关键词： α-地中海贫血   Hb Bart’s   基因   高分辨率熔解曲线  

摘要： α-地中海贫血(α-thalassemia，α-地贫)是α-珠蛋白基因缺失或突变使α-珠蛋白链的合成受到抑制而引起的遗传性溶血性贫血，是人类最常见且危害最大的单基因遗传病之一，在我国主要集中在南方地区，广州是α-地贫的高发区。正常人有4个α基因，若4个α-基因都缺失(Hb Bart’s水肿胎)，胎儿一般在妊娠晚期或出生后数小时死亡。另外，一些非缺失型Hb H病和非缺失型α-地贫纯合子患者贫血严重，甚至需要输血治疗。静止型和轻型α-地贫基因携带者自身无临床表现，但可能生育重型地贫的胎儿，因此，在α-地贫高发区进行人群筛查尤为必要。已有研究发现脐血中的Hb Bart’s与α-地贫直接相关，本研究应用全自动毛细管电泳技术(Sebia Capillarys2)对脐血进行Hb Bart’s定量，探讨其筛查α-地贫的效果。另外，近年来兴起的一种遗传学分析方法——高分辨率熔解曲线技术(HRM技术)，用于基因突变扫描、基因分型等具有简单、快速、低成本等优点，本研究探讨HRM技术用于筛查非缺失型α-地贫的可行性。 一、目的 1.调查广州地区α-地贫的基因携带率及基因型频率。 2.探讨新生儿脐血Hb Bart’s水平与α-地贫类型的关系。 3.探讨高分辨率熔解曲线技术(HRM技术)用于筛查非缺失型α-地贫的可行性，建立一种快速、简便、廉价的非缺失型α-地贫分子筛查方法。 二、方法 1.收集2010年5月至2011年7月我院产科分娩的6525例新生儿脐带血。 2.应用全自动毛细管电泳技术对6525例新生儿脐血进行Hb Bart’s定量。 3.采用gap-PCR技术检测所有Hb Bart’s阳性样本和随机抽取的100例Hb Bart’s阴性样本α-地贫的3种常见缺失(--SEA、-α3.7、-α4.2)。 4.对gap-PCR技术未检出异常，但Hb Bart’s%≧2%的样本，用一种快速可靠的多重PCR检测四种缺失(--THAI，--FIL，--MED，-(α)20.5)。 5.对gap-PCR和多重PCR技术均未检测出异常的Hb Bart’s%≤2.5%的样本，用HRM技术筛查α-珠蛋白基因的第三外显子。 6.用反向点杂交(RDB)技术检测上述样本的3种常见非缺失型α-地贫基因(αCSα、αQSα和αWSα)。 7.对于用以上方法均未知基因型的样本，用HRM技术筛查α-基因的第一、二外显子。 8.用PCR产物直接测序法检测上述样本的α1-和α2-珠蛋白基因全长。 三、结果 1.在6525例新生儿脐带血样本中，检出Hb Bart’s阳性样本377例(阳性检出率为5.78%)，其中375例经基因分析确诊为α-地贫。本研究中共检出14种α-地贫基因型375例(含384个α-地贫等位基因)，α-地贫基因携带率为5.89%。其中东南亚缺失型(--SEA)基因携带率为4.03%，αCSα、αQSα基因携带率分别为0.18%、0.15%。 2.脐血Hb Bart’s的含量与α-基因缺陷(缺失或突变)的个数相关：1、2、3个α-基因缺陷的Hb Bart’s含量分别为0.55%±0.29%、3.54%±0.79%和20.27%±1.72%。 3.随机抽取的100例Hb Bart’s阴性样本中，检出1例-α3.7/αα。 4. HRM技术筛查非缺失型α-地贫的敏感性和特异性均达100%。 5.通过用PCR产物直接测序法检测α1-和α2-珠蛋白基因的全长，检出5例4种非缺失型α-地贫，其中2种是人群中没有报道的新发突变。 四、结论 1.证实了广州地区是α-地贫的高发区。 2.以脐血Hb Bart’s阳性为指标，对新生儿进行α-地贫筛查，能准确地筛查出HbH病、α0地贫及αCSα/αα，但是，Hb Bart’s水平不宜作为αCSα以外的α+-地贫的筛查指标。 3.毛细管电泳Hb Bart’s定量，准确、高效，可应用于新生儿α-地贫的筛查。 4. HRM技术能准确筛查非缺失型α-地贫，并具有简单、廉价、快速、高通量等优点。

