关键词： 血常规检查   缺铁性贫血   地中海贫血  

摘要： 目的 分析血常规检查在鉴别缺铁性贫血和地中海贫血中的应用价值,为临床检查提供参考.方法 将40例地中海贫血患者设为地中海贫血组,40例缺铁性贫血患者设为缺铁性贫血组,分别对其进行血常规检查.结果 两组患者红细胞平均体积基本一致,差异无统计学意义.但缺铁性贫血组患者的红细胞分布宽度明显高于地中海贫血组,同时其血红蛋白、红细胞计数较地中海贫血组明显更低,对比差异具有统计学意义.结论 通过血常规检查中的红细胞分布宽度、血红蛋白及红细胞计数指标,可以较为准确的鉴别区分地中海贫血和缺铁性贫血,具有推广应用价值.

关键词： Hong Kongαα(HKαα)型地中海贫血   家系分析   表型分析   临床表现   产前诊断  

摘要： 目的:通过对Hong Kongαα型地中海贫血家系的诊断和分析,阐述Hong Kongαα型地中海贫血的基因型和表型,对家系中一未出生胎儿进行地中海贫血的产前诊断。方法:收集家系成员血样,进行血红蛋白检测和血常规检测。收集孕妇羊水8ml,磁珠法提取外周血DNA及胎儿DNA。通过PCR-反向斑点杂交检测受试者地中海贫血α点突变以及β点突变,单管多重gap-PCR技术检测常见缺失型α地中海贫血,普通PCR检测αααanti4.2突变,运用巢式PCR检测Hong Kongαα型地中海贫血基因。确定家系每个个体基因型。分析Hong Kongαα型地中海贫血基因携带者表型,对家系中的胎儿进行产前诊断,并为其提供产前优生咨询。结果:该家系共11个成员,血常规、血红蛋白电泳结果表明,除Ⅱ-6以外,其他个体均有不同程度的小细胞低色素贫血表现。其中,个体Ⅱ-4贫血程度较为严重。家系中5人为Hong Kongαα型地中海贫血基因携带者,基因型分别为:一人为HKαα/-α3.7合并β41-42M/βN,两人为HKαα/--SEA、βN/βN,两人为HKαα/-α4.2、βN/βN。胎儿基因型为HKαα/-α4.2、βN/βN。结论:Hong Kongαα型地中海贫血是一种罕见的地中海贫血类型,容易误诊、漏诊。巢式PCR是临床诊断Hong Kongαα型地中海贫血的重要参考。结合患者临床表现以及巢式PCR的检测结果,可以为Hong Kongαα型地中海贫血提供诊断依据。

关键词： 地中海贫血   基因诊断   基因型   表现型  

摘要： 目的通过对广东河源客家人群250例αβ复合型地中海贫血(αβ复合型地贫)基因型的检测及血液学表型的分析, 了解其基因类型和血液学特征以及发生率。方法采用血常规联合毛细血管电泳对11 398例患者进行地贫筛查, 应用缺口PCR(Gap-PCR)技术检测α-地中海贫血(α-地贫)缺失突变, 同时应用反向点杂交(reverse dot blot, RDB)技术检测β-地中海贫血(β-地贫)和α-地贫基因点突变。结果在11 398例样本中检出250例αβ复合型地贫, 群体发生率为2.00%(250/11398), 其中以--SEA/-αα复合βCD41-42/βN, --SEA/-αα复合βIVS-Ⅱ-654/βN, --SEA/-αα复合β-28/βN 3种基因型组合例数最多, 分别为50例、43例和27例, 还有11例Hb H病复合β地贫。共检出39种不同的基因型组合。不同年龄段间分析显示Hb水平无显著差异(P=0.235), 但是平均红细胞体积(mean corpuscular volume, MCV)及平均红细胞血红蛋白含量(mean corpuscular hemoglobin, MCH)之间差别有统计学意义(P=0.002;P=0.004), 提示<18岁年龄组比≥18岁年龄组贫血较重。男性Hb水平要高于女性(P=0.006)。不同基因型组合MCV和MCH差异均具有统计学意义(P均为0.000)。结论αβ复合型地贫的发生率较高, 且缺乏特异性的血液学指标。对β-地贫筛查阳性的病人应同时进行α和β地中海贫血基因诊断, 以减少αβ复合型地贫漏检的可能, 以便进一步正确地指导遗传咨询和产前诊断。

