关键词： Hb Bart’s水肿胎   α-珠蛋白基因   MLPA   PCR-STR  

摘要： 研究背景与目的Hb Bart’s胎儿水肿综合征患者(简称“Hb Bart’s水肿胎”)由于缺乏4个α-珠蛋白基因导致 α-珠蛋白合成缺陷,从而导致过多的 γ 与 β 珠蛋白剩余而形成相应的四聚体Hb Bart’s(γ4)和HbH(β4)。γ4和β4对O2的亲和力极高,即使在低氧组织中也不能释放O2,从而造成胎儿宫内严重缺氧,使得胎儿发育受到严重影响并于孕中期出现水肿。没有经过宫内干预而存活的Hb Bart’s水肿胎案例是鲜有报道的。本研究报道了一例无宫内干预而存活的Hb Bart’s水肿胎案例,同时探讨了其存活的原因。该研究将为Hb Bart’s水肿胎的研究提供新视点。材料与方法1.研究对象:先证者是来自广东肇庆的1岁小男孩,被诊断为Hb Bart’s水肿胎。2.实验方法:采集先证者和其家庭成员的新鲜血样进行血液学的表型分析,结合表型分析的结果后进行α-与β-珠蛋白基因簇常见突变检测。通过在α-珠蛋白基因内进行PCR扩增与多重连接探针(MLPA)方法进一步验证基因型,同时进行荧光定量方法分析珠蛋白基因的mRNA的表达水平。提取先证者毛发毛囊以及口腔黏膜的DNA进行α-珠蛋白基因内PCR扩增进一步验证是否存在嵌合,利用PCR-STR技术、单核苷酸多态性以及荧光定量方法分析嵌合程度、来源以及基因型。研究结果Gap-PCR显示先证者为还存在HBA2基因,其父母为--SEA携带者;α-珠蛋白基因内进行PCR扩增以及MLPA结果显示先证者还存在α-珠蛋白基因,其父母为--SEA携带者;PCR-STR技术与SNP位点分析显示先证者存在来源父母的两套遗传物质,且血液占5.2±0.8%、毛囊占19.5±1.0%、口腔占6.7±0.3%的基因型为(--SEA/αα)的嵌合和α-珠蛋白基因来源于其母亲;荧光定量结果表明在先证者的血液、毛囊、口腔样本中含有α-珠蛋白基因的比例分别为2.6%、8.9%、3.6%,且先证者血液中存在3.2%的α-珠蛋白基因的表达。结论本研究发现,先证者较其他Hb Bart’s水肿胎患者宫内存活时间久,是由于其体内存在基因型为(--SEA/αα)的嵌合细胞。该研究的无宫内干预存活的Hb Bart’s水肿胎案例将为存活的Hb Bart’s水肿胎的研究提供新视点。

关键词： 血常规检验   地中海贫血   缺铁性贫血   鉴别诊断  

摘要： 地中海贫血和缺铁性贫血是临床上比较常见的贫血类型,通过血常规检验可以确定患者的疾病类型,提高诊断的准确性,为临床治疗提供科学的依据,有利于保证治疗的针对性和科学性,提升治疗效果,有利于保证患者健康.基于此,笔者分析血常规检验在地中海贫血和缺铁性贫血诊断与鉴别诊断中的应用.

关键词： 地中海贫血   产前筛查   并发症   研究进展  

摘要： 地中海贫血又称为珠蛋白生成障碍性贫血,是一种遗传性溶血性贫血病,此病在全球范围内广泛分布,在我国南方地区较为高发,其病因是珠蛋白基因的缺失或突变导致珠蛋白链的合成障碍。地中海贫血患者轻者会出现贫血,较为严重的患儿可能在青少年时期因并发症死亡,最为严重的患儿可能于宫内死亡,还会导致孕妇发生妊高症、产时和产后大出血、胎盘过早剥落等危重并发症。在当前此病仍然没有理想的治疗方法,因此做好预防和监控对控制和降低地中海贫血的发病率非常重要,在孕期进行地贫筛查,减少重症地贫胎儿的出生,对优生优育、降低地贫发病率有重要作用。本文就地中海贫血产前筛查研究进展进行了综述。