关键词： 重型β地中海贫血   ELISA   HGV   TTV   广西  

摘要： 目的：调查TTV，HGV在118例广西重型β地中海贫血患者中的感染率及分布特征。 方法：随机收集广西各个地区的重型β地中海贫血患者血清共118例，其中男74例，女44例，年龄2—25岁，输血总量8—960U。采集这些患者血清，以ELISA法检测血清中的TTV及HGV。根据患者的性别，年龄，输血量，居住地进行分组，分别计算各组TTV及HGV的感染率。 结果：1.118例广西重型β地中海贫血患者TTV阳性4例，感染率为3.39%。根据患者年龄分为<10岁组和>10岁组，TTV阳性例数均为2例，阳性率分别为2.25%，6.90%（P>0.05）；在性别组中，男性组和女性组的阳性例数分别是3例和1例，对应的阳性率为4.05%，2.27%（P>0.05）；而居住在桂北的TTV阳性例数为3例，桂南的阳性例数为1例，阳性率分别为6.52%，1.39%（P>0.05）；在输血量(<20U，20-100U，>100U)组中，TTV的阳性例数依次为2例，1例，1例，对应的阳性率为7.41%，1.85%，2.70%（P>0.05）。 2.118例广西重型β地中海贫血患者HGV阳性8例，感染率为6.78%。根据患者年龄分为<10岁组和>10岁组，HGV阳性例数分别为7例和1例，阳性率分别为7.87%，3.45%（P>0.05）；在性别组中，男性组和女性组的阳性例数分别是5例和3例，对应的阳性率为6.76%，6.82%（P>0.05）；而居住在桂北的TTV阳性例数为7例，桂南的阳性例数为1例，阳性率分别为15.22%，1.39%（P<0.05）；在输血量(<20U，20-100U，>100U)组中，HGV的阳性例数依次为1例，3例，4例，对应的阳性率为3.70%，5.56%，10.81%（P>0.05）。 结论：1.广西重型地中海贫血患者TTV的感染率为3.39%，感染率低，感染与患者的性别，年龄，输血量，居住地无关。 2.广西重型β地中海贫血患者HGV的感染率为6.78%，感染率低，感染与患者的性别，年龄，输血量无关。

关键词： 异基因造血干细胞移植   重型β-地中海贫血   单倍体   肝静脉闭塞综合病   出血性膀胱炎   移植物抗宿主病   侵袭性真菌感染   口腔黏膜炎   巨细胞病毒感染  

