关键词： 地中海贫血   筛查   质量控制   切值   流行病学  

摘要： 地中海贫血（thalassemia,简称地贫）常与多样化的血红蛋白变异体共存,其广谱的血液学表型增加了该病筛查的复杂程度;但已有的文献资料对流动人口比例较大的城市特别是长三角地区的流行病学资料较少。我们前期研究了优化定量HbF、HbA2的方法,筛选出联合筛查方案。对经基因诊断确诊的200例地贫和62例正常儿童外周血样本进行血液学指标检测并采用高效液相色谱（high-performance liquid chromatography,HPLC）法检测HbF、HbA2的百分含量,且能检出血红蛋白变体;建立了室内质控方案Westgard多规则12s/13s 22sR4s实时监控实验过程,保证了定量结果的准确性、有效性,降低了实验成本;通过受试工作者曲线（receiver operating characteristic curve,ROC）确定HbF、HbA2的切值分别为1.05%、3.75%。我们应用联合筛查方案检测了491例临床样本,以基因诊断结果为金标准分析该区域地贫儿童群体的流行病学特征。结果提示:该方案灵敏度为99.7%,符合率为99.8%;再次验证为大规模筛查地贫,尤其是β-地贫的理想方案。380例地贫基因检测阳性地贫患儿的地域分布为江苏17.4%,浙江21.8%,上海60.8%。不同地贫类型有特征性的保留时间并有相应的检出范围:H病、E病和重型地贫的HbF、HbA2保留时间与正常对照相比差异较显著,而β-地贫的HbA2的保留时间稍提前。该区域不同地贫基因型的血液学指标MCV、MCH以及HbF、HbA2的表达水平有其特征性。整体上,江浙沪地区地贫儿童群体的MCV、MCH、HbA2均值略高于地贫高发区报道值,而HbF的百分含量差异较大;轻型、静止型α-地贫的各项指标与报道值较接近,H病的血液学指标变异较大,HbA2的百分含量略高于报道值。

关键词： 脾栓塞术   儿童   中间型地中海贫血  

摘要： 目的 评价部分性脾拴塞术治疗中间型地中海贫血的临床疗效.方法 采用经导管脾动脉栓塞术治疗16例中间型地中海贫血患儿.评估拴塞治疗前、后的临床表现和血红蛋白浓度的变化及输血依赖情况.结果 16例患儿中12例患儿不需输血治疗(75％),4例明显延长输血间隔时间(25％).结论 部分性脾栓塞术是治疗中间型地中海贫血较好的治疗方法.

关键词： 血液检测法   地中海贫血   缺铁性贫血  

摘要： 目的 探讨血液检测法在鉴别诊断地中海贫血和缺铁性贫血中的应用效果观察.方法 选择2014年11月—2015年7月期间我院收治的68例贫血性患者作为研究对象,所选患者均实施血液检测,根据其结果分为地中海贫血组及缺铁性贫血组,之后对比两组患者血红细胞分布宽度、红细胞平均血红蛋白量、红细胞计数、血红蛋白含量及红细胞平均体积,并观察检测的符合率、特异性及灵敏度.结果 缺铁性贫血MCH、Hb均低于地中海贫血组,差异有统计学意义(p＜0.05);缺铁性贫血组RDW、MVC、RBC高于地中海贫血组,差异有统计学意义(p＜0.05);两组患者在符合率、特异性、灵敏性均较高,差异无统计学意义(p＞0.05).结论 血液检测法在鉴别诊断地中海贫血和缺铁性贫血中的应用效果显著,值得临床推广.

