关键词： 非输血依赖性β-地贫   临床表型   基因型   单核苷酸多态性   地西他滨   γ-珠蛋白基因   组蛋白甲基化   组蛋白乙酰化   DNA甲基化   人源非输血依赖性β-地贫鼠模型   地西他滨   细胞凋亡   γ-珠蛋白基因   组蛋白甲基化   组蛋白乙酰化  

摘要： 第一部分非输血依赖性β-地中海贫血患者临床表型与基因型的相关性研究目的:1、通过对非输血依赖性β-地中海贫血（简称地贫）患者临床资料的综合分析,探讨临床表型与基因型的关系;2、探讨HBG2、BCL11A、HBS1L-MYB基因多态性与胎儿血红蛋白（HbF）水平的相关关系;3、探讨AHSP、KLF1、KLF2、BCL11A mRNA表达与珠蛋白基因及血红蛋白（Hb）水平的相关关系。方法:收集2013年6月至2017年2月诊断为非输血依赖性β-地贫患者102例,其中男性57例,女性45例,中位年龄为22岁（2-57岁）;正常对照60例,其中男性33例,女性27例,中位年龄为21岁（4-55岁）。采集患者临床资料及血样并检测血常规、生化、血红蛋白电泳;应用PCR直接测序（PCR-sequencing）、跨越断裂点的PCR（gap-PCR）,荧光定量PCR（real time PCR）及下一代测序（Next Generation Sequencing,NGS）方法检测地中海贫血基因;电化学发光法检测血清铁蛋白（serum ferritin,SF）、核磁共振技术检测肝脏R2值及心脏T2*值,并分别用Ferriscan?及CMR tools软件分析肝脏铁浓度（liver iron overload,LIC）及心脏铁浓度;应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性及DNA测序法分析HBG2、BCL11A、HBS1L-MYB基因6个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）位点基因型;采用real time PCR检测α-、β-、γ-珠蛋白基因及AHSP、KLF1、KLF2、BCL11AmRNA表达;并对其相关临床资料、检验结果进行分析比较。结果:1、102例非输血依赖性β-地贫患者中,既往输血治疗77例（75.5%）,输血中位值为800mL（0-20000mL）,平均Hb为76.47±17.13g/L,HbF%中位值:36.9%（1.1-97.6%）;既往行脾切术36例（35.3%）,接受祛铁治疗28例（27.7%）,患者SF中位值为1481.5 ng/mL（27-8300 ng/mL）,LIC中位值14.4 mg/***（2-43 mg/***）,94.5%患者存在肝脏铁过载;心脏T2*中位值35.64 ms（15.53-75.1 ms）,仅有4.6%患者存在心脏铁过载。2、非输血依赖性β-地贫患者突变类型及出现频率明显不同,常见的突变依次是:41-42（-TTCT）、-28（A->G）、CD 26（G->A）、17（A->T）四种。按基因型分类,A类为β-珠蛋白基因纯合子或者双重杂合子,共83例（84.7%）,其中纯合子突变19例,占22.9%（19/83）,Hb E合并β-珠蛋白基因突变33例,占39.7%（33/83）,83例患者中合并了α-珠蛋白基因突变共19例22.9%（19/83）;B类β-珠蛋白基因杂合子,共15例（15.3%）,其中1例合并了α-珠蛋白基因突变,3例合并α-珠蛋白基因重复（含合并Hb Broomhill杂合1例）。比较A、B两类患者的主要血液学参数及铁代谢指标（SF、LIC、T2*）,结果显示HbF%（40vs4.2,P<0.001）,MCH（22vs25.79,p=0.003）及AST（37vs25.5,p=0.039）差异有统计学意义,但Hb、铁代谢之间的差异无统计学意义。按是否合并α-珠蛋白基因突变进行比较,两组之间的主要血液学参数差异均无统计学意义。3、非输血依赖性β-地贫患者各SNP位点基因分型与Hb A2、Hb F及Hb水平及临床严重程度无相关性。多重线性回归分析结果显示HbF及rs766432A→C突变是Hb水平的影响因素;多重logistics回归分析结果显示,β0/β0基因型出现严重临床表型的可能性是β+/β+的6.39倍,β+/β0基因型出现严重临床表型可能性是β+/β+的5.13倍。4、非输血依赖性β-地贫患者AHSP及BCL11A mRNA表达水平及珠蛋白mRNAα/β比例较正常对照组高,差异有统计学意义（p<0.05）,但KLF1及KLF2 mRNA表达水平差异无统计学意义（p>0.05）。AHSP、KLF1、KLF2及BCL11A mRNA表达水平在轻、中、重不同临床严重程度分组及A、B两种基因分类中的差异均无统计学意义。AHSP及KLF1与γ-珠蛋白基因呈正相关（r=0.77,p<0.01;r=0.41,p<0.01）,与Hb呈负相关（r=-0.293,p=0.01;r=-0.34,p=0.004）;KLF1与Hb、HbF呈负相关（r=-0.28,p=0.018;r=-0.27,p=0.027）;BCL11A与HbA2呈正相关（r=0

