关键词： 缺铁性贫血   地中海贫血   血液检验   临床诊断  

摘要： 目的研究血液检验应用于贫血诊断以及鉴别诊断过程中的效果。方法选择2012年9月至2014年9月在本院接受血液检验的88例患者,其中地中海贫血患者42例,其余46例属于缺铁性贫血,对两类贫血患者的血液进行全面检验。结果两组患者在RDW(%)、MCV(f L)和MCHC(g/L)的比较上存在显著差异,具备统计学意义(P<0.05)。结论在医院临床检验工作以及疾病诊断工作中,可借助MCV以及RDW这两项临床指标,对地中海贫血以及缺铁性贫血进行区别及鉴定,提高临床诊断的科学性和准确性。

关键词： 新生儿疾病筛查   α地中海贫血   全自动毛细管电泳仪  

摘要： 目的 :了解南宁市新生儿α地贫筛查情况。方法 :使用全自动毛细管电泳仪对18005例新生儿血样进行筛查,筛查出Hb Bart’s>0者召回进行基因确诊。结果:检出Hb Bart’s>0共1932例,检出率为10.73%;其中静止型（0.2%;.9%）608例,标准型（1%;%）1259例,Hb H病（6%;0%）53例。共召回647例阳性患儿进行基因检测,确诊622例,确诊率96.14%。结论 :通过新生儿足跟血可以准确快速地筛查出α地贫,为临床提供参考。

关键词： 重型β地中海贫血   祛铁剂   不良反应   生存质量   成本效果分析  

摘要： 1.目的本研究在了解广东省4市重型β地中海贫血(β-thalassemia major,以下简称“β-TM”)患者诊疗现状的基础上对祛铁常用药物“祛铁胺、祛铁酮联合用药”(以下简称“联合用药”)与“地拉罗司”两种治疗方案之间进行成本-效果分析,为患者、医生、医保支付方选取相对“价低而质优”的药品。最终达到提高医疗费用报销比例,降低患者自费支出费用,减轻患者及其家庭疾病经济负担的目的。2.方法(1)文献研究。以“地中海贫血”、“药物经济学评价”、“成本-效果分析”等为检索词收集文献,借鉴国内外经验与现有研究成果。(2)问卷调查。针对来自广州、深圳、珠海、佛山的7家医院的就诊β-TM患者,由医生与患者各自填写相应的基线、随访问卷。了解患者为期一年的诊疗状况、费用以及生存质量等。(3)成本-效果分析。根据相对花费少而治疗效果好的为优势药物的原则,选出最具成本-效果的临床用药方案,并进行敏感度分析检验结果稳定性。3.结果(1)调查患者249人,选择联合用药患者(112人)明显多于单独使用地拉罗司(75人)、祛铁胺(36人)、祛铁酮(31人)。(2)回收随访问卷229套,回收率为91.97%。经济困扰(33.33%)是患者变更用药方案的主要原因,用药后患者不耐受(18.67%)及出现不良反应(17.33%)为次要原因。其中,地拉罗司组不良反应的发生率一定程度上低于联合用药组。(3)祛铁剂费与输血费是患者主要费用支出。各医院祛铁剂零售价不同,有4家医院无供应地拉罗司,患者需前往其他医院开药,导致诊疗成本增加。(4)收集生存质量量表103套。患者在情感功能、社会功能、学校功能、总分方面无明显改善;不使用祛铁剂的患者健康状况有所恶化。联合用药在改善生理功能方面较显著;地拉罗司在改善社会功能方面较显著。(5)成本-效果分析。1年短期治疗后,经最小成本法分析,地拉罗司更具成本-效果。将治疗成本与治疗效果联系起来,进一步对两祛铁方案进行评价,地拉罗司成本效果优于联合用药,且经敏感度分析结果较稳定。4.结论诊疗费用给患者及其家庭造成了一定程度上的负担。随访一年后,采用不同祛铁方案均可使患者的各项身体机能与生化指标有所好转。利用患者的诊疗费用和生存质量进行计算,相对联合用药而言,地拉罗司更具成本-效果,也就是说在获得同样的生存质量的情况下,其花费更为合理、更能被患者接受。若可降低其售价,将进一步缓解患者及其家庭的疾病负担。另外,需加大对地贫的预防与控制力度,减少地贫儿出生;重视地贫儿的心理行为改变,治病的同时使患者的身心都得到良好的治疗,促进患者健康成长;探讨医院-社区一体化管理模式,方便患者就医。