关键词： 地中海贫血   缺铁性贫血   血液检验   诊断鉴别  

摘要： 目的本次实验课题主要探讨地中海贫血患者和缺铁性贫血患者采用血液检验进行诊断和鉴别的效果。方法选择2016年7月至2018年7月本院地中海贫血患者50例、缺铁性贫血患者50例,分别为A组和B组,分别检验两组患者的血液,分析两组红细胞比容、红细胞平均体积、血红细胞分布宽度、血红蛋白含量、红细胞平均血红蛋白量、红细胞计数指标。结果 A组和B组各项血液指标差异比较,P<0.05,存在统计学意义。结论血液检验法应用于地中海贫血患者、缺铁性贫血患者的鉴别和诊断中,价值明显,值得推广。

关键词： 呼气试验   红细胞寿命   缺铁性贫血   地中海贫血   肾性贫血   诊断  

摘要： 红细胞寿命(Red blood cell survival,RBCS)是指红细胞在循环血液中的存活时间,是反映红细胞破坏程度最直接、可靠的指标,对贫血鉴别诊断有重要意义。检测RBCS的方法由最初差异凝集法发展到同位素标记法及细胞生物素法,以上方法周期长、对人体有害,导致国内关于RBCS的研究和应用几乎一片空白。研究发现一氧化碳(Carbon monoxide,CO)呼气试验可以准确、快速、安全,呼一口气就可检测RBCS,极大地方便患者,有利于临床推广应用。本课题采用CO呼气试验特定仪器分析法,研究RBCS在常见贫血性疾病中的诊断价值。1目的1.1建立和验证健康成人RBCS参考值范围及其影响因素。1.2分析RBCS在缺铁性贫血(IDA)、地中海贫血、肾性贫血中的水平,探究其对地中海贫血、IDA的诊断价值。2方法选取2017.5～2018.5我院患者共350例:IDA组50例,地中海贫血组122例(α-地中海贫血组72例,β-地中海贫血组50例),肾性贫血50例,对照组为健康人128例。采用CO呼气试验测定各组RBCS。分析各组RBCS数值,分析RBCS与红细胞参数、铁代谢指标、肾功能指标的相关性;ROC曲线分析RBCS对IDA、地中海贫血的诊断及鉴别诊断的效能。3结果3.1对照组:128例健康成人的RBCS均值为115±22天,95%参考范围为72～160天。RBCS与红细胞参数无相关性。年龄、性别、吹气次数、BMI对RBCS的检测结果无影响。3.2 IDA组:RBCS为82±27天,比对照组短(P<0.05)。IDA的RBCS与血清铁(SI)、铁蛋白(SF)呈正相关(r=0.382,P<0.05;r=0.396,P<0.05),与转铁蛋白(Tf)呈负相关(r=-0.327,P=0.023)。ROC曲线诊断IDA的cut-off为90天,AUC为0.830,敏感性80.3%,特异性73.6%。3.3地中海贫血组:RBCS为63±28天,其中α-地中海贫血、β-地中海贫血分别为70±28天、56±24天。各表型组RBCS依次为:静止型α-地中海贫血>轻型α-地中海贫血>轻型β-地中海贫血>中间型α-地中海贫血组>重型β-地中海贫血组,各组两两比较差异均有统计学意义。ROC曲线诊断地中海贫血cut-off值为80天,AUC为0.942,敏感性83.3%,特异性88.8%。3.4 RBCS对IDA组、地中海贫血组鉴别诊断效能:地中海贫血组RBCS比IDA组明显缩短(63±28天vs82±27天)。RBCS对IDA组、地中海贫血组进行鉴别的cut-off为69天。线性逐步回归得出IDA、地中海贫血的鉴别公式为:ITF=-31.421-0.153×RBCS+4.956×RBC+0.062MCHC,其灵敏度 96.7%,特异度95.1%,阳性预测值95.1%,阴性预测值96.7%,约登指数0.908,准确度95.0%。新公式与7个常用鉴别两者的红细胞参数运算公式比较,鉴别效能依次为ITF>F1>F7>F2>F5>F4>F3>F6。3.5肾性贫血组:RBCS较对照组缩短(71±18天vs 115±22天)。RBCS与血肌酐(Scr)、血尿素(BUN)呈负相关(r=-0.450,P=0.047;r=-0.421,P=0.004),与肾小球滤过率(GFR)呈正相关(r=0.310,P=0.040),与促红细胞生成素(EPO)无相关性(r=0.145,P=0.488)。4结论4.1健康成人的RBCS为115±22天,95%参考范围为72～160天。4.2 IDA的RBCS缩短,可反映机体铁缺乏的严重程度,对诊断IDA有一定的临床应用价值。4.3地中海贫血的RBCS明显缩短,与不同基因型表现相关,对诊断地中海贫血有一定的临床应用价值。4.4 RBCS鉴别IDA与地中海贫血的cut-off为69天。新公式ITF=-31.421-0.153×RBCS+4.956×RBC+0.062×MCHC,对 IDA与地中海贫血鉴别效能最高,可为临床鉴别诊断IDA、地中海贫血提供依据。4.5肾性贫血的RBCS缩短,随着肾功能的减退,RBCS缩短越明显;EPO对RBCS无影响。