关键词： 血红蛋白电泳   红细胞参数   地中海贫血   地贫基因  

摘要： 目的探究红细胞（red blood cell,RBC）参数、血红蛋白（hemoglobin,Hb）电泳与CD41-42β地贫基因的携带情况在产前筛查地中海贫血中的应用价值。方法择取我院2013年1月2014年10月收治的地中海贫血患者50例（研究组）,另选取正常人群50例（常规组）,分别对两组人群进行红细胞参数实验、血红蛋白电泳实验,分析检测人群地中海贫血的特异度、灵敏度等指标。结果研究组的阳性检出率明显高于常规组（P<0.05）;平行检测的阳性率明显高于联合检测的阳性率（P<0.05）;平行检验的灵敏度、准确度、阴性预报值要高于联合检验方法;红细胞参数检验的灵敏度、特异性、准确度、阳性与阴性预报值均低于HB检验结果;且所有检测人群中,CD41-42基因型有6例,包括4例为CD41-42杂合子,1例为CD41-42复合α地贫基因。结论对地中海贫血行产前筛查时应用红细胞参数实验与血红蛋白电泳实验的诊断价值较高,两者联合检测的应用效果更佳。

关键词： 贫血病人   红细胞异常形态   地中海贫血   诊断  

摘要： 目的分析观察贫血病人的红细胞异常形态对诊断地中海贫血的重要意义。方法选择2015年6月至2017年1月对我校附属医院收治的200例贫血患者,抽取患者两份血样,将两份血样分为对照组和观察组,对照组血样选择聚合酶链反应技术与其他分子生物学手段结合在一起筛查地中海贫血,观察组血样通过观察红细胞异常形态筛查地中海贫血,对比两种筛查方式检出率,根据对照组数据,判断观察组筛查正确率。结果对照组患者筛查检出率9.5%,观察组患者筛查检出率9.0%,以对照组数据为基础,观察组患者筛查正确率94.7%,两种检测方式对比差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论观察贫血病人的红细胞异常形态诊断地中海贫血,操作简单,设备要求低,检查时间短,可以满足地中海贫血的初筛要求,值得在临床上应用。

