关键词： 大脑中动脉血流峰值速度   胎儿   地中海贫血  

摘要： [目的]通过对妊娠晚期不同程度地中海贫血胎儿大脑中动脉血流峰值速度middle cerebral artery peak systolic velocity(MCA-PSV)的分析,探讨妊娠晚期MCA-PSV快速筛查和预测重度地贫的价值,为临床提供一种弥补中孕产前诊断失败或错过的补救方法。[方法]回顾性分析2008.01~2010.12妊娠晚期接受MCA-PSV检查的病例,正常胎儿组100例,产前诊断确诊为各型地贫的病例25例,分析各类妊娠晚期地中海贫血胎儿大脑中动脉血流峰值速度的特点及MCA-PSV在胎儿地中海贫血的预测价值。[结果]重型地贫胎儿MCA-PSV明显高于正常组以及轻度和中间型地贫胎儿。以1.55MOM为切割值,晚孕重度地中海贫血的敏感性100%和特异性达100%。以﹥1.29MOM为切割值,中度地中海贫血的敏感性50%和特异性100%。[结论]妊娠晚期MCA-PSV具有快速筛查和预测重度地贫的价值,为临床提供一种弥补中孕产前诊断失败或错过的补救方法。

关键词： β-地中海贫血   β珠蛋白基因(HBB)   基因变异   序列分析  

摘要： 目的探讨云南傣族人群中β-地中海贫血β珠蛋白基因(hemoglobin betagene,HBB)变异分布特点。并建立检测相应常见变异位点的快速筛查方法。方法获取209例云南傣族儿童β-地中海贫血阳性样本,用DNA序列测定的方法对包含有β珠蛋白基因(HBB)在内的1755 bp DNA片段进行基因变异分析。建立检测3个常见变异位点的碱基突变特异性扩增系统(amplification refiactory mutation system,ARMS),并对引物及扩增条件进行优化。结果 209例样本中共发现9个变异位点,按频率由高到低分别是CD2 T>C(50.72%)、CD26 G>A(35.41%)、CD17 A>T(12.92%)、IVS-Ⅱ-1 7 C>G(1 2.44%)、IVS-Ⅱ-1 6 G>C(11.96%)、IVS-Ⅰ-30 A>G(9.57%)、CD6G>A(9.09%)、CD41-42(-TCTT)(7.18%)、CD5 T>A(1.92%),有153人被检测出基因变异位点,占总人数的73.21%。引入错配碱基的ARMS引物,在65℃的退火温度能对CD2、CD26和CD17 3个常见变异位点进行特异筛查。结论云南傣族β-地中海贫血人群中HBB基因的变异位点有其自身的特点,与其他地区有所不同。ARMS检测云南傣族β-地中海贫血基因变异是一种准确有效并简便经济的方法。

关键词： 重型β-地中海贫血   血清铁蛋白   铁过载   MRI   LVEF   评估   心脏T2~*值   LIC  

摘要： 目的研究广西重型β-地中海贫血患者全身铁过载状况及脏器铁过载的发生情况。 方法对50例年龄大于10岁的广西重型β-地中海贫血（地贫）患者进行血清铁蛋白、心脏T2*值和肝脏R2值的检测。血清铁蛋白采用放射免疫法（RIA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测,心脏T2*值和肝脏R2值采用核磁共振（MRI）检测。50例患者分为规则祛铁组（17例）和不规则祛铁组（33例）。比较两组的全身铁状况及脏器铁过载的发生情况。评估血清铁蛋白、心脏T2*值和肝铁浓度（LIC）的相关性。 结果 （1） 50例重型β-地中海贫血患者的血清铁蛋白（SF）中位值为5511（4204.75）μg/L,其中SF>2500μg/L 44例（88%）。 （2）心脏T2*值>20ms（无心脏铁过载） 25例（50%）,T2*值≤20ms（有心脏铁过载）25例（50%）,其中T2*值10～20ms（轻中度心脏铁过载）13例（26%）,T2*值<10ms（重度心脏铁过载）12例（24%）。 （3） 50例患者LIC均大于3mg Fe/g干重,中位值为42.3mg Fe/g干重。 （4）规则祛铁组与不规则祛铁组相比,血清铁蛋白中位值分别为3974μg/L和6490μg/L（P=0.026）;心脏T2*中位值分别为36.7ms和10.6ms（P=0.000）;LIC中位值分别为37.2 mg Fe/g干重和43 mg Fe/g干重（P=0.0003）。 （5）不同程度的心脏铁过载,其铁蛋白、LIC均有差别（P=0.033,P=0.005）,轻中度和重度心脏铁过载组的铁蛋白水平均高于无心脏铁过载组（P值均小于0.05）;轻中度和重度心脏铁过载组的LIC均高于无心脏铁过载（P值均小于0.05）。 （6）血清铁蛋白与心脏T2*值没有相关性（P>0.05）,与LIC呈中度正相关（相关系数为0.546,P<0.05）。 结论 （1）广西大于10岁的重型β-地中海贫血患者铁过载较严重,重度铁过载（SF>2500μg/L）占88%。 （2）广西大于10岁的重型β-地中海贫血患者心脏、肝脏铁过载较严重。50%的患者有心脏铁过载,100%的患者有肝脏铁过载。 （3）不规则祛铁治疗是引起患者全身铁过载和脏器铁过载的主要原因。 （4）血清铁蛋白与心脏T2*值没有相关性,与LIC呈中度正相关,说明血清铁蛋白不能反映心脏铁沉积情况,但在一定程度上能反映肝脏铁沉积情况。 （5）MRI测量作为一种新的铁过载的评估方法,更能准确、无创、有效的评估脏器铁沉积和指导袪铁治疗方案。

