关键词： BCL11A   SOX6   KLF1   KLF2   γ珠蛋白  

摘要： 背景:β地中海贫血是一种严重危害人类健康的遗传性溶血性疾病,其分子遗传学基础是β珠蛋白基因的缺失或缺陷,使β珠蛋白链的合成缺乏或不足,造成α与非α珠蛋白链合成的不平衡,过多的α珠蛋白链形成包涵体,沉积在红系祖细胞和红细胞,造成细胞死亡和无效造血,引起贫血、溶血、骨骼改变等地贫表现。临床研究发现,增加胎儿血红蛋白(Fetal Hemoglobin,HbF)的合成能减轻β地中海贫血病人的临床表现。已有的研究表明,Bcl11A、SOX6、KLF1及KLF2是调控HbF表达的相关转录因子,但是针对β-地中海贫血患者靶向调控SOX6、KLF1和KLF2的表达诱导HbF合成治疗β地中海贫血的实验研究,国内外未见报道。针对中国常见的基因型β-地中海贫血患者,靶向调控Bcl11A的表达诱导HbF合成治疗β地中海贫血患者的实验研究,国内外未见报道。目的:在K562细胞系和以正常人及广西常见基因型β地中海贫血(IVS-Ⅱ-654、41/42及血红蛋白E/β-地贫)病人单个核细胞(mononuclear cell MNC)为对象,在体外分化的红细胞中,运用慢病毒载体基因感染细胞,分别抑制Bcl11A、SOX6、KLF1和KLF2的表达,采用实时荧光定量多聚酶链反应(Real time fluorescentquantitative Polymerase Chain Reaction,RT-PCR),蛋白质免疫印迹方法(Western Blot)方法在信使核糖核酸(MessengerRibonucleic Acid,mRNA)和蛋白层面观察其对人γ珠蛋白基因的调控作用。方法:1.通过人淋巴细胞分离液(Ficoll-Hypaque)密度梯度离心法提取正常人经粒细胞集落刺激因子(recombinant humangranulocyte colony stimulating factor,rhG-CSF)动员后外周血和β地中海贫血患者骨髓和/或外周血里的MNC,接种于本实验室已建立的一步法体外液体红细胞培养体系,促进MNC向红细胞分化,定期观察培养细胞黑白倒置相差显微镜下形态,Geimsa染色细胞形态及细胞形态分类计数;分化终末流式细胞仪检测红系分化特异抗原CD235a确定分化效率。通过RT-PCR的方法观察红系分化培养过程中CD235a、β、γ珠蛋白基因表达的动态变化。2.运用小RNA干扰原理和脂质体转染的方法,以Bcl11A、SOX6、KLF1及KLF2 shRNA候选质粒转染K562细胞系或者293FT细胞系,转染48小时后提取细胞RNA,反转录为cDNA,采用RT-PCR方法在mRNA层面验证各质粒的抑制效果;转染72小时后,提取细胞蛋白,运用Western Blot在蛋白层面验证各质粒的抑制效果,选取抑制效果最佳的质粒包装含目的shRNA片段的慢病毒。3.将含目的shRNA片段的质粒与辅助质粒VSVG 1.0载体,Δ8.9载体共转染293FT细胞,转染72小时后,收获培养基上清中的病毒。将病毒浓度梯度稀释,感染1080细胞,嘌呤霉素筛选病毒感染阳性细胞,结晶紫染色活细胞测试病毒滴度。4.分别在K562细胞系,正常人MNC体外分化的红细胞及β地中海贫血患者MNC体外分化的红细胞中感染慢病毒。在K562细胞系,采用RT-PCR和Western Blot方法从mRNA和蛋白两个层面检验Bcl11A、SOX6、KLF1和KLF2四个因子的抑制效果和对γ珠蛋白基因的调控作用;在正常人MNC细胞体外分化的红细胞和β地中海贫血患者MNC细胞体外分化的红细胞中,采用RT-PCR方法在mRNA水平检验Bcl11A、SOX6、KLF1和KLF2四个因子的抑制效果和对Y珠蛋白基因的调控作用。结果:1.在体外红细胞分化实验中,随着体外培养时间的延长,倒置显微镜下可见培养体系内出现较多具有红系特征的橘红色细胞集落;Geimsa染色形态学证实培养细胞逐渐由原始红细胞向成熟红细胞分化。随着分化时间延长,培养体系里红细胞比例逐渐增加,至第15天,各发育阶段红细胞比例可达到90%以上,流式检测红系特异性抗原CD235a的表达达87%。CD235a、β珠蛋白基因与γ珠蛋白基因RNA表达量随着分化时间延长逐渐增加;γ/β mRNA的比例随着分化时间延长逐渐下降。2.在K562细胞系中,分别下调BCL11A与SOX6因子后,γ珠蛋白基因表达在mRNA与蛋白水平均升高。在正常人MNC体外分化的红细胞和β地中海贫血患者MNC体外分化的红细胞中,分别下调BCL11A与SOX6后,γ珠蛋白基因表达在mRNA水平升高。下调BCL11A与SOX6因子后,未观察到对红系分化有明显影响。3.在K562细胞系中,下调KLF1后,γ珠蛋白基因表达在mRNA与蛋白水平均降低;除此之外,下调KLF1后,β珠蛋