关键词： β-地中海贫血   诱导性多能干细胞   CRISPR/Cas9基因编辑   ssODNs  

摘要： β-地中海贫血是最常见的单基因遗传病(Monogenic Disorders,MGDs)之一,它是由位于人类第11号染色体上的HBB基因突变导致血红蛋白合成不足或缺失而引起的血液系统疾病,对人类健康构成严重威胁。诱导多能干细胞(Induced Pluripotent Stem Cells,iPSCs)技术为MGDs的治疗提供了新的思路。利用传统的基因定点编辑技术结合打靶载体即可对基因突变进行修复,然而这种打靶效率极低,同时药物筛选也会引起基因组小片段缺失或插入改变,这为临床治疗应用带来了一定的安全隐患。人工核酸酶技术尤其是CRISPR/Cas9(Clustered Regulatory InterspacedShort Palindromic Repeatassociated endonuclease 9)技术的发展为基因编辑提供了极大的便利,它构建简单、廉价,普通实验室即可完成,大大提高了基因操作的效率及简便性。在本研究中,我们建立了β-41/42(-TCTT)地中海贫血纯合病人特异来源的多能干细胞系即β-iPSCs,利用单链供体寡核苷酸(single-strand oligodeoxynucleotides,ssODNs)、小分子化合物L755507以及高保真CRISPR/Cas9(Clustered Regulatory InterspacedShort Palindromic Repeatassociated endonuclease9)核酸酶技术对β-iPS细胞进行基因修复,显著提高了同源重组(Homology-Directed Repair,HDR)修复效率,获得了高效无痕的基因修复β-iPS细胞系;并且,全基因组外显子测序并未检测到脱靶现象;最后将病人特异性iPS细胞和基因修复后的iPS细胞分别进行体外定向诱导造血分化,结果显示在转录水平上,基因修复后的iPS细胞能够表达正常β珠蛋白。本研究为应用干细胞对地中海贫血进行基因治疗提供了理论基础。

关键词： 中间型β地中海贫血   CS型α地中海贫血   铁超载   脾切除  

摘要： 目的:了解中间型β地中海贫血(beta-thalassemia intermedia,β-TI)和CS型α地中海贫血即CS血红蛋白H病(Hemoglobin H Constant Spring disease,HbH CS)患者一般情况、治疗和并发症现状,分析并发症的影响因素,以指导对并发症的预防,提高患者的生存质量。方法:纳入自2011年至2016年就诊于中国人民解放军第303医院的92例β-TI患者和68例HbH CS患者,调查其发病年龄、性别、输血史、祛铁情况、是否接受脾切除术及各种并发症情况。患者均空腹抽血,检测其血糖、肝肾功能、血常规、血清铁蛋白;行腹部超声检测,观察有无肝脾增大、有无胆囊结石;行心脏彩超检查有无肺动脉高压或三尖瓣返流速度>2.8m/s;行X线及骨密度仪检测,检查有无骨质疏松;行磁共振及X线检查髓外造血。单变量分析研究年龄、性别、铁蛋白、血红蛋白、脾切除、输血、祛铁等因素对并发症的影响,并用逐步Logistic回归分析进行验证。结果:92例β-TI患者中男性51(55.4%)例、女性41(44.6%)例,平均年龄24.9±9.2岁,起病年龄4岁(1～30)。91例患者接受过输血治疗(其中15例规律输血),接受输血者平均Hb为58.1±20.1 g/L。72例患者铁超载(铁蛋白≥800 ng/ml),但仅22例曾接受祛铁治疗。平均血清铁蛋白为2172.0±3728.12 ng/ml,40例(43.5%)患者为重度铁超载者(铁蛋白>2500 ng/ml)。行脾切除术57例(62.0%),脾切除患者的平均年龄18.2±10.6岁。肺动脉高压、骨质疏松、胆囊结石、肝功能异常及髓外造血,发生率分别为55.7%、54.1%、44.0%、43.3%和9.7%。单变量分析表明脾切除与肝功能异常及胆囊结石有关,铁超载与肝功能异常及骨质疏松有关。逐步Logistic回归分析铁超载与肝功能异常和骨质疏松的关联接近统计学意义(P分别为0.068和0.056),而祛铁治疗为胆囊结石的独立保护因素。68例HbH CS患者中男性30例,女性38例。平均年龄29.4±9.8岁,起病年龄为10.3±9.0岁。平均血红蛋白82.2±18.8 g/L,18例接受输血治疗(其中8例为规律输血)。25例(36.8%)患者有铁超载,平均血清铁蛋白1057.4±1570.6 ng/ml,10例(14.7%)接受祛铁治疗,铁蛋白>2500ng/ml的5例(7.4%)。34例已经行切脾手术,切脾时平均年龄24岁(6～43岁)。68例患者中分别有9例有糖耐量异常(13.2%)、28例有胆道并发症(41.2%)。67例行心脏彩超检查,11例有肺动脉高压(16.2%),56例患者行骨密度检查,19例(27.9%)有骨质疏松;63例患者行甲状腺功能检查,3例(4.4%)有亚临床甲状腺机能减退。分析51例有完整资料的患者,出现1个以上并发症的概率为72%。单变量研究表明脾切除与并发症的发生无关联。单变量分析表明铁超载与骨质疏松、胆囊结石有关联,逐步Logistic回归分析表明铁超载为骨质疏松的独立危险因素。结论:1.β-TI患者和HbH CS患者治疗现状均不能令人满意,表现在严重的贫血和铁超载状态。β-TI患者的治疗现状较HbH CS患者更为严重。2.由于治疗现状差,β-TI患者和HbH CS患者的并发症均较多,且在β-TI患者表现更为严重。3.无论是β-TI患者还是HbH CS患者,铁蛋白均与并发症相关,表明祛铁治疗需加强。4.在β-TI和HbH CS患者,脾切除术对并发症的影响似乎有所不同,有待进一步研究。

