关键词： 缺失型α-地中海贫血   基因拷贝数定量   试剂盒研制   实时定量PCR  

摘要： 研究背景与目的 地中海贫血(thalassemia,简称地贫)是由于珠蛋白基因发生缺陷；致使珠蛋白链合成减少或缺如,使形成血红蛋白的α-链/非α-链比例失衡,而导致的一组严重威胁人类健康的致死、致残的遗传性血液病,主要发生在地中海沿岸国家、东南亚、非洲和我国南方地区,保守估计全世界地中海贫血基因携带者近2亿人,其中包括我国南方广西、广东、海南等省份。地中海贫血主要包括α-地中海贫血和p-地中海贫血,在广西、广东,α-地中海贫血基因的人群携带率分别高达17.55%、8.53%。此病目前缺乏有效治疗手段,应用相应分析技术通过人群筛查及产前诊断阻止重症患儿出生是国内外公认的首选预防措施。 α-地中海贫血属于常染色体隐性遗传病,其分子基础是位于16号染色体末端16p13.3位点上的人a珠蛋白基因簇的先天性遗传缺陷。导致α-链合成减少的基因缺陷主要(>95%)是α珠蛋白基因缺失,其缺失数目是a-地中海贫血临床表现及分型的依据。在我国南方地区常见的三种α-地中海贫血缺失基因型为--SEA/αα(东南亚型)、-α3,7/aa(右缺失型)、-α4.2/αα(左缺失型)。 目前对于α-地中海贫血的筛查仅停留在血液学指标,即只有明显的血液学表型的个体才会进行进一步的分子诊断,这会导致大部分的静止型携带者(如-α3.7/αα和-α4.2/αα)漏检,所以对于α-地中海贫血的筛查急需一种简单、快速基因分型的筛查手段。然而对于α-地中海贫血的分子诊断,Southern Blot杂交技术是金标准,准确性高,但操作繁琐、标本用量大、费时费力、检测通量小而不适合常规检测；目前常规的检测技术是gap-PCR技术,只能定性检测各已知缺失类型,工作量大、检测通量小,并且存在其他缺失类型的假阴性和PCR污染导致的假阳性,故仍不能满足当前大规模人群筛查及常规分子诊断的需要。 本课题组发明了一种用基因拷贝数直接定量快速诊断缺失型α-地中海贫血的方法(专利号：ZL201110081598.8),该方法是采用TaqMan实时定量荧光PCR技术直接定量分析HBZ、HBA1和HBA2的相对拷贝数来诊断是否存在缺失,有效避免了由缺失类型遗传异质性导致的假阴性和外源污染导致的假阳性,且易于实现自动化与标准化,提高了检测通量和检测效率,适合缺失型a-地中海贫血大规模人群筛查和常规分子诊断。 本研究是以该发明专利为技术基础,通过全基因组DNA提取的研制和PCR扩增检测体系的建立,研制出可用于临床常规检测应用的试剂盒,以满足当前临床检测的需要。 研究方案与方法 一个分子诊断方法,涉及到样本来源、样本制备、样本检测、结果分析等步骤,只有做好每个步骤的质量控制,才能保证结果的准确可靠,所以,基于这种完整的诊断流程,本研究具体实施了以下研究方案与方法。 1.样本采集、运送及保存。不同的抗凝剂对PCR扩增的影响是不同的,例如肝素抗凝的血液标本经DNA提取后仍会影响PCR的扩增效率。血液的新鲜程度也会影响DNA提取的质量。故本研究所采用的血液标本均要求为EDTA或枸橼酸钠抗凝全血,存放在4℃冰箱不超过7天,在-20±5℃保存期为6个月；若要长期保存,需储存于-80±5℃；标本应避免反复冻融。 2.全血基因组DNA提取。人类基因组DNA样本的浓度和纯度对PCR扩增都具有较大的影响,例如人类基因组DNA样本浓度太低(低于最低检测限)或含有PCR抑制剂会导致PCR扩增受到影响。因此本研究从红细胞裂解液、变性剂、消化时间、提取液和DNA溶解液等方面对DNA提取方法进行全面的研制,研制出一种能满足荧光定量PCR要求的DNA提取方法,并利用紫外分光光度计来监测DNA样本的浓度和纯度。 3.试剂盒原料的质量检测。原料质量合格是一个实验成功的基本要求,所以原料的质量检测尤为重要。主要的原料包括蛋白酶K、氯化锂、引物、探针和聚合酶。蛋白酶K应为白色絮状或粉末状；氯化锂应为白色结晶粉末,分析纯；引物和探针应采用紫外分光光度计测定浓度,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定,浓度不低于合成的浓度,电泳结果应为位置正确的单一条带,表示纯度合格；聚合酶应为无色粘稠的透明液体,于-20±5℃不冻结。 4.试剂盒配制与验证。试剂盒主要包括全血基因组DNA提取试剂和PCR检测试剂。全血基因组DNA提取试剂包括红细胞裂解液、DNA提取液A(缓冲液)、DNA提取液B(变性剂)、DNA提取液C(蛋白酶)、DNA提取液D、DNA溶解液。PCR检测试剂包括PCR反应液A(缓冲液,酶)和PCR反应液B(引物,探针)。所有液体配制需按照配制要求进行,配制好的液体按照相应的要求灭菌后存放或者直接存放。将配制好的全血基因组DNA提取试剂(柱提法)结合质检合格的试剂盒其它组分,以正常基因

