关键词： 地中海贫血   HbWestmead突变   PAGE实验   基因型   血液学表型  

摘要： 目的:（1）评价利用聚丙烯酰胺凝胶肽链电泳（PAGE）检测异常血红蛋白Westmead（HbWS）区带的准确性,从检测蛋白质肽链层面提供筛查和诊断HbWS的新方法。（2）探讨百色地区人群中HbWS的基因型和血液学表型特点及其与其他不同基因型的地中海贫血（地贫）的血液学表型差异。方法:（1）实验研究:收集2015年-2016年、籍贯系百色地区、在我院进行地贫基因检查、年龄在2-60岁之间的病例,以基因检测作为诊断HbWS的金标准、同时应用PAGE方法检测HbWS区带即具有Gγ位置区带浓染而Aγ位置无浓染（HbF值正常）为HbWS区带阳性,通过四格表计算PAGE阳性诊断HbWS的敏感性、特异性等各项指标。（2）临床研究:收集2010年-2016年、来源于百色地区、门诊确诊为HbWS的不同基因型携带者（患者）为研究对象,根据纳入标准及排除标准从中筛选出HbWS各类型基因突变的携带者（患者）作为观察组,筛选出其他相应各类地贫基因型携带者（患者）分成若干对照组（亚组）;所有样本均进行自动血细胞分析仪、血红蛋白自动分析仪进行血液学分析;采用Gap-PCR检测缺失型α-地贫和反向斑点印迹（RDB）法检测非缺失型α-地贫和β-地贫。应用SPSS 19.0统计软件对各组数据进行处理。结果:（1）入组病例600例,取得的样本经PAGE实验诊断HbWS区带阳性130例、阴性470例;同时按金标准方法共检出含HbWS基因突变的126例,无HbWS基因突变的474例。PAGE诊断HbWS的诊断符合率为98.00%、敏感度96.83%、特异度98.31%、阳性预测值0.9385、阴性预测值0.9915、阳性似然比57.3、阴性似然比0.0249。应用ROC曲线分析PAGE诊断HbWS的曲线下面积AUC为0.942,95%置信区间为（0.893,0.991）。（2）收集确诊为HbWS的不同基因型组合携带者（患者）共292例,基因类型组合分为八大种类,其中hbws杂合子（αwsα/αα）174例（占59.59%）、hbws复合轻型β-地贫43例（占14.73%）、hbws复合其它静止型α-地贫的双重杂合子30例（10.27%）、hbh-ws病28例（占9.59%）、含hbws的轻型α-地贫复合β-地贫8例（占2.74%）、hbh-ws病复合轻型β-地贫4例（占1.37%）、hbws复合重型β-地贫3例（占1.03%）和hbws纯合子2例（占0.68%）。（3）117例hbws杂合子组的hb（129.68±21.11g/l）、mcv（86.00±5.36fl）、mch（27.76±2.16pg）在正常范围内,其均值低于正常人组但高于αcsα/αα组、αqsα/αα组、αα/-α3.7组和αα/-α4.2组（该四个组mch均低于正常参考值）;rdw-cv（13.10±1.10%）与其他静止型α-地贫比较无差异但高于正常人组。（4）hbws复合其它静止型α-地贫的双重杂合子的hb在正常范围（128.60±15.67g/l）,高于hbws复合轻型β-地贫组和轻型β-地贫组;mcv（80.27±4.70fl）在临界范围、mch（25.29±1.52pg）低于正常参考值范围,但高于hbws复合轻型β-地贫组;rdw-cv（13.38±1.27%）低于hbws复合轻型β-地贫组、轻型β-地贫组和标准型的α-地贫。（5）hbws复合轻型β-地贫组的hb（112.59±14.03g/l）,mcv（64.48±5.53fl）、mch（19.72±1.81pg）低于正常范围,表现为小细胞低色素性轻度贫血与轻型β-地贫组的hb、mcv和mch差异无统计学意义,rdw-cv（15.67±1.34%）低于轻型β-地贫组。（6）hbh-ws病的hb（104.67±27.03g/l）、mcv（67.76±6.10fl）、mch（20.64±1.82pg）与-α4.2/--sea组、-α3.7/--sea组一样表现为小细胞低色素性轻度贫血但hb水平比后两组高（p<0.05）;αwsα/--sea组的mcv低于αcsα/--sea组（p<0.05）,mch减低程度最轻,rdw-cv增加程度最轻（p<0.01）。结论:（1）page方法hbws区带阳性诊断hbws的特异性、敏感性和诊断符合率高,准确性接近基因检测方法,可作为hbws新的筛查诊断方法供临床应用参考;此外,page方法还可检测ζ链诊断成年人标准型α-地贫。（2）百色地区hbws的基因突变类型主要以αwsα/αα为主,αwsα/αα的血液学表型基本正常,筛查时容易漏诊;hbws复合其它静止型α-地贫的双重杂合子,表现为小细胞低色素;hbws复合轻型β-地贫组表现为小细胞低色素性轻度贫血;hbh-ws病也表现为小细胞低色素性轻度贫血,但

