胞周期调控、细胞生长和分裂调控、细胞凋亡调节、蛋白质定位维持、蛋白质分泌调节、基因表达调控、组蛋白H2A乙酰化等生物过程显著富集。 4、我们通过细胞周期和对不同阶段细胞的DEGs进行GO富集分析,发现early-Ortho E这一阶段细胞仍能进行红细胞分化,这与以往的研究结果有所不同;在患者移植前样本中,我们在Ortho E阶段的GO富集中还发现了参与红细胞稳态负向调节的生物过程。对不同组别样本进行终末期红细胞基因表达动态变化差异分析,发现IFI27、MGST3和HEMGN,在移植前组vs移植后1个月组以及移植前组vs供者组均具有差异表达。在DMGs和DEGs联合分析中,与移植后1个月组相比,移植前组CST3、USP34、CD164、TNRC6B、ELF1和CD44在低甲基化的情况下上调。 结论:本研究通过全基因组甲基化测序及单细胞转录组测序技术,构建了重型β-地中海贫血患者终末期红细胞分化相关的差异甲基化图谱,并捕获了许多与造血分化以及红系分化相关的转录差异,尤其是在转录启动子结合区。筛选出与地中海贫血红系细胞发育分化相关的DEGs:IFI27、MGST3和HEMGN,以及DMGs:CST3、USP34、CD164、TNRC6B、ELF1和CD44。这些差异甲基化基因及转录组基因可为研究β-地中海贫血疾病红细胞分化进程的分子机制提供基因靶点。

关键词： 重型β地中海贫血   骨钙素   睾酮  

摘要： 目的与意义:本文拟通过研究重型β地中海贫血患儿一般生长发育情况和青春期前期及青春期骨钙素与性腺激素的水平,探讨重型β地中海贫血患者血清骨钙素与性腺功能相关性,为该病患儿性腺功能减退及生长发育迟缓相关并发症的诊治提供依据。方法:通过回顾2012年01月01日至2021年12月31日于广西医科大学第一附属医院血液内科就诊,通过血红蛋白电泳及基因分型确诊为重型β地中海贫血男性患者资料,收集患儿一般情况(年龄、身高、体重、血清骨钙素(BGP)、生长激素(GH))、性腺激素(包括促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)、睾酮(TESTO))。同时随机选择同期在该医院就诊的2-18岁非地中海贫血青少年儿童作为对照组。分析两组之间在年龄、身高、体重、血清骨钙素、生长激素和性腺激素(促卵泡雌激素、促黄体生成素、睾酮)水平间的差异,并研究地中海贫血患者青春期前、后骨钙素与性腺激素水平,分析患者血清骨钙素与性腺激素之间的相关性。统计分析使用SPSS软件(版本号23.0)进行。结果:1)与对照组相比较,重型β地中海贫血患者平均身高、体重显著低于对照组(P均<0.01)。病例组640例男性重型β地中海贫血患者中有321例(50.2%)患儿身高低于全国同性别、同年龄青少年儿童平均身高的2SD,有240例(37.5%)患儿体重低于全国同性别、同年龄青少年儿童平均体重的2SD;对照组中58例男性正常青少年儿童中有18例(31%)身高低于全国同性别、同年龄青少年儿童平均身高的2SD,无一例(0%)体重低于全国同性别、同年龄青少年儿童平均体重的2SD;病例组与对照组相比,身材矮小、体重低下发生率显著升高(P<0.01)。2)病例组与对照组的骨钙素、生长激素与性腺激素水平比较,病例组BGP水平显著升高(P<0.01),GH、FSH水平显著降低(P<0.05),两组间LH、TESTO水平无统计学差异。3)移植前、后地中海贫血患者骨钙素、生长激素与性腺激素水平比较,移植后患者的BGP、FSH、LH显著高于移植前患者(P<0.05),而GH则显著低于移植前患者,两组间TESTO水平无显著差异。4)病例组不同年龄段患者骨钙素、生长激素与性腺激素水平比较,≥12岁患者与<12岁患者相比,≥12岁患者FSH、LH、TESTO水平显著升高(P<0.01),BGP、GH水平两组间无显著差异。5)病例组中不同骨钙素水平患者的生长激素、性腺激素水平比较,与低BGP组相比,高BGP组患者FSH显著升高,两组间GH、LH、TESTO水平无显著差异。在<12岁患者中,高BGP与低BGP两组间相比,GH、FSH、LH、TESTO等指标水平均无显著差异,在≥12岁患者中,高BGP组患者的LH、TESTO水平显著高于低BGP组(p=0.00),GH、FSH水平无显著差异。6)骨钙素与年龄的Pearson相关分析及性腺激素的Spearman相关性分析,结果显示,β地贫患者BGP与FSH、LH呈显著正相关,与年龄、TESTO无显著相关性;在<12岁患者中,BGP与FSH呈显著正相关,与年龄、LH、TESTO等因素均无显著相关性,在≥12岁患者中,BGP与LH、TESTO呈显著正相关,与年龄、FSH无显著相关性。结论:1)本研究中观察到,在≥12岁患者中骨钙素与睾酮水平存在显著的正相关,骨钙素对睾酮水平具有一定的调控作用。2)与对照组相比,重型β地中海贫血患儿身材矮小、低体重的发生率显著增高,且生长激素、性腺激素水平偏低。生长发育迟缓、性腺功能减退等内分泌并发症在重型β地中海贫血症患者中较为常见,对重型β地中海贫血患者进行定期内分泌功能评估是必要的。3)移植后患者性腺激素水平有所升高,造血干细胞移植使重型β地贫患者性腺功能得到一定程度的改善,建议尽早行造血干细胞移植治疗。

