关键词： β-地中海贫血   miR-144/451   红细胞生成  

摘要： 目的： 研究正常和β-地中海贫血红细胞中miR-144/451的表达情况,以及miR-144/451的表达变化对β-地中海贫血表型的影响,以探寻miRNA-144/451在β-地中海贫血红细胞生成过程中的作用。 方法： 1、为了研究β-地中海贫血红细胞生成中miR-144/451的表达情况,繁殖培育足量的β-globin敲除鼠(β-地中海贫血鼠)和β-globin/miR-144/451双敲除鼠来模拟人β-地中海贫血疾病模型,进行新鼠的基因型鉴定和筛选。 2、为了研究β-地中海贫血和正常红细胞中miR-144/451的表达差异,进行以下实验：首先,培育3-6月大小β-地贫和野生型小鼠并合笼繁殖,取14.5天的β-地贫和野生型小鼠胚胎,采用miRNA芯片技术检测β-地贫/野生型胚胎肝内差异表达的miRNAs,筛选出β-地贫差异表达的miRNAs;,然后用荧光定量PCR方法检测β-地贫和野生型小鼠外周全血中miR-144/451的表达;最后,荧光定量PCR方法检测β-地贫和野生型小鼠骨髓红细胞中miR-144/451的表达。 3、观察miR-144/451对β-地中海贫血表型的影响：构建敲除miR-144/451的β-地中海贫血小鼠模型。首先,用HEMAVET950动物血液分析仪检测β-globin+/+miR-144/451+／+(野生型)、β-globin-/+miR-144/451+/+(β-地贫)、β-globin-/+miR-144/451-/-(敲除miR-144/451的β-地贫)、β-globin+/+miR-144/451-/-(miR-144/451敲除)四组小鼠的血液指标情况;然后,观察以上四组小鼠的脾脏大小及称重脾脏重量,比较组织形态学。结果： 1、小鼠的繁殖和鉴定结果表明,从分组开始繁殖6个月,约有200只小鼠育出,经基因鉴定,β-globin+/+miR-144/451+/+小鼠占51.3%、β-globin-/+miR-144/451+/+小鼠占28.3%,β-globin-/+miR-144/451-/-小鼠占2.5%。培育出研究需要的动物数量增加近3倍。 2、miRNA芯片技术结果显示β-地中海贫血小鼠胚胎肝细胞中miR-144/451的表达量显著上调;β-地中海贫血小鼠全血中miR-144/451的表达量显著高于野生型小鼠全血中miR-144/451的表达量;β-地中海贫血小鼠骨髓红细胞中miR-144/451的表达量显著高于野生型小鼠骨髓红细胞中miR-144/451的表达量。 3、构建敲除miR-144/451的β-地中海贫血小鼠模型后,动物全血分析、脾脏组织形态学分析显示,敲除β-地中海贫血小鼠miR-144/451的表达后,其贫血表型相比未降低miR-144/451的β-地中海贫血小鼠的贫血表型发生有明显的改变。结论： β-地中海贫血小鼠造血系统中miR-144/451的表达增高,而敲除miR-144/451能够改善β-地中海贫血小鼠的贫血表型,这提示对β-地中海贫血小鼠体内miR-144/451的分析有助于理解β-地中海贫血病态造血的作用机制,为后续试验提供依据,并且提示miR-144/451可能成为人类β-地中海贫血诊断和治疗的新线索和新方法。

关键词： β-地中海贫血   治疗   护理  

摘要： β-地中海贫血是-类由于常染色体遗传性缺陷引起血红蛋白珠蛋白肽链合成障碍。使一种或几种珠蛋白数量不足或完全缺如导致细胞易被溶解破坏的熔血性贫血，其中广西、广东、云南、贵州及海南等地区是高发区。该病严重影响病人的生活质量，预防和治疗显得极为重要。规范性的定期输血和使用去铁胺治疗可明显延长病人的寿命。我科于2013年以来对12例重型β-地中海贫血病人采用经外周静脉输注甲磺酸去铁胺（ DFO），效果理想。现将护理报告如下。

