关键词： SH-2040型全自动琼脂糖凝胶电泳系统   新生儿、血红蛋白电泳、α地中海贫血、筛查、监测  

摘要： 目的:探讨应用国产SH-2040型全自动琼脂糖凝胶电泳系统筛查、监测新生儿α-地中海贫血的实用性。方法:采用国产SH—2040型全自动琼脂糖凝胶电泳系统对2826例新生儿脐血进行血红蛋白电泳、Bart含量测定,筛查α-地中海贫血;其中,34例标本与美国Helena公司SPIFE快速自动电泳分析系统作对照检测。结果:检出α-地中海贫血221例,其中:Bart胎儿水肿综合征3例,血红蛋白H病7例,静止型(α地贫2)82例,标准型(α地贫1)129例;34例标本与美国Heiena公司SPIFE快速自动电泳系统对照分析结果都符合。结论:应用国产SH-2040型全自动琼脂糖凝胶电泳系统筛查、监测新生儿α地中海贫血是可行的。

关键词： 早孕   胎盘厚度   重型α地中海贫血   胎儿   超声  

摘要： 目的:探讨早孕期超声测量胎盘厚度对评价胎儿重型α地贫风险性的价值。 方法:对实验组208例具有α地贫风险的早孕期胎儿和对照组52例正常胎儿行二维超声检查,测量胎盘厚度。所有实验组病例均经宫颈或经腹部取胎盘绒毛行α地贫基因诊断。胎盘厚度用中位数的倍数(multiples of the median , MOM)表示。 结果:早孕期重型α地贫胎儿胎盘厚度明显高于中间型α地贫、轻型α地贫和正常胎儿,差异有统计学意义(P<0.001,P<0.05);其他各组胎儿胎盘厚度两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。α地贫高危胎儿胎盘厚度提示重型α地贫风险性高的最佳临界点为1.18MOM。胎盘厚度>1.18MOM提示重型α地贫风险性高的灵敏度、特异度分别为82.9%,84.7%。 结论:超声测量早孕期胎盘厚度可作为早期评价重型α地贫风险性的一项非侵入性方法。对于有重型α地贫风险的胎儿,胎盘厚度是评价胎儿患重型α地贫风险性高低的一项安全、有效的指标,可以减少不必要的侵入性操作,提高重型α地贫胎儿检出率。

