关键词： 产前诊断   地中海贫血   基因诊断   特别贡献奖  

摘要： 地中海贫血是遗传性溶血性疾病,广泛流行于地中海、东南亚和中国南方地区等地。重型地中海贫血胎儿或死亡,或出生后终生依赖输血等治疗。地中海贫血严重危害健康,是出生缺陷的主要病因,成为影响社会发展的公共卫生问题。本项目自上世纪七十年代开展地中海贫血防治研究,历时43年,获得系列创新性成果。创建了地中海贫血筛查、基因诊断和产前诊断技术并推广应用,开创和推动地中海贫血防治工作,实施大规模人群干预,避免重型胎儿出生,降低了出生缺陷,减轻家庭和社会的巨大负担,影响深远。项目研究

关键词： 地中海贫血   基因突变类型   血红蛋白A2   截断值  

摘要： 目的：探讨中国十省地区（广东，广西，福建，江西，湖南，四川，贵州，海南，重庆，云南）地中海贫血的基因突变类型及血液学特点，制定各省市血红蛋白A2（HbA2）的截断值（cut-off值）。　　方法：以2006年7月至2016年12月送往金域医学检验有限公司检测血红蛋白成份和地中海贫血突变基因的十个省份的样本为研究对象：　　1.统计各省份地中海贫血的阳性率及常见基因突变类型，用卡方检验对比各省份之间地中海贫血阳性率的差异性。　　2.筛选出同时检测血红蛋白成分和地贫突变基因的样本，统计各突变基因型所对应的HbA2含量;用非参数检验对比各突变基因型HbA2含量的差异性。　　3.以基因检测结果为金标准，用R中的pROC包绘制各省份HbA2筛查地中海贫血的ROC曲线。　　结果：　　1.823909例α地中海贫血受检样本中阳性人数为244675例，阳性率为29.70%;767427例β地中海贫血受检样本中阳性人数为169759例，阳性率为22.12%。　　2.α地中海贫血常见的三种基因突变类型分别是--SEA/αα（68.53%），-α3.7/αα（15.63%）和-α4.2/αα（6.48%）;β地中海贫血常见的三种基因突变类型分别是CD41-42杂合子（45.50%），IVS-II-654杂合子（21.96%）和CD17杂合子（18.16%），并检出一例少见突变类型-90（C＞T）杂合子　　3.各省市地中海贫血阳性率有所不同。其中：α地中海贫血阳性率较高的前三个省份为：海南省，广东省和广西省;β地中海贫血阳性率较高的前三个省份为：广西省，云南省和广东省。　　4.各省市的常见地贫基因突变类型有所不同。对α地中海贫血而言，除海南省最常见的两种基因突变类型分别是-α3.7/αα和-α4.2/αα外，其余各省市最常见的两种基因突变类型均为--SEA/αα和-α3.7/αα。对β地中海贫血而言，华南地区三个省份：广东省、广西省和湖南省最常见的基因突变类型都是CD41-42杂合子;而西南地区的四个省市：贵州省、四川省、云南省和重庆市突变频率最高的基因型则是CD17杂合子;-28杂合子和βE杂合子分别在海南省和云南省中较常见，在其他省市却不常见。　　***曲线发现各省份HbA2筛查地中海贫血的最佳截断值有差异，且HbA2对β地中海贫血的诊断效能高于α地中海贫血。　　结论：　　1.中国南方地区α地中海贫血的常见基因突变类型为--SEA/αα，-α3.7/αα和-α4.2/αα，β地中海贫血的常见基因突变类型为CD41-42/N，IVS-II-654/N和CD17/N。　　2.不同地区间地中海贫血的阳性率和常见基因突变类型存在差异。　　3.不同地区间HbA2筛查地中海贫血的最佳截断值不同，提示在进行地贫筛查时，不同地区应设立不同的筛查标准。　　4.从ROC曲线下面积来看，HbA2筛查β地中海贫血的效果明显好于α地中海贫血。

关键词： 分子诊断   地中海贫血   PCR  

摘要： 地中海贫血具有遗传性,常见的基因缺陷类型主要为 α-、β-,早期筛查和诊断可为临床治疗提供指导,将其应用于产前诊断可减少重型地中海贫血患儿出生,达到优生优育的目的 .目前,常见的实验室分子诊断技术包括PCR分子诊断技术、多重连接探针扩增技术、基因芯片技术、高通量测序等.本文将对各种实验室分子诊断技术的诊断原理及价值进行分析,为地中海贫血的分子诊断发展提供参考.