关键词： β-地中海贫血   血红蛋白A2   HRM   基因突变   筛查  

摘要： α-地中海贫血、β-地中海贫血和DMD都是严重危害人类生命健康的最常见单基因遗传病,目前,临床上只能对常见的点突变和缺失重复突变进行检测,而由于点突变致病的患儿或携带者往往会漏诊或得不到基因诊断。如DMD基因,由于其基因序列庞大并且没有点突变热区,在临床上只能对缺失和重复突变进行检测,而点突变致病的病人失去基因诊断的机会,也意味着他们家族不能进行DMD的产前诊断;β-地中海贫血突变如果不是常见的突变,可能导致中重度患儿的出生。测序是点突变检测的金标准但是繁琐并且成本高、工作量大。因此急需寻求一种简单、灵敏度高的点突变检测方法,很多研究致力于通过先对该基因进行点突变筛查,筛查出怀疑点突变的序列后再进行测序,从而大大减轻成本以及工作量。最近不少文献认为HRM分析方法是一种很好的新点突变检测方法。 第一部分建立HRM分析检测单基因遗传病点突变 目的 以β-珠蛋白、DMD和α-珠蛋白的基因为研究对象,建立应用HRM分析方法检测单基因遗传病点突变的方法,并探讨该方法是否适用于基因纯合突变的检测。 方法 1.采用LightScanner96和LightScanner32 HRM分析仪进行检测,结合琼脂糖凝胶电泳对引物、引物浓度、引物最佳退火温度、镁离子浓度、模板起始量及染料加入的时间进行摸索。 2.对76个包含正常及点突变的β-珠蛋白的标本进行检测,其中有12个是常见突变基因型的纯合突变标本,对这些纯合的突变标本进行两种方法检测,首先进行常规的点突变筛查扫描然后加入等比例的野生型标本混合后再进行扫描检测。并且将该方法对8个DMD,其中一个为DMD第四外显子已知点突变进行检测。 3.用突变筛查扫描法及不对称PCR结合非标记封闭探针法对24个含正常和α-地贫的CS、QS、WS三种点突变标本检测。 4.对怀疑存在点突变的标本用ABI 3100基因测序仪对β-珠蛋白基因进行测序。 结果 用HRM方法检测基因点突变时,需要把模板起始浓度稀释为同一浓度;引物最佳退火温度比加入染料前的温度要高。该方法可对β-珠蛋白点突变进行扫描筛查,结果与RDB方法或测序方法一致;对于一个DMD男性患者第四外显子点突变的标本和十二个CD41/42、IVS-ΙΙ-654、TATAbos -28、CD17的纯合突变标本均可以通过直接扫描及野生型标本混合后进行扫描两种方法进行区分。而不对称PCR结合非标记封闭探针法对α-地贫的CS、QS、WS三种点突变标本检测未能成功,需进一步优化。 结论 本研究建立了应用HRM分析方法对单基因点突变遗传病检测的平台,可快速、可靠地对杂合和纯合点突变的基因进行检测。 第二部分β-地中海贫血的临床检测 第一章HbA2筛查β-地中海贫血的作用 目的 评估HbA2升高(≥3.5%)筛查β?地中海贫血的作用。 方法 应用血常规自动分析仪对360名妇女进行血常规检测,高效液相色谱法血红蛋白电泳进行HbA2水平检测。第一组为HbA2水平≥3.5%的65名孕妇,85名为非孕妇女,均进行RDB或β-珠蛋白基因测序检测,第二组为HbA2水平< 3.5%的96名孕妇,114名非孕妇女,如果MCH>29pg, MCV>90fl的不作基因检测,HbA2值在3.0%-3.5%进行β-珠蛋白基因测序,其余的进行RDB方法检测。利用t检验对HbA2的值进行统计。 结果 1.第一组中(n= 150名,20-40岁),其中65名为孕妇,85名为非孕妇女,她们的HbA2水平≥3.5%,RDB方法检测显示147名为中国常见的β-地中海贫血突变,其中三名用RDB检测未见异常,经测序分析发现其中两例为RDB不能检测的Hb Kaohsiung杂合点突变即HBB:c.341T > A杂合点突变,第三例为-90 (C>T)杂合点突变即HBB:c.-140C>T杂合点突变。 2.第二组中(n= 210, 20-40岁),其中96名孕妇,114名非孕妇女,RDB方法检测显示均未发现β-地中海贫血基因突变,并且用测序方法检测HbA2范围在3.0%-3.5%的标本,也未发现存在β-地中海贫血基因突变。 3.没有地中海贫血携带的孕妇跟非孕妇比较,孕妇的HbA2水平轻微升高(P<0.05),但她们HbA2的水平均未超过或者达到3.5%。 结论 妊娠虽然可使HbA2的水平稍微升高,但是并未影响到HbA2对β-地中海贫血携带者的筛查作用,不论在孕妇还是非孕妇中,HbA2均有很好的筛查β-地中海贫血携带者的价值。 第二章应用HRM分析检测β?地中海贫血基因点突变 目的 应用上述建立的HRM分析方法对未知基因型的标本进行β-珠蛋白基因检测,探讨其临床应用的可行性。 方法 1.应用上述第一部分优化的条件方法对未知基因型的标本进行检测。 2.选取60个标本,其中包含5个血液学和HbA2确认的β?地中海贫血携带但