关键词： 地中海贫血患者   负性生活事件   生活质量   心理资本   领悟社会支持   团体辅导  

摘要： 地中海贫血患者是一个特殊的慢病群体,他们从小就比正常同龄人面临着更大的压力,生活质量受到很大的影响。关注他们的生存状态及影响因素,并针对性地进行干预,对于促进他们的身心健康,提高他们的生活质量,具有十分重要的前瞻性和现实意义。本研究分为两个子研究:研究一为调查研究,以广东、广西两省14～25岁的地中海贫血患者为研究对象,采用积极心理资本量表(PPQ)、领悟社会支持量表(PSSS)、青少年负性生活事件量表(ASLEC)、生活质量量表(SF-36),探究负性生活事件与地中海贫血患者生活质量的关系、领悟社会支持以及心理资本在负性生活事件对生活质量的影响上可能起的作用。研究二为干预研究,从深圳市第二人民医院规律输血的重型地中海贫血患者中,筛选并纳入30名患者,随机分为两组,每组15人,分别纳入实验组和对照组。对照组仅接受常规的护理健康宣教,实验组在对照组的基础上接受每周一次基于心理资本的团体心理辅导,实验组和对照组每次时长均为2小时。8周干预结束后,比较两组干预前后的心理资本和生活质量得分,探究基于心理资本的团体心理辅导是否对提高地中海贫血患者的心理资本以及他们的生活质量有帮助。本研究发现:(1)地中海贫血患者的生活质量较健康人群偏低,且与其负性生活事件呈负相关,与心理资本、社会支持呈正相关。(2)心理资本在地中海贫血患者负性生活事件对生活质量的影响上起中介作用,领悟社会支持在地中海贫血患者负性生活事件对生活质量的影响上起调节作用。(3)基于心理资本的团体心理辅导能提高患者的心理资本水平,同时提高患者的生活质量。

