关键词： 缺铁性贫血   地中海贫血基因携带者   地中海贫血特质   红细胞指数   鉴别诊断  

摘要： 目的探讨红细胞指数用于鉴别缺铁性贫血(iron deficiency anemia,IDA)与地中海贫血特质(thalassemia trait,TT)患者的应用价值和最佳界值。方法选取2017年10月1日至2021年3月31日北京和睦家医院确诊为IDA或TT的中国患者40例。根据血常规结果,计算8种红细胞指数,分析其对于鉴别IDA或TT的灵敏度与特异度、约登指数,根据ROC探讨其在我国患者中的适合界值。结果40例患者中有22例IDA和18例TT。Jayabose、Green and King和Ricerca 3种红细胞指数用于鉴别IDA和TT的约登指数分别为0.667、0.667和0.682,ROC的AUC分别为0.990、0.995和0.992,均为十分可靠的指标。同时,Jayabose、Green and King和Ricerca 3种红细胞指数的最适合界值分别为251.69、79.56和3.91。调整界值后,Jayabose、Green and King和Ricerca 3种红细胞指数鉴别IDA和TT的准确率均提高至97.5%。结论含有红细胞分布宽度指标的红细胞指数对于鉴别我国小细胞低色素性贫血患者的病因具有很高的应用价值,值得临床推广。

关键词： 地中海贫血   缺铁性贫血   血常规检验   鉴别诊断   应用价值  

摘要： 目的 探讨在地中海贫血和缺铁性贫血诊断与鉴别诊断中血常规检验的应用效果.方法 抽取2018年12月～2021年12月本院收治的50例地中海贫血与50例缺铁性贫血患者,同时抽取以上时段在本院进行健康体检的受检者50例开展本次研究.以上三组参与研究的对象均开展血常规检验,分析相关资料,评价血常规检验在地中海贫血和缺铁性贫血诊断与鉴别诊断中的应用价值.结果 RBC(红细胞计数)、Hb(血红蛋白)、MCV(红细胞平均体积)、MCHC(红细胞平均血红蛋白浓度)、MCH(红细胞平均血红蛋白量)、SF(血清铁蛋白)相对

关键词： CRISPR-Cas9   基因编辑   造血干祖细胞   同源重组   地中海贫血   造血干细胞移植   基因治疗  

摘要： 基因编辑技术的飞速发展给造血干祖细胞基因治疗带来了新的机遇。CRISPR-Cas9等技术能够实现特定基因的定向编辑。基因编辑技术的不断优化使编辑效率显著提高,检测技术的进步也促进了对基因编辑细胞安全性的评估,包括检测脱靶效应和大片段删除突变。造血干祖细胞基因编辑已经进入临床试验阶段,但是目前的编辑技术可能会影响细胞功能和基因组稳定性,在临床应用中应当引起注意。这篇综述总结了基因编辑的技术原理、基因编辑技术在造血干祖细胞中的应用和基因治疗研究,并探讨了基因编辑产品的安全性提升方法和质控方案。