关键词： 地中海贫血   产前筛查   基因分析   湖北夷陵地区  

摘要： 目的了解湖北省夷陵地区孕妇地中海贫血（简称地贫）的患病情况及基因分布特点,为该地区地贫防控提供科学依据。方法选择2018年6月—2019年3月在宜昌市夷陵区妇幼保健院进行产前检查的1 872名孕妇,以血液学检查进行初筛,疑似地贫人群进行血红蛋白电泳和基因型检测,根据基因突变情况确定是否为地贫。结果共发现地贫患者38例,患病率为2.03%。其中α-地贫17例,以--SEA/αα和-α;/αα基因型为主;β-地贫20例,以IVS-2-654和CD17基因型为主;1例αβ复合型地贫,具体基因型是-α;/β;。非地贫组的血红蛋白（Hb）、红细胞平均体积（MCV）及红细胞平均血红蛋白含量（MCH）均值明显高于地贫组,差异有统计学意义（P<0.001）。结论夷陵区不属于地贫高发区,但仍有一定数量的患者,需积极实施产前筛查,有效降低发病率,提高出生人口素质。

关键词： 血液学指标   地中海贫血   缺铁性贫血   鉴别诊断  

摘要： 目的对儿童地中海贫血和缺铁性贫血鉴别诊断中血液学指标应用价值进行分析。方法选取我院2013年12月至2018年12月收治的220例接受检查的患儿作为研究对象,其中有110例地中海贫血患儿,110例为缺血性贫血患儿,通过统计血常规检查结果,对两组患儿血液学指标进行比较。结果地中海贫血组与缺铁性贫血组的rBc、HB、McH、McHc、rdW的比较具有差异显著(P<0.05)。结论在鉴别儿童地中海和缺铁性贫血过程中,可将rBc、HB、rdW等血液学指标作为依据支持,能够有效提高临床诊断效率,其对鉴别这两种不同类型的贫血有着重要指导作用,从而为患儿制定可靠的治疗方案奠定基础,其值得推广使用。

关键词： 中间型β地中海贫血   沙利度胺   胎儿血红蛋白   临床疗效  

摘要： 目的:观察沙利度胺治疗中间型β地中海贫血（thalassemia intermedia,TI）的临床疗效、药物安全性及与疗效相关的因素分析。方法:纳入符合入组条件并签署知情同意书的15例成年TI患者,采用自身对照的方法,每晚口服沙利度胺50mg治疗3个月。入组时统计患者地中海贫血基因型及是否行脾切除术。用药前筛查患者血常规、肝肾功能、血清铁蛋白（Serum ferritin,SF）、血红蛋白组分分析、腹部彩超、心电图,女性患者加查尿妊娠试验（Human Chorionic Gonadotropin,HCG）,并记录其基线水平;用药期间每月进行随访1次,监测患者血常规、肝肾功能变化情况,并记录用药期间有无药物相关不良反应发生。待3个月观察期结束时,再次复查患者血常规、肝肾功能、SF、血红蛋白组分分析、腹部彩超、心电图,女性患者复查尿HCG。统计患者治疗期间各项实验室指标情况,并与入组时基线水平对比。将血红蛋白（Hemoglobin,Hb）上升值超过2g/dL定义为显效,上升1～2 g/dL定义为有效,否则为无效。结果:最终14例TI患者按照试验方案完成治疗和相关检验检查,主要疗效指标Hb平均值较基线水平上升2.5±1.8g/dL（P<0.05）。经过1个月的治疗,总体有效率（显效+有效）和显效率分别为78.6%和50%;观察结束时,12例患者达到有效标准,2例患者无效,治疗总体有效率为85.7%,其中10例患者达到显效,显效率为71.4%。14例患者血红蛋白组分中HbF平均值较基线水平上升2.6±1.6g/dL（P<0.05）、HbA平均值较前下降0.6±1.0g/dL（P<0.05）,其中6例β复合E患者HbA2+E上升1.0±0.3/dL（P<0.05）,其余8例TI患者HbA2上升0.06±0.1g/dL（P=0.10）。患者红细胞（Red blood cell,RBC）计数和网织红细胞（Reticulocyte count,Ret）计数明显上升,有核红细胞计数（Nucleated red blood cell,NRBC）、胆红素（Total bilirubin,TBIL）、间接胆红素（Indirect bilirubin,IBIL）、和乳酸脱氢酶（Lactic dehydrogenase,LDH）明显下降（P<0.05）;白细胞（White blood cell,WBC）计数明显下降（P<0.05）,血小板（Platelets,PLT）、谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（Aspartate aminotransferase,AST）、肌酐（Creatinine,Cr）和SF无明显变化;腹部超声对比用药前后肝脏和脾脏大小均无明显改变;相关分析表明患者治疗后Hb上升值与用药前HbF比例呈显著性相关（r=0.683,P<0.05）,与患者用药前Hb、Ret、NRBC计数无关。多因素回归分析表明用药前HbF比例是影响疗效的独立危险因素,与性别、是否行脾切除术无关。药物不良反应轻微,观察期间未发生严重药物相关不良反应。结论:沙利度胺治疗TI可以改善患者的溶血和无效造血;药物疗效与患者服药前基线HbF水平相关;患者对药物耐受性较好,不良反应较小,有相对较高的安全性和便利性,有待更大规模的临床试验来证实我们的结论。

