关键词： 地中海贫血   产前筛查   产前诊断  

摘要： 目的：探讨贵州省户籍孕妇地贫的分子缺陷情况，探索可用于临床一线的地贫产前筛查指标和产前诊断技术，并将其应用于贵州省地贫孕妇的产前筛查和产前诊断中，以降低我省重症地贫患儿出生率,提高人口质量。　　方法：1.选择2010年9月-2012年1月在贵州省人民医院进行产前检查孕18周以前的贵州省户籍孕妇1089例，分析红细胞指标（RBC、Hb、MCV、MCH）和血红蛋白电泳（Hb A2）值，异常者纳入疑似病例;2.筛查出双方均有地贫表型阳性的夫妇，提取基因组DNA，gap-PCR法同时检测-α3.7、-α4.2和—SEA/αα3种最常见的α-地贫缺失突变类型，RDB法检查中国最常见的17种β-地贫突变基因和3种α-地贫突变基因，确定基因型;3.双方确定为同型地贫的夫妇，经知情同意后，孕妇于16~24周行羊膜穿刺抽取羊水20ml，常规提取胎儿基因组DNA，用上述基因检测方法检测胎儿是否地贫。如胎儿为轻型地贫，可向孕妇提出合理化建议。如胎儿为中重型地贫，建议孕妇终止妊娠;分娩后取胎儿组织提基因组DNA，检测地贫基因型以进一步证实产前诊断的结果。　　结果：1.红细胞指标和血红蛋白电泳初步筛查地贫孕妇78例，初筛阳性率7.16％（78/1089）;基因诊断确诊53例,筛查阳性确诊率67.9％(53/78)。2.两种地贫孕妇的RBC均高于正常孕妇（P<0.01）。3.两种地贫的Hb、MCV、MCH均低于正常孕妇（P<0.01）。4.α-地贫孕妇的Hb高于β-地贫孕妇（P<0.01），而Hb A2低于β-地贫孕妇（P<0.01）。5.α-地贫20例，发生率1.84％（20/1089）,β-地贫33例，发生率3.03％（33/1089）。6.本实验中贵州户籍孕妇α-地贫最常见的基因型是--SEA/αα,β-地贫最常见的基因型是17/N。7.7例孕妇羊水穿刺检测胎儿地贫基因，6例与胎儿脐血检测结果一致（1例仍在妊娠）。　　结论：1.孕早中期的孕妇进行红细胞指标和血红蛋白电泳检查可以初步筛查地贫并初步区分地贫类型。2.贵州省户籍孕妇β-地贫发生率较α-地贫发生率高，β-地贫最常见的基因型是17/N，α-地贫最常见的基因型是--SEA/αα。3.地贫羊水基因诊断符合率高,我省孕妇可以将地中海贫血的筛查作为常规产前检查。

关键词： 输血   除铁灵   重型β地中海贫血   临床观察  

摘要： 目的重型β地中海贫血患者长期进行输血治疗,出现过多的铁负荷,观察除铁灵对重型β地中海贫血的驱铁效果。方法选取经确诊为重型β地中海贫血患者28例进行观察,随机分为对照组12例与治疗组16例,对照组患者采取输血治疗;治疗组患者在进行输血治疗的同时,结合除铁灵进行治疗,经过联合治疗,检查患者血液中血清蛋白以及患者的肝功能情况,并且对患者的生长发育情况进行详细的观察。结果重型β地中海贫血患者经过长期的输血治疗,血液中的铁含量明显比正常范围要高,导致患者出现明显的铁负荷,结合除铁灵治疗之后,患者血液中的血清铁蛋白含量明显下降,与治疗前相对比,具有明显差异,有统计学意义(P<0.05)。结论对重型β地中海贫血进行输血以及除铁灵结合治疗,能够有效治疗患者血液中铁负荷过多的症状,疗效明显、安全,并且没有出现明显的毒副反应,具有良好的临床价值,值得推广。