关键词： β地中海贫血   iPSCs   造血分化   CRISPR-Cas9基因编辑  

摘要： 【目的】构建β地中海贫血β-i PSCs;鉴定稳定传代的β-i PSCs多能性、基因组稳定性以及体外造血分化能力;基于CRISPR-Cas9系统,建立用于β（A>T）修复的体外基因编辑体系。【方法】本课题利用仙台病毒载体转导ESCs中特异性表达的关键转录因子至β纯合突变重型β地中海贫血患者的PBMC,重编程获得非整合型β-i PSCs,无饲养层法传代培养使β-i PSCs体外增殖,RT-PCR法鉴定病毒载体残留情况;AP染色、TRA-1-60染色以及dd PCR染料法鉴定β-i PSCs多能性,G显带染色体核型分析鉴定β-i PSCs基因组稳定性;OP9细胞与β-i PSCs体外共培养诱导其向红系造血干细胞分化,流式细胞术检测培养细胞表面识别抗原,确认CD34红系造血干细胞;针对β突变位点修复的策略,在HBB第一外显子框下游52bp处设计4对sg RNA电转293T细胞进行筛选,并插入PX459、peg RNA载体构建目的质粒,通过脂质体转染293T细胞,鉴定HDR效率。【结果】体外重编程28天左右获得β-i PSCs,后续传代培养观察β-i PSCs可维持典型集落状态,在P18获得无病毒载体残留的β-i PSCs;β-i PSCs在传代培养中可维持干性,且具有正常二倍体核型（46,XY）;OP9细胞体外共培养后部分β-i PSCs分化为CD34细胞;通过RNP体系电转293T细胞筛选出高效切割的sg RNA序列,插入PX459载体构建目的质粒,转染至293T细胞中,检测HDR效率约为3.68%,此外根据sg RNA序列设计并构建peg RNA目的质粒,利用PE2系统转染至293T细胞中,HDR效率可达7.50%。【结论】本课题通过体外重编程成功构建了非整合型β-i PSCs,经过鉴定证实了β-i PSCs多能性、基因组稳定性以及体外造血分化能力,此外构建了修复β（A>T）的高效基因编辑体系,并初步检测了编辑效率,为后续基于β-i PSCs平台探索基因治疗的临床前研究提供了实验基础。