关键词： 重型β-地中海贫血   造血干细胞移植   生存质量   PedsQL4.0   铁过载   影响因素  

摘要： 目的：调查并分析研究重型β-地中海贫血患儿成功接受全相合同胞异基因造血干细胞移植术后的生存质量及其影响因素,为制定重型β-地中海贫血患儿的治疗决策及提高患儿术后生存质量提供理论依据和支持。方法：采用儿童生存质量普适性核心量表4.0(PedsQL4.0)中文版对2005年4月至2014年3月在我院成功接受HLA全相合同胞异基因造血干细胞移植术的82名患儿的生存质量进行调查,采用1：1：1配对的研究方法,比较其与传统治疗组即非移植组、健康对照组的生存质量并分析重型β-地中海贫血患儿造血干细胞移植术后生存质量的影响因素。结果：1.重型β-地中海贫血患儿造血干细胞移植术后总体生存质量及生理功能、情感功能、社会功能、学校表现4个维度的得分均显著高于非移植组(P<0.05),其中生理功能及学校表现差异最为显著；移植组在总体生存质量及生理功能、情感功能、社会功能3个维度得分稍低于健康对照组,但差异无统计学意义。2.重型β-地中海贫血患儿造血干细胞移植术后生存质量影响因素回归分析显示：评价时间、评价时的血清铁蛋白水平、慢性移植物抗宿主病(Chronic Graft-versus-host disease, cGVHD)的发生及评价时使用免疫抑制剂治疗对生存质量存在影响。(P<0.05)结论：重型β-地中海贫血患儿成功接受造血干细胞移植术后生存质量显著高于非移植组,移植组生存质量与健康对照组水平相似。评价时间、评价时的SF水平、cGVHD的发生及评价时使用免疫抑制剂治疗与患儿生活质量相关,故应采取有效措施积极防治相关并发症并规范移植后祛铁治疗,改善患儿的远期预后、提高患儿的生活质量。

关键词： Alloimmunization   India   Autoantibodies   Thalassemia   Incidence   antibody screen   Isoantibodies  

摘要： Introduction. Red blood cell (RBC) alloimmunization and autoimmunization remain a major problem in transfusion dependent thalassemic patients. There is a paucity of data on the incidence of RBC alloimmunization and autoimmunization in thalassemic patients from eastern part of India, as pretransfusion antibody screening is not routinely performed. Aims. To assess the incidence of RBC alloimmunization and autoimmunization in transfusion dependent thalassemic patients in eastern India. Materials and Methods. Total 500 thalassemia cases were evaluated. The antibody screening and identification were performed with commercially available panel cells (Diapanel, Bio-rad, Switzerland) by column agglutination method. To detect autoantibodies, autocontrol and direct antiglobulin tests were carried out using polyspecific coombs (IgG + C3d) gel cards in all patients. Results. A total of 28 patients developed RBC alloimmunization (5.6%) and 5 patients had autoantibodies (1%). Alloantibody against c had the highest incidence (28.57%) followed by E (21.42%). Five out of 28 (17.85%) patients had developed antibodies against both c and E. Conclusion. Data from this study demonstrate that the RBC alloantibody and autoantibody development rates are significant in our region. Thus, pretransfusion antibody screening needs to be initiated in eastern India in order to ensure safe transfusion practice. © 2015 Suvro Sankha Datta et al.