关键词： 地中海贫血   常染色体遗传病   临床分析  

摘要： 目的：分析地中海贫血的临床特征及预后。方法：回顾性分析13例地中海贫血患者的临床资料。结果：本组患者13例，年龄为1～50岁，平均年龄17.62岁，其中14岁以下者4例；男性：女性为1.17:1；其中α地中海贫血3例，β地中海贫血10例，比例为0.3:1；极重度贫血者0例（0.00%），重度贫血者5例（15.38%），中度贫血者7例（53.85%），轻度贫血者4例（30.77%）；血清铁蛋白为（55.00～180.00）μmol/L，平均为93.15μmol/L，血清铁（Fe）为（11.50～27.00）μmol/L，平均为17.69μmol/L，总铁结合力为（51.50～69.00），平均为61.73μmol/L；总胆红素（STB）为（8.20～54.00）μmol/L，平均为24.97μmol/L，结合胆红素(CB)为（1.80～7.70）μmol/L，平均为5.22μmol/L，非结合胆红素（UB）为（6.40～48.60）μmol/L，平均为20.86μmol/L；开始溶血的Nacl溶液为（3.60～4.40）g/L，平均为4.00g/L，完全溶血为（2.25～3.50）g/L，平均为2.83g/LNacl溶液。经过药物、输血、脾切除等对症治疗后，死亡3例（15.38%），失访2例。结论：地中海贫血为小细胞低色素性、常染色体遗传性溶血性贫血，其血清铁蛋白正常，骨髓铁染色阳性，直接胆红素正常，间接胆红素升高，渗透脆性减低，无性别差异。其分布有地域性，在我国南方多见，北方少见，但近年在新疆地区有上升趋势，临床上易误诊、漏诊。

关键词： 反相液相色谱   珠蛋白肽链   地中海贫血   异常血红蛋白  

摘要： 背景与目的 血红蛋白（hemoglobin, Hb）是人体内氧的运输体,每个血红蛋白由四条珠蛋白肽链组成四聚体,其中包含两个α类亚基和两个β类亚基,每个亚基又分别携带一个血红素。正常人体血红蛋白存在胚胎、胎儿和成人3个不同发育阶段。由于机体对于氧气需求不同,因此,不同的发育阶段所合成的血红蛋白种类也存在一些差异。这些不同发育阶段的血红蛋白为不同珠蛋白肽链所组合而成的四聚体结构,在胎儿期和成人期,α-链分别以γ-链(根据136位氨基酸的不同可分为Gγ和aγ形成Hb F （fetal hemoglobin, α2γ2）,或与δ-链形成Hb A2（α2δ2）,或与β-链形成Hb A （adult hemoglobin, α2β2）;而在胚胎期,α类珠蛋白肽链还有ζ-链,ζ-链与γ-链形成了Hb Portland（ζ2γ2）或与ε-链形成Hb Gower1（ζ2ε2）,此外,α-链与ε-链形成Hb Gower2（α2ε2）。 当珠蛋白肽链编码基因发生缺陷时,将导致两类不同的珠蛋白肽链改变,一类致使珠蛋白肽链合成减少或缺如,使形成血红蛋白的α-链/非α-链比例失衡,而导致一组遗传性溶血性疾病,称为地中海贫血,轻者可无临床表现,重者以进行性溶血性贫血为主要特征,根据珠蛋白肽链合成受到抑制的类型,地中海贫血可以分为α-地中海贫血、β-地中海贫血、δ-地中海贫血、γ-地中海贫血、δβ-地中海贫血和εγδβ地中海贫血等;另一类致使珠蛋白的一级结构发生改变,从而导致血红蛋白的分子结构发生改变,称为异常血红蛋白,大多数异常血红蛋白并不引起临床表型,但有少数异常血红蛋白导致明显功能改变,如溶血性异常血红蛋白Hb S及可引起地中海贫血样变的Hb E、Hb CS、Hb QS等可在单独存在或者复合地中海贫血时表现为中间型或重型地中海贫血。 这两类遗传性血液病的常用确诊方法依赖于基于聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）的分子诊断技术,如缺口-PCR（Gap-PCR）、反向点杂交（reverse dot blot, RDB）、变性高效液相色谱（denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC）、多重连接探针扩增技术（multiplex ligation-dependent probe amplification, MLPA）及高分辨率熔解曲线分析（high-resolution melting, HRM）等均已被应用于相关突变检测。尽管如此,表型研究在血红蛋白病的临床诊断及研究中占据着重要地位。没有表型指导下直接进行分子诊断则意味着耗时、高成本,同时使误诊风险加大,基因型与表型关系的复杂性也加大了诊断的困难,因此联合多种检测手段对于正确诊断显然是必要的。血液学表型分析和血红蛋白分析是目前指导后续分子诊断的重要参考指标。而珠蛋白肽链检测是表型研究中的重要技术之一,对于观察珠蛋白肽链合成改变或检测异常珠蛋白肽链均具有重要意义。目前其分析技术主要分为两大类,一类基于电泳原理,主要有醋酸纤维素薄膜电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、垂直等电聚焦及毛细管电泳;另一类则基于色谱分离原理,主要有羧甲基层析柱法和反相液相色谱法（reversed-phase high-performance liquid chromatography, RP-HPLC）。两类技术改进的方向均为提高分辨率和减少分析时长。其中反相液相色谱法得益于其高分辨率以及自动化分析是目前用于珠蛋白肽链分析的主流技术,尽管目前出现各种基于该法的检测条件,但目前其仍面临两个主要技术短板,样品预处理繁琐,为获得较高分辨率所需分析时间仍较长。另外一个重要技术问题是,由于目前所报道的色谱条件五花八门（包括所使用的色谱柱和洗脱条件）,而对于无现成条件可参考的反相色谱柱而言,其用于珠蛋白肽链分析的初始条件摸索和进一步的优化显然不是一件容易的工作。 本研究的主要目的是基于反相液相色谱建立一种珠蛋白肽链快速分离方法,并探讨该法在地中海贫血和异常血红蛋白中的应用价值,同时观察相关参数对色谱分离行为的影响,为与珠蛋白肽链分析相关工作提供有参考价值的经验。 材料与方法 1.样本收集：共收集了临床样本301例,其中正常样本106例,α-静止型和标准型共60例（2例合并Hb WS）,Hb H病59例,β-地中海贫血携带者46例（其中2例合并Hb E,3例合并Hb WS）,中重型β-地中海贫血30例（其中11例合并Hb E,2例合并Hb WS）.样本首先进行血常规和血红蛋白分析,标准型α-地中海贫血分子诊断的血液学指标为：MCV＜80几,MCH＜27pg,HbA2正常或偏低,Hb F＜1.0%;β-地中海贫血进