关键词： 地中海贫血   缺铁性贫血   血液检测法   鉴别诊断  

摘要： 目的观察分析血液检测法在鉴别诊断地中海贫血和缺铁性贫血中的应用效果。方法随机抽取我院自2014年2月-2015年2月期间进行血液检测的贫血患者82例作为研究对象,根据检测结果分为地中海贫血组(n=42例)和缺铁性贫血组(n=40例),对两组患者的临床指标进行分析比较,包括红细胞计数、红细胞平均血红蛋白量、血红蛋白含量、血红细胞分布宽度、红细胞平均体积、红细胞比容等指标。结果地中海贫血组与缺铁性贫血组的红细胞计数、红细胞平均血红蛋白量、血红蛋白含量、血红细胞分布宽度、红细胞平均体积、红细胞比容等指标比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论采取血液检测法用于鉴别诊断地中海贫血和缺铁性贫血具有良好的应用效果,值得临床推广。

关键词： 地中海贫血   二代测序   捕获测序   基因突变   拷贝数变异  

摘要： 背景与目的地中海贫血是严重威胁人类健康的致死致残的常染色体隐性遗传性血液病。全球约2%的人为地中海贫血基因的携带者,在我国南方高发病地区的人群携带率为3%-24%。地中海贫血是由于珠蛋白基因发生缺陷,导致肽链合成减少或缺失的遗传性溶血性血红蛋白病,根据编码珠蛋白基因肽链合成受到抑制的类型,地中海贫血可分为弘地中海贫血、p-地中海贫血、δ-地中海贫血、Y-地中海贫血、δp-地中海贫血和研6p-地中海贫血等。临床上地中海贫血又分为轻型(地中海贫血携带者),中间型和重型。临床表现出特殊的地中海贫血面容-头颅增大、颧骨突出、眼距增宽、鼻梁低平,根据病情的轻重表现为小细胞低色素,溶血性贫血伴黄疸,疲乏无力,肝脾肿大,不定期或定期输血,水肿胎或过多铁沉积导致心力衰竭致死。成人的血红蛋白主要是两个a类亚基和两个β类亚基珠蛋白形成的四聚体,在血红素的作用下运输氧气。因此地中海贫血可大致分为α地中海贫血和p-地中海贫血,α地中海贫血主要由弘珠蛋白基因缺失引起,中国人中最常见的是SEA、3.7kb和4.2kb这三种缺失类型,在广西地区突变携带率分别为7.84%,4.78%和1.61%。p-地中海贫血主要由p-珠蛋白基因突变引起,中国人中最常见是点突变CD41-42(广西地区占45.2%),CD17(广西地区占24.7%),-28、CD26、IVS-Ⅱ-654和CD71-72这6种突变共占了全部突变类型90%以上。α-珠蛋白基因簇定位于16号染色体16p13.3位点,成人α珠蛋白主要由仅1和眈两个基因编码,p珠蛋白基因簇定位于11号染色体1lp15.5位点,成人p-珠蛋白主要由p基因编码。目前世界上已发现至少300种伽珠蛋白基因变异和200多种p-珠蛋白基因变异,而在中国人群中至少30种(其中17种缺失型和13种非缺失型)α地中海贫血突变和58种(52种点突变和6种缺失型)p-地中海贫血突变。