关键词： β-地中海贫血   无创产前基因检测   孕妇外周血游离胎儿DNA   假四倍体基因型   高通量测序  

摘要： 目的:地中海贫血是危害严重的遗传性溶血性疾病。重型β-地中海贫血需要终生依赖输血和祛铁治疗,治疗费用昂贵,死亡率极高,给病人、家庭和社会带来巨大的负担。对高危夫妇实施胎儿产前诊断是避免重型患儿出生的唯一有效途径。目前国内外对地中海贫血的产前诊断方法主要是有创的产前诊断技术,不可避免会存在对母体和胎儿的伤害。因此,安全有效的无创性产前诊断技术一直是地中海贫血等遗传性疾病产前诊断研究的方向和目标。本研究拟应用高通量目标区域捕获测序和假四倍体基因型生物信息分析方法,对高危孕妇血浆游离胎儿DNA实施β-地中海贫血基因突变检测,探讨创建安全、有效和准确的无创性产前检测体系,为β-地中海贫血产前诊断提供新的技术和实施方法。方法:课题选取的研究对象为双方均携带β-地中海贫血基因突变,可能生育重型β-地中海贫血患儿的夫妇。孕妇孕周为12周-26周、单活胎、拟进行胎儿产前诊断。对孕妇实施绒毛膜穿刺、羊膜腔穿刺或脐静脉穿刺,提取胎儿DNA,应用反向斑点杂交法和荧光PCR溶解曲线法进行胎儿DNA地中海贫血基因诊断。同时采集孕妇外周血,提取血浆游离DNA。设计针对中国人群常见的12种β-地中海贫血基因突变类型的目标区域捕获基因panel,将孕妇外周血游离DNA进行文库构建,并与基因panel杂交,进行目标区域捕获高通量测序。利用高通量测序信息,根据胎儿基因型、孕妇外周血游离胎儿DNA浓度、孕妇与胎儿共存的假四倍体基因型三者之间的关系,建立假四倍体基因型生物信息分析方法。通过最大似然估计,不断的迭代出胎儿的最优浓度。利用贝叶斯模型得到每个位点最优基因型,利用基因型与胎儿浓度的对应关系估算出最准确的胎儿浓度,不断的迭代直到前后两次浓度之差小于0.001,从而得到的最优的胎儿浓度,进而得到对应的胎儿基因型。将孕妇外周血游离胎儿DNA的胎儿基因型与有创产前检测胎儿基因型结果进行对比,将假四倍体基因型分析模型预测的游离胎儿DNA值与实测值对比,以检验本研究方法的效能。结果:1.一般资料:146组入组病例中,有133组病例样本符合本研究要求。其中孕妇的年龄为28.47±6.05岁（16岁至47岁）,孕周为15.24±3.31周（12.0周至26.4周）,身高为156.44cm±5.02cm（145cm至171cm）,体重为54.78kg±7.84kg（40.5kg至79.0kg）,BMI为20.3±3.2m2/kg（18.4kg/m2至23.98kg/m2）。2.孕妇外周血游离DNA文库浓度测定及FF值结果:孕妇外周血游离DNA文库浓度为20.3ng/μl±12.8ng/μl,DNA文库浓度与孕周之间成正性线性关系。妊娠第12周、13周及18周的孕妇外周血游离DNA文库浓度与年龄无相关性,即孕妇年龄对孕妇外周血游离DNA浓度无影响。孕妇外周血游离游离胎儿DNA浓度（fetal fraction,FF值）预测值为10.26%±5.82%,实测值为11.37%±6.86%。FF值与孕周之间成正性线性关系。妊娠第12周、13周及18周的孕妇FF值与年龄无相关性,即孕妇年龄对FF值无影响。3.绒毛、羊水或脐带血胎儿基因型结果:反向斑点杂交法和荧光PCR溶解曲线法检测结果一致。突变位点的双重杂合子15例,突变位点的纯合子7例,突变位点的杂合子79例,无突变32例。包含了以下基因突变类型:CD 41/42、CD 17、CD 71/72、CD 43、-28、-29、IVS-I-I、IVS-II-654和Hb E。4.血浆游离DNA文库质量检测结果:133例孕妇外周血DNA文库,质量鉴定显示,主峰吸收光谱200bp-400bp之间,峰图高而尖,线条平滑;第二峰范围在400bp-1000bp,峰图矮而钝;Lower marker后无明显峰图。高通量测序时DNA文库读长吸收峰均值为167bp±8bp。5.目标区域高通量测序结果:133例合格DNA文档库的平均测序深度为379.475×±172.928×,120例（90.22%）测序深度超过200×;pool池的累计测序深度600×。Real reads为7825310.57±1254716.368,Q30 rate为81.8317%±2.09838%;GC含量41.0253%±0.8747%。构建pool池的DNA浓度为16.5nmol/L、每个DNA文库样本测序数据量为4.2M时,高通量测序效率/成本比最高。突变位点总文库数181,捕获的有效文库数161,捕获效率88.95%;对CD 41/42位点的捕获效率为85.14%,在其他区域的捕获效率为91.59%。6.假四倍体基因型生物信息分析结果:与有创产前检测结果相比,有113例结果符合;有20例结果不符合,包括11例CD 41/42、3例CD 17、2例-28、1例CD 43、1