关键词： β地中海贫血   kruppel样因子1   基因突变   人群遗传学   临床表型   遗传修饰作用  

摘要： 背景与目的:　　本次研究首次通过分子筛查一个大样本中国人群来调查KLF1基因的突变率与突变谱，并通过表型研究来评估KLF1突变是否对β地贫具有遗传修饰作用。　　设计与方法:　　一、研究人群、病人和表型检测　　本研究通过随机抽样对长期居住在中国南方地区的3918例非亲缘关系个体进行了突变分析，这个大人群队列包括:3839例连续采集的样本和79例表型导向型样本（Hb A2水平:3.3％-4.1％和/或Hb F水平大于1.5％）。与此同时，我们通过采集携带KLF1突变的β地贫患者进行了家系研究，以确认突变是自发突变还是遗传性突变。另外，我们还召集了中国非地贫高发区域的1190例个体作为对照研究，他们来自中国北方地区山东省。　　所有的血液学参数均用自动血细胞计数仪测定，血红蛋白组分分析运用高效液相色谱法进行测定。红细胞表面抗原CD44表达量运用流式细胞仪分析。　　二、分子遗传检测　　DNA提取采用传统的酚/氯仿抽提法。通过高分辨率熔解曲线技术分析（HRM assay）筛查所有参加者的KLF1变异，运用第一代测序对所筛查的变异进行验证。对于KLF1变异是否是功能性突变主要基于两点标准:(1)根据表型的变化:携带者Hb F水平大于1％同时/或红细胞表面抗原CD44表达下降;(2)生物信息学预测:应用 SIFT()和 PolyPhen-2()软件来预测所发现的KLF1变异是否影响其蛋白质结构和功能。　　三、统计分析　　所有的统计分析均使用SPSS19.0统计软件或R语言进行，P＜0.05视为具有显著的统计学差异。　　结果:　　一、中国南方地区人群具有相对高的KLF1突变率　　中国南方人群KLF1突变率在队列A，队列B，队列C的突变率分别是:1.27％(25/1971)，1.16％(11/946)，1.30％(12/922)，且这三组之间没有统计学差异，P=0.959，但南方人群KLF1总突变率显著高于北方人群(1.25％ vs.0.08％，P＜0.001)，说明KLF1突变在中国南方人群有相对高的突变频率，且在地中海贫血流行区域更为常见。　　二、广泛的KLF1突变谱　　3839例连续采集的南方人群样本（队列A，B，C）中共鉴定出48个突变的KLF1等位基因，79例表型导向型样本共发现16个，检出率为20.25％。从突变谱看，***176AlafsX179和***299Asp为最主要的两种突变，占所有突变的90.6％。另外本研究还报道了13种新的中性KLF1变异，包括4种错义突变、4种同义突变和5种3'UTR突变。所发现的这些突变首次展现了KLF1基因人群广泛的突变谱。　　三、KLF1突变可改变正常个体血液学参数　　通过对41例携带KLF1突变的非地贫人群（25例来自队列A，16例来自队列D）进行血液学分析，发现无论是平均红细胞体积(Mean corpuscular volume，MCV)还是平均红细胞血红蛋白量（Mean corpuscular hemoglobin，MCH）与1946例未携带KLF1突变的非地贫人群相比都轻微的降低了(MCV:82.45±5.39 vs.89.29±4.77 fL,P＜0.001;MCH:26.95±2.11 vs.29.46±1.44 pg,P＜0.001)。另外，这41例个体的Hb A2和Hb F水平也有一定程度的升高，分别为3.28±0.45％和3.44±1.75％。因此，本研究首次通过人群研究发现轻微升高或者处于临界值的MCV和MCH是KLF1基因突变的重要表型，与升高的Hb A2和Hb F这两个已发现的指标一样，可以提高筛查KLF1基因突变的阳性率。　　四、KLF1突变可改变β地贫携带者的血液学表型　　本研究对14例KLF1杂合突变与β0杂合突变共遗传的个体进行了血液学分析，其中7例β0/βN来自队列B（队列B中1例β+/βN，1例βE/βN，2例β0/βN合并α地贫被排除分析），另外7例β0/βN来自家系样本。意外的是，这14例个体MCV或MCH与217例β0杂合突变携带者相比，并未显得更低，无统计学差异(MCV:63.53±3.94 vs.65.11±4.34 fL，P=0.112;MCH:20.26±1.42 vs.20.34±1.37 pg，P=0.567)。另外一方面，这14例个体显示出了相当高的Hb A2(α262)水平（6.47±0.81％，最低5.10％，最高8.00％），显示出KLF1突变和β-globin基因突变对δ-globin基因表达升高的叠加作用;与此同时，我们注意到这些样本具有升高的且变异的Hb F水平（7.67±4.11％，最低3.60％，最高18.20％），但其变异性有待进一步研究。　　五、KLF1突变可减轻β地贫患者临床表型严重性　　为了评价KLF1突变对