关键词： β地中海贫血   胎儿游离DNA   无创性产前诊断   第二代测序技术  

摘要： 研究背景与目的 β地中海贫血是p珠蛋白合成减少(β+)或缺失(βo),造成血红蛋白(α2β2)生成障碍,导致无效造血和红细胞破坏而产生溶血性贫血。p地中海贫血有三种临床表型：携带者、中间型地中海贫血和重型地中海贫血。 β地中海贫血分子基础是位于11号染色体短臂1区5带5亚带(11p15.5)位点上的p珠蛋白(HBB)缺陷所致。迄今为止,已发现200多种突变类型,p地贫表型分为β0和p+两种类型,β0地贫无珠蛋白产生,p+地贫有低于正常水平的p珠蛋白产生。在中国人群的p地贫突变中,中国南方地区有5类突变最为常见,占突变类型的92.5%,分别是：(1)密码子41-42(-TCTT),即在HBB基因第41和42密码子区域出现4个核苷酸的缺失引起移码突变,导致肽链合成提前终止,产生β0地贫；(2)IVS-2-654(C-T),使mRNA加工异常产生β+地贫；(3)TATA盒-28(A-G),使mRNA转录效率降低,从而使p珠蛋白链合成减少,产生p+地贫；(4)密码子17(A-T),引起无义突变,生成无功能的mRNA,产生β0地贫；(5)异常血红蛋白E,是异常血红蛋白中最常见的一类结构异常,导致中间型地贫。 目前,对于重型地中海贫血患者缺乏有效的治愈方法,因此对夫妇双方为地中海贫血基因携带者的孕妇进行地贫基因产前诊断(prenatal diagnosis),可有效预防地贫患儿的出生。 产前诊断是现代遗传病诊断的重点,也是临床产科学的重要组成部分,是通过物理、生化和遗传等诊断技术和方法,对胎儿的遗传状况进行诊断,其主要目的在于为遗传病风险家庭提供充足可靠的信息,使他们在妊娠期做出适当的选择。侵入性方法是获取胎儿物质最直接的方法,是目前产前诊断广泛使用的方法之一,主要通过羊膜腔穿刺术、绒毛取样术、脐静脉血取样术等方式获取到充足的胎儿物质用于遗传学检测,但存在流产(0.2%-3%),绒毛膜炎,羊水渗漏,穿刺部位出血、感染,胎儿心动过缓,胎膜早破等手术并发症,增加孕妇风险同时加重孕妇及家属焦虑情绪。因此大力发展无创性产前诊断技术是临床医务工作者和科学研究者共同努力的方向。 从2007年发现母体血浆中存在胎儿游离DNA至今,p地中海贫血作为常染色体隐性遗传性疾病的常见病之一被学者做为单基因疾病模型进行无创性产前诊断的方法学研究。最初采用飞行质谱、AS-PCR等方法针对父母携带不同突变的胎儿进行父源性突变等位基因排除性诊断,但该方法存在局限性：(1)不能对携带了父源性突变等位基因的胎儿行进一步的诊断。(2)不能针对双亲携带相同突变的胎儿进行诊断。 随着数字化PCR、液滴数字化PCR以及第二代测序等绝对定量技术的出现,及相对突变剂量(RMD)这一理论的提出,推进了单基因疾病的无创性产前诊断的发展,使得从cfDNA中鉴别胎儿是否遗传了母源性突变位点成为现实。目前研究利用SNP的特点,通过父母具有不同信息的SNPs位点进行RMD分析,通过序贯概率比检验(SPRT)来判断胎儿是否携带双亲的致病突变位点,达到无创性产前诊断的目的。但SNPs作为第三代人类遗传物质标签,受人群、种族等因素影响,其等位基因的频率存在差异性,因此,需要建立一组与地域、人群等相关的具有诊断价值的SNPs数据库,尽管目前可以通过液相杂交捕获的方法获取HBB基因上成千上万的SNP位点,但捕捉芯片价格昂贵,不适合广泛的临床应用。 鉴于以上技术方法的缺点和不足,本研究拟以地中海贫血为研究对象,采用PCR捕获的方法对地贫突变基因位点进行富集,应用Illumina Miseq台式高通量测序平台建立一种快速、经济、准确的无创产前诊断方法。p地中海贫血基因突变以点突变为主,其中IVSII-654、CD41-42、CD17.-28和HbE5种突变最为常见,由于-28和-29突变位点相邻,可通过同一对引物进行扩增,因此本研究拟针对以上6种突变进行设计引物,通过扩增子对目标区域进行富集,富集后的片段经Miseq深度测序。针对双亲携带不同突变位点的样本,首先对父源性突变等位基因进行排除性诊断,而后通过RMD结合SPRT方法对母源性突变位点进行诊断。针对双亲携带相同突变位点的样本直接通过RMD和SPRT方法对胎儿基因型进行分析。本研究拟建立的方法简便、快捷有望实现地中海贫血无创性产前诊断的临床转化,推进单基因疾病无创性产前诊断的临床应用,为我国的优生优育工作做出贡献。 材料与方法 本研究对象为2012年1月至2013年1月分别到南方医科大学南方医院、新加坡国立大学国立医院妇产科就诊的144个计划接受产前诊断的p地中海贫血家系,其中124个家系中双亲携带的p地贫突变位点涉及实验设计的5个p地贫突变位点(IVSII-654、CD41-42、CD17、-28、-