由于地中海贫血属于常染色体隐性遗传病,即夫妻双方都为地中海贫血基因携带者,下一代则有1/4的几率成为地中海贫血的患者。而目前地中海贫血缺乏理想的治疗方法,输血和骨髓移植是目前改善患者生活的方法,但该方法给家庭带来沉重的经济负担,对患者的心里带来严重的影响。想从根源上防止地中海贫血的发生,重要的在于预防有地中海贫血基因缺陷的患儿出生,做好产前大规模人群的筛查和宣传。临床上进行地中海贫血基因的筛查只针对q基因的3种缺失和3种点突变,β基因的17种点突变,远远不能满足对其他变异位点的检测,因此准确诊断地中海贫血的致病突变可以更有效的预防患儿的出生,丰富已有突变数据库的同时为地中海贫血病人的治疗提供新的靶点和研究思路。二代测序技术又称下一代测序技术或深度测序技术,可以一次性对几十万到几百万条DNA分子序列进行测定,其本质为边合成边测序,即通过不同颜色的荧光来标记四种不同的dNTP,通过碱基互补配对原理在DNA聚合酶的作用下,每次添加一种dNTP,结合的碱基就会释放出相应的荧光,最后根据荧光信号对碱基进行识别,一次上机可以产出几百兆到几个太的数据量。与传统的一代测序技术相比二代测序可以一次性对几百几千个样本同时进行测序分析,具有高通量,低成本,高分辨率等优点,靶向捕获测序是利用序列捕获技术将所感兴趣的区域通过芯片杂交的方式抓取下来,通过高度富集度的方式,更直接快捷地获得大批量样本的序列变异信息,相对于全基因组测序更高效更快捷,极大提高了人类基因组疾病相关区域的研究效率,显著降低了研究成本。因此该技术被广泛应用到遗传性疾病检测,肿瘤疾病,药物开发等分析和研究中,该技术还可完美地应用于地中海贫血疾病中未知变异的发掘和解决常规实验室无法检出的的变异。本研究主要采用二代测序结合芯片捕获技术对地中海贫血病人进行测序分析,测序原始数据通过BWA, Samtools, GATK, Annovar等一系列软件的处理,结合Python和Perl等程序对数据作出相应分析,最后可分别得到点突变(SNP),小插入缺失突变(Indel)和拷贝数变异(CNV)等信息,从而对地中海贫血病人变异作出准确的判断。本研究旨在搭建好二代测序数据分析的平台,初步构建地中海贫血疾病相关变异的信息学数据分析流程,建立相关基因的突变谱,为后期地中海贫血病人的变异检测提供基础,也为其他遗传性疾病的诊断和预防提供参考和研究方向。材料与方法1.研究对象收集来自我国南方192例无亲缘关系的地中海贫血样本进行回顾性分析,其中包含93例棚R蛋白基因型正常的p-地中海贫血患者,84例β-珠蛋白基因型正常的α地中海贫血患者和15例α-珠蛋白基因合并p-珠蛋白基因的地中海贫血患者。此项研究通过了我校南方医院医学伦理委员会的批准,所有患者均签订知情同意书。2.血液学参数与基因型检测所有的血液学参数结果均使用自动全细胞计数仪和血红蛋白分