摘要： 目的 异基因造血干细胞移植（allo-hematopoietic stem cell transplantation, allo-HSCT）是目前根治重型p-地中海贫血的唯一方法。人类主要组织相容性抗原（human leucocyte antigen,HLA）全相合的亲缘相关或无关供者是allo-HSCT最合适的供者,然而仅有20%～30%的患者能找到HLA相合的亲缘供者,在无关人群中找到相合供者的概率是1/5万～1/10万,甚至更低,而且需要消耗很长的时间去骨髓库检索。若进行HLA单倍体造血干细胞移植,则将有90%的患者能够找到供者,解决供者难找的问题,进而为更多需接受移植治疗而无HLA相合供者的患者带来福音,但是单倍体移植面临着造血重建延迟、移植物抗宿主病重、免疫重建延迟、感染及移植失败的诸多问题。目前有关HLA单倍体治疗地中海贫血的研究较少,主要为白血病方面的研究,本课题将通过回顾性分析探讨单倍体移植治疗重型β-地中海贫血的临床疗效,更好的指导我们今后的工作。 方法 1999年8月至2011年10月我移植中心对21例患重型β-地中海贫血（以下简称地贫）的患者行单倍体造血干细胞移植。分为两组：08年以前移植的地贫患者11人,患者年龄2岁～13岁,中位年龄6岁,男孩9人,女孩2人,地贫临床分度：Ⅰ-Ⅱ度7例,Ⅲ度4例,HLA配型均为高分辨1个位点不合。干细胞来源为父母的骨髓（BM）,其中单个核细胞数中位数为2.5×108/kg（1.94-5.4×108/kg）,其中2例第一次移植失败后3个月内分别进行了第二及第三次移植,结局都是移植失败。08年以后移植的地贫患者10人,患者年龄3岁-11岁,中位年龄5.5岁,男孩,4人,女孩6人。地贫临床分度：Ⅰ～Ⅱ度9例,Ⅲ度1例,HLA配型高分辨1个位点不合有8例,HLA配型高分辨全相合2例。干细胞来源为父母外周血造血干细胞（PBSC）。输注外周干细胞的单个核细胞数为中位数8.62（8～9）×108/Kg,其中1例移植后进行供者淋巴细胞输注（DLI）3次。 1、预处理方案：08年以前预处理方案以马法兰（Bu）+环磷酰胺（Cy）+抗人胸腺兔免疫球蛋白（ATG-F）为主。在此基础上加用氟达拉滨（Flud）或者全身放疗（TBI）。其中1例第二次移植用马法兰（Bu）+环磷酰胺（Cy）+抗人胸腺兔免疫球蛋白（ATG-F）+氟达拉滨（Flud）,第三次移植采用环磷酰胺（Cy）+足叶乙甙（Vpl6）+全身放疗（TBI）。另外1例第二次移植采用环磷酰胺（Cy）+全身放疗（TBI）。08年以后预处理方案均采用静脉马法兰（Bu）+环磷酰胺（Cy）+氟达拉滨（Flud）+塞替派（TT）+抗人胸腺兔免疫球蛋白（ATG-F）方案。 2、移植物抗宿主病（graft-versus-host disease GVHD）的预防：08年以前移植患者采用环孢素A（CsA）+霉酚酸酯（MMF）,再此基础上加或不加“短疗程”甲氨蝶呤（MTX）,出现GVHD者给予达利珠单抗（赛尼哌）或抗CD25单抗（舒莱）。08年以后移植患者采用环孢素A（CsA）+霉酚酸酯（MMF）+“短疗程”甲氨蝶呤（MTX）。用法：08年以前CsA在移植前一天开始维持20小时静脉注射,监测血药浓度维持在150～250ug/L之间,MTX在移植后+1day、+3day、+6day、+llday应用,剂量分别为15mg/m2、10mg/m2、10mmg/m2、10mg/m2;MMF在移植后6小时开始按30mg/***口服应用。08年以后移植患者CsA在预处理开始（1.5mg/***）当天即给予20小时持续静脉注射,移植前一天开始（3mg/***）维持20小时静脉注射,监测血药浓度维持在150-250ug/L之间,MTX在移植后+1day、+3day、+6day应用,剂量分别为15mg/m2、10mg/m2、10mg/m;MMF在移植后6小时开始按30mg/***口服应用。 3、肝静脉闭塞病（HVOD）的预防：08年以前移植患者在移植后第1天开始静脉应用肝素钠（100～150U/***）、质脂体前列素E1（10～30ug/d）。08年以后移植患者在预处理开始即开始给予肝素钠（100U/***）、质脂体前列素E1（10～30ug/d）和熊去氧胆酸（12mg/Kg.d）口服。期间监测肝功能及凝血功能,若无显著肝静脉闭塞病表现则在移植后20天停药。 4、出血性膀胱炎（HC）的预防：在预处理期间水化碱化尿液,保证每小时尿量大于60～100ml/m2：同时应用美司钠：在第一剂环磷酰胺前半小时开始,加入生理盐水中持续静脉注射24小时;每天美斯钠的剂量=1.25×每天CY量,治疗主要采用采用水化+血小