关键词： &beta   thalassemia   beta-globin mutations   mean cell volume   mean cell hemoglobin   HbA(2)/E   amplification refractory mutation system-polymerase chain reaction  

摘要： Interpreting hemoglobin disorders by high performance liquid chromatography can sometimes deceptive, especially with borderline HbA(2) values. It is often problematic, especially in antenatal cases if the partner is a known thalassemia trait. We tested for underlying beta-thalassemia mutations in 24 subjects with borderline HbA(2) values (between 3.0%-4.0%). Amplification refractory mutation system-polymerase chain reaction was used to detect the five common Indian beta-thalassemia mutations: [IVS-I-5 (G>C), Cod 15 (G-A), Cod 8/9 (+G), Fr. 41/42 (-TTCT) and Cod 26 (G-A)]. beta-globin gene sequencing was performed if no mutation was detected. beta-globin gene defect was not identified in any of the samples. There was no presence of any of the five common mutations in the small cohort. The average value of HbA(2) in 24 normal samples was found to be 3.96. The average values for mean cell volume and mean cell hemoglobin (MCH) were found to be 82 and 28.8 pg respectively. Among these 24 normal samples, 13 had MCH below 27 pg and 11 had MCH above 27 pg. On the contrary, one thalassemic family was screened, in which the father of an HbE-beta thalassemia patient was found to have HbA(2) 3.1, being a beta-thalassemia carrier. Mutation analysis should be offered to all at-risk couples with borderline HbA(2), especially those with values between 3.5% and 4.0% and microcytic hypochromic indices. As, cases with some specific mutational background or clinical condition shows abnormally low HbA(2), so mutation screening should be performed in other partner if one partner found to be carrier or patient of thalassemia.

关键词： thalassemia   sociology   Messina   collaboration staff/patient  

摘要： Changing the care along with improved treatment, have altered the life of thalassemia patients, one of the world's most common genetic diseases (Thalassemia International Federation;http://***). The new demography of the disease, with its widely variable phenotypes, has implications for its diagnosis, counseling, and management. Improved of the new treatment of this ancient disease is essential for optimizing survival. From June 2010 to January 2011, we interviewed 36 people with thalassemia from a primary care in Messina (Center of Genetics and Immunology). The aim of this study is to show the results of a survey conducted in this Center in Messina. This study shows the importance of influence of a multidisciplinary approach, medical, psychological and social, that addresses the changing treatment and epidemiology of thalassemia in order to ensure a better quality of life and survival. Understanding the influence of all three types of resources, medical, psychological and social, is critical for constructing ways to enhance health capability, chronic disease self-management, and health.