关键词： 血细胞   血红蛋白   地中海贫血  

摘要： 目的分析血细胞和血红蛋白分析在地中海贫血中的临床意义。方法以2018年1月至2018年10月我院接收的50例地中海贫血基因携带者为观察对象,根据类型不同分为α组(30例)、β组(15例)及αβ复合组(5例),以同期在我院体检的100例健康人作为参照对象,对不同筛查方式下的检测结果进行回顾性分析。结果 MCH、MCV、HbA2单项指标筛查结果中,α组中三项指标灵敏度、特异度两两对比差异显著,P <0.05,有统计意义;MCH+MCV联合与MCH+MCV+HbA2联合筛查结果对比结果中,两种检测方法α组灵敏度、特异度对比差异显著,P<0.05,有统计意义。结论与其他方法相对比,MCH+MCV联合用于地中海贫血初筛效果最佳,HbA2作为单项指标诊断α型地中海贫血灵敏度较低,因此可适当放宽判定标准。

关键词： 地中海贫血   缺铁性贫血   血常规检验  

摘要： 目的:研究地中海贫血和缺铁性贫血诊断与鉴别诊断中血常规检验的应用价值。方法:根据贫血类型将本院接收的贫血患者42例分为地中海贫血组和缺铁性贫血组,21例/组,均进行血常规检验,并对比两组的检验结果。结果:地中海贫血组的Hb、MCHC高于缺铁性贫血组,RBC、RDW、MCV低于缺铁性贫血组,且缺铁性贫血组的WBC异常率、PLT异常率高于地中海贫血组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:采用血常规检验可根据相关参数的差异性对地中海贫血和缺铁性贫血两种贫血类型进行较好地鉴别诊断,可为临床治疗提供数据参考。

