关键词： 地中海贫血   红细胞输注   储血计划  

摘要： 目的掌握"地贫之家"患者的用血规律,为开展"地贫之家"的医院提供参考。方法对本院2016年6月开设"地贫之家"起至2019年5月的113名地中海贫血患者的2 629袋红细胞输注情况进行回顾性分析。结果 "地贫之家"患者ABO血型分布与所在的华南地区ABO血型分布大致相当。患者中位数年龄为9岁(6,15),93.8%(106/113)为30周岁以下,尤其以儿童及青少年为主。总体用血量逐渐增加,每年1月至2月和7月至8月的寒暑假回落,主要集中在非工作日输注。结论新建"地贫之家"用血有一定规律,输血科可参考患者的血型分布、用血周期变化制定储血计划,安排人力资源,合理安全使用血液资源。

关键词： 地中海贫血   造血干细胞移植   儿童  

摘要： 地中海贫血是因调节血红蛋白的基因突变导致珠蛋白链形成障碍的遗传性血液疾病。目前异基因造血干细胞移植是公认的唯一治愈手段,其经历了预处理方案的演进,供体及移植物来源的对比选择等阶段,现生存情况已得到提高。该文回顾了地中海贫血移植的发展过程及研究进展,以期给临床提供更合适的治疗选择决策。

关键词： 网织红细胞血红蛋白含量   轻型地中海贫血   妊娠期   铁缺乏  

摘要： 目的探讨网织红细胞血红蛋白含量(Ret-He)对轻型地中海贫血(简称地贫)孕妇妊娠期铁缺乏状态的诊断价值。方法选取轻型地贫孕妇49例(轻型地贫组),以铁缺乏孕妇101例(ID组)和缺铁性贫血(IDA)孕妇55例(IDA组)作为疾病对照组,健康孕妇106名作为健康对照组。分析血清铁蛋白(SF)、红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、网织红细胞绝对值(Ret#)和Ret-He与不同疾病风险的关联程度。以SF<20μg/L定义为缺铁,分析其他关联指标与患者贫血程度和缺铁状态的关系,及其对妊娠期铁缺乏的诊断性能。结果轻型地贫组、铁缺乏组、IDA组及健康对照组之间各项指标差异均有统计学意义(P<0.01)。多项Logistic回归分析结果显示,仅SF[比值比(OR)=0.563,P<0.001]与铁缺乏的关联密切;SF(OR=0.688,P=0.001)和Hb(OR=0.441,P<0.001)与IDA的关联密切;Ret-He(OR=0.243,P<0.001)和Hb(OR=0.515,P<0.001)与轻型地贫的关联密切。IDA组和轻型地贫组SF与缺铁状态相关[偏相关系数(rp)值分别为-0.640、-0.330,P值分别为<0.001、0.001];铁缺乏组、IDA组和轻型地贫组Ret-He与缺铁状态相关(rp值分别为-0.269、-0.289、-0.199,P值分别为0.025、0.017、0.036)。受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,Ret-He判断铁缺乏孕妇、IDA孕妇及轻型地贫孕妇缺铁状态的临界值分别为<27.6 pg、<27.2 pg和<23.3 pg,敏感性分别为54.0%、62.2%、88.2%,特异性分别为85.7%、87.2%、86.2%。结论Ret-He与轻型地贫密切相关,或可作为妊娠期铁缺乏的筛查指标,但轻型地贫孕妇铁缺乏的判断界值不宜采用IDA孕妇标准。