关键词： 无创产前诊断   胎儿游离DNA   β-地中海贫血   连接酶检测技术   分子开关  

摘要： 背景和目的： 常用遗传性疾病产前诊断技术手段多为有创性操作,对孕妇及胎儿均有一定伤害，以致在临床推广及应用中受到限制。而非侵入性的产前检查方法如中孕期母血清HCG、AFP定量及超声检查的检测范围各有侧重，仅能作为遗传性疾病筛查的一种手段，不能作为诊断依据。近年来，随着胎儿游离DNA的研究不断深入使无创产前诊断方法取得巨大进展，利用孕妇血浆检测胎儿性别、RhD基因已经在国外的一些产前诊断中心开展;利用全基因组高通量测序及数字PCR等方法检测单基因疾病已有报道，目前仍处于研究阶段，成本昂贵，而且操作十分复杂。 β-地中海贫血(简称β-地贫)是一种由β-珠蛋白基因突变导致β-珠蛋白链合成减少或严重缺乏所引起的常染色体隐性遗传单基因疾病，是以β珠蛋白基因单核苷酸突变及小片段缺失为主要分子学基础。以该疾病作为研究对象，构建高特异性、高灵敏度、可用于低丰度基因单核苷酸突变及小片段缺失检测的技术，可为利用母体血浆中胎儿单基因遗传性疾病的检测寻求一种操作简单、成本低的新方法。 2004年Lo在Lancet报道应用等位特异性荧光定量PCR技术检测β地中海贫血小片段缺失突变CD41-42(del-CTTT)。但由于等位特异性PCR检测低丰度突变时敏感度不高，目前仍未应用于临床。近年有学者发现当引物3末端人为引入耐核酸酶外切的硫代磷酸修饰的碱基时，若引物3末端与模板不能完全匹配，具有3′→5′外切酶活性的高保真DNA聚合酶不能及时切除错配碱基，造成DNA聚合反应的非成熟性终止，阻止引物继续延伸，有效地减少了PCR在检测基因突变中常出现的假阳性结果。这一研究现已应用于部分单基因遗传性疾病临床样本的检测，但目前未见应用于低丰度基因突变的检测。 在前期实验中，以β-地中海贫血常见的两种单核苷酸突变位点为目标，利用常规PCR、LDR、毛细管电泳三者相结合的技术对所建立的地中海贫血胎儿母血浆DNA实验模型进行检测，发现该方法灵敏度为1:10000,因此证明该方法能够满足自孕妇血浆检测胎儿父源性单核苷酸突变的要求。但因在此实验中的PCR产物需要经过纯化，而后再将纯化产物应用于下一步LDR反应中，在纯化过程中极易污染，直接影响实验结果的准确性。 在本研究中，我们将高保真DNA聚合酶结合硫化修饰引物构成的“分子开关”与等位特异性实时定量PCR结合来检测低丰度β地中海贫血CD41-42(del-CTTT)突变，以期用于孕妇血浆中胎儿单基因疾病小片段缺失突变的检测。而对于基因单核苷酸突变的检测方法，我们将立足于前期实验基础之上进行简化实验步骤等改良，拟将PCR扩增产物直接应用于LDR反应后再进行毛细管电泳检测，不再进行纯化等繁杂的操作步骤，以期达到减少污染、节约成本的目的。 材料和方法： 1. DNA聚合酶结合普通引物与高保真聚合酶结合硫化引物分别进行常规PCR扩增β地中海贫血CD41-42(del-CTTT)突变基因片段 全血基因组提取、引物退火温度测试[模板为正常基因组DNA与CD41-42(del-CTTT)杂合突变基因组DNA]、扩增片段切胶回收后测序。 2.高保真DNA聚合酶结合硫化引物构成的“分子开关”结合等位特异性实时定量PCR检测β地中海贫血CD41-42(del-CTTT)突变基因片段 将CD41-42(del-CTTT)杂合突变基因组DNA稀释成各浓度梯度进行扩增检测，正常基因组DNA稀释成各浓度梯度作为对照。 3.利用甲基化敏感限制性酶切法结合实时定量PCR检测高甲基化RASSF1A片段以验证孕妇血浆DNA是否存在胎儿游离DNA。 采孕妇新鲜外周血5ml，制备血浆后提取孕妇血浆DNA,限制性内切酶Hinp1I和Hha I进行酶切后，实时定量PCR以RASSF1A为靶点检测胎儿游离DNA。 4.普通PCR、LDR、毛细管电泳技术相结合的改良方法检测低丰度单核苷酸突变基因 4.1提取人类基因组全血DNA后送公司测序证实突变基因类型。将20pgCD17(A→T)突变杂合子、IVS-Ⅱ-654(C→T)杂合子突变型基因组DNA分别和1ng、10ng、50ng、100ng的正常基因组DNA混合后建立β-地贫胎儿孕妇血浆模型，正常基因组DNA作为阴性对照。PCR扩增产物进行LDR反应后结合毛细管电泳检测连接产物。计算灵敏度。 4.2检测正常孕妇血浆中的微量单核苷酸突变 正常孕妇血浆DNA中加入20pg单核苷酸突变杂合子外周血DNA后进行扩增、扩增产物电泳及LDR检测反应。 结果： 1.无3′→5′外切酶活性的DNA聚合酶结合普通引物进行PCR扩增、电泳检测产物后可见未明显体现等位特异性PCR扩增的温度特异性;有3′→5′外切酶活性的高保真聚合酶结合硫化引物进行PCR扩增、电泳检测产物后可见PCR扩增退火温度越高，特异性越好，至67.8℃时，可判读正常基因与C