关键词： 环磷酰胺   小鼠   造血干细胞移植   重型β-地中海贫血   预处理方案  

摘要： 目的:研究环磷酰胺在干细胞移植治疗重型β-地中海贫血预处理方案中的作用。方法:1.通过腹腔注射右旋糖酐铁,结合国内外公认的重型地贫三级危险程度分级标准,模拟建立重型地中海贫血三级危险级别模型。2.选择中度危险模型小鼠按不同时间点分组(d1,d2,d3,d4,d5,d6,d7,d14)腹腔注射环磷酰胺(Cy)50mg/kg,连续两天,建立地贫移植Cy预处理模型,采用细胞自动分析仪记录外周血象、BMNNCs数目,磁珠分选结合流式细胞仪分析HSCs、在细胞周期中的分布、活性氧水平、骨髓微环境等指标,观察d1-d7和d14变化,分析Cy在地贫移植预处理方案中对骨髓细胞的作用特点及机理。3.经N-乙酰半胱氨酸抗氧化后,检测上述指标变化。结果:1.与对照组相比,低、中、高剂量铁剂组小鼠血清铁蛋白较正常组小鼠分别升高7.6倍、12.8倍、15.2倍,肝脏质量分别增大46.9%,96.5%,160.2%,病理切片显示肝脏、脾脏、骨髓细胞内外均大量铁沉积,与铁的剂量呈正相关,结合地贫分级危险标准,成功模拟建立地贫三级危险模型。2.与正常小鼠相比,地贫模型小鼠外周血未见明显改变;Cy组小鼠外周血WBC数目、YM%d1-d4较前模型组明显降低,d4天降至最低,差异具有统计学意义(P<0.05),d5逐渐回升,d6、d7基本正常;PLT数目较模型组、对照组升高,差异具有统计学意义(P<0.05);而RBC、HBG三组之间差异无统计学意义。3.与正常小鼠相比,地贫模型小鼠BMNNCs、HPCs数目未见明显改变,但HSCs、LT-HSCs数目减少,差异具有统计学意义(P<0.05);Cy组小鼠BMNNCs与WBC变化基本一致,而HSCs数量变化第1天开始升高,d3升至最高,差异有统计学意义(P<0.05)。4.与正常小鼠相比,地贫模型小鼠细胞周期分布未见明显改变;Cy组小鼠G0/G1期细胞比例在d1-d3明显减少,d3降至最低,差异有统计学意义(P<0.05)。而S期、G2/M期变化与之相反,差异有统计学意义(P<0.05)。经NAC治疗后,G0/G1在d1-d3降低程度较前减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。5.与正常小鼠相比,中度危险地贫模型小鼠和环磷酰胺的d1、d2、d3组小鼠骨髓细胞总的ROS、造血干细胞群ROS、均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),且Cy组活性氧水平从d1开始逐渐升高,d3升至最高,以后开始下降,d6、d7、d14恢复正常。经NAC治疗后,d1、d2、d3、d4均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1、通过腹腔注射不同剂量的右旋糖酐铁,成功模拟建立地中海贫血三级危险模型。研究显示铁沉积在骨髓并对骨髓长期造血干细胞造成损伤,但是未引起外周血血象的改变。2、Cy 50mg/kg连续两天在预处理方案中,使更多静息状态的HSC进入细胞周期,起到动员造血干细胞的作用,并且在d4天动员作用最大,为临床研究Cy/Bu在预处理方案中衔接的最佳时机提供分子水平的理论基础;3、Cy的动员造血干细胞的作用可能与氧化应激有关;4、初步探讨了本移植中心治疗地中海贫血“NF-08-TM”预处理方案相较于其他移植中心的优势,为进一步制定个性化预处理方案提供理论基础。