关键词： 石阡县   地中海贫血  

摘要： 汪正年说,无论如何,他不会放弃,他要留住女儿树琳。2012年的这个冬天,对于贵州省铜仁市石阡县而言,雨季格外漫长,这也无疑加剧了眼前的严寒。从贵阳通向石阡县的高速公路正在山下修建,距离农民汪正年家步行约半个小时。在以往还算不错的天气,这位32岁的

关键词： 重型β-地中海贫血   HbF   γ-珠蛋白表达   BCL11A基因   基因多态性  

摘要： 目的：探讨我国广西重型β-地中海贫血BCL11A基因rs11886868、rs1427407及rs766432多态性与其HbF水平及Y-珠蛋白表达的相关关系。 方法：收集无亲缘关系的广西籍重型β-地中海贫血患者(按是否治疗分为治疗组与未治组)及正常对照者的外周血,2ml提取基因组DNA并应用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction, PCR)、限制性片段长度多态性(Restriction fragment length,RFLP)及DNA测序技术,对我国广西重型β-地中海贫血患者BCL11A基因rs11886868、rs1427407及rs766432三个位点多态性进行检测,统计基因型频率,分析上述位点与正常对照组分布频率的差异,并分析重型β-地中海贫血未治组患者三位点多态性与HbF水平的相关关系。2ml提取单个核细胞中的总RNA,并逆转为cDNA,采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR中相对定量分析方法,以β-actin基因为参照基因,分别检测两组重型β-地贫患者中BCL11A基因rs766432位点中不同基因型中Y-珠蛋白基因的表达差异。采用相对定量双标准曲线法进行Y-珠蛋白基因mRNA相对表达量的比较,分析该位点不同基因型与Y-珠蛋白基因表达的相关关系。 结果：重型β-地贫未治组BCL11A基因rs1427407和rs766432位点各基因型分布与正常对照组对比有统计学差异(P<0.001；P<0.001),突变基因型的频率明显高于正常对照组,rs11886868位点各基因型分布两组比较无统计学差异(P>0.05)。在两组重型β-地贫患者中,基因型分布与三个多态性位点有较大关联(P<0.001,Cp=0.477)。重型β-地贫未治组中,rs11886868位点不同基因型之间HbF水平差异无统计学意义(P>0.05)。rs1427407位点和rs766432位点突变基因型HbF水平较未突变基因型高,各个基因型之间比较有统计学差异(P<0.001,P<0.001),相关性分析显示基因多态性与HbF水平有关(rp=0.931,P<0.001；rp=0.915,P<0.001)。而且,在p-地贫患者及正常人身上均发现了rs766432位点基因突变大部分伴随rs1427407位点基因突变,且突变类型绝大部分相同。用荧光定量RT-PCR分别对两组重型β-地中海贫血患者BCL11A基因rs766432位点不同基因型进行分析得出,两组中三种基因型γmRNA相对表达量比较有统计学差异(P<0.001,P<0.05),通过两两比较得知,未治组中,三种基因型γmRNA相对表达量各不相同；治疗组中,CC型比AA型γmRNA表达量增高。相关性分析显示基因多态性与γmRNA表达有关(rp=0.924,P<0.001；rp=0.567,P<0.05)。 结论：(1)在重型β-地贫未治患者中,BCL11A基因rs1427407和rs766432位点基因突变频率明显高于正常对照组,rs1427407和rs766432位点突变基因型HbF水平较未突变基因型高,证实这两个位点基因多态性与HbF水平有关,rs1427407和rs766432位点基因突变可能提高HbF水平。(2)两组重型β-地中海贫血患者基因型分布与三个多态性位点有较大关联。(3)rs1427407和rs766432位点基因突变可能存在个体重叠性,两位点基因突变之间可能存在一定关联。(4)两组重型β-地贫患者rs766432位点基因多态性与γmRNA表达有关,基因突变可能使Y-珠蛋白基因表达量增高,未治组中两者的关系更加明显。