关键词： 地中海贫血   全自动琼脂糖凝胶电泳   基因诊断  

摘要： 目的:通过分析1065例地中海贫血(简称"地贫")筛查及基因诊断结果,观察国产SH2020型全自动琼脂糖凝胶电泳系统在地中海贫血筛查中的作用和不足。方法:对来我院行产前检查或婚前检查的育龄人群共1065例做地中海贫血筛查,筛查流程主要是抽取静脉外周血分别做血液常规检测、红细胞渗透脆性试验和全自动琼脂糖凝胶血红蛋白电泳试验(电泳仪为北京金桑特产SH2020型),综合三者的结果判定其是否患有地贫及其地贫类型[5],同时对所有病例进行α及β基因诊断试验,并对结果进行回顾性分析。结果:在用全自动琼脂糖凝胶电泳对1065例地中海贫血筛查结果中检出α-轻型地贫181例、HbH病5例、β-轻型地贫68例、异常血红蛋白病6例(其中HbE为3例、HbK、HbG、HbD各1例)、表型正常806例。而基因诊断结果显示:α-轻型地贫134例、HbH病5例、β-轻型地贫65例、正常861例;二者相互比较:α-地贫筛查的诊断符合率较低只有74.03%,但HbH病诊断符合率为100%,而β-地贫筛查的诊断符合率较高达95.59%。结论:SH2020型全自动琼脂糖凝胶电泳系统分辨率高,对地中海贫血筛查及分型起到良好的效果。尤其对β-轻型地贫及HbH病的筛查效果优良,对α-轻型地贫的筛查效果稍欠佳,存在一定的误诊率。