关键词： 重型β地中海贫血   γ珠蛋白基因   mRNA表达   Gγ-158多态性   DNA甲基化  

摘要： 目的：本研究通过对广西省重型β地中海贫血患者和正常人外周血中γ珠蛋白基因启动子区片段CpG岛的甲基化位点的确认及其状态检测、γ珠蛋白mRNA的定量表达和“γ-158(C-T)多态性三者的研究,初步筛选出可能影响Y珠蛋白表达的基因启动子区主要的甲基化位点,探讨其甲基化状态、γ珠蛋白mRNA表达与Gγ-158多态性的相关性。 方法：收集广西地区重型β地中海贫血患者和正常健康人外周全血4ml,分别提取标本DNA和RNA。DNA标本用于聚合酶链反应/限制性片段长度多态性(PCR/RFLP)分析“γ-158多态性；同时采用重亚硫酸盐测序法(Bisulfite genomic sequencing PCR,BSP)修饰,降落PCR(Touchdown PCR, TD-PCR)扩增,最后对PCR产物进行DNA克隆测序,得到目的片段中每个CG位点的甲基化情况,定量检测甲基化的确切位置与程度；标本RNA逆转录成cDNA用于实时荧光定量PCR(SYBR GREEN相对定量)检测Y珠蛋白mRNA。 结果：1、87例重型β地贫标本“γ-158位点多态性分析：87例重型β地贫标本检测出10例XmnI杂合子突变,87例正常对照组检测出1例合并XmnI杂合子突变。重型β地贫患者中Gγ-158位点杂合子突变的检出率明显高于正常人11.49％v s1.15％(X2=7.861P=0.009, P<0.05),差异具有统计学意义。 2、30例重型β地贫标本甲基化位点确认：重型β地贫患者与正常人γ珠蛋白基因启动子区均存在4个CG甲基化位点,在序列中分别位于28bp、122bp、231bp、234bp。 3、30例重型β地贫标本甲基化状态检测：重型β地贫患者与正常人γ珠蛋白基因启动子区各CG甲基化位点均呈高度甲基化水平,其中122bp位点甲基化率明显低于正常对照组(X2=10.784,P<0.01)；231bp位点甲基化率低于正常对照组(X2=4.110, P<0.05),28bp和234bp位点甲基化率与正常对照组均无显著性差异(P>0.05) 4、10例合并XmnI重型β地贫标本γ珠蛋白基因mRNA表达检测：合并XmnI重型β地贫与正常对照组γ珠蛋白表达存在显著差异性(Gγ值Z=-3.780P<0.01,Aγ值Z=-2.851P<0.01)差异均有统计学意义。据荧光定量mRNA=2一ΔΔct,以中位数计算Gγ珠蛋白mRNA表达量约为正常对照表达的44倍,Aγ珠蛋白约为正常对照的10倍。 5、10例合并XmnI重型β地贫标本相关性分析：-158位点多态性与mRNA表达相关分析结果示Gγ珠蛋白基因(γ=0.867, P<0.01)、Aγ珠蛋白基因(Y=0.451, P<0.05) mRNA表达与XmnI均呈正性相关；Gγ珠蛋白mRNA表达与γ基因启动子区甲基化率呈负相关(γ=-0.777双侧检验P=0.008, P<0.01), Aγ珠蛋白m RNA表达与γ基因启动子区甲基化率不呈相关(γ=-0.068双侧检验P=0.851,P>0.05)。 结论：重型β地贫患者中“γ-158位点杂合子突变的检出率明显高于正常人；两组研究对象γ基因启动子区均存在甲基化位点且呈高甲基化状态,初步筛选出影响Y珠蛋白表达的主要位点可能在于122bp和231bp；携带“γ-158突变重型β地贫组,γ珠蛋白表达较正常对照组增高且Gγ显于Aγ的增加；重型β地贫患者γ基因启动子区甲基化状态相对正常人较低,Gγ与其呈负性相关。继而证实去甲基化治疗在重型β地贫中的可行性,为进一步研究各种方法和药物(如地西他滨)靶向去甲基化治疗提供基础理论依据,激活γ珠蛋白表达,为重型β地中海贫血的基因治疗带来新曙光。