关键词： 高保真聚合酶   硫化修饰引物   β地中海贫血   基因检测  

摘要： 目的：采用高保真DNA聚合酶介导的基因突变敏感性分子开关准确、快速检测β地中海贫血基因突变。 方法：首先提取正常人血液基因组DNA，根据已知中国人群β珠蛋白基因热点突变CD41-42、IVS-2nt654、TATAbox-28、CD17、CD71-72及CD26区域序列，分别设计引入突变位点的扩增引物，利用低保真酶进行引物延伸反应，将其PCR产物克隆到pMD19-T载体，得到β地中海贫血常见的六个突变位点的基因突变克隆：CD41-42、IVS-2nt654、TATAbox-28、CD17、CD71-72及CD26。然后以这六个突变位点为检测靶点，分别设计3’末端与野生型基因位点或突变型基因位点配对的引物，硫化磷酸修饰后偶联高保真DNA聚合酶构成基因突变敏感性分子开关。首先在不同体系分别对含有相应突变位点的六个阳性质粒模板及正常人基因组DNA模板进行引物延伸反应，并通过凝胶成像系统对其进行分析；然后在同一体系中同时对含有相应突变位点的六个阳性质粒模板及正常人基因组DNA模板进行引物延伸反应，并通过凝胶成像系统对其进行分析；最后对已知分别含有CD26和TATAbox-28突变位点的病人DNA样本进行检测。 结果：在不同反应体系分别对六个热点突变进行检测。结果显示，使用正常人的染色体DNA样本，该方法仅能使野生型等位基因相关引物得以延伸，而突变型等位基因位点特异性引物不能被延伸。反之，使用突变质粒模板，该方法仅能使突变型等位基因位点相关引物得以延伸，而野生型等位基因位点特异性引物不能被延伸。在同一反应体系同时对以上热点突变进行检测。同样，完全配对引物能被延伸，不完全配对引物不能被延伸。对分别含有CD26和TATAbox-28突变位点的病人DNA样本进行检测，与含CD26突变位点的病人DNA模板配对的突变引物有产物，不配对的无产物；与含TATAbox-28突变位点的病人DNA模板配对的突变引物有产物，不配对的无产物。 结论： 1.成功获得可用于基因检测技术研发的人工突变的地中海贫血基因突变阳性模板； 2.高保真聚合酶介导的突变敏感性分子开关对β地中海贫血基因单一热点突变有较高的特异性和敏感性； 3.高保真聚合酶介导的突变敏感性分子开关可用于多重PCR快速筛查β地中海贫血基因热点突变。