关键词： 乙肝病毒   地中海贫血   孕妇   妊娠期糖尿病  

摘要： 目的:在广东地区,慢性HBV感染和地中海贫血是妊娠期可能合并的两种高发疾病,但两种同时合并是否会增加妊娠不良结局的发生,尚无定论。本研究的目的是探讨两种疾病同时合并是否增加母体及胎儿不良事件的发生率,并通过构建预测模型准确判断不良事件发生的概率。方法:研究对象为在暨南大学附属第一医院2011年9月1日至2016年5月31日期间分娩的孕妇17 774例,根据纳入标准和排除标准,同时合并地中海贫血和慢性HBV感染孕妇共57例(地贫+乙肝组);从患有地中海贫血孕妇样本中随机抽取57例(地贫组),从患有慢性HBV感染孕妇样本中随机抽取57例(乙肝组),从非地贫非慢性HBV感染孕妇样本中随机抽取114例(简称双非组)。收集患者的一般情况、肝肾功能、血常规、妊娠期并发症、妊娠期合并症、胎儿及新生儿分娩时情况、新生儿不良事件。检测不同组别之间上述指标的差别,筛选出可能引起不良事件的因素。使用Logistic回归分析相关危险因素(回归系数、P值、OR值、95%CI)与不良事件的相关性;若logistic回归模型具有较高的预测价值(C指数>0.7),则绘制列线图,形象展示预测模型。结果:四组孕妇的年龄、孕周、孕次、产次、初产妇、高龄产妇、剖宫产等基线资料比较,均无统计学差异,因此说明四组间的结果具有可比性。地贫+乙肝组在孕期第24至28周餐后1h血糖显著高于双非组(8.45±1.68 vs.7.44±1.56,P=0.001)。地贫组产后24h内出血量显著高于双非组、乙肝组、地贫+乙肝组(分别为381.49±151.24 vs.305.39±100.56,P<0.001;381.49±151.24 vs.314.64±102.16,P=0.003;381.49±151.24 vs.329.39±126.75,P=0.019)。四组人群的妊娠期糖尿病发病率有显著性差异,地贫组、乙肝组、地贫+乙肝组妊娠期糖尿病发病率均显著高于双非组(分别为21.05%vs.2.63%,P<0.001;10.53%vs.2.63%,P=0.012;17.54%vs.2.63%,P<0.001)。各组孕期多普勒超声检测胎儿发育指标及新生儿出生体重、头围和身长等基本参数无显著统计学差异;四组的早产儿、低出生体重儿、巨大儿、脐带异常等新生儿不良事件无统计学差异;但在新生儿住院疾病中,地贫+乙肝组新生儿缺氧缺血性心肌损害疾病患病率高于其他三组(分别为12.07%vs.5.22%,P=0.001;12.07%vs.0%,P<0.001;12.07%vs.5.17%,P=0.001)。多因素回归分析显示年龄、地贫、乙肝、地贫合并乙肝、妊娠期高血压为妊娠期糖尿病的独立危险因素。该模型能够正确预测89.96%的孕妇是否会患有妊娠期糖尿病。模型的敏感度为14.29%,特异度为99.13%,C指数为0.759,具有较好的预测判断能力。地贫合并乙肝、孕周为新生儿总不良事件的危险因素。该模型能正确预测57.29%的新生儿是否出现不良事件。模型的敏感度为53.80%,特异度为61.54%,C指数为0.587,该模型预测判断能力不佳。结论:(1)地贫+乙肝组在孕24至28周餐后1h血糖的水平最高,并且显著高于双非组。地贫合并乙肝可以显著损害妊娠女性的糖耐量,造成糖代谢功能下降,很可能是导致妊娠期糖尿病的危险因素。(2)地中海贫血孕妇分娩前贫血显著,分娩时却出血量更多,造成贫血进一步加重。这类患者更应该注意产前及产后管理,避免产后大出血发生。(3)乙肝和地贫在没有出现严重的肝功能障碍和贫血时,并不会影响胎儿发育,也不会增加新生儿不良事件,但地贫合并乙肝可能造成新生儿缺血性心肌损害疾病发生率增高。(4)孕妇年龄、地贫、乙肝、地贫合并乙肝可增加孕妇患妊娠期糖尿病的发生风险,本研究绘制了列线图,可预测某孕妇罹患妊娠期糖尿病的概率。这类孕妇在临床上应加强孕期血糖的监测,从而及早发现妊娠期糖尿病并及早予以生活方式干预,必要时给予药物治疗。