关键词： 异基因   造血干细胞移植   出血性膀胱炎   危险因素   儿童   β-地中海贫血  

摘要： 目的 异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)是目前治疗儿童恶性血液病,遗传性疾病及自身免疫性疾病的一种重要方法,在我国已经有30余年的历史。而β—地中海贫血作为儿童常见的一种遗传性疾病,异基因造血干细胞移植是目前根治此种疾病的唯一方法。异基因造血干细胞移植后的病人,其并发症有许多种,出血性膀胱炎(Hemorrhagic cystitis,HC)是其中常见之一,常增加病人的住院时间及费用、影响患者的生活质量、甚至影响肾功能、威胁到病人的生命。成人异基因造血干细胞移植后并发HC的报道比较多见。由于我国小儿造血干细胞移植的起步较晚,国内关于儿童恶性血液病及遗传性疾病等异基因造血干细胞移植并发HC的比较少见,关于儿童地中海贫血异基因造血干细胞移植后并发HC的研究报道更少。如何合理、有效的预防和治疗HC是影响移植成功与否以及病人长期生存质量的重要因素之一。本课题将对儿童重型地中海贫血患者行异基因造血干细胞移植后的临床资料进行分析整理,旨在探讨HC发生的危险因素及临床特征,以期为小儿重型地中海贫血并发HC的防治提供指导意义。 方法 对2000年4月至2009年12月在我科造血干细胞移植中心行造血干细胞移植的100例病例进行回顾性分析。100例儿童重型地贫患者基因型为纯合子或双重杂合子,其中男72例,女28例。Allo-PBSCT有33例(父母亲供者的3例,29例为无关供者,同胞供者1例。HLA全相合的30例),移植平均年龄7.07±2.18岁；Allo-BMT的有54例(同胞供髓的有29例,17例无关。HLA全相合的有43例),移植中位年龄6.08+2.66岁；Allo-BMT+Allo-CBT有13例(全部为HLA全相合的同胞供者),移植中位年龄5.66±1.46岁。 1、病例入选标准 未发生HC的病例,住院时间均超过2个月；发生HC的病例,不考虑2月内是否死亡均纳入分析；对于二次移植及三次移植的病人,每次开始再次移植时均作为一个新的独立个体纳入观察。 2、预处理方案 按移植类型不同,预处理方案以马法兰(Bu)+环磷酰胺(Cy)为主。在此基础上加用氟达拉滨(Flud)或者全身放疗(TBI)或塞替哌(TT)。另外,第二次移植的预处理方案为：全身放疗(TBI)+环磷酰胺(Cy),第三次移植常见为输注供者淋巴细胞(DLI)。 使用口服Bu的共47例,用量为8-24mg/kg(年龄小于5岁用量为≥16mg/kg,大于5岁用量为<16mg/kg),分4次口服；静脉使用BU的共49例,量为2.8mg/kg/d～4.4mg/kg/d,根据年龄及代谢情况调整剂量。Cy用量为120mg～200 mg/kg/d,分2天应用；TBI总剂量为6～8Gy,剂量率为6.5～7cGy/min,晶状体屏蔽,肺屏蔽至总量<6.5Gy, Flud用量为30～40mg/m2·d×5d,移植的-17d～-15d开始应用。二次移植用量为Cy (60mg/kg·d×2d)+TBI(3Gy)。 3、移植物抗宿主病的(GVHD)分级、分度及防治 aGVHD根据皮疹形态及受累面积、胃肠道和肝脏损害进行分级,分Ⅳ级。2001年以前移植患者采用抗人胸腺或抗淋巴细胞免疫球蛋白(ATG)+环抱菌素A(CsA)+甲氨喋吟(MTX),2001年后改用ATG+CsA+霉酚酸酯(MMF),无关供者移植采用ATG+CsA(或者普乐可复,FK-506)+麦考酚酸酯(MMF)+MTX。CsA在移植前一天开始维持24小时静脉注射,监测血药浓度维持在150～250ug／L之间；MTX在1、3、6、11天应用,剂量分别为15mg/m2,10 mg/m2,10mg/m2,10mg/m2, FK-506血药浓度控制在10～25ug／L之间。CsA及FK-506在正常进食后改口服应用。MMF在移植后第一天开始按0.5g～1.0g／d口服。 4、巨细胞病毒的监测及其治疗 (1)预处理前,无论是否存在巨细胞病毒感染均给予更昔洛韦静滴(2)移植后,中性粒细胞>0.5×109／L时,行巨细胞病毒定量(HCMV-DNA)监测,据血象、病毒拷贝数、血尿情况考虑是否行抗病毒治疗。 5、其它并发症的预防 肝静脉闭塞病的预防：移植后第1天开始静脉应用肝素钠(100-150U／kg)、质脂体前列腺素E 10-30ug／d及口服熊去氧胆酸。监测凝血功能,若无显著肝静脉闭塞病(HVOD)表现则在移植后20天停药。监测凝血项,在APTT>50秒时减量使用,在全身有出血倾向时停用。 霉菌预防：在+6d给予伊曲康唑按10mg/kg/d静滴,+7d改为5mg/kg/d静脉使用。 感染预防：

关键词： 广西   壮族   β-地中海贫血  

摘要： β-地中海贫血是我国常见的遗传性病之一,其发病特征可能存在种族和地域的差异性.本文分析探讨了β-地中海贫血的基因分子基础,并对广西壮族自治区该病常见的基因类型:CD41/42、IVS-Ⅱ654、CD17、TATA-28、CD71/72、TATA-29以及HLA-DQB1基因组和CR1基因组的研究进行了综述.