关键词： 新生儿筛查   遗传疾病   孕前检查   上海   SMA   基因检测   地中海贫血   血片  

摘要： 如今,我们国家一直在在实行稳定的低生育政策,力求提高人口素质。但实际上,从人口学的角度来研究,一个家庭应该有两个孩子较为合适。为何我国的人口问题会一直持续到现在,并且比较严重,可能也与出生缺陷率不断发生有关。因此,我国人口素质的方方面面还有待提高。

关键词： 缺失型α-地中海贫血   基因拷贝数定量   试剂盒研制   实时定量PCR  

摘要： 研究背景与目的 地中海贫血(thalassemia,简称地贫)是由于珠蛋白基因发生缺陷；致使珠蛋白链合成减少或缺如,使形成血红蛋白的α-链/非α-链比例失衡,而导致的一组严重威胁人类健康的致死、致残的遗传性血液病,主要发生在地中海沿岸国家、东南亚、非洲和我国南方地区,保守估计全世界地中海贫血基因携带者近2亿人,其中包括我国南方广西、广东、海南等省份。地中海贫血主要包括α-地中海贫血和p-地中海贫血,在广西、广东,α-地中海贫血基因的人群携带率分别高达17.55%、8.53%。此病目前缺乏有效治疗手段,应用相应分析技术通过人群筛查及产前诊断阻止重症患儿出生是国内外公认的首选预防措施。 α-地中海贫血属于常染色体隐性遗传病,其分子基础是位于16号染色体末端16p13.3位点上的人a珠蛋白基因簇的先天性遗传缺陷。导致α-链合成减少的基因缺陷主要(>95%)是α珠蛋白基因缺失,其缺失数目是a-地中海贫血临床表现及分型的依据。在我国南方地区常见的三种α-地中海贫血缺失基因型为--SEA/αα(东南亚型)、-α3,7/aa(右缺失型)、-α4.2/αα(左缺失型)。 目前对于α-地中海贫血的筛查仅停留在血液学指标,即只有明显的血液学表型的个体才会进行进一步的分子诊断,这会导致大部分的静止型携带者(如-α3.7/αα和-α4.2/αα)漏检,所以对于α-地中海贫血的筛查急需一种简单、快速基因分型的筛查手段。然而对于α-地中海贫血的分子诊断,Southern Blot杂交技术是金标准,准确性高,但操作繁琐、标本用量大、费时费力、检测通量小而不适合常规检测；目前常规的检测技术是gap-PCR技术,只能定性检测各已知缺失类型,工作量大、检测通量小,并且存在其他缺失类型的假阴性和PCR污染导致的假阳性,故仍不能满足当前大规模人群筛查及常规分子诊断的需要。 本课题组发明了一种用基因拷贝数直接定量快速诊断缺失型α-地中海贫血的方法(专利号：ZL201110081598.8),该方法是采用TaqMan实时定量荧光PCR技术直接定量分析HBZ、HBA1和HBA2的相对拷贝数来诊断是否存在缺失,有效避免了由缺失类型遗传异质性导致的假阴性和外源污染导致的假阳性,且易于实现自动化与标准化,提高了检测通量和检测效率,适合缺失型a-地中海贫血大规模人群筛查和常规分子诊断。 