关键词： hemoglobinopathies   population screening   beta-thalassemia trait  

摘要： Hemoglobinopathies, common genetic disorders of hemoglobin, can be prevented by population screening and genetic counseling. Identification of these disorders is immensely important epidemiologically and aid in prevention of more serious hemoglobin disorders. Thalassemia is the commonest monogenic disorder in India, which belongs to the thalassemia belt of the world. The present study was undertaken to find out the characteristics of beta-thalassemia trait and spectrum of this disorder among the rural population, screened under the hospital-based screening program in West Bengal, a state in eastern part of India. This study was carried out in school and college students, newly married couples and pregnant women after proper counseling in the rural areas of five southern districts of this state. Blood samples were tested by high-performance liquid chromatography. Total 1429 beta-thalassemia traits were detected by random screening from this population. The mean value of HbA(2) of the study population, having beta-thalassemia trait is 4.9%. The prevalence (10.5%) of beta-thalassemia trait in West Bengal is higher than other parts of the country. These data are likely to help us in future planning for screening programmes in rural areas of West Bengal, India.

关键词： CHINESE medicine   ERYTHROCYTES   ANEMIA   BIOCHEMICAL markers   BLOOD analysis   DNA   EXPERIMENTAL design   GENES   HEMOLYSIS & hemolysins   HERBAL medicine   RESEARCH -- Finance   RNA   T-test (Statistics)   THALASSEMIA   WESTERN immunoblotting   TREATMENT effectiveness   ALPHA-Thalassemia   BETA-Thalassemia   DESCRIPTIVE statistics   GENOTYPE   EVALUATION   THERAPEUTIC use  

摘要： The objective of this study was to investigate the therapeutic biological mechanism of Yisui Shengxue Granule (YSSXG), a complex Chinese medicine, on the hemolysis and anemia of erythrocytes from patient with thalassemia disease. Sixteen patients with thalassemia (8 cases of alpha-thalassemia and 8 cases of beta-thalassemia) disease were collected and treated with YSSXG for 3 months. The improvements of blood parameter demonstrated that YSSXG had a positive clinical effect on patients with thalassemia disease. For patients with alpha-thalassemia disease, RT-PCR showed that YSSXG upregulated the relative mRNA expression level of alpha-globin to beta-globin and downregulated DNMT1, DNMT3a, and DNMT3b mRNA compared with pretreatment. Western blotting showed that YSSXG downregulated the expression of DNMT1 and DNMT3a. For patients with beta-thalassemia disease, the relative expression level of (A)gamma-globin to alpha-globin had an increasing trend and the level of BCL11A mRNA expression obviously increased. For all patients, RT-PCR showed that YSSXG upregulated mRNA expression of SPTA1 and SPTB. Activities of SOD and GSH-Px significantly increased and MDA obviously reduced on erythrocyte and blood serum after YSSXG treatment. TEM showed that YSSXG decreased the content of inclusion bodies. Activities of Na+ K+-ATPtase and T-ATPtase of erythrocyte increased significantly after YSSXG treatment. This study provides the basis for mechanisms of YSSXG on thalassemia suffering with hemolysis and anemia of erythrocytes from patient.