关键词： 基因歧视   携带者   地中海贫血   小谢   体检标准  

摘要： 2009年4月,小周、小谢、小唐通过了佛山市的公务员考试。在之后的体检中,他们被认定为"地中海贫血"基因携带者,体检不合格。他们因此失去了被录用为公务员的机会。为此,他们提出行政复议申请。

关键词： 自发突变   Hb H病   α2-珠蛋白基因   移码突变  

摘要： 背景与目的 遗传性血红蛋白病是世界上最常见的人类单基因遗传病之一,其中α-地中海贫血(a-thalassemia,α-地贫)和β-地中海贫血(β-thalassemia,β-地贫)为遗传性血红蛋白病的主要类型,地理分布主要在全球的热带与亚热带地区。α-地贫以α-珠蛋白基因大片段缺失为主,非缺失型α-地贫较少见;β-地贫主要是由于β-珠蛋白基因(HBB)发生突变所致,β-地贫的大片段缺失也较少见;另外,在α-地贫与β-地贫的一些不常见的病例中可有罕见的自发改变,包括少数α-珠蛋白基因的自发缺失,特别是导致的伴α-地中海贫血智力低下综合征(ATR-16综合征),以及一些发生在不同人群β-珠蛋白基因上的自发突变。 α地贫是一组以珠蛋白合成减少,α-链／非α-链比例失衡为特征的遗传性溶血性血红蛋白病,是发生于包括中国南方在内的世界上最常见的一类对人类健康影响最大的单基因遗传病之一,全国90万人的流行病学调查得出的总发病率为2.64%,其中广东省的发病率为4.11%。 Hb H病是一种中间型α-地贫的类型,流行于东南亚地区及中国南部;患者由于三个α-珠蛋白基因缺失或缺陷,导致α-珠蛋白肽链的合成速率的明显降低,过剩的β珠蛋白肽链形成β4四聚体-Hb H,并在红细胞内形成Hb H包涵体,引起慢性溶血性贫血。东南亚地区Hb H病主要由于缺失型α-地贫如(--SEA)缺失型α-地贫与缺失型α+-地贫如-α3.7缺失型或-α4.2缺失型,或与非缺失型α+-地贫如HbConstant Spring组合而成。只有Waye JS等首次报道过整个ζ-α-珠蛋白基因簇的自发缺失复合-α3.7缺失所导致的Hb H病。 在本研究中,我们鉴定了一种α2-珠蛋白基因的自发移码突变复合(--SEA)缺失型α-地中海贫血所导致Hb H病。我们探讨了基因型／血液学表型与α-地贫包括引起Hb H病的自发突变之间关系,在家系分析的基础上,通过实时荧光定量反转录PCR技术,我们在mRNA水平上分析了这一新突变对基因转录效应的影响。我们在PubMed上进行文献检索后,发现这是首次报道人α-珠蛋白基因的单个基因自发缺失突变复合(--SEA)缺失型α-地中海贫血所导致的Hb H病。材料与方法 研究对象 先证者,为一名2岁的男孩,来自于中国南方广西省桂林市,其父母无亲缘关系;顺产,出生时体重为3650g;出生时无黄疸,无明显的生长发育迟缓;6月大时,家人注意到其面色苍白;1岁时,先证者表现出如下临床和血液学表型而首次被诊断为Hb H病：轻度肝肿大;实验室检查示小细胞低色素贫血,血红蛋白(Hb)8.0 g／dL,平均红细胞体积(MCV)56.3fL,平均红细胞血红蛋白量(MCH)17.8 pg;血红蛋白电泳显示Hb H带,铁缺乏被排除。 接下来的1年里,先证者的贫血未恶化,且未接受输血治疗,当先证者2岁的时候,对先证者进行基因检测以确诊。在签署知情同意书后,我们抽取先证者及其4位家庭成员外周血标本进行此次研究,外周血以EDTA抗凝。血液学方法 红细胞参数分析(血常规)采用全自动血细胞计数仪(Model Sysmex F-820;Sysmex Co Ltd, Kobe, Japan)进行检测,血红蛋白定量检测采用毛细管电泳法(Capillarys, Sebia, Montpellier, France)。 DNA分析 基因组DNA的提取采用酚／氯仿方法。Gap-PCR技术和反向点杂交技术分别用于检测中国人常见α-地中海贫血缺失和6种α-地中海贫血点突变(αcd30α／,αcd31α／,αcd59α／,αQSα／,αCSα／和αWSα／)的诊断,这9种突变占到已知中国人α地贫突变的98%。11种中国人常见β-地中海贫血突变的分析采用反向点杂交方法。我们进行了直接α1和α2珠蛋白基因的测序(α1 andα2, GenBank Accession NG00006)来鉴定未知的突变。为了排除α2-珠蛋白基因自发点突变体细胞嵌合的可能性,我们将先证者淋巴细胞、毛发及口腔粘膜剥脱细胞来源的DNA分别进行α2-珠蛋白基因的测序。我们还进行了亲子鉴定以排除非自发突变的可能。 RNA分析 为了评价α-地贫自发突变对α-珠蛋白mRNA表达水平的影响,我们设计了实时荧光定量反转录PCR实验,采用基于双标准曲线法的定量分析,我们对该家系的先证者(Hb H病),先证者母亲(--SEA缺失型α-地贫携带者),正常人的α-珠蛋白mRNA进行了基因表达水平检测,每种样品均进行4次独立的重复测定。 结果 血液学分析结果 先证者(Ⅲ：1)表现为Hb H病的表型,具有小细胞低色素贫血(Hb 8.4 g/dL, MCV 60.7 fL and MCH 15.9 pg), Hb H和HbBart’s升高分别为3.2%和5.4%