关键词： 重型β-地贫   甲状腺功能   亚临床甲减   铁过载   免疫组化  

摘要： 目的：调查广西地区重型beta地中海贫血患者甲状腺功能一般情况,研究重型beta地中海贫血患者体内铁过载情况及其与甲状腺功能之间的关系,探讨机体内铁过载水平是否对甲状腺功能存在一定的影响,为临床治疗地中海贫血及其内分泌相关并发症提供依据。方法：通过集中收集、临床采集等方式,将2009年5月至2014年5月期间,中国广西壮族自治区(包括南宁、百色、桂林、玉林,以及少部分广西周边地区)经基因型检测确诊为重型beta (等同于“β”)地贫患者共300例纳入观察对象(其中男197例,女103例,2-25岁),集中选取85例健康人的对照组(其中男53例,女62例,3-15岁),对比分析2组间的生长发育情况、甲状腺功能水平(FT3、FT4、TSH)、地贫组的铁过载情况及其与甲状腺功能的关系。通过腹腔注射右旋糖酐铁建立铁过载蒙古沙鼠实验室模型18只,并设置对照组18只,对照组腹腔注射同等剂量的生理盐水,同等条件下饲养14周(14w)、16周(16w)、18周(18w)后,按每批每组6只,分批取其甲状腺组织,福尔马林液固定、石蜡包埋、切片,分别进行HE染色、普鲁士蓝铁染色、抗TSH-R免疫组化染色,比较对照实验组与对照组蒙古沙鼠的染色结果。结果：1)300例重型β-地贫患者有111存在身高低下,占37.5%；对照组85例对象有5身高低下,占5.9%。地贫组有65例(占22.0%)出现体重低下,对照组有4例(占4.7%)体重低下。2)300例地贫患者甲状腺功能测定(TSH、FT4、FT3)有26例(占8.67%)患者表现为“亚临床型甲状腺功能减退”,有2例(占0.66%)表现为“甲状腺功能减退”,地贫组的TSH水平要高于对照组(P=0.001)；对照组未出现亚临床型或临床型甲状腺功能减退。3)208例重型β-地贫患者处于重度铁过载状态,占70.27%, SF、CMR等于甲状腺功能未发现明显的相关关系。4)铁过载与对照组蒙古沙鼠甲状腺普鲁士蓝铁染色结果之间无统计学差异；铁过载沙鼠的体内血清铁蛋白水平显著高于对照组沙鼠(62.18±5.55 μg/L VS. 16.85±2.02 μg/L, P=0.001)。铁过载沙鼠甲状腺组织免疫组化(抗TSH-R) Mean Density值为0.079±0.166,对照组沙鼠Mean Density值为0.029±0.007,铁过载组的Mean Density值明显大于对照组(P<0.001)结论：1)广西地区重型β-地贫患者亚临床甲状腺功能减退的发生率(8.67%)显著高于对照组人群；甲状腺功能减退的发生率(0.66%)高于同期人群筛查结果。对于重型β-地贫患者甲状腺功能建议早监测、早发现、早干预、早治疗。2)青少年地贫患者的身材矮小、体重低下较为普遍,高于同年龄同性别正常人群,需要定期监测和早期临床干预。3)铁过载沙鼠是血清铁蛋白值显著高于对照组,铁过载沙鼠甲状腺组织未发现显著的铁沉积；铁过载沙鼠甲状腺腺泡及基底组织免疫组化TSH-R表达阳性率显著高于对照组沙鼠。