关键词： 高通量测序   转录组   地中海贫血   滇重楼  

摘要： 基因组学和转录组学技术在医学、农业等领域的应用越来越广。本文通过采用高通量测序方法,针对云南地区高发疾病地中海贫血防控筛查得到以下研究结果:(1)完成傣族人群951个样本的实验测序及数据分析工作,获得了目标族群的地贫基因突变率和携带率。在傣族人群中,α&β复合型地贫携带者的比例占到8.60%。在β地贫携带者中,CD26变异率最高的现象可能与和傣族人群环境适应具有相关性。(2)传统筛查中,近74.8%的α地贫携带者和30.5%的α&β复合型地贫携带者被漏筛。本研究发现NGS筛查地中海贫血携带率为49.5%,而传统筛查的地中海贫血携带率仅为22.0%,说明高通量测序在筛查的敏感性和特异性上与传统筛查方法具有不可取代的优势。通过采用转录组小RNA高通量测序的方法,对云南地区重要药材滇重楼种子休眠机制进行了探索。研究发现:(1)在滇重楼种子和种皮中鉴定出263个保守miRNA、768个新的miRNA。(2)通过对保守及新发现的miRNA的靶基因进行预测和功能注解,发现这些miRNA以直接或间接的调控方式参与了滇重楼休眠种子的细胞、代谢及遗传信息处理过程,为促进育种和该药材培养提供了依据。

关键词： 血液检验   地中海贫血   缺铁性贫血   应用价值  

摘要： 目的:分析和评估血液检验在地中海贫血和缺铁性贫血诊断与鉴别诊断中的应用价值.方法:选择本院于2015年1月-2017年1月间收治的119例受检者为研究主体.其中,地中海贫血患者39例,缺铁性贫血患者42例,健康人38例.分别设定为A组、B组与C组.对其进行血液检验,对比其MCV(红细胞平均体积)、RDW(红细胞体积分布宽度)、RBC(红细胞)和MCH(红细胞平均血红蛋白量).结果:A组、B组的RBC、MCV和MCH与C组相比,差异显著,有统计学意义(P＜0.05).A组的RDW、MCH和MCV显著低于B组,对比差异明显,有统计学意义(P＜0.05).结论:血液检验中的各项血液指标能够作为不同类型贫血的鉴别诊断标准,可有效诊断出地中海贫血或是缺铁性贫血疾病,可推广.