关键词： 造血干/祖细胞   间充质干细胞   腺相关病毒   β-地中海贫血   基因治疗  

摘要： 目的： 本研究优化构建包装纯化携带标记基因GFP的重组杂合型AAV载体,用各重组杂合型AAV载体感染来源于人的造血干/祖细胞,筛选高效转导人的造血干/祖细胞的杂合型AAV载体,以此构建携带β-珠蛋白基因的杂合型AAV载体,转导流产的β-重型地贫胎儿骨髓源造血干/祖细胞,将转染后的细胞移植入照射裸鼠体内,系统检测受体鼠内人β-珠蛋白基因的表达水平,筛选出高效转导的杂合型AAV载体。 方法与结果： 1.造血干/祖细胞和间充质干细胞的分离培养 本研究采用密度梯度离心法结合免疫磁珠分离法获取人造血干/祖细胞,流式检测分离纯度,集落培养检测分化潜能和生物学活性;密度梯度离心法结合贴壁法体外培养获取人骨髓MSCs,分别诱导MSCs向成脂肪和成骨分化。结果表明通过免疫磁珠分离法可以获得高纯度的造血干/祖细胞,集落培养说明其具有较高的分化潜能和生物学活性;体外原代和传代培养可获得高效扩增能力的MSCs。 2.重组腺相关病毒载体的获得 本研究中通过磷酸钙共沉淀,三质粒共转染,肝素-琼脂糖法包装纯化含有目的基因的rAAV病毒载体;通过SDS-PAGE蛋白电泳,点杂交检测,细胞感染等检测rAAV的纯度、滴度和生物活性。结果表明包装纯化的rAAV具有较高的生物学活性,能成功感染细胞。 3.筛选高效转导造血干／祖细胞的rAAV载体 用rAAV1-GFP, rAAV2-GFP, rAAV6-GFP感染人造血干/祖细胞,流式检测其感染效率,结果表明rAAV1-GFP或rAAV6-GFP> rAAV2-GFP。在此结果基础上构建包装纯化获得rAAV1-β-globin和rAAV6-β-globin,用NOD/SCID裸鼠实验进一步筛选能高效转导人造血干/祖细胞的rAAV载体。经X射线照射后的NOD/SCID裸鼠,输注经rAAV-β-globin感染后的重型β-地中海贫血流产胎儿的造血干/祖细胞,移植后检测裸鼠体内人β-globin的表达。结果表明：WesternBlot检测移植后裸鼠外周血中人(3-globin蛋白,IPP软件灰度扫描分析结果为rAAV1 17.12, rAAV6 13.6。 结论： 本研究在体外成功地分离培养出具有高效扩增能力和分化潜能的人造血干/祖细胞和骨髓MSCs,并且通过rAAV载体有效地介导GFP在人造血干/祖细胞和MSCs中的表达,筛选出能高效转导人造血干/祖细胞的rAAV载体rAAV1和rAAV6。再通过体内实验,进一步筛选出转导效率rAAV1高于rAAV6。

