关键词： 遗传性球形红细胞增多症   β地中海贫血   溶血性贫血   鉴别诊断  

摘要： 目的:对3例溶血性贫血疑难病例进行鉴别诊断。方法:柱层析法定量测定血红蛋白A2(HbA2),国际血液学标准化委员会(ISCH)推荐速率法测定红细胞葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)和丙酮酸激酶(PK),梯度凝胶电泳分析红细胞膜血影蛋白,其他溶血试验按常规方法操作。同期进行家系调查。结果:3例患者外周血并存浅染靶形红细胞和浓染球形红细胞,红细胞渗透脆性试验(OFT)初始溶血Nacl浓度和酸化甘油溶血试验(AGLT50)均为阴性,3例患者的HbA2和2例患者的抗碱血红蛋白(HbF)增高。3例患者的双亲一方为遗传性球形红细胞增多症(HS)指标异常,另一方为β地中海贫血(βTh)。结论:3例患者均并存HS和βTh。HS和βTh并存时会明显干扰溶血试验特别是红细胞膜病的实验指标,这种情况必须特别注意血象提示和形态学提示,并进行溶血系统分析和家系调查。

关键词： αβ复合型地中海贫血   复合率   基因型  

摘要： 目的：研究云南省德宏州αβ复合型地中海贫血的检出率、基因型及临床表现。方法：采用反向斑点杂交法（RDB）诊断为β地中海贫血173例,再进一步采用GAP-PCR琼脂糖凝胶电泳检测常见三种α地中海贫血基因缺失类型;结果：在173例β地中海贫血患者标本中检出30例α地中海贫血缺失型,即αβ复合型地中海贫血检出率为17.34%;结论：云南省德宏州αβ复合型地中海贫血检出率高于广东地区。