关键词： 毛细管区带电泳   珠蛋白肽链   地中海贫血   异常血红蛋白  

摘要： 背景与目的血红蛋白是机体生存必需的功能蛋白,分子质量约为64.5KDa,是红细胞内氧及二氧化碳的载体。人体血红蛋白分子结构呈球形,内部有四个含氧血红素,每个血红素与相应肽链之间由共价键相连。人体血红蛋白是由2条α类肽链和2条β类肽链非共价结合形成的四聚体,α类肽链包括ζ链和α-链,β类肽链包括￡-链、γ-链、δ-链、β-链。机体在不同发育阶段对氧气的需求是不同的,因此不同发育阶段的血红蛋白肽链组成也有所不同。Hb Gower 1(ζ2ε2).Hb Gower 2 (α2ε2)、Hb Portland(ζ2γ2)是人体胚胎期血红蛋白的主要类型；随着妊娠进程,ζ、ε-珠蛋白基因表达开始减少,γ-珠蛋白基因表达增加,HbF(α2γ2)成为胎儿期的主要血红蛋白,同时机体有少量的HbA2(α2δ2)产生；γ-珠蛋白基因在出生前后关闭,β-珠蛋白基因表达在1岁后达到高峰并维持终生,因此成人期的主要血红蛋白类型为HbA(α2β2).HbA2α2δ2)。血红蛋白病是一类由珠蛋白结构异常或者合成不足引起的遗传性疾病,主要分为地中海贫血(简称“地贫”)和异常血红蛋白。地贫主要是因为珠蛋白基因异常,使珠蛋白肽链合成受到抑制而导致类α肽链和类β肽链失衡的一组遗传性溶血性疾病。根据α-和β-链失衡程度可分为以下三类：(一)地贫基因携带者,此类个体常无明显的临床症状。α-地贫基因携带者基因型多为α/αα,ααΥ/αα αΥα/αα,-α/-α,-α/αΥα;β-地贫基因携带者常见基因型为β+/βN,β0/βN。(二)中间型地贫：该型临床表型严重程度不同,贫血程度也有很大差别。中间型α-地贫又称Hb H病,此类患者基因型多为--/-α或--/αTα。而中间型p-地贫患者的基因型多为β+/β+,β+/β0,β-地贫复合HPFH,6p-地贫。(三)重型地贫：该型包括重型α-地贫和重型p-地贫。由于重型α-地贫四个α-珠蛋白基因缺如,γ-珠蛋白相对过剩,聚集产生Hb Bart's(γ4),又称Hb Bart's胎儿水肿综合征,其基因型为--/--。重型p-地贫的基因型为β0/β+,β0/β0。异常血红蛋白则是因为珠蛋白链的分子结构发生改变,导致相应蛋白结构、功能、合成和/或稳定性产生改变的一组遗传性疾病。表型研究在异常血红蛋白疾病的诊断以及病情预判中占有重要的地位。现阶段用于地中海贫血和异常血红蛋白辅助诊断的临床表型研究指标有平均红细胞体积(MCV),平均红细胞血红蛋白含量(MCH),异常的IbA2、HbF含量以及异常血红蛋白的检出。尽管如此,由于表型与基因关系的复杂性加大了研究的困难,因此联合各种表型检查技术辅助诊断地贫是很有必要的。为了更好的理解地贫,揭示α/非α链不平衡的程度,确定未知异常血红蛋白和监测动物实验以及相关珠蛋白基因疗法的血液学研究,珠蛋白链的成份分析和结构鉴定研究就尤为重要。迄今为止,已报道有多种方法用于珠蛋白肽链分析,包括酶联免疫法测定(Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA),凝胶电泳,高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)和反相高效液相色谱法(Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography, RP-HPLC)。但是这些方法仍然面临操作繁琐,样品制备耗时和分辨率有限等缺点。最近,毛细管电泳(Capillary Electrophoresis, CE)技术因其高效率,低样品消耗,分析时间短,溶剂消耗少和分离能力高等优势正在成为人类珠蛋白链分离有吸引力的工具之一。在毛细管应用研究中一些研究人员主要集中于探讨涂层毛细管在珠蛋白链的分离和定量中的应用。然而,商业性涂层毛细管因其昂贵的费用,使用的有限性以及复杂费时的处理过程限制了它在临床实验室的应用。有研究发现在酸性条件下使用未涂层毛细管,以动态涂层替代永久性涂层同样可以获得良好的分离效果。尽管目前出现了基于该法的分析条件,却并没有得到广泛的应用。在实际应用中,我们仍面临许多问题,例如：如何简化复杂的处理过程；如何提高实验效率获得高的分辨率等。毛细管分离性能的提高和条件的优化可能是两个主要的思考方向。另外一个需要面临的问题是,目前所报道的相关文献中的方法条件均有所不同,找到其中的共同规律对于有此类需求的工作而言显然具有重要意义。本研究的主要目的是基于毛细管区带电泳技术建立一种快速珠蛋白肽链分离方法,并探讨该法在提示异常血红蛋白病的临床应用价值,同时为相关工作提供有益的经验。材料与方法1.样本收集：在本研究中,选取20例样本(每种类型地贫各4例)用于前期分离方法的建立和实验条件优化。另选4个样品(正常的成人,正常新生儿,Hb H病,