关键词： 地中海贫血   血红蛋白A2   基因突变   细胞病理学  

摘要： α-地中海贫血、β-地中海贫血和DMD都是严重危害人类生命健康的最常见单基因遗传病，目前，临床上只能对常见的点突变和缺失重复突变进行检测，而由于点突变致病的患儿或携带者往往会漏诊或得不到基因诊断。如DMD基因，由于其基因序列庞大并且没有点突变热区，在临床上只能对缺失和重复突变进行检测，而点突变致病的病人失去基因诊断的机会，也意味着他们家族不能进行DMD的产前诊断；β-地中海贫血突变如果不是常见的突变，可能导致中重度患儿的出生。测序是点突变检测的金标准但是繁琐并且成本高、工作量大。因此急需寻求一种简单、灵敏度高的点突变检测方法，很多研究致力于通过先对该基因进行点突变筛查，筛查出怀疑点突变的序列后再进行测序，从而大大减轻成本以及工作量。最近不少文献认为HRM分析方法是一种很好的新点突变检测方法。本研究分为三个部分：\n 第一部分：建立HRM分析检测单基因遗传病点突变。\n 目的：以β-珠蛋白、DMD和α-珠蛋白的基因为研究对象，建立应用HRM分析方法检测单基因遗传病点突变的方法，并探讨该方法是否适用于基因纯合突变的检测。\n 方法：⑴采用LightScanner96和LightScanner32 HRM分析仪进行检测，结合琼脂糖凝胶电泳对引物、引物浓度、引物最佳退火温度、镁离子浓度、模板起始量及染料加入的时间进行摸索。⑵对76个包含正常及点突变的β-珠蛋白的标本进行检测，其中有12个是常见突变基因型的纯合突变标本，对这些纯合的突变标本进行两种方法检测，首先进行常规的点突变筛查扫描然后加入等比例的野生型标本混合后再进行扫描检测。并且将该方法对8个DMD，其中一个为DMD第四外显子已知点突变进行检测。⑶用突变筛查扫描法及不对称PCR结合非标记封闭探针法对24个含正常和α-地贫的CS、QS、WS三种点突变标本检测。⑷对怀疑存在点突变的标本用AΒI 3100基因测序仪对β-珠蛋白基因进行测序。\n 结果：用HRM方法检测基因点突变时，需要把模板起始浓度稀释为同一浓度；引物最佳退火温度比加入染料前的温度要高。该方法可对β-珠蛋白点突变进行扫描筛查，结果与RDΒ方法或测序方法一致；对于一个DMD男性患者第四外显子点突变的标本和十二个CD41/42、IVS-II-654、TATAβos-28、CD17的纯合突变标本均可以通过直接扫描及野生型标本混合后进行扫描两种方法进行区分。而不对称PCR结合非标记封闭探针法对α-地贫的CS、QS、WS三种点突变标本检测未能成功，需进一步优化。\n 结论：建立了应用HRM分析方法对单基因点突变遗传病检测的平台，可快速、可靠地对杂合和纯合点突变的基因进行检测。\n 第二部分：β-地中海贫血的临床检测。\n 目的：评估HβA2升高（3 3.5%）筛查β-地中海贫血的作用。\n 方法：应用血常规自动分析仪对360名妇女进行血常规检测，高效液相色谱法血红蛋白电泳进行HβA2水平检测。第一组为HβA2水平3 3.5%的65名孕妇，85名为非孕妇女，均进行RDΒ或β-珠蛋白基因测序检测，第二组为HβA2水平＜3.5%的96名孕妇，114名非孕妇女，如果MCH>29pg，MCV>90fl的不作基因检测，HβA2值在3.0%-3.5%进行β-珠蛋白基因测序，其余的进行RDΒ方法检测。利用t检验对HβA2的值进行统计。\n 结果：⑴第一组中（n=150名，20-40岁），其中65名为孕妇，85名为非孕妇女，她们的HβA2水平3 3.5%，RDΒ方法检测显示147名为中国常见的β-地中海贫血突变，其中三名用RDΒ检测未见异常，经测序分析发现其中两例为RDΒ不能检测的Hβ Kaohsiung杂合点突变即HΒΒ:c.341T＞ A杂合点突变，第三例为-90 (C>T) 杂合点突变即HΒΒ:c.-140C>T杂合点突变。⑵第二组中 （n=210，20-40岁），其中96名孕妇，114名非孕妇女，RDΒ方法检测显示均未发现β-地中海贫血基因突变，并且用测序方法检测HβA2范围在3.0%-3.5%的标本，也未发现存在β-地中海贫血基因突变。⑶没有地中海贫血携带的孕妇跟非孕妇比较，孕妇的HβA2水平轻微升高（P<0.05），但她们HβA2的水平均未超过或者达到3.5%。\n 结论：妊娠虽然可使HβA2的水平稍微升高，但是并未影响到HβA2对β-地中海贫血携带者的筛查作用，不论在孕妇还是非孕妇中，HβA2均有很好的筛查β-地中海贫血携带者的价值。\n 第三部分：应用HRM分析检测β-地中海贫血基因点突变。\n 目的：应用上述建立的HRM分析方法对未知基因型的标本进行β-珠蛋白基因检测，探讨其临床应用的可行性。\n 方法：⑴应用上述第一部分

关键词： α地中海贫血   β地中海贫血   血常规系数  

摘要： 目的:探讨地中海贫血基因与RBC、HB、MCV和HCT之间的关系。方法:通过地中海贫血基因检测,把99例α地中海贫血基因缺失的标本,49例β地中海贫血基因缺失的标本、109例缺铁性贫血标本和79例健康体检人员的血常规参数作为研究对象。利用血细胞分析仪,对上述标本的RBC、HB、MCV和HCT等血常规参数进行分析。结果:α地中海贫血组的RBC、HB、MCV和HCT与健康组比较,都有显著性差异,P<0.05,差异均有统计学意义。结论:α,β地中海贫血的MCV比缺铁性贫血的都低,有可能是基因缺失造成,P<0.05,差异均有统计学意义。提示上述指标可以作为辅助鉴别诊断缺铁性贫血的指标。