关键词： 地中海贫血   基因型   傣族   发生率  

摘要： 目的调查西双版纳州勐海勐海县孕龄妇女傣族女性地中海贫血的发生率及基因型。方法对勐海县连续3年里对1680例孕龄妇女进行地贫筛查方法:毛细管电泳法,仪器型号:sebia capillarys2试剂为sebia血红蛋白测定试剂盒α缺失:电泳法(跨越断裂点PCR法)、α突变和β点突变方法学是反向点杂交,试剂厂家为亚能生物。结果傣族孕龄妇女中地中海贫血基因总携带率为44.1%。β-地中海贫血阳性率为66.67%。其中傣族孕龄妇女阳性率最高为20.5%;α-地中海贫血阳性率为33.33%,其中傣族阳性率最高为51.5%,汉族最低为9.05%。结论云南省勐海县各民族孕龄妇女地中海贫血基因携带率高,基因型与我国其他地中海贫血高发区(广东、广西)有明显不同;α-地中海贫血以3.7/4.2缺失为主,β-地中海贫血以17种突变为主;本地区各民族儿童之间的地中海贫血基因携带率和主要的地中海贫血类型也有所不同,应引起高度重视。

关键词： 重型β-地中海贫血   铁过载   造血干细胞移植   核磁共振  

摘要： 研究背景β-地中海贫血(β-thalassemia)是世界上最常见的遗传性贫血之一。大多数重型β-地中海贫血患儿存在铁过载情况,而铁过载可对造血干细胞移植的预后产生不利影响[1-2]。目前国内外多以血清铁蛋白(SerumFerritin,SF)作为评估铁过载的指标,但由于铁在机体内各个器官分布并不一致,血清铁蛋白并不能完全代表肝脏、心脏等重要器官铁过载的情况。目前国内外的相关研究均证实了核磁共振(MRI)T2*能准确的测定患者肝脏及心脏的铁负荷[3-7]。研究目的为了更确切的了解肝脏、心脏铁过载对重型β地中海贫血患儿造血干细胞移植的影响,我中心采用MRI T2*检测肝脏及心脏铁过载情况,从而评估肝心铁过载对重型β地中海贫血患儿全相合异基因造血干细胞移植的影响。研究方法对81例2014年4月至2016年12月在我科进行全相合异基因造血干细胞移植的年龄>3岁,能配合MRI检测的重型β地中海贫血患儿,进行肝脏及心脏MRIT2*检测。根据检测结果计算出肝脏及心脏铁浓度,作为评价肝心铁过载的指标,并将肝脏、心脏铁浓度与患儿年龄、血清铁蛋白、左心室射血分数(LVEF)、B型钠尿肽(BNP)、心肌型肌酸激酶同工酶(CK-MB)、造血重建时间、死亡率、植入率、移植后常见并发症的发病率,如移植物抗宿主病、感染率、免疫性溶血、全血细胞减少、肝静脉阻塞病、败血症、口腔炎、I病毒感染、感染性腹泻、肺部感染进行相关因素的分析。研究结果年龄与心铁浓度呈正相关(r=0.275,P=0.013),与LVEF呈负相关(r=-0.225,P=0.043)。SF 与肝脏 T2*呈负相关(r =-0.305,P=0.006),与肝脏铁浓度呈正相关(r=0.228,P=0.04)。SF、LVEF、BNP、CK-MB与心脏T2*及心铁浓度无明显相关性。肝脏铁浓度与血红蛋白植入时间呈正相关(r = 0.229,P=0.043),心脏铁浓度与死亡率呈正相关(r==0.266,P=0.017),SF与植入率呈负相关(r=-0.289,P=0.009),SF与败血症发病率呈正相关(r=0.251,P=0.024),SF与全血细胞减少发病率呈正相关(r=0.276,P=0.013)。移植前与移植后的肝脏、心脏MRIT2*、肝铁浓度、心铁浓度差异无统计学意义。研究结论此次研究中大部分患者都存在铁过载情况。铁在各个脏器内的沉积是不均一的。铁过载可对重型β地中海贫血患儿全相合异基因造血干细胞移产生不利影响:铁过载有可能与植入失败存在相关性;铁超载能增加败血症发生的机率;肝脏铁超载有可能延长血红蛋白植入时间;心铁浓度与死亡率正相关。移植前检测核磁共振(MRI)T2*能准确的测定患者肝脏及心脏的铁负荷,对预测移植结果有重要意义。特别是心脏MRI测定出的心铁浓度可作为预测患儿移植后死亡率的指标。因此对行造血干细胞移植的β-TM病人综合进行SF、肝脏及心脏铁过载的评估非常必要。