关键词： 血色病   血色病性骨关节病   铁过载   DNA测序方法   地中海贫血  

摘要： 背景和目的:血色病（hemochromatosis,HC）有原发性和继发性两大类,主要是通过体内的铁过载引起肝脏、胰腺、心脏、关节、肾等各组织器官铁的异常蓄积,进而导致器官发生功能或结构的改变。由于各类型的铁过载疾病表型广泛重叠,因此寻找铁过载的病因是一件不容易的事,而应用基因检测以确定患者的遗传背景尤其重要。本研究的主要目的是探讨一例反复出现血红蛋白尿并伴有骨关节损害及双下肢银屑病的血色病患者的遗传背景。资料与方法:本研究在10年前收治了一例以“反复排铁锈色样尿液10余年,左下肢疼痛伴活动受限半年”为主诉的61岁男性患者。首诊印象为“骨转移瘤或血液系统疾病”可能。患者入院后予完善血常规、尿常规、生化、贫血指标、溶血试验及肝脏、左膝关节磁共振成像（magnetic resonance imaging,MRI）等检查。在过去的10年间,建立在考虑原发性血色病或继发性血色病、血色病性骨关节病诊断基础上展开多轮基因检测。该患者起初是接受了多次的HFE和G6PD基因热点突变的Sanger检测,但一直没有阳性结果。近2年来还为患者进行了 2次第二代测序（next-generation sequencing,NGS）检测,但仍未发现责任基因突变位点。最后,本研究选择了一个针对地中海贫血突变方式的检测方法,即采用跨跃断裂位点-聚合酶链反应（gap-polymerase chain reaction,gap-PCR）方法检测地中海贫血基因常见突变点及3种α-珠蛋白基因缺失突变型（-α3.7,-α4.2,-SEA）。结果:患者表现有反复血红蛋白尿、左膝关节及以下疼痛肿胀、溶血性贫血、小细胞低色素性贫血、铁过载和黄疸。尿含铁血黄素试验（Rous试验）反复阳性。肝脏MRI显示肝脏弥漫性信号降低,为血色素沉着症;脾脏肿大、胆囊多发结石及双肾囊肿。左膝关节计算机断层扫描示胫骨骨髓腔扩大,骨皮质变薄。左膝MRI示左侧股骨、胫骨、腓骨及髌骨骨髓腔内广泛异常信号,左侧胫骨上段外侧骨髓腔内结节状病变。全身骨骼扫描见左胫骨上端点状放射性异常浓聚,四肢关节放射性对称性异常浓聚。骨髓涂片提示红系明显增生,以中幼红为多,核浆发育不平衡,双核及分裂型可见,成熟红细胞明显大小不等,部分偏大,球形红细胞3%泪滴形4%,不规则形5%,碎片形3%,可见嗜多色性红细胞及H-J小体;细胞外铁++,细胞内铁-19%,+45%,++28%,+++6%,环形铁粒幼2%。Sanger测序提示患者HFE基因的 ***282Tyr（C282Y）、***63Asp（H63D）及G6PD基因的***459His、***32Arg位点均为野生型。患者的一个未发病的女儿被检测出携带有HFE基因的H63D杂合型。然而,gap-PCR检测结果发现患者携带有α-珠蛋白基因的-α4.2,--SEA复合杂合缺失突变。这二种缺失突变型是东南亚α-地中海贫血常见病因,但引起如此严重广泛的非输血性继发性血色病性骨关节病并不多见。值得注意的是,本研究还新发现一个PIEZO1基因变体。患者被检测到存在PIEZO1（NM01142864）基因的错义突变 c.4748C>T（***1583Val）。结论:综上所述,结合患者病史与遗传诊断,考虑为α-地中海贫血、非输血性继发性血色病性骨关节病诊断。该患者携带有α-珠蛋白基因的-α4.2,--SEA二种缺失突变型,其PIEZO1错义突变位点c.4748C>T（***1583Val）是否参与该患者的致病过程仍需进一步的研究证实。对不同形式突变的基因检测,需要针对性地选择检测方法,而不是盲目选用高新测序方法,要建立在对疾病鉴别诊断基础上,如HC基因检测方法的选择仍需基于对该疾病临床表型的深入分析。