关键词： 单倍体相合   HLA全相合   造血干细胞移植   重型β地中海贫血   内分泌代谢疾病  

摘要： 目的:观察重型β地中海贫血患儿移植前、经不同供者来源的造血干细胞移植(HSCT)术后6个月内、1年内、2年内及2年以上的空腹血糖、空腹胰岛素、甲功三项、生长激素、骨钙素、甲状旁腺激素、血清钙磷离子水平变化情况,探讨HSCT对重型β地中海贫血患儿的内分泌功能有无影响,比较不同供者来源(单倍体相合、HLA全相合)的HSCT对重型β地中海贫血患儿的内分泌功能影响有无差异。为造血干细胞移植术后重型β地贫患者后期的随访及临床干预提供参考。 方法:根据纳入标准,选择2017年1月至2020年12月在广西医科大学第一附属医院行造血干细胞移植的重型β地中海贫血患者,根据供者来源的不同,分为单倍体组(25例,其中男15例,女10例,移植时年龄介于3-18岁,中位年龄8岁,移植后随访时长5-31月,中位随访时间12.96月);HLA全相合组(102例,其中男61例,女41例,移植时年龄介于2-17岁,中位年龄7岁,移植后随访时长5-51月,中位随访时间15.89月);选择相应年龄段确诊为重型β地中海贫血而未行移植的患者为未移植组(192例,其中男117例,女75例,年龄介于3-13岁,中位年龄7岁);选择相应年龄段的健康儿童为健康对照组(91例,其中男57例,女34例,年龄介于2-18岁,中位年龄10岁)。观察四组的空腹血糖、空腹胰岛素、甲功三项、生长激素、骨钙素、甲状旁腺激素、血清钙磷离子水平变化情况,运用倾向性评分匹配法(PSM)平衡各组的基线特征,比较四组的内分泌代谢指标水平有无差异;构建广义估计方程(GEE)模型分析单倍体组及全相合组移植前后不同时间段的内分泌代谢指标变化情况。 结果:1.倾向性评分匹配前,各个时间段内单倍体组、全相合组、未移植组及健康对照组的空腹血糖、空腹胰岛素、甲功三项、生长激素、骨钙素、甲状旁腺激素、血清钙离子水平的组间比较均存在显著性差异(P<0.05);四组的血清磷离子水平在移植前、移植后12-24月内、移植后24月以上的时间段内存在显著性差异(P<0.01)在移植后6月内、6-12月内组间对比无显著性差异(P>0.05)。2.经PSM平衡组间基线资料后,单倍体组、全相合组、未移植组及健康对照组的空腹血糖水平在移植前、移植后6月内、6-12月内其差异有统计学意义(P<0.01),在12-24月内其差异无统计学意义(P>0.05);匹配后各个时间段内四组的空腹胰岛素水平无显著性差异(P>0.05);匹配后四组的FT3水平在移植前其差异有统计学意义(P<0.01),在移植后6月内、6-12月内、12-24月内其差异无统计学意义(P>0.05);匹配后四组的FT4水平在移植前、移植后6月内其差异有统计学意义(P<0.05),在移植后6-12月内、12-24月内其差异无统计学意义(P>0.05);匹配后四组的TSH水平在移植前、移植后6-12月内其差异有统计学意义(P<0.05),在移植后6月内、12-24月内其差异无统计学意义(P>0.05);匹配后四组的生长激素水平在移植前、移植后6月内其差异有统计学意义(P<0.05),在移植后6-12月内、12-24月内其差异无统计学意义(P>0.05);匹配后四组的骨钙素水平在移植前、移植后6月内、6-12月内其差异有统计学意义(P<0.01),在移植后12-24月内其差异无统计学意义(P>0.05);匹配后各个时间段内四组的甲状旁腺激素水平无显著性差异(P>0.05);匹配后四组的血清钙离子水平在移植前、移植后6-12月内其差异有统计学意义(P<0.01),在移植后6月内、12-24月内其差异无统计学意义(P>0.05);匹配后四组的血清磷离子水平在移植前其差异有统计学意义(P<0.01),在移植后6月内、移植后6-12月内、12-24月内其差异无统计学意义(P>0.05)。***分析显示:(1)单倍体组与全相合组在移植前及移植后不同时间段内各项内分泌指标的组间对比无显著性差异(P>0.05)。(2)单倍体组移植前及移植后不同时间段的空腹血糖、空腹胰岛素、TSH、生长激素、甲状旁腺激素、血清钙磷离子水平组内对比存在显著性差异(P<0.05);在FT3、FT4及骨钙素水平的组内对比中无显著性差异(P>0.05)。(3)HLA全相合组移植前及移植后不同时间段的空腹血糖、空腹胰岛素、甲功三项、骨钙素、甲状旁腺激素、血清钙磷离子水平组内对比存在显著性差异(P<0.05);在生长激素水平的组内对比中无显著性差异(P>0.05)。 结论:1.单倍体相合与HLA全相合的HSCT对重型β地中海贫血患儿的空腹血糖、空腹胰岛素、甲功三项、生长激素、骨钙素、甲状旁腺激素、血清钙磷离子水平的影响组间对比无显著性差异。说明在对重型地贫患儿内分泌功能影响方面,行单倍体相合HSCT与行HLA全相合的H