本研究是以该发明专利为技术基础,通过全基因组DNA提取的研制和PCR扩增检测体系的建立,研制出可用于临床常规检测应用的试剂盒,以满足当前临床检测的需要。 研究方案与方法 一个分子诊断方法,涉及到样本来源、样本制备、样本检测、结果分析等步骤,只有做好每个步骤的质量控制,才能保证结果的准确可靠,所以,基于这种完整的诊断流程,本研究具体实施了以下研究方案与方法。 1.样本采集、运送及保存。不同的抗凝剂对PCR扩增的影响是不同的,例如肝素抗凝的血液标本经DNA提取后仍会影响PCR的扩增效率。血液的新鲜程度也会影响DNA提取的质量。故本研究所采用的血液标本均要求为EDTA或枸橼酸钠抗凝全血,存放在4℃冰箱不超过7天,在-20±5℃保存期为6个月；若要长期保存,需储存于-80±5℃；标本应避免反复冻融。 2.全血基因组DNA提取。人类基因组DNA样本的浓度和纯度对PCR扩增都具有较大的影响,例如人类基因组DNA样本浓度太低(低于最低检测限)或含有PCR抑制剂会导致PCR扩增受到影响。因此本研究从红细胞裂解液、变性剂、消化时间、提取液和DNA溶解液等方面对DNA提取方法进行全面的研制,研制出一种能满足荧光定量PCR要求的DNA提取方法,并利用紫外分光光度计来监测DNA样本的浓度和纯度。 3.试剂盒原料的质量检测。原料质量合格是一个实验成功的基本要求,所以原料的质量检测尤为重要。主要的原料包括蛋白酶K、氯化锂、引物、探针和聚合酶。蛋白酶K应为白色絮状或粉末状；氯化锂应为白色结晶粉末,分析纯；引物和探针应采用紫外分光光度计测定浓度,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定,浓度不低于合成的浓度,电泳结果应为位置正确的单一条带,表示纯度合格；聚合酶应为无色粘稠的透明液体,于-20±5℃不冻结。 4.试剂盒配制与验证。试剂盒主要包括全血基因组DNA提取试剂和PCR检测试剂。全血基因组DNA提取试剂包括红细胞裂解液、DNA提取液A(缓冲液)、DNA提取液B(变性剂)、DNA提取液C(蛋白酶)、DNA提取液D、DNA溶解液。PCR检测试剂包括PCR反应液A(缓冲液,酶)和PCR反应液B(引物,探针)。所有液体配制需按照配制要求进行,配制好的液体按照相应的要求灭菌后存放或者直接存放。将配制好的全血基因组DNA提取试剂(柱提法)结合质检合格的试剂盒其它组分,以正常基因