关键词： 血常规检验   地中海贫血   缺铁性贫血   诊断   鉴别  

摘要： 目的:观察与探究血常规检验在地中海贫血和缺铁性贫血诊断与鉴别.方法:选取2014年03月~2017年03月期间于本院就诊及治疗的60例贫血患者作为研究对象,按照贫血类型不同分为两组,将30例地中海贫血患者作为对照组,将30例缺铁性贫血患者作为观察组,对比并分析两组患者的血常规检验结果和诊断满意度.结果:观察组和对照组患者的MHC相比,组间差异不明显(p>0.05),观察组患者的RDW、RBC、RBC、Hb、MCHC与对照组患者相对比,组间差异比较明显(p<0.05),观察组患者的诊断满意度(90.00%)与对照组患者(83.33%)相对比,组间差异不明显(p>0.05).结论:血常规检验在地中海贫血和缺铁性贫血的临床诊断与鉴别中具有重要应用价值.

关键词： 缺失型β-地中海贫血   血红蛋白电泳   MLPA技术   Gap-PCR技术   云南省   β-地中海贫血   罕见突变   基因测序  

摘要： 目的:了解云南省缺失型β-地中海贫血的流行情况,报道罕见地中海贫血类型,为研究其分子流行病学建立实验基础。方法:对来到云南省第一人民医院遗传诊断中心进行地中海贫血筛查的人群(6个月-45岁),登记民族籍贯等个人信息,使用毛细管血红蛋白电泳测定Hb F水平,筛选出缺失型β-地中海贫血阳性样本(Hb F>5%)。提取基因组DNA并测定其浓度,运用MLPA技术和Gap-PCR技术进行缺失型β-地中海贫血检测。结果:进行筛选的样本总数有35086例,对其中14562例登记了民族信息的人群统计结果:汉族11269例(77.39%),彝族1224例(8.41%),白族552例(3.79%),回族395例(2.71%),其他民族共1095例。对其中14703例登记了籍贯的人群统计结果:昆明市5534例(37.64%),曲靖市1997例(13.58%),红河哈尼族彝族自治州1 193例(8.1 1%),楚雄彝族自治州1072例(7.29%),昭通市951例(6.47%),大理白族自治州831例(5.65%),玉溪市578例(3.93%),丽江市468例(3.18%),其他地区共2133例。35086例筛查的人群中,筛选出缺失型β-地中海贫血阳性样本(Hb F>5%)150例(男28例,女122例)。对150例阳性样本使用MLPA技术检测出8例大片段缺失携带者,携带率为0.023%(8/35086),筛查阳性样本检出率为5.33%(8/150),其中2例为HPFH缺失型,2例为(δβ)0缺失型,3例为Gγ(Aγδβ)0缺失型,1例为εγδβ缺失型。