关键词： 地中海贫血   基因治疗   诱导多功能干细胞  

摘要： 地中海贫血(简称地贫)是最常见的血液系统遗传病之一,在我国主要分布于长江以南各省,其中两广、云贵及海南为高发省区。重型地贫不仅对患者的生活质量造成巨大的影响,而且为社会和家庭带来巨大的经济负担。输血、除铁和骨髓移植等是地贫的传统治疗方法,近年来由于干细胞技术的发展,地贫的基因治疗有了长足的进步。本文就地贫的基因治疗进行综述。

关键词： 大片段重组   中间型β地中海贫血   HbH病   α珠蛋白基因   CGH  

摘要： 研究背景与目的 地中海贫血(thalassemia,简称地贫)是由于珠蛋白基因表达比例失衡引起的一种遗传性血液病,表现为小细胞低色素性贫血。在我国主要发生在广西、广东、海南等省份。α-珠蛋白基因或者p-珠蛋白基因缺陷分别对应产生α-地贫或p-地贫,出生后血红蛋白主要成分为HbA,由两条α链和两条拾链组成,其中珠蛋白链由位于16p13.3的玖-珠蛋白基因簇和11p15.3的p-珠蛋白基因簇合成。据文献报道,大约90%的α地中海贫血是由包含α珠蛋白基因簇或其调控区域的片段缺失导致,大约95%的p地中海贫血是由p珠蛋白基因簇上的点突变引起。 α-地中海贫血的表型因α珠蛋白基因缺陷的数目不同而表现出多样性。一个α基因缺失或突变为α+地中海贫血,两个α珠蛋白基因缺失或突变为值α0地中海贫血。一个或者两个α基因缺陷会导致轻度贫血症状。三个α基因缺陷时会引起HbH病,表现中度至重度贫血症状,四个α基因缺陷会导致围产期死亡,即Hb Bart's水肿胎。对于一个α0地贫携带者和α+地贫携带者夫妇,其后代有25%的机会罹患HbH病。因此鉴定各种缺陷对于产前诊断是很有必要的。 在α-地中海贫血中缺失突变属于常见类型,但α-珠蛋白基因簇重复容易被忽略,除非与p珠蛋白基因缺陷共遗传加重表型而被检测。过量的α-珠蛋白基因表达可能使p-珠蛋白基因缺陷的携带者表型从轻型加重成中间型。 本研究鉴定了一个大片段重复突变家系和一个大片段缺失突变家系,两个大片段重排均从16号染色体短臂端粒起始,覆盖整个α基因簇。通过实时荧光定量PCR分析两个罕见突变中珠蛋白基因的mRNA表达水平。希望基于本次研究以筛查无法用常规方法鉴定的罕见地贫样本,并对研究基因组重组提供案例。 材料与方法 1.研究对象 家系A：先证者是一个来自湖南邵阳的7岁小女孩,4岁时诊断为中间型p地贫,出现黄疸和肝肿大,血液学参数为：Hb54g/L、MCV68.4fL、MCH16.7pg、HbA26.8%和HbF6.3%,排除缺铁性贫血。先证者从出生11月时开始接受不规律输血,共四次。 家系B：先证者是一个来自广西柳州的8岁小男孩,6月大时贫血面色苍白进行不规律输血,近一年来每月规律输血。先证者发育迟缓,肝脾肿大,严重贫血,在输血后一个月的血液学参数为：Hb45g/L、MCV73.5fL、MCH19.2pg、 HbA22.3%和HbF0.7%。 2.实验方法 采集先证者及其家庭成员的新鲜血样,进行血液学表型分析,结合表型分析结果进行α珠蛋白和β珠蛋白基因簇常见突变的检测。分析发现检测的已知突变不足以解释先证者表型,从而通过多重连接探针(MLPA)方法检测珠蛋白基因拷贝数变化。结果显示HBA基因探针检测位置全部缺失或重复,继而采取比较基因组杂交方法(aCGH)分析缺失或者重复断裂点区域。通过aCGH结果显示的断裂点范围,设计不同组特异性引物。将先证者基因组DNA片段化至2-3kb后,连接上通用片段后用通用引物扩增,完成建库。通过特异性引物与通用引物扩增建库后的样本,磁珠纯化后将扩增产物连接至T载,转化,挑取单克隆进行菌落PCR验证后送测序。通过该双重PCR、克隆、gap-PCR鉴定出大片段缺失或者重复的断裂点位置。通过实时荧光定量方法分析珠蛋白基因的mRNA表达水平,分析罕见突变杂合子对α-珠蛋白基因表达的影响。 研究结果 1.断裂点鉴定 在家系A中,先证者7岁女孩输血一年后血红蛋白含量为61g/L,为小细胞低色素贫血,其中平均红细胞体积MCV为63.7fL、平均血红蛋白含量MCH为18.3pg,并且HbA2和HbF升高,分别为4.5%和7.7%。通过对β珠蛋白基因全长测序分析发现先证者携带有βCD41-42杂合突变,该杂合突变遗传自其母亲,α-珠蛋白基因全长突变未发现致病突变。多重连接探针技术分析α珠蛋白基因簇拷贝数,结果发现该先证者有大片段重复,重复范围超出探针指示范围,无法确定断裂点。全基因组比较基因组杂交技术显示,该先证者出现一个杂合的大片段重复,重复范围为从16号染色体短臂端粒起始至282kb(UCSC,hg19)。通过双PCR方法,显示从16号染色体短臂端粒起始至282199bp的大片段序列插入16号染色体短臂94054bp和94055bp之间,并在断裂点引入一个A碱基。结果分析显示,16号染色体94038bp-94053bp的序列和282184bp-282199bp的序列是一致的。对其他家系成员分析发现,该大片段重复突变遗传自其父亲。该大片段重复包括完整的α-珠蛋白基因簇,使α-珠蛋白基因数量从4个增加到6个,与βCD41-42共遗传解释了中间型β地贫的表型。 在家系B中,8岁男孩先证者在输血一个月后血红蛋白含量

