关键词： 地中海贫血   毛细管电泳   Hb   Bart’s   HbA   脐血   基因  

摘要： 【目的】 1、通过毛细管电泳检测脐血Hb Bart’s和Hb A，Luminex200液相芯片技术对脐血行基因诊断，以基因结果为金标准，评价脐血毛细管电泳法筛查新生儿α-地中海贫血及新生儿β-地中海贫血的价值。 2、并通过Luminex200液相芯片检测脐血的基因结果，获得广东地区新生儿α-地中海贫血及β-地中海贫血的携带率。 【方法】 1、抽样方法：广东省共21个地级市，在每个地级市分别抽取一个具有出生缺陷监测的区县，然后在该区抽取1-5间医院（要求年分娩量大于600例），确定了抽样医院共91家，在各个抽样医院收集自2012年5月至2012年12月住院分娩的新生儿合格脐血共13396例。 2、应用第二代全自动毛细管电泳技术对脐血进行血红蛋白电泳分析，获得各血红蛋白组分：HbA、Hb F、HbA2和Hb Bart’s。 3、采用液相芯片Luminex200系统检测地贫基因常见的23种突变，包括三种α-基因缺失，三种α-基因点突变和17种β-基因点突变。 4、使用受试者工作曲线（receiver operating characteristic curve，ROC）曲线评价毛细管电泳筛查新生儿β-地贫的价值，并得出最佳的HbA的截断值。 5、数据分析采用SPSS13.0统计学软件进行统计学分析，血红蛋白百分比含量呈非正态分布，采用中位数，第25百分位数和第75百分位数M （P25P75）表示。计算皮尔森相关系数得出胎龄与Hb A的相关性，各组的Hb A通过秩和检验进行统计检验。 【结果】 1、13396例新生儿脐血经基因诊断，1571例是α-地贫携带者，500例是β-地贫携带者，76例是α β复合型地贫携带者，广东地区新生儿地贫携带率为16.03%。α与β基因总突变2273例，广东地区新生儿地贫基因突变总携带率为16.97%。其中α-地贫基因突变位位点1692例，α-地贫基因突变携带率为12.64%，其中东南亚缺失型（--SEA）基因突变携带率为6.52%，β-地贫基因突变点581例，β-地贫基因突变携带率为4.34%，其中CD41-42（-CTTT）基因突变携带率为1.81%。 2、毛细管电泳13396例脐血，1212例为Hb Bart’s阳性标本，经基因验证，1179例为α-地贫。以基因诊断为金标准，毛细管电泳以Hb Bart’s为指标，筛查中重型α-地贫的灵敏度为100%，标准型为97.06%，静止型为49.45%。特异性均为99.71%。 3、毛细管电泳13396例脐血，11249例非地贫基因携带者Hb A为18.00%，498例轻型β-地贫HbA为9.80%，2例中间型β-地贫HbA分别为3.10%，7.10%。经秩和检验，非地贫基因携带者HbA与β-地贫携带者HbA差异具有统计学意义。 4、记录有胎龄（29周≤胎龄<42周）的10898例新生儿，经计算皮尔森相关系数，总体上，胎龄与HbA具有相关性。早产β-地贫携带者HbA为5.10%，早产非地贫基因携带者HbA为13.90%，两者差异具有统计学意义。足月β-地贫携带者HbA为10.10%，足月非地贫携带者HbA为18.20%。两者差异具有统计学意义。 5、使用ROC曲线，在早产儿中，得出Hb A最佳截断值为11%时，灵敏度为98.60%，特异度为94.40%。在足月儿中，当Hb A截断值为13%时，灵敏度为98.40%，特异度为76.00%。 【结论】 1、脐血毛细管电泳以Hb Bart’s为指标，可用于筛查新生儿α-地贫，但筛查静止型α-地贫（尤其是-α3.7/αα）存在较高漏筛率。 2、脐血毛细管电泳定量Hb A可用于筛查新生儿β-地贫。考虑胎龄的因素，足月儿HbA截断值为13%，早产儿的HbA的截断值应稍低。 3、广东地区新生儿地中海贫血携带率高。