关键词： 中医药治疗   地中海贫血   中医证候   聚类分析   meta分析  

摘要： 目的： 本课题在前期系统复习文献研究基础上,通过问卷调查的方式对地中海贫血(珠蛋白生成障碍性贫血)患者进行临床研究,初步探究本病的中医证候特征及中医证型分布规律,归纳各证型的辨证要点,规范化地中海贫血的辨证标准,为中医药治疗地中海贫血循证医学研究提供理论依据。 方法： 复习国内外已公开发表的中医药地中海贫血的相关文献,尝试应用循证医学meta分析的方法,评价中医药治疗地贫的可行性与安全性,并提出规范地中海贫血的中医证候的意义。将2012年2月-2013年8月期间在广东省中医院血液科门诊长期随诊的119例地中海贫血患者作为研究对象,设计由患者一般资料及地贫患者临床主要症状、常见伴随症状、舌象、脉象等相关中医四诊信息为主要内容的临床信息采集表,采用横断面设计的临床流行病学方法,对符合纳入标准患者进行临床调查,所得数据建立数据库,采用描述性分析、聚类分析等统计学方法进行数据处理和分析,探讨地中海贫血中医证候特征及中医证型分布规律。 结果： ***分析研究中共检索到文献108篇,通过阅读题目和摘要对其进行筛选,其中诊断明确,且疗效标准与《血液病诊断及疗效标准》一致的文章共2篇,共117例患者进入本系统评价。提取数据后,采用Cochrane协助网专用软件RevMan5.2进行统计分析,进行Meta分析或描述性分析。结果显示整体效应点估计量是1.03,95%CI为0.62到1.44,Z值为4.94,P<0.001,差异有统计学意义,提示中医药治疗地中海贫血疗效明确。 2.所调查的119例地中海贫血患者常见症状中,出现频率在30%以上的依次有面色少华或萎黄(91.6%)、倦怠乏力(84.9%)、口干(74.8%)、头晕目眩(63.9%)、爪甲色淡(60.5%)、易于感冒(57.1%)、腰膝酸软(51.3%)、气短(47.1%)自汗(40.2%)、腹胀(39.5%)共10个症状；舌象主要以舌淡红或舌淡白,苔薄白或苔白腻最多见；脉象以脉细及脉弦最多见。经聚类分析得到4个主要证型分别为第一类：气血两虚证45例(37.8%)；第二类：肝肾阴虚证36例(30.3%)；第三类：脾肾阳虚证占22例(18.5%)；第四类：阴阳两虚证患者占16例(13.4%)。各证型辨证要点如下：(1)气血两虚证：面色苍白、爪甲色淡、倦怠乏力、易感、心悸、自汗、气短、舌淡红或淡白、苔薄白、脉细；(2)肝肾阴虚证：面色苍白、手足心热、大便干结、头晕目眩、爪甲色淡、盗汗、口干、舌偏红、苔少、脉弦；(3)脾肾阳虚证：面色萎黄、腰膝酸软、倦怠乏力、心悸、畏寒肢冷、身目发黄、腹胀、爪甲色淡、舌淡红或胖大有齿痕、脉滑或脉细；(4)阴阳两虚证：面色苍白或黧黑、腰膝酸软、爪甲色淡、自汗、口干、倦怠乏力、心悸、头晕目眩、潮热、舌质暗红或偏红,脉细或脉数。 结论： 1.通过此次尝试应用Meta分析方法虽证实中医药治疗地中海贫血的疗效有效率优于安慰组；但如果中医治疗疾病的临床疗效评价只利用西医诊断疾病的分类方法和疗效评价方法,其中医药疗效不能被完全展现,因为临床评价研究中没有体现中医辨证论治思维,没有对疾病进行科学的证候分类。因此,通过多次临床试验,探索疾病中医证候学分类是开展中医临床疗效评价、提高中医临床疗效的重要基础。 2.地中海贫血主要的中医证型有气血两虚证、肝肾阴虚证、脾肾阳虚证、阴阳两虚证4个证型,其中气血两虚证所占比例最大,提示脾肾气虚为本病最主要的病机,临床治疗本病应着重从脾肾论治。