关键词： α-地中海贫血   氧化应激   临床异质性   转录组   miRNA  

摘要： 目的和意义:地中海贫血(地贫)是人类最常见的单基因遗传病之一。α-地贫发病率高,发病人群基数大,部分患者需要终身输血,且易继发出现并发症,严重影响患者的生活质量,给家庭及社会造成极大的经济负担,针对α-地贫的发病及临床异质性研究具有十分重要的意义。氧化应激水平失调是影响地贫发病临床症状严重程度的重要因素之一,本研究旨在通过RNA及mi RNA转录组测序方法探索与H-CS型α-地贫氧化应激相关的核心基因及mi RNA,为探索α-地贫及其他类型地贫的发生机制,寻找缓解及治疗地贫的有效途径提供依据。 方法:本研究采用高通量RNA转录组测序及mi RNA转录组测序的方法检测H-CS型α-地贫(H-CS组,n=6)和健康对照(N组,n=3)外周血有核红细胞样本转录组的变化,采用GO富集分析、KEGG富集分析等生物信息学分析方法对测序数据进行分析,采用RT-q PCR法对差异表达基因及mi RNA进行验证,探索差异表达基因及mi RNA在H-CS型α-地贫中潜在的功能。在细胞机制实验中,取H-CS型α-地贫患者及健康对照人群新鲜抗凝血,应用流式细胞术及比色法检测两组人群外周血ROS、MDA水平,探索H-CS型α-地贫患者氧化应激水平。以“oxidative”为关键词在“Gene Cards”数据库取得氧化应激相关基因集,与RNA测序所得的差异表达基因集相交集寻找可能的目标的基因,扩大人群样本量应用RT-q PCR的方法进行验证。利用生物信息学技术,预测mi RNA与靶基因的靶向关系,利用双荧光素酶实验对靶向关系进行验证,应用Western blot的方法检测过表达mi RNA后靶基因的蛋白水平;扩大人群样本,提取RNA后应用RT-q PCR的方法验证mi RNA在H-CS型α-地贫患者中的表达水平;在K562细胞中构建过表达与抑制表达mi RNA模型,应用流式细胞术检测ROS的水平,应用RT-q PCR的方法,检测mi RNA、靶基因及氧化应激相关标志性基因的表达水平。 结果:本研究总共筛选出差异表达基因1585个,差异mi RNA 358个。对差异基因联合“Gene Cards”数据库分析,发现8个明显与地贫发生发展相关的基因。GO富集分析显示,差异基因主要富集在细胞核、细胞质和核仁等细胞成分,参与了泛素结合、泛素样蛋白结合等分子功能。KEGG富集分析显示,差异基因主要富集在泛素介导的蛋白质水解、FOXO信号通路等方面。我们对差异显著的5个基因及7个mi RNA进行RT-q PCR临床标本验证,结果与测序数据中的表达变化趋势一致。流式细胞术实验结果显示,与健康对照人群相比,H-CS型α-地贫患者ROS水平上升;比色法实验结果显示,与健康对照人群相比,H-CS型α-地贫患者MDA表达水平较高;生物信息学分析可能参与调控H-CS型α-地贫氧化应激的基因有24个,其中FOXO3可能起重要作用;扩大人群样本量应用RT-q PCR方法验证结果显示,H-CS型α-地贫患者FOXO3基因表达明显增高。mi RNA的靶基因预测数据库预测显示,mi R-132-3P的编码区与FOXO3 3’UTR区域碱基互补;双荧光素酶报告基因实验显示mi R-132-3P和FOXO3基因存在靶向关系;Western blot实验显示mi R-132-3p能抑制FOXO3的蛋白表达;构建氧化应激模型,质粒转染后,RT-q PCR结果显示过表达及抑制mi R-132-3P均成功,FOXO3及CAT、SOD1的m RNA表达水平检验结果显示,过表达mi R-132-3P后,FOXO3及CAT、SOD1的m RNA表达水均下降,抑制mi R-132-3P后,FOXO3及CAT、SOD1的m RNA表达水均上调;流式细胞术结果显示,过表达mi R-132-3P后,K562细胞中ROS水平上升,抑制mi R-132-3P后,K562细胞中ROS水平下降。 结论:我们的研究初步探索了H-CS型α-地贫有核红细胞的转录组变化水平。根据测序分析结果我们推测:FOXO信号通路可能对H-CS型α-地贫的发病及临床表型具有一定的作用。H-CS型α-地贫患者红细胞内氧化应激水平增高,FOXO3的升高可能与H-CS型α-地贫患者氧化应激水平的调节存在一定的关系。mi R-132-3P可能通过mi R-132-3P/FOXO3轴影响氧化应激失调产物ROS以及活性氧清除酶SOD1和CAT的表达。

摘要： 广西是地中海贫血(以下简称"地贫")高发地区,据不完全统计,全区输血依赖型地贫大约有10万人,要治疗这一病症,每年所需费用高达数万元。为了尽可能救治地贫患儿,助力广西地贫防治工作,广西壮族自治区人民医院内科第二党支部在"我为群众办实事"实践活动中,发起了"关爱生命"地中海贫血救助行动,针对影响地贫患儿接受规范化诊治的痛点、难点,开展一系列救助活动。