关键词： 非输血依赖型地中海贫血   生活质量   PedsQL4.0   SF-36v2   影响因素   铁过载   祛铁治疗  

摘要： 目的：调查及评价非输血依赖型地中海贫血(Non-transfusion-dependent thalassemia, NTDT)患者的生活质量(Quality of life, QOL)及其影响因素,为提高患者生活质量提供理论依据。 方法：采用儿童生存质量普适性核心量表4.0(The Pediatric Quality of Life Inventory Measurement Models, PedsQL4.0)及SF-36量表第二版(the version2of SF-36-health survey, SF-36v2)两个量表问卷的方式,对2013年6月至2014年3月在广西医科大学第一附属医院进行诊疗的130例5岁至63岁的NTDT患者进行生活质量调查,并采用1：1配对的研究方法,通过t检验的方法,比较其与正常人群的生活质量；通过Spearman相关分析和多元线性回归模型分析影响生存质量的因素。 结果：***患者与正常人群生活质量比较：NTDT未成年患者在生理功能Physical health)、情感功能(Emotional functioning)、社会功能(Social functioning)、学校表现(School functioning)4个维度的得分及生活质量总得分均明显低于正常未成年人(P<0.05)。其中,学校表现维度的得分差值最大。NTDT成年患者在生理功能(Physical Functioning, PF)、生理职能(Role Physical, RP)、身体疼痛(Bodily Pain, BP)、总体健康(General Health, GH)、活力(Vitality, VT)、社会功能(Social Functioning, SF)、情感职能(Role Emotional, RE)、精神健康(Mental Health, MH)8个维度以及生理健康总分(Physical Component Summary, PCS)、心理健康总分(Mental Component Summary, MCS)均明显低于正常成年人(P<0.01),其中,总体健康、活力和精神健康3个维度的得分差值最大。心理健康总分(MCS)的差异高于生理健康总分(PCS)。2.生活质量各影响因素回归分析显示：血红蛋白水平和血清铁蛋白水平影响未成年人生活质量总得分及成年人生理健康总分。 结论：非输血依赖型地中海贫血患者的生活质量明显低于正常人群,与患者的血红蛋白水平、血清铁蛋白水平有明显关系,应加强NTDT患者规范化输血治疗及祛铁治疗,提高患者生活质量。

关键词： 地中海贫血   妊娠结局   系统评价  

摘要： 背景：地中海贫血被WHO列为危害人类健康的6种常见遗传病之一，严重危害患者的健康。随着人们对孕期保健和优生优育的重视程度不断提高，地中海贫血对孕妇妊娠结局的影响仍然说法不一，本研究按照Cochrane系统评价的方法分析地中海贫血对孕妇妊娠结局影响的研究，通过科学可靠的方法合并效应量，了解地中海贫血孕妇的妊娠结局与正常孕妇的妊娠结局是否存在差异。 目的：旨在明确两个问题，一是地中海贫血孕妇的妊娠结局与正常孕妇的妊娠结局相比，是否存在不良妊娠结局发生率升高的情况，二是如果地中海贫血孕妇的不良妊娠结局发生率确实存在升高的情况，探讨不同类型的地中海贫血对孕妇妊娠结局的影响是否有差异，为临床决策以及今后的研究提供依据。 方法：按照Cochrane系统评价方法进行Meta分析和描述分析。经研究人员讨论并试验后确定检索词及检索策略，检索Pubmed，Elsevier，Cochrane Library，isi web of knowledge、中国期刊全文数据库、维普中文科技期刊数据库、万方数据库、中国生物医学文献数据库上从建库至2014年1月发表的关于地中海贫血与孕妇妊娠结局研究的文献，由两名研究员根据文献纳入和排除标准进行文献筛选，质量评价和数据提取。采用RevMan5.2软件进行meta分析和发表偏倚检测。 结果：共纳入符合标准的研究13篇，其中中文文献7篇，英文文献6篇，均为队列研究，文献整体质量较好。meta分析发现地中海贫血孕妇的妊娠结局与正常孕妇的妊娠结局相比，剖宫产、早产以及新生儿低体重的发生风险明显增加，巨大儿发生风险无明显增加。将剖宫产、早产及新生儿低体重研究分亚组进行分析。剖宫产亚组结果显示，地中海贫血孕妇与正常孕妇相比，剖宫产发生风险未上升，β地中海贫血孕妇与正常孕妇相比，剖宫产发生风险上升49%。(RR=1.49，95%CI[1.28，1.72]，P＜0.05）。早产亚组结果显示，中海贫血孕妇与正常孕妇相比，早产发生风险无上升，β地中海贫血孕妇与正常孕妇相比，出生缺陷风险上升111%(RR=2.11，95%CI[1.38，3.23]，P<0.05）。新生儿低体重亚组分析结果显示，中海贫血孕妇与正常孕妇相比，新生儿低体重发生风险无上升，β地中海贫血孕妇与正常孕妇相比，出生缺陷风险上升73%(RR=1.73，95%CI[1.42，2.11]，P<0.05）。漏斗图分析提示文献有一定的发表偏倚。 结论：地中海贫血孕妇的妊娠结局与正常孕妇的妊娠结局相比，剖宫产、早产、新生儿低体重发生风险明显增加，存在正相关，巨大儿发生风险无明显增加。亚组分析结果显示，β地中海贫血与地中海贫血相比，有更高的风险发生剖宫产、早产及新生儿低体重。敏感性分析结果表明本次系统评价结果稳定可靠。