通过Gap-PCR技术验证结果为2例HPFH缺失型中有1例是SEA-HPFH缺失型,3例Gγ(Aγδβ)0缺失型中有2例是中国型Gγ+(Aγδβ)0缺失型。结论:对云南省8个市和8个少数民族自治州35086例样本进行缺失型β-地中海贫血的分析,能够初步反映云南省缺失型β-地中海贫血流行情况。缺失型β-地贫发病率低,8例携带者均有贫血症状。8例携带者中,2例为HPFH缺失型,2例为(δβ)0缺失型,3例为Gγ(Aγδβ)0缺失型,还有1例是εγδβ缺失型,是中国首次报道。通过Gap-PCR技术验证结果为2例HPFH缺失型中有1例是SEA-HPFH缺失型,3例Gγ(Aγδβ)0缺失型中有2例是中国型Gγ+(Aγδβ)0缺失型。目的:报道3例β-珠蛋白基因的突变类型,丰富β-地中海贫血临床数据。方法:对来到云南省第一人民医院遗传诊断中心就诊的3例疑似β-地贫患者,常规实验方法未能检测出基因突变,对整个β-珠蛋白基因进行测序,检测β-珠蛋白基因突变情况。结果:通过对β-珠蛋白基因进行测序,发现了 3种突变类型:(1)1号患者检出β-珠蛋白基因第70866个碱基由G突变为A,根据HGVS命名为Hb G-Copenhagen,CD 47(G>A)(HBB:c.142G>A)。(2)2 号患者检出β-珠蛋白基因第71957个碱基由A突变为G,根据HGVS命名为Hb Dieppe,CD 127(A>G)(HBB:c.383A>G),这个突变为显性突变。(3)3号患者检出β-珠蛋白基因第70596个碱基由T突变为C,根据HGVS命名为Initiation CD(T>C)(HBB:c.2T>C)。结论:对所有具有地中海贫血症特征的个体或异常血红蛋白变异体不能通过常规方法检测到β-珠蛋白基因突变的,通过对β-珠蛋白基因测序,能够发现罕见的β-珠蛋白基因突变类型。检出3例β-珠蛋白基因突变类型:(1)Hb G-Copenhagen,CD 47(G>A)(HBB:c.142G>A)(2)Hb Dieppe,CD 127(A>G)(HBB:c.383A>G)(3)Initiation CD(T>C)(HBB:c.2T>C)。CD 127(A>G)(HBB:c.383A>G)是在全世界第三次检测出来,Initiation CD(I>C)(HBB:c.2T>C)在中国仅在香港有报道,大陆地区无报道,Hb G-Copenhagen,CD 47(G>A)(HBB:c.142G>A)是在中国首次检测出来的突变,本研究中已对证实的3种罕见的β-珠蛋白突变进行了详细的描述,这些结果丰富了中国人群β-珠蛋白基因突变谱的异质性,有利于中国人群的地贫突变筛查和产前诊断。