关键词： 去铁胺   重型β地中海贫血   临床观察  

摘要： 目的：探讨去铁胺与成分输血应用在重型β地中海贫血治疗中的临床治疗效果。方法选择2013年3月至2015年4月在本院治疗的重型β地中海贫血患儿作为本次研究样本，分成研究组和对照组，每组各40例。其中研究组样本均应用成分输血加用去铁胺进行临床治疗，对照组则单纯应用成分输血对患儿进行治疗，将两组样本临床研究结果进行分析与讨论。结果研究组共有5例患儿出现治疗不良反应，包括感染2例，血肌酐升高2例，胃肠道不良反应1例；对照组共有9例患儿出现治疗不良反应，包括感染3例，血肌酐升高4例，肝转氨酶升高1例，胃肠道不良反应1例，不良反应发生率为22.5%。即研究组患儿的治疗效果显著优于对照组患儿的治疗效果（P<0.05）。结论研究组样本采用成分输血加用去铁胺进行治疗，可显著降低患儿机体铁负荷，提高患儿的尿铁排泄量，并且减少患儿的治疗不良反应，具有临床应用的价值。

关键词： “肾生髓、髓生血”   地中海贫血   骨髓造血微环境   骨髓造血干细胞   有效造血   DNA甲基化  

摘要： β地中海贫血(简称β地贫),属于常染色体隐性遗传血红蛋白病。地贫广泛分布于热带、亚热带。地中海以及东南亚地区(印度、泰国、印度尼西亚)是地贫的高发区,中国地贫高发区主要分布在南方广西、广东。地贫是在世界范围内发病率高、危害大、致死率高的单基因遗传病,重型和中间型地贫患儿的出生是世界公认的公共卫生问题。现代医学目前尚未找到根治大量新生地贫患儿的解决方案,如何提高这类人群的生存质量是现代医学亟待解决的问题。地贫发病机制明确,但对其治疗相对滞后。导师吴志奎教授基于“肾生髓、髓生血”理论,用“补肾益髓”法在地贫高发区治疗β地贫取得了肯定疗效。积累了30多年临床实践,首次对地贫的中医理论认识、核心病机、中医药治疗地贫的治则治法和疗效作用的可能机制提出了较明确的认识。创建了系统的理论与有效治法,填补了植物药治疗地贫的临床空白,扩大了中医药治疗单基因遗传病的国际影响。本论文的主要内容是在深入学习传承导师“补肾益髓”治疗地贫理论和临床实践经验,总结前期工作的基础上,首次在高发区开展“补肾益髓”治疗β地贫随机、双盲、安慰剂对照规范临床研究并对其疗效的可能机制提出研究假说,认为“补肾益髓”治疗地贫发挥疗效的可能机制是通过改善造血微环境,调控骨髓造血干细胞增殖分化、影响DNA甲基化表观遗传修饰,进而促进骨髓有效造血实现的。通过分离培养骨髓造血干细胞、间充质干细胞,采用RT-PCR检测珠蛋白基因表达调控,利用Western blot,DNA甲基化芯片,透射电镜等现代生物信息学技术,体内外实验相结合,验证假说的客观性。一、研究目标开展补肾益髓治疗β地贫临床规范研究;并从改善造血微环境,调控骨髓造血干细胞增殖分化,影响DNA甲基化修饰等方面对其促进骨髓有效造血的疗效机制进行深入研究,侧面揭示“肾生髓、髓生血”的理论内涵。