关键词： 缺铁性贫血   地中海贫血   血常规  

摘要： 目的探究在血常规检查中如何鉴别诊断缺铁性贫血与地中海贫血。方法选自我院2010年～2012年进行血常规检测的病理报告共150份,其中检测结果分别有正常、缺铁性贫血以及轻型地中海贫血,各50份。缺铁性贫血报告为A组、轻型地中海贫血报告为B组,正常报告为C组。对比三组血常规检查中红细胞体积分分布宽度(RDW)相关数据。结果 C组RDW指数在10.5%～14.5%之间,A组RDW指数超过14.5%,B组RDW指数均不超过14.5%,A组与B组之间筛查相符率对比具有统计学意义(P<0.05)。结论在进行血常规检查时RDW筛查方法对于缺铁性贫血和地中海贫血之间的鉴别诊断准确率相对较高且操作方便,有突出的临床诊断意义。

关键词： 大片段重组   中间型β地中海贫血   HbH病   α珠蛋白基因   CGH  

摘要： 研究背景与目的 地中海贫血(thalassemia,简称地贫)是由于珠蛋白基因表达比例失衡引起的一种遗传性血液病,表现为小细胞低色素性贫血。在我国主要发生在广西、广东、海南等省份。α-珠蛋白基因或者p-珠蛋白基因缺陷分别对应产生α-地贫或p-地贫,出生后血红蛋白主要成分为HbA,由两条α链和两条拾链组成,其中珠蛋白链由位于16p13.3的玖-珠蛋白基因簇和11p15.3的p-珠蛋白基因簇合成。据文献报道,大约90%的α地中海贫血是由包含α珠蛋白基因簇或其调控区域的片段缺失导致,大约95%的p地中海贫血是由p珠蛋白基因簇上的点突变引起。 α-地中海贫血的表型因α珠蛋白基因缺陷的数目不同而表现出多样性。一个α基因缺失或突变为α+地中海贫血,两个α珠蛋白基因缺失或突变为值α0地中海贫血。一个或者两个α基因缺陷会导致轻度贫血症状。三个α基因缺陷时会引起HbH病,表现中度至重度贫血症状,四个α基因缺陷会导致围产期死亡,即Hb Bart's水肿胎。对于一个α0地贫携带者和α+地贫携带者夫妇,其后代有25%的机会罹患HbH病。因此鉴定各种缺陷对于产前诊断是很有必要的。 在α-地中海贫血中缺失突变属于常见类型,但α-珠蛋白基因簇重复容易被忽略,除非与p珠蛋白基因缺陷共遗传加重表型而被检测。过量的α-珠蛋白基因表达可能使p-珠蛋白基因缺陷的携带者表型从轻型加重成中间型。 本研究鉴定了一个大片段重复突变家系和一个大片段缺失突变家系,两个大片段重排均从16号染色体短臂端粒起始,覆盖整个α基因簇。通过实时荧光定量PCR分析两个罕见突变中珠蛋白基因的mRNA表达水平。希望基于本次研究以筛查无法用常规方法鉴定的罕见地贫样本,并对研究基因组重组提供案例。 材料与方法 1.