关键词： 地中海贫血   组织因子微粒   组织因子   抗凝血酶III   细胞间粘附分子-1  

摘要： 目的通过检测地中海贫血患者血浆组织因子微粒（TF+MP）促凝活性、凝血及抗凝物、纤溶功能、内皮细胞功能及血小板（PLT）计数,探讨地中海贫血患者是否存在可能引起血液高凝状态及血栓形成的高危因素。方法对71例地贫组及20例正常对照组分别用发色底物法检测血浆TF+MP促凝活性、ELISA法检测血浆组织因子（TF）、组织因子途径抑制物（TFPI）、蛋白C（PC）、蛋白S（PS）、抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）、组织型纤溶酶原激活物（t-PA）、凝血酶激活的纤溶抑制物（TAFI）、可溶性E选择素（sE-sel）、可溶性细胞间粘附分子-1（sICAM-1）、可溶性血栓调节蛋白（sTM）水平。结果重型β地贫组（TM组）AT-Ⅲ水平较对照组（C组）降低（P<0.05）,TM组AT-Ⅲ与PLT成独立正相关(rpPLT=0.37,P<0.05);中间型α地贫组（TA组）TF及sICAM-1水平较C组显著降低（P<0.01）;脾切组（S组）及中间型β地贫组（TI组）血浆TF+MP促凝活性较C组显著增高（P<0.05）并分别于sICAM-1和AT-Ⅲ呈独立正相关(r sICAM-1=0.84,P<0.05;rpAT-Ⅲ=0.77,P<0.05);S组PLT计数显著高于C组及非脾切组（NS组）(PC组<0.05 P NS组<0.01);肝功能正常组TF及sICAM-1水平较C组降低(P TF<0.01,P sICAM-1<0.05),肝功正常组与非正常组间TF+MP活性有显著性差异（P<0.05）;其余各组相应指标与C组相比及组间相比无显著性差异。结论重型β地贫患者存在肝功能损害及抗凝物质的减少;脾切及中间型β地贫患者血浆TF+MP的促凝活性异常增高;脾切地贫患者PLT数量异常增高;这些因素可能增加地贫患者血液高凝状态或血栓形成风险。但外周血血浆sICAM-1及TF水平降低可能是中间型α地贫患者及肝功正常患者血栓形成的保护性因素。