关键词： 黎族   海南医学院   选择作用   细胞库   分子流行病学   地中海贫血   酶缺乏症   携带率   永生  

摘要： 黎族分布于海南省,人口约有120万。近25年来,海南医学院科研人员对黎族人群开展了以下研究:(1)地中海贫血的分子流行病学研究显示,黎族人群α-和β-地中海贫血的疾病基因携带率分别为50%和11.2%,且基因突变类型集中。(2)葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的分子缺陷的研究,发现了黎族人群该突变起源和进化及其与疟疾选择作用关系的分子依据。(3)建立黎族永生细胞库,并载入"中国不同民族永生细胞库",由"中国不同民族基因组保存中心"北方组保存,是我国人类遗传资源的重要组成部分。

关键词： 血常规检测   地中海贫血   病情诊断   铁元素   患病时间   溶血性贫血   血红蛋白量   血液疾病   平均红细胞体积   差异有显著性  

摘要： 缺铁性贫血和地中海贫血临床治疗差异大,尤其是对铁元素进行处理的方法更是完全相反[1]。本文应用血常规检测方法对缺铁性贫血患者的病情诊断的临床价值进行研究。现汇报如下。1资料和方法1.1一般资料:选2011年1月-2013年1月收治患地中海贫血和缺铁性贫血的患者及健康人各45例,分别定义为甲组、乙组、丙组。甲组研究对象中男性26例,女性19例;患者年龄19-56岁,贫血患病时间1-18个月;

关键词： beta-thalassemia trait   screening   NESTROFT   pregnancy  

摘要： The morbidity of beta-thalassemia major has forced medical professionals to formulate screening tests to effectively screen beta-thalassemia trait (BTT) of which naked eye single tube osmotic fragility test (NESTROFT) is the most cost effective test. Optimal time to screen for BTT appears to be during pregnancy, as at risk couples can be offered prenatal diagnosis. We screened 55 pregnant women attending antenatal clinic in a medical college hospital at Bangalore, with NESTROFT. Twelve (21.89%) were NESTROFT positive with mean hemoglobin of 11.2 mg % and packed cell volume of 32.6%. Catering predominantly to Vokkaliga community in whom literature reports increased prevalence of BTT, addition of a cost effective test like NESTROFT in the antenatal panel, appears promising.

关键词： 代谢综合征   糖尿病   患病率   标化率   HbA1c   高压液相法   便携式糖化血红蛋白仪   一致性   Hb A1c   筛查   相关系数   拜安时   地中海贫血  