关键词： 自发突变复合   Hb H病   α2-珠蛋白基因   移码突变  

摘要： 背景与目的\n 遗传性血红蛋白病是世界上最常见的人类单基因遗传病之一,其中α-地中海贫血(α-thalassemia,α-地贫)和β-地中海贫血(β-thalassemia,β-地贫)为遗传性血红蛋白病的主要类型,地理分布主要在全球的热带与亚热带地区。α-地贫以α-珠蛋白基因大片段缺失为主,非缺失型α-地贫较少见; β-地贫主要是由于β-珠蛋白基因(HBB)发生突变所致,β-地贫的大片段缺失也较少见；另外,在α-地贫与β-地贫的一些不常见的病例中可有罕见的自发改变,包括少数α-珠蛋白基因的自发缺失,特别是导致的伴α-地中海贫血智力低下综合征(ATR-16综合征),以及一些发生在不同人群β-珠蛋白基因上的自发突变。\n α地贫是一组以珠蛋白合成减少,α-链／非α-链比例失衡为特征的遗传性溶血性血红蛋白病,是发生于包括中国南方在内的世界上最常见的一类对人类健康影响最大的单基因遗传病之一,全国90万人的流行病学调查得出的总发病率为2.64％,其中广东省的发病率为4.11％。\n Hb H病是一种中间型α-地贫的类型,流行于东南亚地区及中国南部；患者由于三个α-珠蛋白基因缺失或缺陷,导致α-珠蛋白肽链的合成速率的明显降低,过剩的β珠蛋白肽链形成β4四聚体-Hb H,并在红细胞内形成Hb H包涵体,引起慢性溶血性贫血。东南亚地区Hb H病主要由于缺失型α0-地贫如(-SEA)缺失型α-地贫与缺失型α+-地贫如-α3.7缺失型或-α4.2缺失型,或与非缺失型α+-地贫如HbConstant Spring组合而成。只有Waye JS等首次报道过整个ζ-α-珠蛋白基因簇的自发缺失复合-α3.7缺失所导致的Hb H病。\n 在本研究中,我们鉴定了一种α2-珠蛋白基因的自发移码突变复合(-SEA)缺失型α-地中海贫血所导致Hb H病。我们探讨了基因型／血液学表型与α-地贫包括引起Hb H病的自发突变之间关系,在家系分析的基础上,通过实时荧光定量反转录PCR技术,我们在mRNA水平上分析了这一新突变对基因转录效应的影响。我们在PubMed上进行文献检索后,发现这是首次报道人α-珠蛋白基因的单个基因自发缺失突变复合(-SEA)缺失型α-地中海贫血所导致的Hb H病。\n 材料与方法\n 研究对象\n 先证者,为一名2岁的男孩,来自于中国南方广西壮族自治区桂林市,其父母无亲缘关系；顺产,出生时体重为3650g; 出生时无黄疸,无明显的生长发育迟缓； 6月大时,家人注意到其面色苍白; 1岁时,先证者表现出如下临床和血液学表型而首次被诊断为Hb H病:轻度肝肿大；实验室检查示小细胞低色素贫血,血红蛋白(Hb)8.0／dL,平均红细胞体积(MCV)56.3fL,平均红细胞血红蛋白量(MCH)17.8 Pg; 血红蛋白电泳显示Hb H带,铁缺乏被排除。\n 接下来的1年里,先证者的贫血未恶化,且未接受输血治疗,当先证者2岁的时候,对先证者进行基因检测以确诊。在签署知情同意书后,我们抽取先证者及其4位家庭成员外周血标本进行此次研究,外周血以EDTA抗凝。\n 血液学方法\n 红细胞参数分析(血常规)采用全自动血细胞计数仪(Model Sysmex F-820；Sysmex Co Ltd,Kobe,Japan)进行检测,血红蛋白定量检测采用毛细管电泳法(Capillarys,Sebia,Montpellier,France)。\n DNA分析\n 基因组DNA的提取采用酚／氯仿方法。Gap-PCR技术和反向点杂交技术分别用于检测中国人常见α-地中海贫血缺失和6种α-地中海贫血点突变(αcd30α,acd31α／,αcd59α／,αQSα／,αCSα／和αWSα／)的诊断,这9种突变占到已知中国人α地贫突变的98％。11种中国人常见β-地中海贫血突变的分析采用反向点杂交方法。我们进行了直接α1和α2珠蛋白基因的测序(α1 and α2,GenBank Accession NG＿000006)来鉴定未知的突变。为了排除α2-珠蛋白基因自发点突变体细胞嵌合的可能性,我们将先证者淋巴细胞、毛发及口腔粘膜剥脱细胞来源的DNA分别进行α2-珠蛋白基因的测序。我们还进行了亲子鉴定以排除非自发突变的可能。\n RNA分析\n 为了评价α-地贫自发突变对α-珠蛋白mRNA表达水平的影响,我们设计了实时荧光定量反转录PCR实验,采用基于双标准曲线法的定量分析,我们对该家系的先证者(Hb H病),先证者母亲(-SEA缺失型α-地贫携带者),正常人的α-珠蛋白mRNA进行了基因表达水平检测,每种样品均进行4次独立的重复测定。\n 结果\n 血液学分析结果\n 先证者(Ⅲ:1)表现为Hb