关键词： 婚检   地中海贫血   出生缺陷   发生率  

摘要： 目的探讨婚检人群地中海贫血(以下简称地贫)筛查对出生缺陷发生的影响,为制定进一步干预措施提供科学依据。方法对广西婚检人群开展免费婚检,将地中海贫血筛查列为婚检必检项目,统一采用血常规五分类法判断地贫基因携带者。根据广西出生缺陷监测报表统计结果分析地贫筛查实施前后广西出生缺陷发生的变化趋势。结果 2011—2013年广西婚检人群地贫筛查人数为2 629 528人,检出地贫阳性486 000人,阳性检出率18.48%。其中男女双方均阳性55 988对,男女双方阳性检出率4.26%。实施婚检筛查后广西的中重型地贫儿在出生缺陷病种排位中由2009年(筛查前)的第1位降到了2013年的第4位,出生缺陷发生率也呈逐年下降的趋势,由2009年的20.64‰降到2013年的11.63‰。结论对婚检人群实施地贫筛查并对高风险人群登记随访及进行婚育指导,对预防地贫发生,从而降低出生缺陷的发生率有非常重要意义。

关键词： 地中海贫血   基因筛查   出生缺陷   基因诊断   优生优育。  

摘要： 目的:了解广西崇左市育龄人群地中海贫血(简称地贫)基因的携带率,预防地中海贫血重症患儿的出生,降低有缺陷的患儿的出生率。方法:根据血细胞分析中的平均红细胞体积(MCV),平均红细胞血红蛋白量(MCH),并结合血红蛋白电泳:MCV<82fl和(或)MCH<27pg,HbA<2.5%,HbA2>3.5%,和/或HbF增高,出现以上任何一项异常均为地中海贫血初筛阳性,可疑为α或β地中海贫血,然后在我院抽血送南宁金域医学检验公司分别进行α、β地中海贫血基因检测,检验结果送我院,对地贫表型阳性者进一步行地贫基因分析及统计,跟踪结局。用此法对1418例育龄人群进行基因检测。结果:1418例受检者中筛查阳性349例,其中124例接受α、β地中海贫血基因诊断,基因携带率α地贫为11.41%、β地贫为4.26%。结论:选择合适的检查方法对育龄人群进行地贫基因筛查,可以减少地贫患儿的出生,起到提高出生人口质量的优生优育的作用。