研究对象 家系A：先证者是一个来自湖南邵阳的7岁小女孩,4岁时诊断为中间型p地贫,出现黄疸和肝肿大,血液学参数为：Hb54g/L、MCV68.4fL、MCH16.7pg、HbA26.8%和HbF6.3%,排除缺铁性贫血。先证者从出生11月时开始接受不规律输血,共四次。 家系B：先证者是一个来自广西柳州的8岁小男孩,6月大时贫血面色苍白进行不规律输血,近一年来每月规律输血。先证者发育迟缓,肝脾肿大,严重贫血,在输血后一个月的血液学参数为：Hb45g/L、MCV73.5fL、MCH19.2pg、 HbA22.3%和HbF0.7%。 2.实验方法 采集先证者及其家庭成员的新鲜血样,进行血液学表型分析,结合表型分析结果进行α珠蛋白和β珠蛋白基因簇常见突变的检测。分析发现检测的已知突变不足以解释先证者表型,从而通过多重连接探针(MLPA)方法检测珠蛋白基因拷贝数变化。结果显示HBA基因探针检测位置全部缺失或重复,继而采取比较基因组杂交方法(aCGH)分析缺失或者重复断裂点区域。通过aCGH结果显示的断裂点范围,设计不同组特异性引物。将先证者基因组DNA片段化至2-3kb后,连接上通用片段后用通用引物扩增,完成建库。通过特异性引物与通用引物扩增建库后的样本,磁珠纯化后将扩增产物连接至T载,转化,挑取单克隆进行菌落PCR验证后送测序。通过该双重PCR、克隆、gap-PCR鉴定出大片段缺失或者重复的断裂点位置。通过实时荧光定量方法分析珠蛋白基因的mRNA表达水平,分析罕见突变杂合子对α-珠蛋白基因表达的影响。 研究结果 1.断裂点鉴定 在家系A中,先证者7岁女孩输血一年后血红蛋白含量为61g/L,为小细胞低色素贫血,其中平均红细胞体积MCV为63.7fL、平均血红蛋白含量MCH为18.3pg,并且HbA2和HbF升高,分别为4.5%和7.7%。通过对β珠蛋白基因全长测序分析发现先证者携带有βCD41-42杂合突变,该杂合突变遗传自其母亲,α-珠蛋白基因全长突变未发现致病突变。多重连接探针技术分析α珠蛋白基因簇拷贝数,结果发现该先证者有大片段重复,重复范围超出探针指示范围,无法确定断裂点。全基因组比较基因组杂交技术显示,该先证者出现一个杂合的大片段重复,重复范围为从16号染色体短臂端粒起始至282kb(UCSC,hg19)。通过双PCR方法,显示从16号染色体短臂端粒起始至282199bp的大片段序列插入16号染色体短臂94054bp和94055bp之间,并在断裂点引入一个A碱基。结果分析显示,16号染色体94038bp-94053bp的序列和282184bp-282199bp的序列是一致的。对其他家系成员分析发现,该大片段重复突变遗传自其父亲。该大片段重复包括完整的α-珠蛋白基因簇,使α-珠蛋白基因数量从4个增加到6个,与βCD41-42共遗传解释了中间型β地贫的表型。 在家系B中,8岁男孩先证者在输血一个月后血红蛋白含量