关键词： 罕见   地中海贫血   基因突变   表型   基因型  

摘要： 背景与目的地中海贫血(Thalassemia)又名“海洋性贫血”,以下简称“地贫”,是世界上最早被阐明分子基础的人类单基因病之一。在地中海、中东、印度和东南亚等沿线地区高发,全世界地贫基因的携带率约为1.5%～2%。我国南方地区,特别是广东、广西和海南等地,发生率较高,地贫基因的携带率约为3%～20%。地贫的临床表型多样,轻者需要反复输血,重者未成年即夭折甚至胎死腹中,给家庭和社会带来巨大的精神压力和经济负担。目前对于重型地贫尚无彻底根治办法,最为有效的治疗措施就是进行骨髓干细胞移植。但是骨髓移植受到很多因素影响,譬如:难以找到匹配供者;移植手术费用昂贵,普通家庭难以承受;有复发风险,术后需要免疫治疗及不断监测等等。因此仅有少数患者能够进行骨髓移植,大部分的重型地贫患儿仍然无法得到有效的治疗。通过地贫基因诊断及产前诊断,控制和降低重型地贫患儿的出生率是目前地贫防治工作的重点。地贫为常染色体隐性遗传病,致病基因为人类珠蛋白基因,根据其致病基因不同主要分为α和β两类。α-珠蛋白基因位于16号染色体16p13.3位点,β-珠蛋白基因位于11号染色体11p15.3位点。目前世界上已报道的地贫基因突变类型共有500余种。国内市场上α-地贫基因检测试剂盒主要包括3种缺失突变(--SEA、-α3.7和-α4.2)和3种点突变(CS、WS和QS),β-地贫基因检测试剂盒主要为17种点突变(CD41-42、CD43、IVS-Ⅱ-654、-28、-29、-30、-32、CD71-72、βE、CD17、CD31、CD14-15、CD27-28、IVS-Ⅰ-1、、IVS-Ⅰ-5、、CAP+1 和 IntM)。这两类试剂盒涵盖了中国人群中95%左右的α-和β-地贫致病基因缺陷,仍有约5%罕见或未知突变可能会被漏诊,需要进行罕见地贫基因检测明确或排除病因。罕见地贫基因突变的检测方法因突变类型不同而不同:α-和β-珠蛋白基因测序分析主要用于检测点突变和小片段的缺失或重复突变;Gap-PCR可针对东南亚缺失型HPFH(遗传性胎儿血红蛋白持续存在综合征)、中国型Gγ+(Aγδβ)0地贫、泰国型和菲律宾型α-地贫以及香港型α-地贫基因进行检测;此外,MLPA(多重连接探针扩增技术)、DHPLC(变性高效液相色谱分析)等方法也被用于一些罕见缺失型地贫基因的检测。开展罕见地贫基因检测,并应用于产前诊断,可有效降低重型地贫患儿的出生率;同时可以发现一些新发突变类型,丰富地贫基因突变谱;为改进临床诊断试剂盒提供数据支持,提高试剂盒检测准确性,降低漏诊率。材料与方法1.研究对象分析2011-2016年间在南方医科大学南方医院产前诊断中心行常见地贫基因检测的所有病例。从中筛选出表型和基因型不符的病例。2.方法对于表型和基因型不符的疑似罕见地贫病例,根据其表型资料不同,分别进行相应的罕见地贫基因检测。2.1 α-珠蛋白基因测序主要针对表型为小细胞低色素,血红蛋白(Hb)电泳结果HbA2<2.5%,排除缺铁性贫血,常见α-地贫基因检测正常的病例;或者表型为血红蛋白H(HbH)病,但基因型仅为标准型的患者。β-珠蛋白基因测序主要针对表型为小细胞低色素,Hb电泳结果HbA2>3.5%,常见β-地贫基因检测正常的病例;或者表型为重型β-地贫,但基因型仅为携带者的患者。2.2东南亚缺失型HPFH和中国型Gγ+(Aγδβ)0地贫基因检测主要针对表型为小细胞低色素,Hb电泳HbF增高(一般大于8%),但常见β-地贫基因检测正常病例;或者患儿基因型为ββ-地贫纯合子,但父母一方常见β-地贫基因检测正常的情况。2.3泰国型和菲律宾型α-地贫基因检测主要针对表型为小细胞低色素,血红蛋白(Hb)电泳结果HbA2<2.5%,排除缺铁性贫血,常见α-地贫基因检测正常的病例;或者生育过Bart's水肿胎,但父母一方常见α-地贫基因检测正常的情况。2.4香港型α-地贫基因检测主要针对常见缺失型α-地贫基因检测琼脂糖电泳结果为三条带(3.7带,正常带,SEA带);或者电泳为两条带(弱的3.7带和正常带)的病例。2.5已经排除泰国型和菲律宾型α-地贫,生育过HbH病患儿或Bart's水肿胎,但父母一方常见α-地贫基因检测正常的情况,需要通过MLPA检测罕见缺失型α-地贫;已排除东南亚缺失型HPFH和中国型Gγ+(Aγδβ)0地贫,生育过纯合子重型地贫患儿,但父母一方常见β-地贫基因检测正常的情况,需要通过MLPA检测罕见缺失型β-地贫基因。结果1.对45例疑似病例进行α-珠蛋白基因测序分析,共发现23例罕见α-地贫基因突变,11种突变类型。对108例疑似罕见病例进行ββ-珠蛋白基因测序分析,共发现79例罕见β-地贫基因突变,35种突变类型。2.对85例疑似病例进行东南亚缺失型HPFH和中国型Gγ+(Aγδβ)