关键词： α0-地中海贫血   无创伤性产前诊断   胎儿游离核酸   缺失断裂点   父源性的正常等位基因  

摘要： 背景与目的 α-地中海贫血(简称“地贫”)是世界上最常见的单基因遗传病之一,分布于包括非洲、地中海地区、中东、印度次大陆、东南亚和中国南方在内的全球热带和亚热带疟疾高发地区,这些地区α-地贫携带者频率高达10%-15%。α-地贫属常染色体隐性遗传病,其分子基础是位于16号染色体末端16p13.3位点上的人α-珠蛋白基因(HBA1和HBA2)的先天性遗传缺陷。遗传缺陷的后果是α-珠蛋白肽链合成减少或缺如,从而血红蛋白生成障碍,并导致无效造血和红细胞破坏而产生溶血性贫血。α0-地贫是指2个顺式排列的α-基因丢失的突变,主要分布于东南亚地区(包括中国南方地区),如(SEA)、(—THAI)、(FIL)等。α-地贫的纯合子为严重致死、致残性溶血性贫血,导致Hb Bart’s水肿综合征。当父母双方均为α0-地贫携带者,则生育的孩子有25%的概率为Hb Bart’s胎儿水肿征患者。目前临床上一般采用绒毛吸取或羊膜腔穿刺的取材技术,应用现代遗传分析技术通过产前诊断对受累患儿进行有效地检测,但这些有创伤性的传统的取材方法可引起0.5%1%的流产风险。 在妊娠过程中,母体血浆中存在胎儿有核红细胞和游离胎儿DNA,这一发现为基于母体血浆游离胎儿DNA的无创伤性产前诊断开辟了新的领域,同时为监测胎儿的遗传状况提供了新的取材途径。目前利用母体血浆进行无创伤性产前诊断可鉴定胎儿性别、RhD血型,随着一批高灵敏度的分子诊断技术的发展,还可通过母体血浆游离的胎儿DNA来检测胎儿是否继承父源性的致病突变,这已成功地应用于一些单基因遗传病的无创伤性产前诊断,如强直性肌营养不良症、软骨发育不全、囊性纤维化、先天性肾上腺增生症(CAH)、亨延顿舞蹈症和β-地中海贫血等。当胎儿双亲携带不同的致病突变时这些检测方法尤其有用。近年研究发现另一种检测途径,即当父母双方携带相同致病突变时,通过母体血浆游离胎儿DNA检测胎儿是否继承与父源性致病突变连锁的SNP多态性位点的等位基因来进行无创伤性产前诊断。 当父母双方携带相同大片段缺失突变时,由于缺乏特异性的遗传标记,通过母体血浆游离胎儿DNA准确地对胎儿进行基因分型,技术上还存在很大的挑战。另一方面,由于游离的胎儿DNA片段的特性(99%的胎儿DNA片段长度<313 bp),利用基于普通PCR的技术很难有效地检测胎儿的大片段缺失突变。最近Ho等利用(SEA/)缺失断裂点内2个微卫星多态性位点,通过检测母体血浆游离胎儿DNA来判断胎儿是否遗传父源性的非缺失染色体上的STR等位基因,从而进行Hb Bart’s胎儿水肿综合征的无创伤性产前诊断。但是在(SEA/)缺失区域内的STR位点数目和多态性信息非常有限,因此该技术最多只能应用于诊断1/3的高危家庭。此外,目前国内外很少研究者利用孕妇血浆中的胎儿DNA来涉足重型α-地贫的无创伤性产前诊断,研究该病无创伤性诊断的技术和应用论文数量也很有限。 因此,本研究拟以α-地中海贫血作为研究对象,在基于复合PCR扩增的微测序技术筛查(—SEA/)基因缺失断裂点内胎儿双亲有信息性的SNP位点的基础上,结合等位基因特异性实时荧光PCR技术来检测低拷贝的单核苷酸差异,探索检测母体血浆胎儿父源性的正常染色体上的SNP等位基因的新方法,为HbBart’s胎儿水肿综合征的无创伤性产前诊断提供新的诊断策略,并且收集67个α0-地贫高风险家庭进行临床应用评价,本研究诊断策略的建立将能填补我国在重要遗传病无创产前诊断领域的空白,为我国的优生优育工作作出贡献。同时通过群体筛查获得一组有诊断价值又代表中国南方人群种族特征的候选SNP数据库。 材料与方法 样品采集 从本教研室样品库中分别挑选了α-珠蛋白基因型为aα/aa和基因型为—sEA/αα的无关个体基因组DNA样品各150例,用于筛查α-珠蛋白基因簇(—SEA/)缺失断裂点内的SNP位点。从上述群体样品中选择40例已测序样本作为标准品,用于建立能同时检测多个SNP位点的基于复合PCR扩增的微测序技术。此外,从2008年6月至2010年6月,从67例需要进行绒毛吸取或羊膜腔穿刺检查的孕妇采集10 ml外周血(术前抽取),同时抽取其配偶外周血。67例孕妇的孕周在8.5-25周之间,平均孕周为19.12±3.61周;孕妇年龄在20-41岁之间,平均年龄为27.16±4.89岁。67个高风险家庭的胎儿双亲α-地贫的基因型均为(SEA/)缺失突变,其中一个家庭除外(胎儿父亲的基因型为—THAI/αα)。本研究已经过当地伦理委员会的同意,并得到所有受检者的理解并签署相关的书面知情同意书, 样品处理和母体血浆DNA提取 孕妇外周血在1600 g离心10分钟后分别收集血沉棕黄层和血浆,用标准的酚-氯仿抽提法提取血层棕黄层的基因组DNA;第一次离心收集得到的血浆在16000 g再