本项课题围绕着研究目标从临床和实验两个部分展开研究。1补肾益髓治疗地贫的临床研究1.1地贫患者中医证候分布规律调查调查中医肾虚证候(肾精亏虚证、肾阴虚证、肾阳虚证)在地贫患者中的具体分布,中医肾虚症候积分与基因型的关系以及在地贫患者中的差异,为益髓生血颗粒临床辨证治疗地贫提供依据。1.2益髓生血颗粒治疗β地贫临床规范研究采用随机对照试验(随机双盲安慰剂平行对照),临床试验前在国际临床研究注册网站进行注册。对治疗前后患者的中医症候量化评分,连续观察血液指标动态变化,以国际公认的诊断与疗效标准,采用第三方统计分析对治疗结果进行评价。2补肾益髓治疗地贫的机制研究主要围绕着益髓生血颗粒治疗地贫改善骨髓造血微环境,调控骨髓造血干细胞增殖分化以及影响DNA甲基化表观遗传修饰,进而促进骨髓有效造血展开。2.1地贫患者内源性骨髓造血干细胞增殖通过观察患者内源性骨髓造血干细胞增殖,益髓生血颗粒含药血清及组分单体对造血干细胞集落分化、珠蛋白基因表达及蛋白含量的影响,探讨“补肾益髓”治疗地贫调控造血干细胞增殖分化的机制。同时对益髓生血颗粒治疗两对双胞胎地贫患儿进行个体研究,观察遗传背景与临床疗效、骨髓造血干细胞增殖的关系。2.2益髓生血颗粒改善骨髓造血微环境调控骨髓有效造血通过检测益髓生血颗粒治疗地贫对骨髓血血浆细胞因子活性,红细胞免疫酶活性,以及对间充质干细胞增殖、分泌细胞因子活性与基因表达,观察补肾益髓治疗地贫对造血微环境调控的影响。2.3益髓生血颗粒治疗地贫对DNA甲基化修饰的影响通过对益髓生血颗治疗β地贫有效病例进行全基因组DNA甲基化分析,探讨益髓生血颗粒治疗地贫对DNA甲基化表观遗传修饰的影响,从表观遗传修饰方向寻找与造血相关的功能基因。二、研究方法及结果1 临床研究方法及结果1.1地贫患者中医证候分布规律调查采集地贫患者临床基础数据,制定地贫流行病学调查表。调查299例地贫患者(肾虚证)基因型,对中医证候进行分类(肾精亏虚证、肾阴虚证、肾阳虚证),对26项中医症候进行评分汇总。对不同基因型地贫的中医证候,症候积分进行统计分析,观察中医证候在地贫患者中的分布。地贫患者中医证候调查结果显示,在调查的所有患者中,以肾阴虚证195例最为多见,其次为肾精亏虚证89例,肾阳虚证所占比例较少。涉及的26项中医肾虚症侯出现的频率以面色萎黄、盗汗、口唇淡白、神疲乏力、咽干、口干多见,地贫患者阴血亏虚见面色萎黄、口唇淡白；血虚则气弱,神疲乏力；阴虚则见盗汗、口干、咽干。β地贫患者基因型为纯合子或杂合子的肾虚症候积分无统计学差异。1.2益髓生血颗粒治疗β地贫高发区临床规范研究采用随机、双盲、安慰剂平行对照方法,试验前在国际临床研究网站进行注册(https://***/,NCT01549080),对患者中医症候量化评分,动态观察临床血液指标变化,由第三方编盲与第三方统计,以国际公认的诊断与疗效标准,对临床治疗结果进行评价。入组40例β地贫患