关键词： 地中海贫血   基因治疗   诱导多功能干细胞  

摘要： 地中海贫血(简称地贫)是最常见的血液系统遗传病之一,在我国主要分布于长江以南各省,其中两广、云贵及海南为高发省区。重型地贫不仅对患者的生活质量造成巨大的影响,而且为社会和家庭带来巨大的经济负担。输血、除铁和骨髓移植等是地贫的传统治疗方法,近年来由于干细胞技术的发展,地贫的基因治疗有了长足的进步。本文就地贫的基因治疗进行综述。

关键词： 骨髓移植   脐血移植   同胞   联合   重型β地中海贫血  

摘要： 研究背景 地中海贫血(thalassemia)是世界上最常见的遗传性血液病之一,因该病最早发现的病例是地中海沿岸地区的人而得名,也称为海洋性贫血。地中海贫血的分子基础是珠蛋白基因遗传缺陷导致珠蛋白肽链合成障碍,非α肽链(p、6、γ)和a肽链合成比列失衡,进而引起红细胞破坏造成贫血、溶血和无效造血,其中a和p地中海贫血是最重要的地贫类型。重型p地中海贫血(β-thalassemia major),亦称库勒贫血(Cooley' anemia),为p0、矿基因纯合子或双重杂合子状态,临床以慢性进行性溶血性贫血、特殊面容、肝脾大及血红蛋白F明显升高为特征,是我国常见的一种地中海贫血,我国的高发区主要分布在长江以南各省区,尤以广西、广东和海南三省为高。 重型β地中海贫血是一种进展性疾病,目前常规治疗方法主要包括二个方面：(1)输血治疗。每10～30天1次,使血红蛋白(Hb)维持在90-120g/L,以纠正患者严重的贫血状态；(2)正确使用铁螯合剂。铁螯合剂能够防止并逆转过量铁质在组织细胞内的积蓄,同时减轻铁参与导致的自由基氧化损伤,延长地贫患者生命并改善生存质量。世界卫生组织(World Health Organization,WHO)推荐的地贫儿童合理的治疗方法是每天持续皮下注射去铁胺(Desferrioxamine, DFO)至少10小时,每周至少5天,这种治疗的长期坚持性难于确定,现在也有两种口服去铁剂(去铁酮(Deferiprone,DFP)和地拉罗司(Deferasirox,DFX)),极大地改善了地贫患者在治疗过程中的依从性,但同样存在较明显的不良反应。尽管规律输血和去铁治疗使地贫患者的生活质量提高及生存期延长,但这一疾病最终还是导致患者早期死亡。死亡原因主要是：(1)慢性贫血及其并发症；(2)未适当使用铁螯合剂导致铁沉积病,长期输血导致的铁累积,加上贫血状态促进的胃肠道铁吸收,使得机体处于铁过载状态,进而引起慢性心脏、肝脏、内分泌系统损害等严重并发症。在中国,1名重型地中海贫血患者,如果接受正规输血及去铁治疗,每年的费用在5万元以上,尽管没有确切的统计数据,但临床实践表明,这些重型地贫病人因经济原因绝大多数得不到有效的治疗在15岁前死亡。即使给予正规的输血和去铁治疗,仍有高于50%的重型地贫病人在35岁前死亡。由此可见,重型β地中海贫血给家庭和社会造成严重的危害,对提高人口质量构成严重威胁。 自1982年Thomas等成功运用人类白细胞抗原(Human leukocyte antigen,HLA)全相合的同胞骨髓移植(bone marrow transplantation,BMT)治疗重型地贫以来,异基因造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation, HSCT)开始被运用于治愈地贫。异基因HSCT是目前根治重型地贫唯一的治疗方法,已被医学界说普遍接受。通过HSCT治疗的重型地贫患者的生活质量明显高于传统输血和去铁治疗的患者。超过3000例重型地贫及镰刀细胞病患者通过HSCT得到治愈,其中大部分患者的造血干细胞来源于HLA全相合的同胞骨髓,造血干细胞移植应作为有HLA相合的同胞供者的重型β-地贫患者首选治疗方案。然而,移植物抗宿主病(graft versus host disease, GVHD)目前仍然是造成骨髓移植失败和移植相关死亡的主要因素。同时,骨髓采集属于侵入性操作,对小供者来说创伤较大,若单纯采用骨髓,小供者可能不能耐受大量骨髓的采集。 脐血(umbilical cord blood,UCB)中含有大量的造血干细胞,脐血中CD34+细胞比例约占有核细胞的比例与骨髓相似。而且脐血具有来源广泛、采集方便,对产妇和新生儿无影响,不涉及伦理,GVHD发生率较低,能够克服HLA不相合障碍及污染率较低等优点。自1995年Issaragisil等首次应用脐血移植治疗重型p-地贫／血红蛋白E病(hemoglobin E disease,HBE)获得成功,脐带血很快被认为是重型地贫HSCT很好的来源。脐血移植用于治疗重型p-地贫主要障碍有植入率低和造血及免疫重建延迟。单份脐血中造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)数量有限,脐血每单位含有单个核细胞数为骨髓(bone marrow,BM)的1/10,而地中海贫血是骨髓增生活跃,且长期输血引起的异基因免疫反应,移植时要求有核细胞数(total nucleated cells,TNC)数量大才容易植入。为克服脐血移植后植入困难,目前所采用的措施有脐血的体外扩增、双份脐血输注、联合输注(骨髓+脐血,间充质干细胞+脐血等)方式。 南方医科大学附属南方医院儿科移植中心自20世纪90年