关键词： 地中海贫血   交叉配血困难   输血  

摘要： 目的 查找地贫患者交叉配血困难的原因,找寻解决交叉配血不合难题的方法,确保临床输血安全.方法 对患者血液进行输血前检查,通过不规则抗体筛选试验,查找并分析患者配血不合的原因.结果 ①、③、④、⑤四例患者直接抗球蛋白试验均为阴性,①患者血清中有IgG抗-E 抗体,查Rh 血型CCDee;③、⑤患者血清中有IgG 抗-E 抗-c 抗体并存,查Rh 血型均为CCDee;②患者直接抗球蛋白试验:抗-IgG 阳性,抗C3 阴性,患者血清中有IgM 和IgG 抗-E 抗体,患者放散液中检出抗-E 抗体,查Rh 血型为CCDee;④患者抗体筛选检出抗-e 抗体,查Rh血型为ccDEE.结论 在交叉配血试验中ABO 血型和RhD(+)是否相符合是关健,但Rh 血型系统中的E、e、C、c抗原是否相符合对长期需输血患者交叉配血影响也不容忽视.

关键词： β-地中海贫血   地西他滨   γ-珠蛋白基因   细胞凋亡   K562细胞  

摘要： 目的研究地西他滨对体外培养重型β-地中海贫血红系细胞γ珠蛋白的调控作用,探讨地西他滨治疗β-地中海贫血可能性。 方法 1.地西他滨作用于K562细胞24h、48h、72h。地西他滨的浓度从Onmol/L到300nmol/L。采用实时荧光定量RT-PCR (Q-RT-PCR)检测γ-珠蛋白基因表达,CCK-8检测K562细胞存活率的影响,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,筛选地西他滨诱导γ-珠蛋白基因表达的最佳效应。 2.将筛选获得的地西他滨诱导γ-珠蛋白基因表达的最佳浓度作用于体外培养的重型β-地中海贫血患者红系细胞,并设空白对照组,采用实时荧光定量RT-PCR检测珠α、β、γ-蛋白基因表达,高效液相法(HPLC)检测地西他滨作用后血红蛋白水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率,了解地西他滨对重型β-地中海贫血患者红系细胞γ-蛋白基因表达、胎儿血红蛋白生成(HbF)、细胞凋亡的影响。 结果 1.地西他滨诱导K562细胞的γ-珠蛋白基因表达具有浓度和时间依赖性。与24h和72h比较,地西他滨作用48h后γ-珠蛋白基因表达明显增多(P<0.01)；与100nmol/L和50nmol/L的浓度组比较,浓度为200nmol/L和300nmol/L地西他滨作用后Y-珠蛋白基因表达明显增多(P<0.01),其中浓度为200nmol/L和300nmol/L两组间比较不具有差异性(P>0.05)。地西他滨对K562细胞有生长抑制作用,细胞凋亡增加,该作用具有浓度及时间依赖性。200nmol/L和300nmol/L的浓度组均有较好的调控效果,但从K562细胞存活率及细胞凋亡率的结果中,可观察300nmol/L比200nmol/L的浓度组有明显的细胞抑制作用(P<0.05),最终选取200nmol/L作为地西他滨最适宜的作用浓度。 2.在体外培养的重型β-地中海贫血红系细胞中,200nmol/L地西他滨有助于诱导Y-珠蛋白基因表达,地西他滨组、空白对照组的Y-珠蛋白基因mRNA分别为14.19±1.96、11.15±1.53(P<0.01)；同时地西他滨可改善α/β+Y比值失衡,该比值在地西他滨组、空白对照组分别为1.33±0.16、1.65±0.17(P<0.01)。地西他滨作用后,胎儿血红蛋白(HbF)表达增加。 结论 地西他滨作用于体外液体培养重型β-地中海贫血的红系细胞,有助于诱导Y-珠蛋白基因表达,增加HbF水平,改善珠蛋白基因(α／p+Y)比例失衡。未来,地西他滨可能应用地中海贫血的临床治疗。