关键词： 高通量测序技术   地中海贫血   基因筛查   基因诊断  

摘要： 目的:通过对比基于高通量测序技术与传统跨越断裂点式聚合酶链反应(Gap-PCR)及反向斑点杂交技术(PCR-RDB)的地中海贫血基因检测结果,比较两种基因检测技术的特异性及敏感性,评估采用高通量测序技术在地中海贫血高发区进行地中海贫血基因筛查的临床可行性,以确立地中海贫血高发区的地中海贫血基因筛查诊断新流程。方法:本研究分两阶段进行。阶段一:随机抽取2015年1月至2016年12月到本院产前诊断中心就诊的血液学筛查阳性的病例900例。抽取外周静脉血2～3ml用二乙胺四乙酸抗凝管保存,标本分别用高通量测序技术及传统地中海贫血基因诊断方法(Gap-PCR技术、PCR-RDB技术)进行地中海贫血基因检测,并将两种检测手段取得的实验结果进行对比分析。阶段二:对阶段一中检出的阳性病例的配偶,采用高通量测序技术检测地中海贫血基因,同时完善血常规、血红蛋白电泳检查,分析检验结果。结果:阶段一的900例受检者中,采用传统地中海贫血基因检测方法共检出地中海贫血基因突变携带者585例,阳性率为65.00%(585/900),其中α-地中海贫血326例,占阳性比55.73%(326/585),β-地中海贫血244例,占阳性比的41.71%(244/585),αβ复合型地中海贫血15例,阳性比为2.56%(15/585)。采用高通量测序技术检出地中海贫血基因异常者605例,阳性比为67.22%,包括α-地中海贫血基因突变333例,占阳性比的55.04%(333/605),β-地中海贫血基因突变253例,为阳性比的41.81%(253/585),αβ-地中海贫血基因突变19例,阳性比为3.14%(19/605)。通过对比分析,高通量测序技术的阳性检出率明显高于传统基因检测技术(p<0.01)。阶段二中485例接受检测,检出基因异常者64例,阳性率为13.20%(64/485)。其中α-地中海贫血46例,占71.87%(46/64),β-地中海贫血16例,占25.00%(16/64),αβ-地中海贫血2例,占3.13%(2/64)。64例基因检测阳性病例,其血液学筛查完全正常者21例,意味着采用传统地中海贫血诊断流程漏诊率达32.81%(21/64)。高通量测序技术所检出的所有阳性病例中包括罕见型或新发突变20种,共25例。其中部分基因类型在全国乃至全球都尚未有过报道。结论:高通量测序技术的敏感性、特异性及准确性明显优于传统的地中海贫血检测方法。采用高通量测序技术进行地中海贫血基因筛查具有临床可行性,尤其值得在地中海贫血高发区推广。

关键词： 中医药   治疗   地中海贫血  

摘要： 地中海贫血(thalassemia),简称地贫,也称珠蛋白生成障碍性贫血,它是由于常染色体基因缺陷导致一种或一种以上血红蛋白链合成障碍的一类遗传性慢性溶血性贫血疾病.地贫主要有α、β、δβ、δ等类型,其中又以α及β地中海贫血最为常见.中医古籍中对地中海贫血并无专门论述,但根据中医证候可将该病归属于“血虚”、“虚劳”、“童子劳”、“虚黄”、“眩晕”、“五软五迟”等范畴.目前,对地贫治疗国内外仍以输血为主要治疗方法,而用传统中医药治疗地贫具有一定的优势和疗效,本文将中医药治疗地中海贫血的研究现状进行综述.