摘要： 糖尿病患病率的增长已成为危害我国和全球居民健康的重要公共卫生问题。同时糖化血红蛋白作为糖尿病诊断的新指标得到越来越广泛的应用。我国是一个幅员辽阔、人口众多的多民族国家。云南省景洪市人民医院是我院的对口支援单位,当地基诺族是从原始社会直接进入社会主义社会的特殊少数民族,目前缺乏该人群代谢综合征和糖尿病患病率数据。同时基诺族人有较高的地中海贫血患病率,不适宜使用高压液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)测量糖化血红蛋白,理论上使用免疫法可避免HPLC法的不足。鉴于上述情况,本研究:(1)调查基诺族成人糖尿病与代谢综合征患病率,并以上海糖尿病研究Ⅱ(Shanghai Diabetes StudyⅡ,SHDSⅡ)为参照,分析基诺族成人糖尿病及代谢综合征的特征;(2)评估应用免疫法的便携式糖化血红蛋白仪(拜安时)的精确性;(3)探讨拜安时在基诺族成人血糖评估中的应用价值。第一部分基诺族成人代谢综合征与糖尿病的患病率及特点目的 了解基诺族成人代谢综合征与糖尿病患病现况及特征。对象与方法 2011年11月-2012年4月,上海市糖尿病临床医学中心对云南省基诺族18-75岁成人进行调查。共有5577名基诺族居民完成了调查并纳入分析。既往无糖尿病史者进行口服葡萄糖耐量试验,空腹8个小时后抽取静脉血,测定空腹血糖和2小时血糖。既往确诊的糖尿病患者仅抽取空腹血。收集所有受试者人口学、疾病史等相关资料,进行身高、体重、腰围、血压、体脂含量、免散瞳眼底摄片等检查,以及实验室生化检查(便携式糖化血红蛋白A1CNow+、糖化白蛋白、胰岛素、C肽、肝肾功能、尿微量白蛋白/尿肌酐比值,血常规等检查)。糖尿病和糖调节异常的诊断及分类采用1999年WHO诊断标准。中心性肥胖的判定采用2007年中国成人血脂异常防治指南制订联合委员会制定的标准(男性腰围≥90 cm,女性腰围≥85 cm)。使用中华医学会糖尿病学分会(CDS)2004年标准诊断代谢综合征和超重/肥胖、血脂异常、高血压。以2010年全国人口构成为标准人口,使用直接法计算标化率。SHDSII研究入组标准为18-75岁成人,共5514例。结果 基诺族总人群(5577例,40.1±13.2岁)、男性(2649例,39.9±13.6岁)、女性(2928例,40.2±12.9岁)的代谢综合征标化率分别为10.3%、11.9%、8.6%;糖尿病标化率分别为6.8%、9.4%和4.1%。在新诊断糖尿病患者中,单纯空腹血糖≥7.0mmol/L的占38.4%,单纯2小时血糖≥11.1mmol/L为39.8%,二者均升高的为21.8%。总人群、男性、女性的糖尿病前期标化率分别为19.6%、21.9%和17.5%。糖尿病前期患者中单纯空腹血糖受损的占42.6%,单纯糖耐量受损的占43.8%,空腹和餐后均受损的占13.6%。总人群中超重/肥胖、高血压、血脂异常和中心性肥胖的标化率分别为20.4%、20.0%、36.7%和8.7%。SHDSII研究总人群(5514例,48.7±13.5岁)、男性(2074例,48.7±14.4岁)、女性(3440例,48.6±12.9岁)的代谢综合征标化率分别为16.5%、20.0%和12.7%;糖尿病标化率分别为10.5%、12.7%和8.1%。在新诊断糖尿病患者中,单纯空腹血糖≥7.0mmol/L的占22.9%,单纯2小时血糖≥11.1mmol/L的为42.9%,二者均升高的为34.2%。总人群、男性、女性的糖尿病前期标化率分别为14.6%、14.7%和14.6%。糖尿病前期患者中单纯空腹血糖受损的占23.9%,单纯2小时血糖受损的占63.5%,空腹和餐后均受损的占12.6%。中心性肥胖、超重/肥胖、高血压、血脂异常的总人群标化率依次分别为18.3%、32.4%、27.1%、34.1%。结论 基诺族成人的糖尿病标化率低于SHDSII人群,糖尿病前期的标化率高于SHDSII人群。男性的糖尿病及糖尿病前期患病率明显超过女性。基诺族人群容易出现空腹高血糖。第二部分免疫法检测糖化血红蛋白精度的评价目的 以HPLC法检测的Hb A1c为参照,评估便携式糖化血红蛋白仪拜安时(A1CNow+)对糖尿病患者Hb A1c测定的准确性和误差。对象与方法 2012年09月-2012月12月,上海市第六人民医院内分泌代谢科门诊及住院糖尿病患者1618例。每个受试者分别进行静脉血HPLC法和指尖血A1c Now+法的Hb A1c测量。同一个受试者两种检测方法的采血时间差不超过24小时。使用相关分析、以Hb A1c≥6.5%和Hb A1c≤7.0%为切点作kappa检验、Passing-Bablok回归分析评价两种方法检测结果的准确性;使用配对t检验,两种方