关键词： 地中海贫血   筛查   遗传流行病学   血红蛋白电泳   截断值  

摘要： 目的研究云南省地中海贫血的遗传流行病学,确定云南省地中海贫血的基因携带率；对比云南省籍贯与省外籍贯,以及云南省各个民族、地区之间的血红蛋白电泳筛查的结果推断地中海贫血的发病情况；探讨云南省地中海贫血的血红蛋白电泳筛查的截断值,为云南地区的地中海贫血的血红蛋白电泳筛查提供更加适合的截断值。 资料和方法分析血红蛋白电泳筛查结果共10181例并从中选取疑似地贫患者340例进行基因诊断,结合血常规数据和病人的籍贯、民族,用X2检验和T检验进行统计分析,对比各个民族、地区之间有无统计学差异。运用正态分布图结合ROC曲线对各种血红蛋白,特别是Hb A2和Hb F的诊断意义和最佳截断值进行探讨。 结果1.在10181例血红蛋白电泳筛查的样本中,可检出的6种α地贫的携带者占总人群的1.05%,云南省可检出的18种β地贫的携带者占总人群的3.55%,由此推断云南省可检出的地贫携带者约占总人群的4.60%。此结果与实际情况可能略有偏差。 2.(1)未出现异常条带的人群中,Hb A2的含量(%)的分布呈近似正态分布,均值为2.82,标准偏差为0.411：α地贫基因携带者中,Hb A2含量(%)的分布呈近似正态分布,均值为2.17,标准偏差为0.317；β地贫基因携带者中,Hb A2含量(%)的分布呈近似正态分布,均值为5.30,标准偏差为0.898。(2)Hb F含量(%)的分布无明显的规律。(3)α地贫基因携带者的Hb、MCH与正常人无统计学差异,而MCV具有统计学差异；β地贫基因携带者的Hb与正常人无统计学差异,而MCV和MCH具有统计学差异。 3.(1)云南省α地贫的血红蛋白电泳筛查阳性的判断标准建议定为：出现Hb CS带,或出现Hb Bart's带,或出现Hb H带,或者Hb A2<2.8%。(2)灵敏度较高的p地贫的血红蛋白电泳筛查阳性的判断标准建议定为：Hb A2>3.5%,或Hb F>2.0%,或出现Hb E带；特异度较高的β地贫的血红蛋白电泳筛查阳性的判断标准建议定为：Hb A2>4.5%,或出现Hb E带。(3)在未能有效地检出导致出现Hb D,Hb J, Hb Hope和Hb S等异常血红蛋白的基因突变之前,建议不以上述异常血红蛋白条带为地贫表型阳性的诊断标准。 4.在91例α地贫的表型阳性样本中,有18人检出α地贫基因突变。基因诊断的符合率为19.8%；174例β地贫的表型阳性样本中,有81人检出β地贫基因。基因诊断的符合率为46.6%。 结论1.云南省为地中海贫血的高发地区,有必要进行广泛的产前、孕前筛查,以达到提高人口素质、防止出生缺陷的目的。 2.地中海贫血的发病在不同地区和民族之间存在明显差异,各地区应当视当地情况确定适合的初筛截断值。 3.从基因诊断的符合度来看,血红蛋白电泳筛查和血常规筛查对β地贫的筛查效果均好于α地贫。