关键词： 可逆性后部脑病综合征   地中海贫血   造血干细胞移植   回顾性分析  

摘要： 目的:增加对儿童血液病相关可逆性后部脑病综合征(posterior reversible encephalopathy syndrome,PRES)的认识,减少误诊、漏诊及不可逆性损害的产生。方法:通过收集我院血液病房2015年1月-2019年1月诊治的19例PRES患儿的临床资料,回顾性分析其临床表现、影像学检查、实验室检查、治疗和转归等。结果:1.本研究共收集19例病例,其中男10例,女9例,平均发病年龄(8.2±2.8)岁。急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、ALK阳性间变大细胞淋巴瘤、特发性血小板减少性紫癜各1例,地中海贫血造血干细胞移植后14例,噬血细胞综合征造血干细胞移植后1例。2.临床表现为抽搐19例,反复抽搐4例,精神状态改变14例,头痛9例,呕吐7例,二便失禁5例,头晕4例,视觉障碍3例,乏力2例,血压明显升高15例,血压正常或轻度升高4例。3.19例患儿均无低血糖;低钙血症5例,低钠血症6例,低镁血症9例。11例患儿行脑脊液检查,脑脊液压力升高2例,脑脊液常规、生化及病原学检查未见异常。9例患儿行脑电图检查,8例异常,1例正常。***病灶主要累及部位前5位:顶叶(100%)、枕叶(84%)、额叶(58%)、颞叶(32%)、小脑(21%)。病灶在T1加权像上显示为等信号、低信号或稍长信号影,在T2加权成像上显示为长信号影或高信号影,FLAIR显示为稍高信号或高信号影。5.19例患儿经积极对症治疗后,除1例因合并严重肠道GVHD放弃治疗,余18例临床症状消失,11例复查头颅MRI,6例显示病灶较前减少,5例显示病灶消失。结论:***发病无性别差异,免疫抑制/细胞毒性药物、高血压可能是儿童血液病相关PRES的危险因素。2.相对于化疗患儿,造血干细胞移植患儿可能更易发生PRES,而地中海贫血造血干细胞移植患儿相对于其他血液/肿瘤性疾病造血干细胞移植患儿可能更易发生PRES。3.抽搐、精神状态改变是儿童PRES最常见的临床症状。***以对症治疗为主,最重要的是控制血压。5.实验室检查无特异性,PRES诊断首选头颅MRI,病灶常累及顶枕叶。6.及时的诊断和治疗,PRES预后良好。

关键词： 地中海贫血   脑铁沉积   脑结构   脑功能   默认网络功能  

摘要： 目的:通过MRI对β重型地中海贫血儿童进行横截面研究,系统评估β重型地贫儿童的脑铁沉积量、脑结构及脑功能变化。材料和方法:搜集广西医科大学第一附属医院从2017年1月至2018年12月就诊β重型地中海儿童34名(男性22例,女性12例,年龄9-14岁,平均11.80±1.97岁);从2017年1月至2018年12月招募正常儿童志愿者29名(男性15例,女性14例,年龄9-14岁,平均11.10±1.50岁),应用MRI行T2WI-flair,肝脏梯度多回波T2WI,脑自旋多回波T2WI,SWI,3DT1WI、BOLD序列扫描。肝脏梯度多回波T2WI及SWI序列分别评估β重型地中海贫血儿童肝内铁沉积及脉络丛铁沉积情况;脑自旋多回波T2WI序列定量测量β重型地贫儿童基底节区脑铁沉积;基于体素的形态学方法(VBM)及基于表面的形态学分析方法评估β重型地贫儿童脑灰质体积的及皮下体积改变;独立成份分析方法(ICA)评估β重型地贫儿童默认网络功能改变。结果:1.地贫组肝脏T2*值、脉络丛铁沉积量及双侧尾状核头,苍白球、壳核、丘脑、黑质、红核铁各核团T2mapping值两两间无相关性。2.β重型组双侧尾状核头,苍白球、壳核、丘脑、黑质、红核铁沉积较正常组增多,具有统计学意义(P<0.05)。3.β重型地贫组及正常组双侧尾状核头铁含量具有差异,且具有统计学意义(P<0.05)。4.基于P<0.05非校正且p<0.05 cluster FDR校正VBM结果:地贫组较正常组灰质体积缩小结构及脑区包括双侧距状皮层、双侧楔叶、双侧舌回、双侧基底节区(尾状核、苍白球、杏仁核、核壳)、脑干、小脑;地贫组较正常组体积灰质增大结构及脑区包括右侧岛叶、右侧中央岛盖、双侧中央后回、左侧中央前回、左侧顶上小叶、左侧颞上小叶、右侧颞下回。5.皮下体积测量结果:地贫组双侧尾状核头、壳核、杏仁体、小脑、右侧苍白球及右侧海马体积较正常组缩小,且具有统计学意义(P<0.05)。6.独立成分分析(IAC)结果:地贫组较正常组功能增强脑区包括左侧颞中回、左侧眶部额下回、左侧颞上回、右侧颡中回、左侧中央后回、左侧内侧和旁扣带脑回、左侧顶下缘角回、左侧顶上回、右侧顶上回、右侧顶下缘角回、右侧背侧额上回、右侧中央前回;地贫组较正常组功能减弱脑区包括右侧颞中回、左侧回直肌、右侧楔前叶、右侧三角额下回、左侧额中回、右侧额上回、左侧补充运动区。结论:1.地贫组双侧尾状核头、苍白球、壳核、丘脑、黑质、红核铁存在过量铁沉积。2.地贫组双侧尾状核头、苍白球、壳核、丘脑、黑质、红核铁沉积量且、脑脉络丛铁沉积量、肝脏铁沉积量两两间无相关性。3.地贫组脑灰质存在损伤,默认网络功能紊乱。