关键词： 地中海贫血   血常规   地贫基因型   新生儿  

摘要： 目的:旨在探讨父母红细胞参数对判断新生儿是否携带地中海贫血基因的应用价值;预防重型地中海贫血婴儿出生,减少出生缺陷.方法:收集来我院检查的1000名孕妇及丈夫的红细胞参数,参数未在正常参考范围内的标本对其新生儿进行地贫基因分析,判断基因型.结果:从1000对夫妇中收集到1601份血样本,女1002份、男599份;其中女性血常规红细胞参数异常有88例,检出阳性率为8.8%、男性血常规红细胞参数异常有16例,检出阳性率为2.7%、夫妻红细胞参数同为异常的有2对;基因筛查102名新生儿,74名为地贫基因携带者,红细胞参数异常与基因筛查符合率为72.5%.结论:筛查父母血常规是发现疑似携带地贫基因胎儿的重要手段,方法可靠,准确性强,能有效的避免重型地中海贫血婴儿出生,优化生育.

关键词： β-地中海贫血   α-地中海贫血   nd-HPFH   临床表现  

摘要： 目的分析珠蛋白基因Gγ-158C→T纯合子突变导致的非缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征（non-deletional hereditary persistence of fetal hemoglobin,nd-HPFH）的特点,并探讨其合并地中海贫血时的血液学及血红蛋白特点。方法所有样本均来源于广西医科大学第一附属医院就诊（2016年1月至2016年12月）并进行地中海贫血检测的病例,相互之间无血缘关系。筛选其中胎儿血红蛋白（fetalhomoglobin,Hb F）≥4%的病例,总共90例,再选取其中所有检查结果均正常的30例样本作为为对照组。对120例病例进行血液学检查;应用高效液相色谱法对其进行血红蛋白分析;应用反向点杂交和Gap-PCR进行地中海贫血基因突变的检测;采用DNA测序检测γ-珠蛋白基因突变。结果1.在90例胎儿血红蛋白（Hb F）增高（≥4%）的病例中共检出珠蛋白基因Gγ-158C→T纯合子突变5例,年龄1～24岁,其中3例为儿童,2例为成人;2.血常规结果:2例单纯珠蛋白基因Gγ-158C→T纯合子突变血红蛋白（Hb）119.1～169.8 g/L,平均红细胞血红蛋白量（MCH）26.06～32.95pg,平均红细胞体积（MCV）79.18～95.36 fL;2例珠蛋白基因Gγ-158C→T纯合子突变复合α-地中海贫血病例Hb 96～107.7 g/L,MCH 19～19.56pg,MCV 66.1～62.63 fL;1例珠蛋白基因Gγ-158C→T纯合子突变复合β-地中海贫血病例Hb 101 g/L,MCH 23.7 pg,MCV 69.1 fL;3.血红蛋白分析结果:2例单纯珠蛋白基因Gγ-158C→T纯合子突变Hb F 4～5.1%,Hb A2 1.5～2.8%;2例珠蛋白基因Gγ-158C→T纯合子突变复合α-地中海贫血病例Hb F 4.0～4.1%,Hb A2 2.6～2.8%;1例珠蛋白基因Gγ-158C→T纯合子突变复合β-地中海贫血病例Hb F 97.3%,Hb A22.6%;4.基因分析结果:共检出5例珠蛋白基因Gγ-158C→T纯合子突变。其中2例为单纯纯合子突变,1例复合缺失型α-地中海贫血（--SEA/αα）,1例复合非缺失型α-地中海贫血（αα/αCSα）,1例复合β-地中海贫血（βCD27/28/βN）。结论1.单纯珠蛋白基因Gγ-158C→T纯合子突变导致nd-HPFH,无临床症状,Hb F升高,Hb、MCV、MCH降低或正常。2.首次发现珠蛋白基因Gγ-158C→T纯合子突变复合α-地中海贫血,Hb F升高,与单纯纯合子突变相似,Hb、MCV、MCH降低较单纯纯合子突变明显。3.首次发现珠蛋白基因Gγ-158C>T纯合子突变复合杂合子β地中海贫血,Hb A2正常,其Hb F水平较单纯纯合子突变明显增高,Hb、MCV和MCH降低。提示若不做基因分析,可出现误诊或漏诊。