关键词： 脐血   血红蛋白电泳   地中海贫血  

摘要： 目的：对脐血血红蛋白电泳在地中海贫血临床诊断中的应用进行系统分析和探讨。方法对2014年3月～2015年3月间收集的1130例脐血标本采取血红蛋白电泳，与此同时对电泳膜采取区带扫描的定量分析，再对检出的HbBart＇s带标本开展α-地中海贫血的诊断，另外应用一管定量检测法对本组标本进行筛查试验。结果本研究中有134例脐血标本通过筛查试验，溶血率均＜60%；1130例标本中检出76例HbBart＇s带标本；通过基因诊断确诊为α-地中海贫血的有66例；异常血红蛋白疾病7例。结论采取脐血血红蛋白电泳进行地中海贫血诊断，具有操作简便、效率高的特点，是重要的检查方法，但是对该病症的诊断还应深入研究。

关键词： 重型β地中海贫血   胎儿血红蛋白   单核苷酸多态性   BCL11A   HBS1L-MYB   XmnI-HBG2  

摘要： 目的研究广西105例重型β地中海贫血患者BCL11A基因(rs11886868位点、rs766432 位点、rs4671393 位点),HBS1L-MYB 基因(rs9399137 位点、r s4895441 位点、rs35959442 位点),XmnI-HBG2 基因(rs7482144 位点)多态性与胎儿血红蛋白(Fetal hemoglobin,HbF)的相关关系。方法本实验共纳入广西重型β地中海贫血患者105例,正常健康对照100例,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RELP),DNA测序技术对BCL11A基因、HBS1L-MYB基因及XmnI-HBG2基因的7个位点多态性进行检测,比较病例组与正常健康人等位基因频率及基因型分布差异,并分析病例组7个位点多态性与HbF水平的相关关系。结果1.广西重型β地中海贫血患者BCL11A基因rs4671393位点,rs766432位点小等位基因突变频率明显高于正常对照组且这两个位点的病例组和对照组的基因型分布不同,差异均具有统计学意义(P<0.05)。rs4671393位点、rs766432位点与HbF水平具有相关关系(rs4671393位点:rs=0.772,P<0.001;rs766432 位点:rs=0.744,P<0.001)。rs11886868 位点病例组及正常对照组均未发现突变,且通过相关性分析其与HbF无相关关系(P>0.05)。2.广西重型β地中海贫血HBS1L-MYB基因rs4895441位点、rs35959442位点小等位基因频率均明显高于正常对照组,差异具有统计意义(P<0.05),rs4895441位点基因型分布与正常对照组不同,差异具有统计学意义(P<0.05)。rs4895441位点和rs35959442位点与HbF水平均具有相关关系(rs 4895441 位点:rs=0.506,P<0.001;rs35959442 位点:rs=0.497,P<0.001)。rs9399137位点仅病例组发现2例CC基因型,其与HbF无相关关系(P>0.05)。***-HBG2基因rs7482144位点等位基因频率和基因型分布与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05),相关分析显示:其与HbF水平具有相关关系(rs=0.328,P<0.001)。4.在连锁不平衡分析中BCL11A基因rs4671393位点和rs766432位点LD系数D' =0.702,存在高度连锁不平衡关系。具有rs4671393位点而无rs766432位点突变的基因型与HbF的相关系数为0.466(P<0.05),具有rs766432位点突变而无rs4671393突变的基因型与HbF的相关系数为0.378(P<0.05),同时具有rs4671393位点和rs766432位点相同类型基因突变的基因型与 HbF 的相关系数为 0.802(P<0.05)。HBS1L-MYB 基因 rs9399137 位点、r s4895441位点、rs35959442位点均处于连锁不平衡。结论1.广西地区人群存在BCL11A基因、HBS1L-MYB基因和XmnI-HBG2基因的r s4671393 位点、rs766432 位点、rs35959442 位点、rs4895441 位点、rs9399137位点、rs7482144位点多态性。2.(1)广西重型β地贫患者与正常健康人rs4671393位点、rs766432位点、rs4895441位点等位基因频率及基因型分布均存在差异;rs35959442位点等位基因频率存在差异;(2)广西人群中rs11886868位点及rs9399137位点的突变频率较低。3.在广西重型β地贫患者中rs4671393位点G→A突变,rs766432位点A→C 突变,rs4895441 位点 A→G 突变,rs35959442 位点 C→G 突变,rs7482144位点G→A突变可能有助于增加HbF的合成。***4671393位点和rs766432位点在功能上可能产生协同作用,使它们对HbF水平的影响更为明显。