关键词： 重型β地中海贫血   铁超负荷   生长发育   儿童  

摘要： 目的探讨铁超负荷对重型β地中海贫血患儿生长发育的影响。方法对定期在我院输血的42例重型β地中海贫血患儿进行身高、体重、血红蛋白、血清铁蛋白测定,并与正常组比较。结果地贫组的身高、体重、Hb低于正常组,血清铁蛋白高于正常组。结论重型β地中海贫血患儿的生长发育落后与长期贫血及铁超负荷有关。

关键词： 脊髓性肌萎缩   β地中海贫血   多重链置换扩增   植入前诊断   等位基因特异性PCR   反向斑点杂交  

摘要： β地中海贫血和脊髓性肌萎缩是两种常见的单基因遗传病。其中β地中海贫血是是我国南方常见的一种常染色体隐性遗传、血红蛋白异常性疾病,携带率约为2.8%。该病由于珠蛋白基因缺失或突变导致。β珠蛋白基因簇位于人11号染色体上,包含5个功能基因和1个假基因,这些基因的突变导致血红蛋白合成异常而发病。全世界约发现200多种突变,我国大约有28种突变。地贫基因的突变会导致贫血及后续的器官损害,严重危害人的生命。SMA是一种常见的致死性常染色体隐性遗传性疾病,其发病率约1/6000-1/10000。人群携带率约1/40-1/50。染色体5q13的脊髓性肌萎缩运动神经元生存基因(survival motor neuron gene 1, smn1)的缺失是导致SMA发病的主要病因。Smn1基因的突变使脊髓运动神经元退变而导致肌无力和肌萎缩,由于肌肉渐进性的退化,患者走路、爬行、吞咽、甚至呼吸等功能都会逐渐丧失,常因呼吸衰竭而死亡。上面两种疾病至今仍缺乏有效的治疗方法。现在一般使用产前诊断的方法来减少患儿的出生。然而,产前诊断需要终止妊娠,给孕妇及家庭带来巨大的伤害。 胚胎植入前诊断(preimplantation genetic diagnosis, PGD)是一种基于试管婴儿的技术发展起来的不同于产前诊断的诊断方法。PGD通过对体外授精形成胚胎进行细胞活检,使用PCR或者荧光原位杂交等技术,进行遗传病的诊断,根据结果移植合适的胚胎到宫腔中的一种技术,这种技术可以避免产前诊断所需要的终止妊娠。根据欧洲人类生殖与胚胎协会PGD分会的统计,目前全世界实行PGD周期总数超过20,000例,成功分娩6,000多个健康胎儿。为许多患者夫妇带来了希望。 已经有许多对β地中海贫血和SMA进行植入前诊断的报道。如通过使用单链构象多态性、变性梯度凝胶电泳、荧光PCR(Fluorescence PCR, F-PCR)、巢式PCR、连锁分析结合微小测序等方法进行β地中海贫血的单细胞诊断和植入前诊断;通过限制性酶切、等位基因特异性PCR(allele-specific PCR, AS-PCR)、荧光PCR(Fluorescence PCR, F-PCR)、微小测序等方法进行SMA的植入前诊断。然而上述的方法都基于单细胞诊断技术,因此具有一些缺点,如只能同时扩增少量基因位点、样本不能保留、每种反应体系都需要进行优化、高等位基因脱扣率(allele drop out, ADO)等。 为了解决这个问题,全基因组扩增技术(whole genome amplication, WGA)用于扩增单细胞全基因组DNA已经引入到PGD之中。