关键词： 血常规检测   缺铁性贫血   地中海贫血   诊断鉴别   应用  

摘要： 目的:探讨血常规检测在缺铁性贫血和地中海贫血鉴别诊断中的应用.方法:选取我院健康体检者20例作为对照组,同时选择缺铁性贫血患者20例作为观察A组、地中海贫血患者20例作为观察B组,采用血细胞分析仪及生化分析仪检测患者的血常规各项指标,观察三组患者的诊断结果,进行临床对照性分析.结果:观察A组、观察B组的红细胞、血红蛋白、红细胞/血红蛋白、平均红细胞比容、平均红细胞血红蛋白含量、平均红细胞血红蛋白浓度、红细胞体积分布宽度均与对照组血常规指标均存在差异,对比具有统计学意义(P<0.05).另外观察A组与观察B组的红细胞、血红蛋白、红细胞体积分布宽度差异具有统计学意义(P<0.05).结论:血常规检测在缺铁性贫血和地中海贫血鉴别诊断中的应用价值高,值得推广应用.

关键词： 地中海贫血   缺铁性贫血   血检   诊断与鉴别  

摘要： 探讨不同类型贫血疾病的临床检验与鉴别方法。方法:选取我院2016年5月至2016年8月收治的68例地中海贫血患者,并选取68例缺铁性贫血患者以及68例健康者,将其分别作为研究组、观察组以及对照组,对比三组患者血检结果差异,对血检结果进行鉴别和诊断,观察诊断准确性。结果:研究组诊断准确率95.59%,观察组诊断准确率为94.12%,无明显差异(P>0.05),三组患者血检指标差异明显具有统计学意义(P<0.05)。结论:不同类型的贫血通过血液检验能够有效诊断和区分,对临床治疗贫血的指导价值高,值得临床推广应用。

关键词： 地中海贫血   筛查   育龄夫妇  

摘要： 目的:初步了解简阳地区育龄夫妇地中海贫血的检出情况,预防地贫患儿的出生率,提高人口素质.方法:对该地区2015年10月-2016年1月在我院进行婚前体检的1717对夫妇(3434人)采用血液学指标(MCV、MCH)、血红蛋白分析等方法进行地中海贫血筛查,阳性结果送华西附二院做基因分型检查.结果:1717对育龄人群中,检出地中海贫血34例,平均检出率0.99%,其中α-地中海贫血14例检出率0.41%,β-地中海贫血20例检出率0.58%,二种类型的地中海贫血在该地区的发病区基本一致,无显著性差异(P>0.05).结论:简阳地区地中海贫血的检出率低于四川省平均水平[1],在育龄人群中进行地中海贫血筛查,能有效避免重症地中海贫血患儿的出生,对优生优育具有重要作用.