关键词： 地中海贫血   高通量测序   突变型和缺失型  

摘要： 地中海贫血(简称“地贫”)是由珠蛋白基因缺失或突变引起的遗传性溶血性贫血,是全球分布最广、累积人群最多的一种单基因遗传病。地贫目前尚无有效的治疗措施,并且治疗费用较高,因此,地贫人口的出生尤其是中间型和重型地贫患儿的出生给家庭和社会医疗卫生事业带来沉重的负担。地贫虽难治,但可防,做好婚前和孕前人群的地贫基因筛查,若夫妻双方筛查结果为地贫阳性者,再进行产前诊断,此措施可以有效的预防地贫患者的出生。随着PCR(聚合酶链反应)技术的不断完善,基因检测技术已成为地贫诊断的金标准,逐渐代替传统的血液常规检查和血红蛋白电泳技术,临床上常见的地贫基因检测技术包括Gap-PCR(跨越断裂点PCR)、PCR-RDB(反向点杂交)、PCR-流式荧光杂交法、基因芯片、MLPA(多重连接探针扩增技术)等,这些检测技术存在检测型别局限、成本高或无法同时检测缺失型和突变型的缺点。因此开发一种高通量、低成本并可同时检测缺失型和突变型的新技术迫在眉睫。本研究根据α-地贫和β-地贫相关的HBA1、HBA2和HBB三个基因的特点设计一系列引物,同时引入用于识别样本的标签序列。利用多重PCR技术将样本中的HBA1、HBA2和HBB基因扩增富集,将96例样本的PCR产物混合成一个文库,进行文库构建,将制备好的文库在高通量Hiseq2500测序平台上测序,每一条DNA的测序结果经过文库接头序列、样本标签序列和引物序列比对拆分后将被精确定位到每一个样本的每一个扩增区域中。将每个样本和目标区域的测序结果与标准数据库中的各种地贫基因变异类型进行比对分析,从而判断样本中是否存在地贫基因变异以及变异的类型。研究结果如下:(1)成功设计及验证了17条针对地贫缺失型的特异性引物及10条针对地贫突变型的引物,可准确扩增7种地贫缺失型(–α3.7、–α4.2、--SEA、--THAI、SEA-HPFH、中国型和台湾型)和涵盖HbVar数据库所有已知地贫突变型别。(2)成功设计及验证了96套引物标签,实现一次PCR反应检测样本数量由传统的单个样本升级到96个样本,显著提高地贫的检测通量和节约成本。(3)成功建立了多重PCR反应的引物组合、反应体系和反应程序。在5个多重PCR反应中准确有效的扩增出地贫突变型和缺失型基因,与普通PCR需要11个PCR反应相比,本研究简化实验操作和节约检测成本。(4)为了验证本研究技术的可行性,选择已知结果的临床样本748例(包括452例阳性样本,290例阴性样本)进行实验,710例样本得出地贫分型结果,38例(5%)样本检测失败。经比对,710例样本分型结果符合率为100%,38例失败的样本重新实验之后,均得出准确的地贫分型结果。选择5例已经结果的样本重复10次分型实验,10次分型结果均与已知结果一致。因此,本研究开发的基于高通量测序平台同时检测地贫缺失型和突变型的方法具有高通量,高准确性,检测型别种类多并可发现新的突变型等特点,适合于大规模人群的地贫基因筛查。