关键词： 地中海贫血   HSPCs   CRISPR/Cas9   rAAV6  

摘要： β地中海贫血是由于β珠蛋白基因HBB突变导致正常β-珠蛋白肽链合成减少或缺失的一种遗传性溶血性贫血,是最常见的单基因遗传病之一,全世界范围内大约有9000万的β地贫携带者,占全球人口1.5%左右。β地贫也是我国南方地区发病率最高、影响最大的致死、致残性血液类遗传病。广东省地贫基因携带率高达16.83%,发病率约7.8%,重症死亡率约3%,据统计,仅广东地区每年重型β地贫患儿的出生数约为4000人,对家庭和社会造成沉重的负担。目前唯一能治愈β地贫的方法为异基因造血干细胞移植,但由于MHC配型率低、预处理毒性及移植物抗宿主病等并发症导致能够从中获益的患者较少。以患者自体造血干细胞为基础的基因治疗成为治愈β地贫的新方案。其中基于慢病毒的基因治疗已经开展了多项临床试验,但由于慢病毒的随机整合特性其临床安全性还需长期随访观察。而由基因编辑技术介导的基因治疗已经成为β地贫治疗研究的热点。利用基因编辑工具通过同源重组修复途径可以对β地贫突变位点进行精确修复,将修复后的自体造血干细胞回输到患者体内有望彻底治愈地贫。CRISPR/Cas9基因编辑技术自2012年发展起来,由于其设计及操作简单、价格低廉很快获得了广泛应用,其核糖核蛋白复合体（ribonucleoprotein complex,RNP）形式由于基因编辑效率高、没有密码子优化和启动子选择的要求、较低的脱靶效应、毒性和免疫反应少,已经成为CRISPR/Cas9的主要应用形式。同源重组修复的体外修复模板主要包括单链寡核苷酸（single-strand oligodeoxynucleotides,ss ODNs）和病毒介导的靶向修饰载体,ss ODNs供体序列一般不超过200nt,主要用于特定突变位点的修复,而我们拟建立一套针对β地贫常见突变位点通用的基因打靶修复方案,因此选择病毒介导的靶向修饰载体作为体外修复模板。其中重组腺相关病毒（recombinant adeno-associated virus,r AAV）是目前公认最安全的临床级基因治疗载体,且具有4.7kb的供体序列包装能力,其中血清6型对造血干细胞感染效率最高。因此,我们拟联合利用CRISPR/Cas9基因编辑技术的RNP形式及r AAV6体外修复模板建立针对β地贫常见突变位点的通用型基因打靶修复体系,并通过验证该方案的可行性及安全性以期为基因编辑技术介导的β地贫临床治疗奠定理论基础。第一部分利用脐血HSPCs建立通用有效HBB突变位点基因编辑修复体系目的:利用脐血HSPCs建立通用有效HBB突变位点基因编辑修复体系,为后续功能研究及修复疾病来源HSPCs奠定基础。方法:利用CCTop在线设计平台针对HBB基因2号内含子设计5条sg RNA,同时使用Snap Gene软件设计r AAV6体外修复模板;通过载体构建技术构建PX458-sg RNA质粒,T7E1酶切实验及TIDE平台分析sg RNA切割效率;利用电穿孔法转染RNP复合体,同时转导r AAV6,通过优化RNP复合体中cas9蛋白/sg RNA摩尔比、电转参数、r AAV6 MOI值等获得通用有效基因编辑修复体系;利用甲基纤维素单克隆实验及in-out PCR技术验证修复后细胞的基因型及比率。结果:成功建立通用有效HBB突变位点基因编辑修复体系,切割效率可达80-90%,同源重组修复效率平均可达12%;优化的体系参数如下:cas9蛋白/sg RNA摩尔比为1:2.5、电转参数为1600V,10ms,3 p?lse、使用化学修饰sg RNA、r AAV6 MOI值为10～4;基因打靶后的脐血HSPCs中61%为单等位基因修复,35%为双等位基因修复。结论:我们通过优化各种转导参数成功建立了通用有效HBB突变位点基因编辑修复体系,可用于后续功能及疾病来源HSPCs修复的研究。第二部分对脐血HSPCs修复后功能及基因组脱靶效应进行验证目的:分析基因打靶后脐血HSPCs的体内外功能及全基因组脱靶效应。方法:通过CFU实验检测打靶后HSPCs的体外多系形成能力,红系定向分化实验检测打靶后HSPCs的红系分化效率,吉姆萨染色实验检测打靶后HSPCs红系定向分化过程中的形态变化,小鼠移植实验分析打靶后HSPCs的体内长期重建能力,全基因组高通量测序分析基因编辑修复体系的脱靶情况。结果:体外CFU实验结果表明打靶前后HSPCs多系祖细胞形成能力无显著差异;体外红系定向分化实验结果表明打靶前后HSPCs红系定向分化效率无显著差异;小鼠移植实验证实打靶后的HSPCs能够成功归巢并分化,体内修复效率约为2%;全基因组高通量测序分析表明未见明显与打靶方案有关的脱靶。结论:我们建立的通用有效HBB突变位点基因编辑修复体系对脐血HSPCs体外功能无明显影响,且不会诱发明显脱靶效应,移植后虽然体