关键词： 宜宾翠屏区   血细胞筛查   地中海贫血基因特征  

摘要： 目的:通过血细胞筛查及地中海贫血基因检测,了解宜宾翠屏区孕妇地中海贫血检出率以及基因特征;同时对该人群地中海贫血基因检测结果进行分析,为宜宾翠屏区孕妇的产前优生遗传咨询以及制定预防出生缺陷措施提供参考依据。方法:选择2015年2月-2019年6月期间在宜宾市第二人民医院产检的翠屏区孕妇,且血细胞分析中血红蛋白(hemoglobin,Hb)<110g/L,平均血红蛋白体积(mean corpuscular volume,MCV)<80fl,平均血红蛋白含量(mean corpuscular hemoglobin,MCH)<27pg 满足任意一项(即为血细胞筛查阳性)的孕妇6237例,应用Gap-PCR、PCR/寡核苷酸探针反向斑点杂交法对上述孕妇行地中海贫血基因检测,并分析其基因类型。结果:(1)6237例孕妇中,有2278例明确诊断为地中海贫血,检出率为36.52%,患者年龄18-42岁,平均年龄(28.25±1.14)岁;2278例地中海贫血(简称地贫)患者中,α-地贫患者1142例,占比50.13%,β-地贫患者935例,占比41.05%,α合并β地贫患者201例,占比8.82%。(2)在1142例α地中海贫血孕妇中,检出缺失型α地中海贫血SEA、α3.7、α4.2三种类型,属于中国人种较为常见的基因类型,检出基因类型与构成比分别为:--SEA患者619例,占比54.20%,-α3.7型患者343例,占比30.04%,-α4.2患者50例,占比4.38%。检出突变型α地中海贫血(Hb Constant Spring,Hb CS)、(Hb Westmead,Hb WS)、(Hb Quong Sze,Hb QS)三种类型,检出基因类型与构成比分别为:CS患者47例,占比4.11%,WS患者43例,占比3.77%,QS患者40例,占比3.50%。(3)在935例β地中海贫血孕妇中,检测结果显示出,CD41-42患者 356 例,占比 38.07%,CD17 患者 271 例,占比 28.98%,IVS-Ⅱ-654患者215例,占比23.00%,-28患者33例,占比3.53%,-29患者27例,占比2.89%,CD71-72患者21例,占比2.25%,CD27/28患者12例,占比 1.28%。(4)在201例α合并β地中海贫血孕妇中,检测结果显示出,α3.7合并CD41-42患者56例,占比27.86%,SEA合并CD41-42患者40例,占比19.90%,α3.7合并CD17患者36例,占比17.91%,SEA合并CD17合并IVS-Ⅱ-654 患者33例,占比16.42%,SEA合并CD17患者24例,占比 11.94%,,α4.2 合并 CD41-42 患者 9 例,占比 4.48%,WS 合并 CD41-42合并IVS-Ⅱ-654患者3例,占比1.49%。(5)在筛查中明确地中海贫血的血细胞分析检查结果显示,α地贫孕妇的 Hb、MCV、MCH 分别为(90.25±4.56)g/L、(76.35±3.56)fl、(21.58± 1.04)pg,β 地贫的 Hb、MCV、MCH 分别为(88.62±4.35)g/L、(74.15±3.58)fl、(22.34±1.16)pg,血细胞分析指标α地贫和β地贫组间对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)宜宾翠屏区孕妇地中海贫血检出率为36.52%,基因类型以α地贫为主。(2)α地中海贫血基因型以缺失为主,缺失型按照频率高低依次为--SEA/αα、-α3.7/αα、-α4.2/αα,突变型以CS携带为主,缺失型比例明显高于突变型,与国内其他大部分地区相同。(3)β地中海贫血主要以CD41-42、CD17、IVS-Ⅱ-654突变基因型最常见。(4)虽然地中海贫血患者全国各地的患病率存在明显差异,但宜宾翠屏区孕妇人群地中海贫血的基因突变类型与其他地区存在相似趋势。(5)血细胞分析指标在判别α地贫和β地贫之间无特异性。总结:宜宾翠屏区孕妇地贫基因阳性检出率较国内其他部分地区偏高,经由产前筛查能够有效避免重型地贫患儿的出生,对于地区内人群产前基因诊断以及提高人口素质具有重要价值;血细胞分析中红细胞参数属于地中海贫血检查前的重要筛查项目,但存在一定的局限性,经由Gap-PCR、PCR/寡核苷酸探针反向斑点杂交法能够快速且可靠的诊断孕妇地贫基因型,有助于控制重型地中海贫血后代的出生。