关键词： α-地中海贫血   KLF1基因   突变   遗传修饰因子  

摘要： 背景 α-地中海贫血（α-地贫）是一种隐性遗传性溶血性血红蛋白疾病,在我国南方地区具有很高的人群携带率（广西：17.55%和广东：8.53%）。其致病机理是由于α珠蛋白基因缺陷,导致相应的α-珠蛋白肽链合成不足,破坏α-与β-珠蛋白链平衡,从而引起溶血性贫血。α-地中海贫血的表型差异主要取决于缺陷的α-珠蛋白基因的数目。一般来说,正常个体携带有4个功能正常的α-珠蛋白基因。在α-地中海贫血个体中,随着缺陷的α-珠蛋白基因的数目增加,病情会相应的加重,期间涵盖了极其广泛的表型谱,从无临床症状到宫内或出生后数小时内死亡。除此以外,α-地贫表型还会受到α-珠蛋白基因突变等位基因型或非连锁的修饰基因影响。相对于日渐丰富的β-地中海贫血的表型修饰基因,目前关于α-地中海贫血的遗传修饰作用我们却知之甚少。迄今为止,只有β-地中海贫血基因已被明确证实可改善α-地中海贫血的严重程度。但越来越多的研究显示仅凭致病基因α-珠蛋白的基因型和修饰基因β-珠蛋白的基因型仍然不足以解释个体间较大的表型差异。例如,静止型α-地中海贫血携带者（主要包括-α3.7/αα,-α4.2/αα和αWSα/αα）的血液学指标通常是属于正常范围,但有时却会出现低色素和/或小细胞现象。此外,在散发性案例或小鼠模型中,发现有少数基因如HS-40,BRG1,PIP4KIIA和AHSP,可能作为α-地中海贫血潜在的修饰基因,参与调控血红蛋白H病（Hb H）的严重程度。 红系调控因子KLF1基因（Erythroid Kriippel-like factor）是一个与红系发育密切相关的重要因子,可以调控一系列与红细胞的发育相关的基因,另外,还参与调控胎儿血红蛋白（Hb F）到成人血红蛋白（Hb A）转化。最近的研究表明,在正常人或散发的α-地中海贫血携带者（基因型为-α3.7/αα）中,KLF1基因突变能触发的一系列良性红细胞表型,如In（Lu）稀有血型,血红蛋白A2（HbA2）含量增高和胎儿血红蛋白水平增高。因此,KLF1可能通过调节不同的血红蛋白肽链合成,弥补或加重α-与β-珠蛋白肽链不平衡程度,从而改变α-地中海贫血血液指标或影响临床表型的轻重。 本次研究通过筛查大样本的α-地中海贫血人群的KLFl基因突变,通过比较携带具有功能影响的KLF1突变个体与KLF1野生型个体之间血液学指标和临床表型差异,来评估它是否具有对α-地中海贫血的遗传修饰作用。 材料与方法 一、研究对象 本课题对来自中国南方的1468例无血缘关系的α-地中海贫血个体进行回顾性分析,其中包括742例成年的β-珠蛋白基因正常的α-地中海贫血携带者（GroupA和B；年龄18-50岁）和726个随机连续的HbH病患者（Group C;年龄1-70岁）。742例α-中海贫血携带者中包括432例（Group A）伴随着Hb F水平升高（≥1%）和的310例（Group B） Hb F水平正常（<1%）。C组726例Hb H患者按照下述临床常用分类指标,可分为相对较轻的表型（N=243）和相对较重的表型（N=483）两组。轻型Hb H患者包括那些血红蛋白含量（Hb）维持在90g/L或以上,不需要接受定期输血的病人。重型Hb H患者包括那些血红蛋白水平≤90g/L和/或需要接受定期输血的病人。Hb H病患者所有的血液学指标均在输血前收集。这项研究通过了南方医院的伦理委员会批准,所有参与者均签署了知情同意书。 二、血液学参数和基因型的测定 所有的血液学参数均用指定型号的自动细胞计数仪和高效液相色谱法进行测定。运用酚氯仿法抽取参与者外周静脉血（EDTA-K2抗凝）来提取基因组DNA。根据科室早前流行病学调查研究中所用的筛查地中海贫血的方法来验证HBA和HBB基因上的缺失型和点突变。使用高分辨率熔解分析（HRM assay）检测所有参加者的KLF1基因型,使用的引物和实验条件均根据早前本实验室的研究。对于所有怀疑携带有变异的样本进行桑格测序,确定变异所在位置。应用SIFT和PolyPhen-2软件来预测所发现的KLF1变异是否影响其蛋白质结构和功能,同时结合流式细胞分析突变携带者的红细胞表面抗原CD44表达是否下降。若两者都为真,我们就认为该变异为具有功能影响的KLF1突变（直接截短KLFl锌指结构的突变可以无需经过软件的预测）。 三、统计分析 所有的统计分析均使用SPSS13.0统计软件,P值<0.05视为具有显著的统计学差异。独立样本t检验和卡方检验分别用于评估血液学参数和定性资料是否存在显著性差异。逻辑回归分析（Logistic Regression）用于评估4个潜在修饰因素,包括HBA基因型,HBB基因,KLF1基因型和性别,与Hb H病患者表型轻重的关系。计

关键词： α地中海贫血   诊断进展   基因诊断   产前地中海贫血  

摘要： 地中海贫血是我国临床中最常见的遗传病之一，本文主要针对α地贫进行研究，重型α地中海贫血多会导致在妊娠末期胎死宫内，或出生后数分钟内死亡，具有严重的危害性。本文综述产前α地中海贫血的基因诊断进展，探讨在产前诊断地中海贫血的有效措施，做好产前诊断预防工作，降低地中海贫血患儿的出生率，全面了解产前地中海贫血的基因诊断现状。

关键词： β-地中海贫血   基因座控制区   CD41-42突变基因   重组载体  

摘要： 目的:构建β-地中海贫血CD41-42突变基因和基因调控区HS2、HS3全基因片段的真核表达重组载体,为β-地中海贫血CD41-42突变基因治疗的细胞模型奠定基础。方法:设计合成β-地中海贫血CD41-42突变纯合子患者的DNA特异性引物,扩增基因座控制区(LCR)和CD41-42突变基因,插入载体pcDNA3.1-中,筛选阳性重组体,通过酶切分析及PCR进行鉴定。结果:扩增出2.1 kb CD41-42突变基因及5.5 kb LCR片段,酶切及测序结果证明重组载体构建成功,测序结果和引入方向正确。结论:成功构建了含人β-地中海贫血CD41-42基因的重组载体。