关键词： 地中海贫血   缺铁性贫血   红细胞参数  

摘要： 目的:探讨血液检验红细胞参数在鉴别诊断贫血患者中的价值。方法:选本院地中海贫血患者48例作为地中海贫血组,48例缺铁性贫血的患者为缺铁性贫血组以及选择该时期进行体检的正常人48例为对照组。比较血液检验红细胞参数的差异。结果:血红细胞含量、红细胞平均血红蛋白量和红细胞平均体积都是对照组最大,红细胞体积分布宽度缺铁性贫血组最大,红细胞计数地中海贫血组最大,差异均显著,P<0.05。结论:血液检验红细胞参数不仅能够诊断贫血,还能够将贫血的类型进行鉴别。

关键词： 地中海贫血   珠蛋白   红细胞输注  

摘要： 1什么是地中海贫血地中海贫血英文名称为thalassemia,就诊于血液科室。由于珠蛋白的生成出现了功能性障碍导致的贫血,原称之为地中海贫血又称海洋性贫血,是一组具有遗传性质的溶血性贫血疾病。主要是由于遗传的基因出现了严重的缺陷,导致人体内的血红蛋白中的一种或者一种以上的珠蛋白链,在实际的合成过程中出现了缺如或者不足而导致的贫血病症或者病理状态。出现地中海贫血的原因,缘于基因出现了较严重的缺陷,或者出现了复杂性以及多样性,导致缺乏的珠蛋白链的类型以及数量或者在临床症状表现中,出现了较大的变异性。

关键词： 重型β地中海贫血   造血干细胞移植   血清铁蛋白  

摘要： 目的：　　β地中海贫血(简称β地贫,Beta thalassemia)是一组因β珠蛋白基因缺陷造成的溶血性贫血.临床上根据β地贫贫血的严重程度将疾病分为轻型、中间型及重型.规范化终生输血及祛铁治疗是目前重型β地贫的主要治疗方法.而造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)是目前临床上根治重型地贫的唯一途径.本中心从HSCT后白细胞及血小板的植入、移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)、供者细胞嵌合等方面对移植后进行监测.铁负荷是移植前风险评估的重要项目,而血清铁蛋白(serum ferritin,SF)则是目前反映机体铁负荷状况最简单实用的方法.目前移植前血清铁蛋白对β地贫患者移植影响的研究仍存在争议.本研究主要阐述移植前血清铁蛋白对重型β地中海贫血移植的影响.　　方法：　　本中心对2014年7月至2018年12月60例在我中心行外周血造血干细胞移植的重型β地中海贫血病例进行了一项回顾性研究.所有病例均于移植后定期监测其白细胞及血小板植入时间、GVHD、供者细胞嵌合等指标.按移植前SF值将本研究入组病人分为高铁蛋白组(≥1500μg/L)和低铁蛋白组(＜1500μg/L)两组.使用卡方检验、Fisher检验、Mann-Whitney U检验及独立样本t检验等统计方法分析移植前血清铁蛋白与重型β地贫移植之间的关系.　　结果：　　1.造血干细胞移植前血清铁蛋白水平的中位数是1647.5μg/L,范围为453.6-4960.0μg/L.　　2.高、低铁蛋白组在白细胞及血小板的植入时间、急慢性GVHD发生率上并无显著的统计学差异(P=0.426,P=0.307,P=0.434,P=0.221).　　3.60例病例中全血混合嵌合发生率为18.33%,持续全血混合嵌合发生率为6.67%.当移植前血清铁蛋白≥1500μg/L时,有更高的全血混合嵌合发生率(P=0.016).　　4.高铁蛋白组比低铁蛋白组具有较高的T细胞混合嵌合发生率(P=0.046),而B细胞、NK细胞则无明显差异(P=0.137,P=0.224).同时研究了T细胞嵌合的影响因素.单因素分析示移植前SF与T细胞混合嵌合发生有关(P=0.046),但是多因素分析未见统计学意义(P=0.172).提示移植前铁蛋白浓度并非HSCT后第14天T细胞混合嵌合的独立危险因素.　　结论：　　1.移植前血清铁蛋白与白细胞及血小板的植入时间、急慢性GVHD发生率无关.移植前血清铁蛋白可能不是评估移植前全身铁过载可靠的临床指标.　　2.移植前血清铁蛋白与全血及T细胞混合嵌合发生率有关.