关键词： 贫血   血液检查   地中海贫血   缺铁性贫血   巨幼红细胞贫血  

摘要： 目的：探讨血液检验在贫血临床诊断、鉴别中的价值。方法：选取我院健康体检者40例并将其纳为A组，选取我院贫血患者120例，其中地中海贫血、缺铁性贫血、巨幼红细胞贫血患者各40例，分别纳为B1组、B2组、B3组，开展研究，均予以血液检查，观察检查结果。结果：检查后，A组红细胞体积分布宽度（RDW）、红细胞（RBC）、血红蛋白（HB）、平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白含量（MCH）检查结果分别为（14.71±1.28）%、（4.31±1.68）×10～9/L、（124.35±19.98） g/L、（92.08±8.41）fL、（29.78±1.23）pg;B1组检查结果分别为（17.58±1.08）%、（6.28±0.87）×10～9/L、（102.50±14.28）g/L、（72.58±5.98）fL、（20.86±1.25）pg;B2组检查结果分别为（22.18±1.15）%、（5.14±0.63）10～9/L、（85.68±28.32）g/L、（75.82±6.89） fL、（24.21±2.98） pg;B3组检查结果分别为（19.05±3.82）%、（3.56±0.78）×10～9/L、（71.80±13.26） g/L、（114.25±7.38）fL、（35.87±7.58）pg。经对比，各组各项血液检查指标均存在一定差异，具有统计学意义（P<0.05）。结论：血液检验在贫血临床诊断、鉴别中的应用效果理想，可推广。

关键词： α地中海贫血   三维能量多普勒超声   早中孕期   胎盘血管化指数   静脉导管  

摘要： 目的:探讨三维能量多普勒超声监测早中孕期不同类型α地中海贫血胎儿胎盘血管化相关指数,并结合静脉导管血流参数,评估及预测胎儿α地中海贫血风险的临床价值。 方法:选择2020年8月至2021年8月在广西医科大学第一附属医院产前诊断中心就诊的夫妇双方均诊断为α地中海贫血基因携带者72例为实验组,夫妇双方均不携带α地中海贫血基因30例为对照组,两组中夫妇双方均不合并心肝肾等其他疾病。对实验组及对照组所有胎儿均行常规二维超声检查,了解胎儿生长发育情况。应用三维能量多普勒超声监测胎盘血管指数（VI）、血流指数（FI）、血管血流指数（VFI）,同时,测量胎儿静脉导管DV-S、DV-a、DV-PI。对72实验组胎儿均经绒毛膜或羊膜腔穿刺行α地中海贫血基因诊断。 结果:1、胎儿α地中海贫血基因诊断结果:重型α地中海贫血21例,中间型α地中海贫血12例,轻型α地中海贫血31例,无α地中海贫血8例。2、实验组和对照组间年龄、孕周差异均无统计学意义（P>0.05）。3、实验组中重型及中间型α地中海贫胎盘VI、FI、VFI及DV-S、DV-a显著高于轻型α地中海贫血组及对照组胎儿,DV-PI低于轻型α地中海贫血组及对照组胎儿,差异具有统计学意义（P<0.05）,重型与中间型α地中海贫血比较,胎盘VI、FI、VFI差异无统计学意义（P>0.05）。4、胎盘VI、FI、VFI与DV-S、DV-a均呈正相关关系（rs=0.255、rs=0.241、rs=0.304;rs=0.389、rs=0.297、rs=0.414,P均<0.05）,胎盘VI、FI、VFI与DV-PI呈负相关关系（rs=-0.413、rs=-0.312、rs=-0.438,P均<0.05）。5、胎盘VI、FI、VFI及DV-S、DV-a、DV-P均可以用于预测重型及中间型α地中海贫血胎儿风险,差异均有统计学意义（P<0.05）,ROC曲线下面积分别为0.903、0.770、0.923、0.765、0.784、0.737,胎盘血管化指数联合DV血流参数预测重型及中间型α地中海贫血胎儿灵敏度及特异度均较高。 结论:1、胎盘血管化指数VI、FI、VFI可作为预测重型及中间型α地中海贫血风险性一项新的非侵入性检查方法,是预测早中孕期胎儿贫血的可靠参数。2、胎盘VI、FI和VFI与DV-S、DV-a以及DV-PI均有一定相关性,二者联合可提高其预测重型及中间型α地中海贫血风险的灵敏度及特异度。