关键词： 电化学基因传感器   DNA杂交   α-地中海贫血   β-地中海贫血   基因分型  

摘要： 研究背景及目的地中海贫血,又称“海洋性贫血”和“珠蛋白合成障碍性贫血”,简称地贫。它是一种隐性基因遗传病,可导致遗传性溶血性贫血,也是全球分布最广、累积人群最多的一种单基因病。地中海贫血患者无法制造充足的血红蛋白,进而无法将充足的氧气输送至全身各个器官及组织。器官及组织由于长期处于供氧不足的状态进而无法正常工作继而严重影响患者的正常生长发育。地中海贫血主要发生在地中海沿岸国家、东南亚、非洲和我国南方地区,保守估计全世界地中海贫血基因携带者近2亿人,其中包括我国南方广西、广东、海南等省份。地中海贫血是我国南方省份发病率最高、影响范围最大的隐性遗传病之一,其中尤以广西、广东最甚,据估计两省地贫人数占全国总人数的2/5以上。地中海贫血主要包括α-地中海贫血和p-地中海贫血,a-地中海贫血和p-地中海贫血其分子基础是分别位于16号染色体短臂末端16p13.3位点上的a珠蛋白基因簇的先天性遗传缺陷及位于11号染色体短臂末端11p15.5位点上的p珠蛋白基因簇的先天性遗传缺陷。α-地中海贫血多数情况因为一条染色体上1个或同时2个α珠蛋白基因缺失引起、少数情况由非缺失型突变引起的(αTα或ααT)。α+-地贫(-α)或α0地贫(--)携带者存在着下一代出现血红蛋白H病(--/-α或--/αTa)或重型的Hb Bart's水肿综合症胎儿的风险。Hb H基因型与该病临床症状严重程度相关,可以是重度贫血,也可以是轻度贫血。最常见的是α0-地贫复合α+-地贫的缺失型Hb H病,然而非缺失型的Hb H病也占有相当的比例。而我国最常见的三种非缺失型α地中海贫血Constant Springα (acsα) αβQuongSzeα (αβQSα) αWestmeadα(αwsα),在α-地中海贫血发病率最高的广西有45.8-53.3%的Hb H病患者携带上述非缺失型α地贫基因。这类病人比那些缺失了3个α珠蛋白基因所表现出来的临床症状更严重,贫血更严重。β-地中海贫血是由于p珠蛋白基因的突变从而引起β珠蛋白链合成减少(β+)或β珠蛋白链缺失(p0),而红细胞膜与过剩的α链结合继而引起的溶血性贫血。世界范围内对该病都有不同程度的关注,世界所有人群和种族均存在其基因缺陷,地中海贫血在我国长江以南数个省份亦有较高的发病率[1]。p-地中海贫血珠蛋白基因的突变主要由于个别碱基的置换、插入或者缺失,因而具有高度异质性,目前为止全球已发现180多种突变类型,其中20多种突变类型在中国被发现[2,3]。中国β-地中海贫血发病人群中超过90%为发病率较高的CD41-42(-CTTT)、IVS-Ⅱ-654(C＞T)、CD17(AAG>TAG)和-28(A>G)4种β-地中海贫血突变类型。由于缺乏有效治疗手段又存在较高的发病率,地中海贫血现在不仅是一个公共卫生问题,也成为了中国南方一个社会经济问题。应用相应分析技术通过人群筛查及产前诊断阻止重症患儿出生是国内外公认的首选预防措施。