关键词： Molecular   Mutation   alpha-Thalassemia   Turkey  

摘要： Objective: The spectrum of alpha-thalassemias correlates well with the number of affected a-globin genes. Additionally, combinations of the several non-deletional types of mutations with a large trans deletion comprising the 2 alpha-globin genes have an impact on the clinical severity. The objective of this study was to analyze the hematological and molecular data of 35 patients with Hb H disease from a single center in order to identify the genotypes of Hb H disease and genotype-phenotype correlations. Materials and Methods: Herein, we report the hematological and mutational spectrum of patients with Hb H disease (n=35). Additionally, genotypes of a-gene mutations of 78 individuals, who were referred to our institution for alpha-gene screening, were analyzed. Results: Supporting the previous data from Turkey, -alpha(3.7) was the most common mutation among patients with Hb H disease (62.8%) and in the other 78 subjects (39.7%). Of the patients with Hb H disease, the most common genotypes were -alpha(3.1/-20.5), -alpha(3.7/-26.5), and -alpha(3.7/-17.5) in 10 (28.6%), 6 (17.1%), and 6 (17.1%) patients, respectively. Another small deletion, -4.2 alpha, and several non-deletional types of alpha-gene mutations, namely alpha (-5nt): IVS-I donor site (***->GAG.G);alpha (PA-2): AATAAA>AATGGA, and alpha (cd59): GGC->GAC, were found to be associated with Hb H disease when present at trans loci of one of the large deletions given above. The combinations consisting of 1 non-deletional and 1 of the large non-deletional types of mutations (alpha(T)alpha/-) at trans loci were found to result in a more severe phenotype compared to the genotypes composed of 1 small trans deletion of a large deletion (-alpha/-). The combination of alpha (Cd59) and in trans was associated with severe phenotype and the disease was associated with an increase in Hb Bart's level with null Hb H. In spite of the presence of 2 intact a-globin genes, homozygosity for PA-2 mutation resulted in severe