关键词： 骨髓移植   脐血移植   同胞   联合   重型β地中海贫血  

摘要： 研究背景 地中海贫血(thalassemia)是世界上最常见的遗传性血液病之一,因该病最早发现的病例是地中海沿岸地区的人而得名,也称为海洋性贫血。地中海贫血的分子基础是珠蛋白基因遗传缺陷导致珠蛋白肽链合成障碍,非α肽链(p、6、γ)和a肽链合成比列失衡,进而引起红细胞破坏造成贫血、溶血和无效造血,其中a和p地中海贫血是最重要的地贫类型。重型p地中海贫血(β-thalassemia major),亦称库勒贫血(Cooley' anemia),为p0、矿基因纯合子或双重杂合子状态,临床以慢性进行性溶血性贫血、特殊面容、肝脾大及血红蛋白F明显升高为特征,是我国常见的一种地中海贫血,我国的高发区主要分布在长江以南各省区,尤以广西、广东和海南三省为高。 重型β地中海贫血是一种进展性疾病,目前常规治疗方法主要包括二个方面：(1)输血治疗。每10～30天1次,使血红蛋白(Hb)维持在90-120g/L,以纠正患者严重的贫血状态；(2)正确使用铁螯合剂。铁螯合剂能够防止并逆转过量铁质在组织细胞内的积蓄,同时减轻铁参与导致的自由基氧化损伤,延长地贫患者生命并改善生存质量。世界卫生组织(World Health Organization,WHO)推荐的地贫儿童合理的治疗方法是每天持续皮下注射去铁胺(Desferrioxamine, DFO)至少10小时,每周至少5天,这种治疗的长期坚持性难于确定,现在也有两种口服去铁剂(去铁酮(Deferiprone,DFP)和地拉罗司(Deferasirox,DFX)),极大地改善了地贫患者在治疗过程中的依从性,但同样存在较明显的不良反应。尽管规律输血和去铁治疗使地贫患者的生活质量提高及生存期延长,但这一疾病最终还是导致患者早期死亡。死亡原因主要是：(1)慢性贫血及其并发症；(2)未适当使用铁螯合剂导致铁沉积病,长期输血导致的铁累积,加上贫血状态促进的胃肠道铁吸收,使得机体处于铁过载状态,进而引起慢性心脏、肝脏、内分泌系统损害等严重并发症。在中国,1名重型地中海贫血患者,如果接受正规输血及去铁治疗,每年的费用在5万元以上,尽管没有确切的统计数据,但临床实践表明,这些重型地贫病人因经济原因绝大多数得不到有效的治疗在15岁前死亡。即使给予正规的输血和去铁治疗,仍有高于50%的重型地贫病人在35岁前死亡。由此可见,重型β地中海贫血给家庭和社会造成严重的危害,对提高人口质量构成严重威胁。 自1982年Thomas等成功运用人类白细胞抗原(Human leukocyte antigen,HLA)全相合的同胞骨髓移植(bone marrow transplantation,BMT)治疗重型地贫以来,异基因造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation, HSCT)开始被运用于治愈地贫。异基因HSCT是目前根治重型地贫唯一的治疗方法,已被医学界说普遍接受。通过HSCT治疗的重型地贫患者的生活质量明显高于传统输血和去铁治疗的患者。超过3000例重型地贫及镰刀细胞病患者通过HSCT得到治愈,其中大部分患者的造血干细胞来源于HLA全相合的同胞骨髓,造血干细胞移植应作为有HLA相合的同胞供者的重型β-地贫患者首选治疗方案。然而,移植物抗宿主病(graft versus host disease, GVHD)目前仍然是造成骨髓移植失败和移植相关死亡的主要因素。同时,骨髓采集属于侵入性操作,对小供者来说创伤较大,若单纯采用骨髓,小供者可能不能耐受大量骨髓的采集。 脐血(umbilical cord blood,UCB)中含有大量的造血干细胞,脐血中CD34+细胞比例约占有核细胞的比例与骨髓相似。而且脐血具有来源广泛、采集方便,对产妇和新生儿无影响,不涉及伦理,GVHD发生率较低,能够克服HLA不相合障碍及污染率较低等优点。自1995年Issaragisil等首次应用脐血移植治疗重型p-地贫／血红蛋白E病(hemoglobin E disease,HBE)获得成功,脐带血很快被认为是重型地贫HSCT很好的来源。脐血移植用于治疗重型p-地贫主要障碍有植入率低和造血及免疫重建延迟。单份脐血中造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)数量有限,脐血每单位含有单个核细胞数为骨髓(bone marrow,BM)的1/10,而地中海贫血是骨髓增生活跃,且长期输血引起的异基因免疫反应,移植时要求有核细胞数(total nucleated cells,TNC)数量大才容易植入。为克服脐血移植后植入困难,目前所采用的措施有脐血的体外扩增、双份脐血输注、联合输注(骨髓+脐血,间充质干细胞+脐血等)方式。 南方医科大学附属南方医院儿科移植中心自20世纪90年