目前,临床上检测地中海贫血基因点突变类型最常用的方法是斑点杂交(Dot blot)、反向斑点杂交(RDB)、等位基因特异PCR(ARMS-PCR)、多重等位基因特异PCR(Multi-ARMS-PCR)、基因芯片技术和基因测序。然而斑点杂交(Dot blot)、反向斑点杂交(RDB)要花费大量时间、操作繁琐、稳定性差、自动化程度低等缺点；等位基因特异PCR(ARMS-PCR)、多重等位基因特异PCR(Multi-ARMS-PCR)、基因芯片技术和基因测序具有灵敏度高、高通量等优势,但是由于其配备的大型检测设备过于昂贵,这点限制了其在临床的推广应用。且往往一次只能单做a-地中海贫血基因分型检测或单做β-地中海贫血基因分型检测。以上方法均不能满足临床对于地中海贫血高危人群快速准确的基因筛查运用及其在各个基层医院大范围的推广应用。生物传感器技术是由生物化学、电化学、医学以及电子技术等多学科相互渗透发展起来的一种新型的检测技术。近年来电化学方法在检测DNA杂交方面的优点使得DNA电化学传感器的研究得到广泛关注。电化学传感器进行DNA单碱基识别主要是基于DNA杂交反应中不同信号探针产生的不同电化学信号,其检测的高度特异性基于碱基互补配对的高度选择性。由于杂交后双链DNA碱基对的堆积,电极表面形成有效的电子传递链。然而当碱基对中存在单个碱基错配时,电子传递链会由于碱基堆积作用被破坏而中断,而作起放大作用的杂交指示剂信号被中断,从电化学输出信号的变化可识别单碱基的错配。DNA电化学基因传感器的识别选择性通过DNA杂交的三明治结构获得较大的提高,因而DNA电化学基因传感器的特异性比较高。DNA电化学基因传感器生物芯片是将核酸杂交技术和电化学传感器技术组合成的能简单快速、准确廉价地帮助诊断患者疾病的新方法。该技术将在支

关键词： 血液检验   缺铁性贫血   地中海贫血   鉴别诊断  

摘要： 目的：探讨血液检验在鉴别诊断缺铁性贫血（ida）和地中海贫血（tHal）中的应用价值。方法选取150例受试者为研究对象，正常组40例，ida 组50例，tHal 组50例，采用血细胞分析仪及生化分析仪检测其血常规。结果ida 组和 tHal 组的 rBc、rBc/HB、McV、McH、McHc、rdW 均与正常组差异有统计学意义（p ＜0.05）。ida组与 tHal 组的 rBc、HB、rdW 差异有统计学意义（p ＜0.05）。结论血液检测在鉴别诊断缺铁性贫血和地中贫血中有较大的应用价值，而且简便、快速、价廉，值得临床推广。

关键词： 血红蛋白电泳   地中海贫血   血红蛋白病  

摘要： 目的:了解本市区血红蛋白病的类型及阳性发生率。方法采用全自动蛋白电泳仪分析系统对12480份患者标本进行测定分析。其中阳性结果再进行基因检测。结果在12480例患者中发现1460例,阳性发生率11.7%,其中α-地中海贫血表型阳性454例,阳性率3.2%,β地中海贫血表型阳性817例阳性率5.6%,异常血红蛋白病189例,阳性率1.3%。结论血红蛋白电泳技术的普及和应用,能有效地筛查出高危患者,对进一步进行基因诊断和遗传咨询提供帮助。