关键词： 血红蛋白病   分子流行病学调查   地中海贫血  

摘要： 背景与目的\n 血红蛋白病是一组常染色体隐性遗传病,可分为地中海贫血和异常血红蛋白两类。地中海贫血的特征是珠蛋白肽链的合成减少；异常血红蛋白表现为珠蛋白肽链结构异常。\n 本研究的主要目的是阐明血红蛋白病在广西地区的流行率以及不同基因型地贫共同遗传的方式。我们采用基因型和血液学表型相结合的分析方法,系统分析了来自广西6个地区5789份样本的α-、β-和δ-珠蛋白基因,确定了血红蛋白病在广西地区的携带率和突变谱,并评估了血红蛋白病在广西不同地区与民族中的分布特点。此外,检测过程中,我们首次发现并报道了6例α-或δ-地贫新突变,以及2例在中国首次报道的δ-珠蛋白基因突变。\n 材料与方法\n 1.人群样本:根据广西地区人口分布及民族构成,共采集了广西6个地区中12所中小学校的5789例广西籍中小学生(男2841,女2948)的外周血样本。汉族、壮族和瑶族样本数的比例分别为58.1％、28.8％和10.7％,其它少数民族样本占总样本数的2。4％。\n 2.血液学分析:对所有样本进行了血常规和血红蛋白组成分析。根据血液学指标分析结果,进一步筛查标准型α-地贫、β-地贫、δ-地贫和异常血红蛋白的基因型。进行标准型α-地贫分子筛查的血液学指标是:MCV<80 fL,MCH<27 pg,Hb A2<3.5％；β-地贫进行分子筛查的血液学指标是:①MCV<80 fL,MCH<27 pg和Hb A2>3.5％；②表现出Hb E电泳带；③Hb F>5.0％。δ-地贫进行分子筛查的血液学指标是:①Hb A2<2.0％；②2.0％<Hb A2<4.0％,MCV<80fL,MCH<27 pg；异常血红蛋白进行分子筛查的表型指标是:醋酸纤维膜电泳可见异常血红蛋白电泳带。\n 3.分子分析:用酚／氯仿方法提取基因组DNA。采用Gap-PCR技术、反向点杂交(RDB)技术检测常见α-地贫缺失突变和点突变；采用反向点杂交(RDB)技术检测常见β-地贫点突变；用变性高效液相色谱技术(DHPLC)检测δ-地贫突变。采用多重连接酶探针扩增反应(MLPA)技术或DNA测序技术检测少见及未知的α-和β-珠蛋白基因缺失突变或点突变。所有β-地贫阳性的样本均检测了α-地贫常见点突变和缺失突变。所有δ-地贫阳性的样本均检测了α-地贫常见点突变和缺失突变及β-地贫常见点突变。异常血红蛋白带的所有样品,均按照条带的位置,分别进行了α-、β-和δ-和珠蛋白基因链的基因测序分析。采用Real-time PCR技术对新发现的α2珠蛋白基因突变进行功能分析。采用基于PCR的限制性片段长度多态性(RFLP)技术对δ-地贫新突变进行β-珠蛋白基因簇单倍型分析。\n 4.统计学分析:当前人口和预计将来重型和中间型地贫出生人口的统计源数据来自于“广西壮族自治区计划生育人口通报”。使用统计软件SPSS13.0,采用Pearsonx2检验的方法比较不同民族和不同地区之间的地贫基因携带率,采用x2分割法将不同民族与地区间地贫携带率进行多重比较。采用两独立样本t检验方法比较新突变基因和正常基因对α-珠蛋白基因mRNA水平的影响。用Hardy-berg平衡公式,计算不同地贫等位基因频率和杂合子频率,判断该调查群体是否处于Hardy-berg平衡。\n 结果\n 血红蛋白病的人群发病率\n 本研究总结并分析了1016个α-地贫等位基因和372个β-地贫等位基因的分子特点和及在不同民族和地区中的分布规律。在α-和β-地贫基因中,6个最常见的α-地贫突变和8个最常见的β-地贫突变分别占α和β珠蛋白肽链突变的98.9％和98.1％。汉族、壮族及瑶族的α-地贫和β-地贫的突变携带率分别为:15.71％(528／3361)和6.43％(261／3361)、20.12％(336／1670)和7.01％(117／1670)、20.84％(129／619)和5.17％(32／619),统计学分析发现α-地贫在汉族和壮族之间、汉族和瑶族之间的携带率存在显著性差异(P<0.0001),而在壮族和瑶族之间没有显著性差异(P>0.05)。β-地贫携带率在三个民族之间的没有显著性差异。同时,我们分析了α-和β-地贫的发病率在广西6个地区的分布特点。结果显示,仅百色和贺州两地区的α-地贫突变携带率比其它4个地区的α-地贫突变携带率要高(P<0.05),α-地贫突变携带率在其它地区及β-地贫突变携带率在各地区之间均没有显著件差异(P>0.05)。因在本研究中,只发现了9例δ-地贫,我们没有在不同民族和地区之间进行比较分析。根据检测的结果,我们认为δ-130(A→G)和-77(T→C)

关键词： 地中海贫血   肝纤维化   生物标志物   成人  

摘要： 目的观察成人轻型地中海贫血患者肝纤维化4项标志物含量的变化。方法经基因分型诊断为轻度地贫患者67例,其中α-地贫46例,β-地贫21例,采用放射免疫法(RIA)检测血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)和层粘连蛋白(LN)的水平,并与健康对照组26例作比较。结果地贫组、β-地贫组、α-地贫组的HA、PCⅢ和LN水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);但CⅣ明显高于对照组(P<0.05)。地贫组与α-地贫组的CIV异常例数显著高于对照组(P<0.05)。结论轻型地中海患者的单项肝纤维化标志物异常的发生率较高,提示轻型地中海患者可能有轻微肝功能紊乱,在健康评估时应予考虑。