关键词： 地中海贫血   供者淋巴细胞输注   混合嵌合体   移植排斥  

摘要： 目的1.总结南方医院儿科移植中心337例重型β-地中海贫血非半相合移植结果及移植排斥的情况。2.回顾分析本移植中心30例移植后出现混合嵌合的重型地贫患者行供者淋巴细胞输注的情况,总结其输注适应症、输注剂量、输注时机、输注结果及并发症,探究供者淋巴细胞输注在预防重型β地贫移植后排斥中的作用。方法1.2011年6月到2016年6月,337例重型β地贫患者在南方医院儿科移植中心接受非半相合造血干细胞移植342次,337例患者中男195例,女142例,中位年龄6岁(3岁-15岁),其中有5例行2次移植,大部分采用本***新预防处理方案。移植后观察植入情况、嵌合体状态、GVHD情况。2.上述337例接受HSCT的重型β地贫患者中有50例患者出现移植后混合嵌合体,予逐渐减用抗排斥药物,供者起源细胞仍持续下降者,予行分次渐增剂量供者淋巴细胞输注治疗。将50例患者分为4组,第1组患者MC为90%-95%(MC1级),并行单纯减停免疫抑制剂组(n=20);第2组为MC1级患者并行DLI 组(n=11);第 3 组患者 MC 为 75%-90%(MC2 级)并行 DLI 组(n=13 例);第4组患者MC<75%(MC3级)并行DLI组(n=6)。第1组行逐渐减停CSA并监测MC 比例;第2-4组减停免疫抑制剂后行DLI治疗,首次输注淋巴细胞数在(1-10)×107/kg之间,每1-2周复查嵌合体情况,如MC比例>95%,停止DLI,如MC 比例仍小于95%且无严重GVHD,可行下一次渐增剂量DLI治疗。DLI后监测血红蛋白及MC水平,观察是否出现GVHD等并发症,并采取相应干预措施。结果1.337例患者共接受342次移植,其中1例未植入,4例出现短暂植入,此5例接受二次移植,50例出现混合嵌合体,最终320例患者植入成功且无病存活,死亡17例。其中9例死于严重感染,4例死于严重GVHD,1例死于爆发性心肌炎,1例死于VOD,1例死于血小板减少导致颅内出血,1例死于肺部感染家长未及时就医。95例发生Ⅰ-Ⅱ度急性GVHD,12例发生Ⅲ-Ⅳ度急性GVHD,10例发生慢性GVHD。2.(1)第1～4组完全嵌合体转化率分别为100%,100%,85%,66.7%;第4组有2例出现GR(33.3%);第1～4组GVHD的发生率分别为15%,27.3%,46.2%,33.3%;(2)对比第1组与第2组的GVHD发生率(15%VS 27.3%)P=0.638;(3)对比首次DLI时间≤80天与DLI时间>180天的患者,GVHD的发生率为(50%VS 10%)P=0.049;(4)对比 DLI 总剂量>1×107/kg 与≤1×107/kg,GVHD 的发生率为(50%VS 27.3%)P=0.142;(5)对比亲缘组移植及非亲缘组移植,GVHD的发生率为(41%VS 25%)P=0.672。(6)对比脐血移植及非脐血移植,GVHD的发生率为(25%VS 38.5%)P=1.0。结论1.337例重型β地贫患者HSCT总体生存率,无病生存率,排斥率,混合嵌合体率,治疗相关死亡率分别是95%,94.2%,1.5%,15%,5%。其中重症感染及GVHD是引起移植后死亡的重要因素。2.重型β地贫患者移植后出现MC1级,予逐渐减停免疫抑制剂或同时行DLI治疗,两者效果相同且DLI组GVHD发生率高,所以MC1级患者应首选观察及调整免疫抑制剂策略。3.移植后出现MC2-3级,排斥风险大,予分次渐增剂量DLI,可有效逆转不稳定嵌合体为完全供者嵌合体;***后GVHD与DLI时间相关,在移植后≤180d给予DLI的患者,GVHD的发生率较高;***后GVHD与DLI输注细胞数无统计学差异,不排除样本数量小对统计结果影响.

关键词： β-地中海贫血   KLF1   成人血红蛋白A   胎儿血红蛋白F  

摘要： 成人血红蛋白A(Hb A2)和胎儿血红蛋白F(Hb F)水平是一种鉴定β-地中海贫血携带者可靠的诊断方法。Hb A2含量的升高是由β-株蛋白基因的突变或者β-株蛋白簇外部的分子机能障碍引起的,这种分子机能障碍可能归因于β-株蛋白簇的调控基因所致,例如KLF1基因。本实验的目的是鉴定KLF1基因对地中海贫血病的影响。本研究从中国南部地区招募40名健康的人和100名中重型β-地中海贫血患者作为实验对象(67例重型和33例中间型)。研究发现,14%的β-地中海贫血患者中存在KLF1基因的特异性突变,这些患者选择性的出现于中间型地中海贫血病例中。KLF1基因突变的患者血液中Hb A2和Hb F水平较健康人群和未发现KLF1基因突变的患者有较大的升高。对这些患者的δ-株蛋白基因和γ-株蛋白基因的表达进行实时定量分析,结果显示携带KLF1基因突变的患者其δ-株蛋白和γ-株蛋白基因的表达明显升高,这支持Hb A2和Hb F水平升高的表型变化。这些结果说明KLF1基因缺陷可以通过改变血液参数来调节β-地中海贫血患者临床表型的严重性。本实验的研究结果也需要在不同种族人群中进行进一步的验证。