关键词： 血常规检验   地中海贫血   缺铁性贫血   诊断效果   鉴别  

摘要： 目的观察血常规检验在地中海贫血和缺铁性贫血患者中的诊断效果及鉴别。方法选取2014年5月至2016年6月医院诊治的贫血患者120例,根据贫血类型不同分为地中海贫血组(n=60)和缺铁性贫血组(n=60)。2组入院后第二天空腹抽取2ml静脉血,采用全自动血液分析仪测定2组患者血常规指标,分析血常规指标在不同贫血疾病中的诊断及鉴别效果。结果 2组患者MCH水平差异无统计学意义(P>0.05);地中海贫血组RDW、RBC及MCV水平,显著低于缺铁性贫血组(P<0.05);地中海贫血组Hb、MCHC,显著高于缺铁性贫血组(P<0.05)。结论血常规指标可以作为地中海贫血和缺铁性贫血患者的辅助参考因素,能迅速对2种疾病进行诊断鉴别,值得推广应用。

关键词： 地中海贫血   规范化基因诊断   临床推广   新缺失突变  

摘要： 第一章罕见地中海贫血规范化基因诊断临床评价　　目的：(1)对广东省妇幼保健院医学遗传中心目前的罕见地贫规范化基因诊断流程进行效果评价，为其进一步临床推广与实施提供依据;(2)初步了解广东省罕见地贫基因分子流行病学情况。　　方法：(1)回顾分析2013年1月至2015年6月广东省妇幼保健院医学遗传中心罕见地贫基因诊断情况。规范诊断流程为：对表现为MCV≤82fl且HbA2≤2.5％的标本进行--FIL，--THAI和α-珠蛋白基因测序分析;对MCV≤82fl且HbA2≥3.5%的标本进行β珠蛋白基因测序分析;对HbF增高的标本进行Yunnanese(Aγδβ)0、ChineseGγ(Aγδβ)0和SEA-HPFH检查;对异常血红蛋白的标本进行α/β珠蛋白基因测序检查。将338例研究对象分为规范诊断组(209例)与未规范诊断组(129例)，比较两组的阳性率;对未规范诊断组不规范的原因加以分析，发现存在的问题，找出病因;采用SPSS13.0对数据进行统计分析;(2)对2011年广东省地中海贫血流行性现况基线调查样本进行罕见地贫基因检测，共从14332个家庭中采集了男性外周血13148份，其中15.9%常规地贫基因检测为阳性，我们对余下血液学初筛阳性，而常规基因检查呈阴性的进行罕见地贫基因型的分析。根据血常规及血红蛋白电泳结果，对研究对象进行分类：α-地贫特征组(MCV≤82fl且HbA2≤2.5%)，β-地贫特征组(MCV≤82fl且HbA2≥3.5%)，HbF增高组(HbF≥5.0%)，异常血红蛋白组。按罕见地贫基因规范化诊断流程进行检测。　　结果：(1)规范诊断组确诊阳性率显著高于未规范诊断组，差异有统计学意义(P＜0.001);(2)检测项目的错检、漏检及不合指征是造成未规范检查的主要原因，导致医疗资源的浪费和确诊阳性率的下降;(3)漏检错检项目反应了医务人员对罕见地贫基因的检测项目与临床症状的相关性理论知识掌握有偏颇，可能存在宣传与培训不足的问题;(4)基线调查中，α-地贫特征组检出了4例阳性，检出率为4/200(2%);β-地贫特征组检出了9例阳性，检出率为9/28(32.14%),;HbF增高组检出了4例阳性，检出率为21.05%(4/19);异常血红蛋白的检出率为43/43(100%)，总共额外增加了60例地贫基因阳性，检出率为20.69%，包括--THAI/2例，突变型α-地贫2例，ChineseGγ(Aγδβ)01例，SEA-HPFH3例，突变型β-地贫9例，HbQ-Thailand11例，HbNewYork18例，HbG-Chinese6例，HbJ-Bangkok6例，另外还有HbJ-Baltimore和HbOkayama各1例。　　结论：(1)我院罕见地中海贫血的规范化基因诊断的制定与实施临床应用效果良好，可降低漏诊误诊率，显著提高医疗质量。在以后推广的过程中，应注意加强医务人员的学习与简化流程，使罕见地贫基因诊断流程能更好地服务临床;(2)虽然本研究的样本量不足以分析罕见地贫基因的携带率，但是我们希望提供一个较大样本中这些罕见地贫基因型的检出情况，为以后全省罕见地贫基因携带率调查的样本估算等打下基础;(3)本研究发现了2例中国人群首次报道的罕见的异常血红蛋白类型：HbJ-Baltimore和HbOkayama，丰富了中国人群异常血红蛋白基因的种类。　　第二章一种地中海贫血的新突变基因鉴定　　目的：目前已有50余种缺失型α-地贫类型被报道，缺失范围从2.4kb到整个α-珠蛋白基因簇不等。本研究拟对一例新发现的导致α0-地贫的44.6kb缺失突变家系进行基因型鉴定。　　方法：采集临床上一例表型为α0-地贫但α-珠蛋白基因常见缺失与突变检测及第一章提及的罕见地贫基因诊断-检测均提示为阴性的先证者及其家庭成员的外周血。采用MLPA方法检测珠蛋白基因拷贝数变化。为了更好地描述断裂位点，我们针对α-珠蛋白基因簇基于Agilent的芯片技术定制了一款CustomCGH芯片。根据CGH结果设计Gap-PCR引物，将扩增的特异DNA片段进行Sanger测序分析。　　结果：MLPA分析α-珠蛋白基因拷贝数，发现先证者存在大片段缺失，无法确定断裂位点。CustomCGH结果显示先证者16号染色体发生大片段缺失，缺失区域为(hg19)chr16:194277-237673。通过Gap-PCR和Sanger测序验证确定，缺失区域为：(hg19)chr16:194214-238840，缺失大小为44627bp。对家系其他成员分析，推测大片段缺失遗传自父亲，家系其他成员未携带该基因。该缺失片段移除了α-珠蛋白基因簇上的所有功能基因，使α-珠蛋白基因数量从4个减少为2个，解释了先证者血液表型。　　结论：本研究成功鉴定一种导致中国人α0-地中

关键词： 分子诊断   下一代测序技术   中文   杂志   gene   封二   地中海贫血   目录   检索工具