关键词： 中间型地中海贫血   糖代谢   铁过载  

摘要： 目的了解中间型地中海贫血患者的糖代谢情况,探究果糖胺在中间型地中海贫血患者血糖监测中的价值。方法研究对象为2013-2016年在广西医科大学第一附属医院血液科就诊的221例中间型地中海贫血患者。隔夜禁食8小时以上,于次晨空腹采血测定血浆葡萄糖浓度、果糖胺、胰岛素、血清铁蛋白、肝功能和甲功三项,随后进行口服葡萄糖耐量试验和胰岛素释放试验,分别于30min、120min采血检测血浆葡萄糖和胰岛素,分为低血糖组、正常血糖组和高血糖组,采用SPSS 21.0统计软件分析数据。结果（1）221例中间型地中海贫血患者,有空腹低血糖35例（15.8%）,空腹血糖受损0例,糖耐量减低26例（11.8%）,糖尿病6例（2.7%）。最早出现糖耐量减低的年龄是16岁,最早出现糖尿病的年龄是20岁。（2）高血糖组的INS120（264.90[172.14,452.00]）比低血糖组、正常血糖组的高（分别为106.00[82.99,262.80]、121.14[51.75,217.88],P<0.001）,高血糖组的△I30/△G30（33.15[13.91,61.12]）比低血糖组、正常血糖组的低（分别为52.99[33.07,79.74]、58.79[27.41,105.58],P<0.001）,高血糖组的HOMA-IR（5.34[3.16,12.38]）比正常血糖组高（4.90[3.19,7.52],P<0.001）,高血糖组（0.13[0.07,0.19]）和正常血糖组（0.14[0.09,0.20]）的ISI比低血糖组（0.10[0.08,0.14]）的低,正常血糖组与低血糖组比较差异有统计学意义（P=0.041）。（3）铁过载的发生率为40.1%（79/197例）,轻中度铁过载、重度铁过载的发生率分别为26.4%（52/197例）、13.7%（27/197例）,重度铁过载组的高血糖发生率(44.4%（12/27例）)较正常组、轻中度铁过载组(分别为10.2%（12/118例）、13.5%（7/52例）)高（P<0.05）。（4）低血糖组、正常血糖组和高血糖组的果糖胺差异无统计学意义（P>0.05）,血清铁蛋白与果糖胺呈负相关关系（r=-0.178,P=0.015）。结论（1）221例中间型地中海贫血患者有空腹低血糖35例（15.8%）,空腹血糖受损0例,糖耐量减低26例（11.8%）,糖尿病6例（2.7%）。（2）中间型地中海贫血患者存在胰岛素抵抗,可能伴有胰岛素分泌不足和胰岛素敏感性下降。（3）中间型地中海贫血患者普遍存在铁过载现象,且铁过载程度越严重,发生糖耐量异常或糖尿病的风险增加。（4）果糖胺可能不是评估中间型地中海贫血患者血糖水平的良好指标。

关键词： 地中海贫血   基因型   基因突变   筛查  

摘要： 目的探讨四川泸州地区228例0～18岁α和β地中海贫血患儿基因突变类型及频率。方法对2013年1月至2015年12月382例0～18岁疑诊地中海贫血的患儿行GAP-PCR技术和RDB-PCR技术检测α、β地中海贫血基因。结果共检测出228例地中海贫血患儿,α-地中海贫血39人,阳性率10.21%,β-地中海贫血189人,阳性率49.47%,其中α-地中海贫血检出基因突变类型3种,基因型5种,以αα/--SEA最高,β-地中海贫血检出8种基因突变类型,13种基因型,前3种依次为CD17（A-T）(44.04%)、CD41-42（-TCTT）(25.39%)、IVS-II-654（C-T）(21.76%)。结论四川泸州地区α地中海贫血基因突变以αα/--SEA为主,β地中海贫血基因突变类型以CD17（A-T）最为常见。据此制订地中海贫血防控策略,将有助于降低其发生率。

关键词： α地中海贫血   β地中海贫血   基因突变   携带率   PCR   二代  

摘要： 目的:本研究目的是探讨福州地区地中海贫血的分子特征和基因突变谱,对全面地贫筛查,产前诊断和遗传咨询提供有用的信息。方法:本研究是回顾性和现状研究。研究对象为1369例病人。为临床怀疑地中海贫血,或者用血红蛋白分析和血红蛋白电泳分析筛查可疑为地中海贫血的患者。包括根据MCV<80fl和MCH<27pg从7946名孕妇中筛查出的681名妇女。提取外周血DNA,用传统方法的Gap-PCR和PCR-反向斑点杂交法分析地中海贫血基因突变。对阴性的标本用二代测序（NGS）的方法再次检测地中海贫血突变。NGS检测出的突变均用Sanger测序,或定量PCR验证,或另一种Gap-PCR试验验证。结果:检测出地中海贫血突变基因743例,其中用传统方法鉴定733例,用NGS方法鉴定出10例。孕妇阳性352例,占7946例的4.43%。在所有的743例突变中,有422例α突变,292例β突变,和9例α/β基因复合突变。其中,--SEA/αα和IVS-II-654（C>T）是最常见的突变型。用NGS检测出4例罕见突变:1例βcodon 14/15（+G）突变,2例α血红蛋白重复突变ααα/αα,和1例1-HBBβ基因缺失突变。结论:1.本研究检测出福州地区的地中海贫血携带率为4.43%。2.福州地区地中海贫血基因突变包含多种形式。3.用NGS的方法可以检测出传统方法不能检测出的常见和罕见的地中海贫血基因突变。