关键词： 血常规   缺铁性贫血   地中海贫血  

摘要： 目的:探讨缺铁性贫血和β-地中海贫血的血常规检测结果差异和诊断价值。方法:以t检验法统计分析了β-地中海贫血患者147例、缺铁性贫血患者231例、健康体检正常者150例血常规结果。结果:两贫血组与健康组比较有显著性差异(P<0.05);两贫血组比较,RBC、HGB、MCHC和RDW有显著差异(P<0.05)。结论RBC、RDW对缺铁性贫血和β-地中海贫血的诊断有重要意义。

关键词： 孕妇   地中海贫血   筛查  

摘要： 目的 探讨凭祥市孕妇产前地中海贫血筛查状况,为基层地中海贫血防治工作提供参考依据.方法 采集外周静脉血作血常规MCV、MCH检查,MCV、MCH其中一项异常者作为孕妇地中海贫血筛查表型阳性.结果 3146例孕妇中,MCV、MCH其中一项异常的有1012例,地中海贫血筛查表型阳性率为32.16%.结论 加强孕期地中海贫血筛查,避免中重度地贫儿出生,提高出生人口素质.

关键词： α地中海贫血   产前诊断   超声技术   胎儿水肿综合征   珠蛋白链   溶血性贫血   常见类型   基因缺失  

摘要： α地中海贫血（简称α地贫）是地中海贫血的常见类型,是由于α珠蛋白基因缺失或缺陷使α珠蛋白链的合成受到部分或完全抑制而引起的溶血性贫血。若夫妇双方均为α地贫携带者,则有生育重型α地贫患儿的可能。重型α地贫又称血红蛋白Bart＇s胎儿水肿综合征,

关键词： 脐血   CD34+造血干细胞   地中海贫血   群体反应性抗体  

摘要： 目的探讨特异性群体反应性抗体(Panel Reactive Antibody,PRA)对脐血CD34+细胞集落形成的影响。方法取含PRA的β地贫患儿血清,与脐血CD34+细胞、补体联合孵育,行半固体集落培养,观察其对CD34+细胞集落形成影响。结果经PRA阳性血清孵育的脐血CD34+细胞经半固体集落培养所形成的集落数下降。结论地中海贫血血清PRA对脐血CD34+细胞的集落形成能力有抑制作用,补体可增强上述作用。

关键词： β-地中海贫血   输血   祛铁治疗   护理  

摘要： β-地中海贫血是临床常见的遗传性溶血性贫血。尽管目前我国尚无重型β-地中海贫血的流行病学调查资料,但从临床诊疗经验来看,病例数一直没有减少[1],其中广西、广东、云南、贵州及海南等地区是高发区。

关键词： 佤族儿童   地中海贫血   G6PD缺乏症   调查分析  

摘要： 目的为了解云南省佤族0-7岁儿童地贫及G6PD缺乏症发生率,为本地区该病的预防和控制服务。方法分别用血细胞分析、Hb电泳和用改良葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD),6-磷酸脱氢酶(6-PGD)定量比值法对该地区少数民族0-7岁儿童进行地中海贫血和G6PD缺乏症筛查。结果共检查7岁以下儿童1042名,地贫检出率5.6%,G6PD缺乏症检出率为0.4%,地贫与G6PD缺乏症检出率相关系数r=0.779,P<0.01,呈高度正相关。结论本地区的地贫与G6PD缺乏症发生率较高,对地中海贫血调查获取其流行病学资料,为今后对该地人群进行疾病的防治、优生优育、遗传咨询、提高人口素质具有重要的指导意义。