关键词： thalassemia   hemoglobin a   transfusion   chronic hemolytic anemia   erythropoiesis  

摘要： The thalassemias are a group of inherited disorders of hemoglobin synthesis characterized by various degrees of defective production of the alpha- or beta-globin chains of adult hemoglobin A. Non-transfusion- dependent thalassemia (NTDT) includes a group of thalassemia patients who do not require regular RBC transfusions for survival, but may require occasional transfusions due to infection or pregnancy or may require more regular transfusions later in life due to splenomegaly or other complications. Due to the rising phenomenon of global migration, this previously well-localized entity is currently spreading more and more worldwide reaching Northern America and Northern Europe. The clinical picture of NTDT is governed by the severity of the ineffective erythropoiesis and the chronic hemolytic anemia, which, in turn, lead to iron overload, hypercoagulability, and an array of clinical complications involving almost every organ system. Patients with NTDT suffer from complications that are distinct from those encountered in patients with transfusion- dependent thalassemia (TDT) in addition to the complications shared by both TDT and NTDT. As a consequence, patients with NTDT deserve a care specifically tailored to their needs. In the care of patients with NTDT, aiming at a standardized yet personalized care is not an easy task especially that NTDT patients lie on a heterogeneous spectrum with a wide variability in their clinical presentation and response to therapy. Therefore, guidelines emerge as a necessity to answer the specific needs of NTDT patients and the clinicians caring for them. In this article, we summarize the complications most commonly associated with NTDT and the recommenda-tions of the guidelines for the management of patients with NTDT, based on the best available evidence.