WGA的方法有许多种,如引物延伸预扩增聚合酶链反应(primer extension preamplification PCR, PEP-PCR),简并寡核苷酸引物聚合酶链反应(degenerate oligonucleotide primed PCR, DOP-PCR),多重链置换扩增(multiple displacement amplification, MDA)等。PEP-PCR和DOP-PCR都是基于PCR为基础的,因此其具有基因组覆盖不完全高ADO率、扩增片段短不适用于需要高质量模板的后续基因分析方法等缺点。MDA是目前为止最好的WGA方法。其最早由Lizardi博士建立,主要基于Phi29 DNA聚合酶的恒温链置换扩增原理,具有恒温扩增、扩增片段长、基因组覆盖度高等优点。 研究目的: 本研究通过使用AS-PCR、微卫星分析、反向斑点杂交(reverse dot blot, RDB)比较不同MDA孵育时间对扩增成功率、ADO率影响,优化MDA的孵育时间。同时通过结合MDA、AS-PCR,微卫星分析对单细胞进行SMA诊断;结合MDA、RDB对β地中海贫血进行诊断,建立结合MDA对单细胞进行SMA和β地中海贫血诊断的方法,为日后建立SMA、β地中海贫血的植入前诊断平台打下基础。 材料: 取本研究所建立的5株成纤维细胞系做为研究材料。其中,有两株smn1基因纯合缺失成纤维细胞(S1和S2);1株β41-42/β17双重杂合突变β地中海贫血成纤维细胞(TH1);1株β41-42/β41-42纯合突变β地中海贫血成纤维细胞(TH2);1株正常人包皮成纤维细胞(N1)。这些细胞的突变类型均事先通过基因检测明确诊断。共取得49个单个成纤维细胞。其中包括13个TH1单个成纤维细胞,10个TH2单个成纤维细胞,8个S1单个成纤维细胞,10个S2单个成纤维细胞。8个N1单个成纤维细胞。 方法: 1.单个细胞制备 2.将细胞分为16小时孵育组和4小时孵育组进行单细胞MDA扩增 3.应用AS-PCR对MDA产物进行smn1和smn2基因的检测 4.应用单重荧光P

关键词： 超声   地中海贫血   产前筛查   Logistic回归  

摘要： 目的探讨多个超声检测指标对中孕期产前筛查地中海贫血(地贫)的价值。方法对120例地贫基因诊断为地贫的孕12～28周单胎孕妇(地贫组)行二维超声检查,测量胎儿双顶径(BPD)、心胸比值(HCR)、脐动脉、脐静脉内径等多项指标,选择同期141例正常胎儿为对照组,比较两组间胎儿超声检测指标,并行多因素Logistic回归分析。结果地贫组胎儿中孕期超声测量指标如BPD、HCR、脐动脉、静脉内径等均明显高于对照组胎儿,差异有统计学意义(P<0.05)。HCR、脐动、静脉内径比值等指标入选筛查地贫的Logistic回归方程。超声多项指标联合应用对中孕期地贫筛查的判对率为91.6%,总符合率为74.03%。结论超声测量指标多项联合应用可明显提高地贫的筛查率。

关键词： 中国   基因歧视   第一案   China   佛山市   区人民法院   公务员考试   地中海贫血   社会保障   人力资源   开庭审理   广东省   体检   诉讼   留言   考生   法庭   禅城   编辑  

摘要： [编辑留言]2010年2月,广东省佛山市禅城区人民法院开庭审理了一起特别诉讼:2009年佛山市公务员考试体检中,有31名考生因为带有地中海贫血基因而被淘汰,其中3人将佛山市人力资源和社会保障局告上法庭.此案被称为'中国基因歧视第一案'.