关键词： 拷贝数变异   α地中海贫血   荧光定量PCR   分子筛查  

摘要： 一、α珠蛋白基因拷贝数变异的检测方法研究 拷贝数变异(Copy number variants, CNVs)是一种重要的结构变异,可通过改变基因的剂量或影响基因表达来改变表型或导致疾病。CNV在人类基因组中的分布非常普遍,可影响基因组中超过10%的序列。然而受限于检测手段,这类遗传变异直到最近几年才为研究者所重视并迅速成为当前人类遗传学研究的热点。 以我们熟悉的α珠蛋白基因为例,可以看到该基因的拷贝数变异与α地中海贫血(简称α地贫)的临床表型间存在密切联系。正常个体中存在4个α珠蛋白基因。当1～4个α珠蛋白基因相继发生缺失时,可分别导致以下几种不同的临床表型：其中1个基因缺失时为“静止型”,没有可检测的临床症状,无明显血液学改变;2个基因缺失时为“标准型”,表现为典型的小细胞、低色素性贫血;3个基因缺失时为“中间型”,表现为血红蛋白病即HbH病,有明显的甚至严重的贫血症状,患儿从1岁左右即出现贫血,严重者肝脾肿大及黄疸,面黄肌瘦并伴骨骼变化,靠输血维持生命;4个基因都缺失时为“重型”,表现为致死性巴氏水肿胎综合症,是最严重的一种,生下来就是死胎或很快就死亡。除缺失外,α珠蛋白基因的重复会产生5个拷贝的α珠蛋白基因(αααanti3.7/αα或αααanti4.2/αα),这一额外的α珠蛋白基因会导致β地贫患者的临床症状加重。我们通过对α珠蛋白基因拷贝数的定量来确定基因型,直接筛查出地中海贫血的高危人群。不仅如此,还可以α珠蛋白基因为模型,探索出一种适用于其它靶基因位点拷贝数检测的通用方法,以满足目前对CNV-疾病间关系研究的需要。 近年来,多种基于芯片的高通量方法用于识别全基因范围内的CNV,如芯片比较基因组杂交(Array comparative genomic hybridization, Array CGH)、SNP分型芯片(SNP genotyping arrays)以及深度测序方法(Deep sequencing-based approaches)。这些方法具有较高的分辨率,主要应用于全基因组范围CNV图谱的构建和疾病的关联分析,但并不适用于诊断针对某种疾病的特定基因位点的拷贝数变异。而针对靶基因位点CNV的检测方法有以下几种：多重可扩增探针杂交(Multiplex amplifiable probe hybridization, MAPH),多重连接探针扩增(Multiplex ligation-dependent probe amplification, MLPA),短荧光片段多重定量PCR (Quantitative multiplex PCR of short fluorescent fragments, QMPSF)以及实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR)。作为筛查和诊断的目的,这几种方法都存在各自的优缺点。以目前应用较广泛的MLPA方法为例,该方法高效、特异,在一次反应中可以同时检测40多个靶序列拷贝数的改变。不足之处在于：1、开放式检测平台,容易造成污染;2、其设计的长探针不能通过普通的化学方法合成,需要通过M13载体克隆的方法获得;3、杂交步骤耗时过长(约16小时)。这些都限制了其作为分子筛查方法的推广和应用。 实时荧光定量PCR是比较受欢迎的检测平台,因为操作简便,快速高效,具有很高的敏感性和特异性;其次,是在封闭的体系中完成扩增并进行实时测定,有效的避免污染,而且直接检测结果,无需扩增后操作;另外,多荧光通道允许在同一反应体系中同时对多个靶序列进行扩增。该方法已广泛应用于针对特定位点进行拷贝数定量,对已知的CNV进行确认。但是多重PCR本身存在一些问题。如不同引物对之间的错配扩增,不同靶序列扩增效率不一致导致效率低的靶点被扩增效率较高的靶点所抑制,这些都会影响拷贝数定量分析。 为了更好的利用实时定量PCR的优势,同时又避免多重PCR扩增效率不一致的缺点,我们建立了一种基于多重加尾引物扩增的巢式实时荧光定量PCR的新方法。我们选择α珠蛋白基因作为建立该方法的候选基因。该方法的建立,有助于在人群中大规模筛查α珠蛋白基因的重复和缺失,建立一种可靠的分子筛查方法。在此基础上,有望成为一种适用于其它疾病相关的CNV进行快速分型的通用方法。 本方法的研究原理是针对特异位点序列设计加尾引物,包括上游引物和下游引物。经过有限循环的扩增后,扩增产物包含完整的基因组短片段序列及加尾序列。这样就将位点的起始拷贝数等比例转化为可供扩增的加尾产物的数目。然后加入通用引物及荧光检测探针,对不同位点的加尾产物同时扩增并记录荧光曲线Cq值。本研究将涉及到上述拷贝数变异的α1珠蛋白基因(简称α1)和α2珠蛋白基因(简称α2)作为待检基因,看家基因β-actin作为参考基因,将已知基因型的正常基