关键词： 血红蛋白病   血红蛋白电泳   地中海贫血  

摘要： 目的了解柳州地区血红蛋白病的检出率及类型。方法采用醋酸纤维素薄膜电泳法,对1500例患者进行血红蛋白电泳分析。结果在1500例患者中,检出血红蛋白病516例,检出率为34.4%,其中α-地贫135例,占26.1%,β-地贫312例,占60.4%,异常Hb69例,占13.5%。结论本地区血红蛋白病的检出率高。血红蛋白电泳技术的普及和应用,对开展婚前检查和产前检查,降低本地区血红蛋白病的发病率,指导优生优育具有极为重要的意义。

关键词： α-地中海贫血   基因频率   流行病学   分子  

摘要： 【目的】分析中山市户籍人群中α-地中海贫血的分子流行病学特征,为有效预防提供参考依据。【方法】以分层抽样采集2500例中山市户籍新生儿脐血,用HPCE测定HbBart's作为诊断α-地贫的阳性参考指标,对阳性样品用gap-PCR和RDB法进行α-地贫基因分型,并在所有被检样品中进行两种常见静止型α-地贫基因(-α3.7/和-α4.2/)的分子筛查。对未知突变进行PCR产物直接测序法、MLPA及家系表型分析等。【结果】在2500例脐带血样本中,经基因检测,255例被确诊为α-地贫基因型(含258个突变等位基因)。检出HbBart's阳性样品183例,有83例α3.7/αα、α4.2/αα和2例-SEA/αα基因携带者检出自HbBart's阴性样品中。中山市户籍人群中α-地贫基因携带率为10.32%(258/2500);4种已知α-地贫基因的构成比依次为54.65%(-SEA/)、33.33%(α3.7/)、11.24%(α4.2/)和0.78%(αCSα/)。【结论】中山市户籍人群中α-地贫基因携带率高,检出4种基因突变类型(-SEA/、-α3.7/、-α4.2/和αCSα/),以-SEA/为主,开展α-地贫的预防工作具有重要意义。

关键词： α-地中海贫血   实验室诊断   筛查法   基因诊断  

摘要： 地中海贫血(thalassaemias),是由于某类珠蛋白合成受抑制所引起的溶血性贫血,但并不涉及血红蛋白结构的异常。是人类最常见的单基因遗传病。总结近年α-地中海贫血实验室诊断技术,为提高地中海贫血诊断的准确性,减少误诊和漏诊,需要要已有的实验技术综合应用,开陈出新,尽力创造最为适合患者诊断的实验手段。

关键词： 胎血   α地中海贫血   诊断   平均红细胞体积  

摘要： 目的了解含血红蛋白(Hb)Bart′s脐血红细胞的MCV值,探讨其对新生儿α地中海贫血的诊断价值。方法取无Bart′s的正常脐血30份和含Bart′s的脐血53份,做血常规测定,观察红细胞MCV值;以电泳图出现HbBart′s带为金标准,做ROC工作曲线,对结果作相关统计学分析,确定其地中海贫血筛查截断值并分析其临床诊断意义。结果脐血MCV值明显高于成年男性(t=18.7263,P<0.01);在健康新生儿、静止型和标准型地中海贫血儿三者之间有显著性差别(H=14.76>χ0X.01(2)=9.21,P<0.01,);MCV的ROC曲线下面积为0.8755,以曲线转弯点98.3 fL为最佳诊断截断值的总灵敏度和特异度分别为83.02%和96.67%,其中对标准型地中海贫血诊断灵敏度高达96.55%,对静止型灵敏度为66.67%。结论脐血MCV对新生儿地中海贫血有较好的诊断意义,是简单方便、无创伤、较准确的筛查方法,可做为无条件开展脐血Hb电泳的医院快速筛查新生儿α地中海贫血的有效方法。

关键词： β地中海贫血   文献复习   髓外造血   椎管内   进行性加重   浅表淋巴结   收缩期杂音   下肢乏力  

摘要： 患者女，24岁，半年前无明显原因出现双侧下肢乏力，感觉麻木，并进行性加重。患者既往有β地中海贫血史，父母及家人均体健。体格检查：全身皮肤黏膜苍白，呈重度贫血貌，全身浅表淋巴结未触及，胸廓无畸形、压痛，心前区可闻及Ⅲ级收缩期杂音，腹软，肝脾触及肿大，双下肢无水肿。