关键词： 地中海贫血   红细胞   溶血贫血   证候季节变化   益髓生血颗粒   分子机制  

摘要： 背景：地中海贫血(简称地贫)是由于珠蛋白基因突变或缺失导致珠蛋白合成障碍的一组遗传性溶血性贫血,其中最常见的是α-地贫和β-地贫。地贫至今仍无有效的治疗办法。导师吴志奎教授课题组,根据中医“肾藏精生髓、髓生血”经典理论,从肾论治治疗地贫,经过三十多年的临床实践,首次对中医药治疗地贫从理论基础、核心病机、治则治法、作用特点和可能机制等提出了较明确的理论认识,形成了系统的理论与有效治法,取得了领先的临床研究成果。通过系列的临床和实验研究,验证了“肾生髓、髓生血”理论指导地贫临床治疗的有效性和科学性。本课题组2006年对112例中间型地贫患者进行中医证候调查,发现地贫患者中医证候多为肝肾阴虚,精血不足证,病情严重程度与季节变化有关,即夏季溶血贫血严重,冬季有所缓解,其证候变化的特点是基本证型未变,但临床症状有明显的季节改变,这种证候季节变化,体现了中医“天人合一,四时阴阳”的整体观,这种证候季节变化可能与血液参数季节性改变有关。既往有关地贫患者证候季节变化的临床报道鲜有,尚未见地贫患者证候季节变化生物学机制研究的报道。本课题是依托国家自然科学基金和“973”研究课题,在前期发现和探索的基础上,探讨季节变化对地贫患者临床证候的影响；从红细胞溶血贫血的角度探讨地贫患者证候季节变化的可能物质基础；并进一步从红细胞溶血贫血的角度探讨益髓生血颗粒治疗地贫的疗效可能机制。目的：以地贫患者为研究对象,从血液指标和中医证候量化评分两个方面探讨季节变化对地贫患者临床表现的影响；从红细胞溶血贫血这一角度阐释地贫患者证候季节变化的可能分子机制,探讨证候季节变化与红细胞溶血贫血的内在关系,为中医“四时”理论指导地贫临床治疗提供部分实验依据。方法：1地贫患者证候季节变化的临床观察 以高发区地贫患者为研究对象,进行了两批次的临床观察。第一批次临床观察：在冬夏两季分别选取一组HbH病患者,冬季组HbH病患者35例,夏季组HbH病患者31例,比较两组HbH病患者血液指标和中医证候量化评分水平的差异,初步探讨季节变化对地贫患者临床证候的影响。第二批次临床观察：选取11例地贫患者(5例α-地贫、6例β-地贫),对11例地贫患者进行冬夏两季的连续观察,动态检测地贫患者冬夏两季血液指标水平并对中医证候进行量化评分,进一步探讨季节变化对地贫患者临床证候的影响。2基于红细胞溶血贫血探讨地贫患者证候季节变化分子机制在临床研究的基础上,针对地贫患者红细胞溶血和贫血的临床特点,采用RT-PCR、ELISA、透射电镜、比色法、比浊法、WB法等分子生物学技术,研究冬夏两季地贫患者红细胞溶血和贫血相关指标(血清铁和血清铁蛋白、红细胞抗氧化损伤、红细胞膜骨架蛋白mRNA表达、红细胞包涵体含量、红细胞膜相关离子通透酶、造血细胞因子)等水平的差异,从红细胞溶血和贫血角度探讨地贫患者证候季节变化的可能分子机制。3基于红细胞溶血贫血探讨益髓生血颗粒治疗地贫的疗效可能机制选取16例地贫患者,从地贫患者红细胞溶血和贫血的角度探讨治疗前后珠蛋白链比、红细胞抗氧化损伤水平、红细胞膜骨架蛋白mRNA表达、红细胞膜相关酶活性、造血细胞因子活性、DNA甲基转移酶mRNA和蛋白表达、BCL11AmRNA的表达等指标水平的变化,探讨益髓生血颗粒治疗地贫的疗效可能的分子机制。结果：1证候季节变化的临床观察1)季节变化对HbH病患者证候影响的临床观察冬季组HbH病患者主要血液指标Hb水平显著高于夏季组HbH病患者(P<0.05),冬季组HbH病患者Ret、HbH水平显著低于夏季组(P<0.05)。冬夏两组HbH病患者RBC水平无明显差异。夏季组缺失型HbH病患者Hb水平显著低于冬季组(P<0.05)；冬夏两组非缺失型HbH病患者Hb水平比较无明显差异。冬季组HbH病患者面色萎黄、爪甲色淡、耳鸣、口咽干燥的中医证候量化评分显著低于夏季组(P<0.01或P<0.05)；腰膝酸软、潮热盗汗中医证候量化评分冬夏两组无明显差异。冬季组非缺失型HbH病患者面色萎黄、耳鸣、口咽干燥的中医证候量化评分显著低于夏季组(P<0.05或P<0.01)。冬季组缺失型HbH病患者面色萎黄、爪甲色淡、腰膝酸软、口咽干燥的中医证候量化评分显著低于夏季组(P<0.05或P<0.01)。冬季组HbH病患者中无论是非缺失型还是缺失型,其大多中医证候量化评分均低于夏季组,提示夏季病情较重,冬季有缓解。初步说明了地贫患者临床症状受季节变化的影响。2)季节变化对同一组地贫患者证候影响的连续观察11例地贫患者冬季主要血液指标Hb水平显著高于夏季(P<0.05),冬夏两季RBC、Ret水平无明显差异。11例地贫患者冬季爪甲色淡、食少纳呆、潮热盗汗的中医证候量化评分显著低于夏季(P<0.05)；头晕目眩、倦怠乏力、腰膝酸软中医证候量化评分冬夏两季无明显差异。同一组地