关键词： 地中海贫血   基因型   海南   铁过载   内分泌  

摘要： 目的:通过分析144例重型β-地中海贫血(β-TM)患者病例资料,目的在于探讨海南地区144例地中海贫血患者的基因突变类型、临床特征、铁过载和内分泌情况,加强对海南地区地贫的认识,为β-TM的临床防治提供参考。方法:回顾性分析2015年1月到2018年12月在海南省人民医院儿科及血液内科住院的144例β-TM患儿的病例资料。总结重要临床表现、实验室检查、影像学检查、治疗情况和内分泌并发症。按基因型、输血状况、铁过载、年龄等分析构成比,根据铁过载的程度分为三组,再将其与输血量、年龄、肝功能进行统计学分析。结果:1.144例患儿中,男85例,女59例。年龄范围从1月至18岁,中位年龄5岁,其中汉族103例(70.83%),黎族41例(29.17%)。肝大90例(62.5%),脾大85例(59.03%)。2.102例β-TM患者基因突变类型中前5位突变位点依次为CD41-42、TATAbox-28、CD71-72、CDl7和IVS.2-654,其中以CD41-42位点突变最常见,另外CD41-42/CD41-42纯合突变复合静止型α地中海贫血最为常见的复合型突变。3.大多数患儿在2岁前开始输血治疗,输血前血红蛋白范围15～110g/L,81.25%患者输血前血红蛋白在60～90g/L,输血前血红蛋白大于85g/L有67例。4.144例患者SF平均值是3701.17ng/mL(9.6～27756.4ng/mL),111(77.08%)例患者存在铁过载,其中重度铁过载者占56.94%。5.有6例患者行心脏T2*检查,其中轻度、重度心铁过载各2例。有8例患者行肝脏T2*检查,1例重度、4例中度、3例轻度肝脏铁过载。有32例患者完成心脏彩超检查,1例有重度肺动脉高压,1例中度肺动脉高压,5例全心扩大(4例患者出现心功能衰竭);10例患者行腹部CT检查,其中有9例有肝色素沉着。6.分析输血量、年龄与铁蛋白的关系,研究结果表明随着输血量及年龄的增加,铁蛋白也越高。轻、中度铁过载和重度铁过载分三组,分析谷丙转氨酶、谷草转氨酶与铁蛋白的关系,结果表明铁蛋白水平越高,出现肝功能异常可能性越大。7.内分泌功能:在31例检查甲状腺、肾上腺功能患者中,6名患者发现亚临床甲状腺功能减退症,有3名患者(9.7%)患有肾上腺皮质功能不全;69例测定血糖的患者中,5例患者出现糖耐量异常,3例患者有糖尿病;年龄大于10岁者有18例(男12例,女6例),平均年齡13.2岁,有3例女性患者年龄大于15岁,即2例原发性闭经,3例青春期发育迟缓。有5例年龄大于14岁男性患者,1例有青春期发育,其余4例青春期发育迟缓。8.144例患儿中,死亡3例。40.97%(59例)规范输血,其中87.39%(97例)未规范祛铁;14例规范输血及祛铁。7名患者(4.86%)进行了脾切除术,1例患者行脾栓塞术。已完成10例重型β地贫患者异基因造血干细胞移植,其中有9例治愈,植入不良1例,治愈率达90%。结论:1.102例β-TM患者最常见的基因突变为CD41-42/41-42,占61.77%。2.144例β-TM患者中81.25%的患儿输血前Hb平均值低于90g/L。3.年龄大于2岁的大多数有不同程度的铁过载并且不规范祛铁治疗。4.随铁过载和年龄的增加肝功能、心脏及其他内分泌并发症会相应增加。5.10例β-TM患者行异基因造血干细胞移植,其中有9例治愈,治愈率达90%。

关键词： 血常规检验   地中海贫血   缺铁性贫血   鉴别诊断  

摘要： 目的 讨论血常规检验在地中海贫血和缺铁性贫血诊断与鉴别诊断中的应用价值.方法 对照组选取60例我院在2016年3月到2018年3月治疗的缺铁性贫血患者,实验组选取60例同期的地中海贫血患者,均使用血常规检测.结果 在红细胞计数,红细胞分布宽度,平均红细胞体积上,实验组小于对照组,比较差别较大(P<0.05).在血红蛋白,红细胞血红蛋白浓度指标上,实验组高于对照组,比较差别较大(P<0.05).在红细胞血红蛋白含量值上,实验组与对照组相比,比较差别较小(P>0.05).结论 在缺铁性贫血,地中海贫血检测中使用血常规检测,其中红细胞分布宽度,红细胞计数,平均红细胞体积,血红蛋白、红细胞血红蛋白浓度是重要的参考指标,可以为检测提供依据,具有重要的临床价值.