关键词： 地中海贫血   筛查情况   血红蛋白电泳  

摘要： 目的了解广州市育龄期夫妇α、β地中海贫血基因的携带情况, 为遗传咨询和产前基因诊断提供临床参考。方法选取2020年参加广州市免费产前筛查和诊断项目的夫妇39 928对, 采用平均红细胞体积、平均血红蛋白浓度指标作为初筛, 高效液相色谱法测定血红蛋白电泳进行复筛, Gap-PCR检测与PCR-反向斑点杂交(PCR reverse dot blot, PCR-RDB)用于确诊α、β地中海贫血。结果在筛查的39 928对夫妇中, 共检出地中海贫血阳性8459例, 发生率为10.59%。其中缺失型α地中海贫血5671例, 发生率为7.10%;非缺失型α地中海贫血253例, 发生率为0.32%;β地中海贫血2535例, 发生率为3.17%。结论广州市育龄期夫妇地中海贫血的发病率较高, 其中缺失型α地中海贫血最常见, 其次是β地中海贫血和非缺失型α地中海贫血, 符合广东地区地中海贫血的基因型分布特点。对于地中海贫血预防和控制, 应建立网络和广泛实施婚前和产前筛查, 以增加地中海贫血干预的可行性。

关键词： 地中海贫血   干细胞移植   异基因   单倍体   移植物抗宿主病   环磷酰胺   预防  

摘要： 目的:评价低剂量后置环磷酰胺(Low-dose Post-transplantation Cyclophosphamide,LD-PTCY)用于预防地中海贫血儿童造血干细胞移植后移植物抗宿主病(Graft-versus-host Disease,GVHD)的临床疗效和毒副作用,方法:回顾性分析38例重型地中海贫血(Thalassemia Major,TM)儿童接受异基因造血干细胞移植(Hematopoietic Stem Cell Transplantation,HSCT)后采用低剂量后置环磷酰胺方案(Cy 25mg/kg/d,+3d、+4d)预防移植后GVHD的临床资料,统计移植后患者血细胞植活时间、总生存(Overall Survival,OS)率、急性GVHD(Acute Graft-versus-host Disease,a GVHD)发生率及其受累器官、慢性GVHD(Chronic Graft-versus-host Disease,c GVHD)发生率及其受累器官、EB病毒激活率、巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)激活率、细菌/真菌/其他病原体感染率、粘膜炎、出血性膀胱炎发生率和其他并发症的发生情况等。结果:38例患者中位随访13.5个月(3-33个月),患者接受移植时中位年龄为5.5岁(年龄范围2-12岁),随访结束时所有患者均稳定植入,2年OS达92.1%,共3名患者死亡,移植相关死亡率为7.9%。II-IV度a GVHD和c GVHD发生率分别为23.7%和20%,其中III-IV度a GVHD发生率仅为10.5%,移植后细菌感染和真菌感染发生率分别为13.2%和5.3%。移植后100天EBV激活率为44.7%,CMV激活率为26.3%。38例患者中非亲缘移植30例,单倍体移植8例,非亲缘组和单倍体组a GVHD、III-IV度a GVHD发生率分别为23.3%vs.25%、10%vs.12.5%,两组c GVHD发生率分别为11.1%和50%,两组OS分别为90%和100%,Fisher确切概率法比较两组a GVHD、III-IV度a GVHD发生率显示差异无统计学意义(p>0.05),而亲缘单倍体组c GVHD发生率则高于非亲缘移植组,且差异具有统计学意义(p<0.05),log-rank分析显示两组OS差异无统计学意义(p>0.05)。结论:(1)LD-PTCY方案用于地中海贫血儿童造血干细胞移植后GVHD的预防安全有效。(2)在非亲缘移植和单倍体移植中,LD-PTCY方案显著减少了a GVHD的发生,特别是重度a GVHD的发生率,改善了地贫儿童单倍体和非亲缘移植的预后。(3)LD-PTCY应用不增加移植相关的病毒激活率,值得推广。