关键词： 造血干细胞移植   互补性移植   地中海贫血   单倍体干细胞   脐带血  

摘要： 研究背景：地中海贫血是常染色体隐性遗传疾病,由于α-或β-珠蛋白基因突变或缺失引起的,这导致血红蛋白链的产生减少或完全缺失,在我国广东省,α-型地中海贫血的患病率为12%,β-型地中海贫血的患病率为3.8%。目前重型地中海贫血的主要治疗手段主要有两种:其一是地中海贫血的临床支持治疗,主要包括规范性输血、祛铁治疗,以及脾切除及脾动脉栓塞治疗。其二是重型β地中海贫血的根治性治疗——异基因造血干细胞移(allogeneic hematopoietic stem cell transplantat,HSCT)。同种异体造血干细胞移植是目前唯一根治地中海贫血的治疗手段。在中国范围内,血缘全相合HSCT的临床应用受到了限制,对于缺乏匹配的供者,现有的方法包括使用脐血移植、单倍体干细胞移植,目前单倍体联合脐带血移植即互补性移植获得肯定疗效。研究目的:研究互补性移植决定植入单倍体或脐血的相关因素,比较最终植入物不同的造血恢复情况和并发症等。研究方法:回顾性分析自2012年9月至2019年4月的55例重型地中海贫血患儿互补性移植,中位年龄为9岁(4～18岁),其中29例单倍体(PBSC)植入(占52.7%),26 例脐血(UCB)植入(占 47.3%),预处理方案:ATG+Cy+Bu+Flu+Ara-C,-4d部分患儿予噻替派。输PBSC按单个核细胞数25.86×108/kg(1.32～63.24×108/kg),+6 天输注 UCB,UCB 按单个核细胞数 3.74×107/kg(1.16～15.78×107/kg)。植入检测采用 PCR-STR 法。研究结果:截至2019年4月31日,中位随访时间为37个月(4～79个月)。影响植入物种类的因素中PBSC的配型相合(P=0.043)和cen-B(P=0.039)有差异,与性别、年龄、体重、移植前铁蛋白、预处理方案是否使用噻替派、单位体重PBMNC、单位体重PB CD34+细胞数、单位体重UCBTNC、单位体UCB CD34+细胞数、UCB配型位点数、UCB cen-B物无差异。以PBSC输注时间第0天记,最终植入CB和PB相比血小板(P<0.001)、中性粒细胞(P<0.001)、血红蛋白(P=0.021)植入时间均有差异;以植入物输注时间记,最终植入CB和PB相比粒细胞(P=0.006)、血小板(P<0.001)植入时间有差异,但最终植入UCB和PBSC的血红蛋白植入时间无明显差异性。最终植入CB的患者发生溶血(P=0.047)的风险高于最终植入PB的患者,发生aGVHD(Ⅱ～Ⅳ°)、cGVHD、VOD、HC的风险性无明显差异。结论:单倍体配型位点、PBSC的cen-B是影响植入物种类的因素。以PBSC输注时间第0天记,最终植入UCB的血小板、中性粒细胞胞、血红蛋白植入时间均明显长于最终植入PBSC的时间;以植入物输注时间记,最终植入UCB粒细胞、血小板植入时间长于最终植入PBSC。最终植入UCB的患者发生溶血的风险高于最终植入PB的患者。

关键词： 肝静脉闭塞病   造血干细胞移植   重型地中海贫血  

摘要： 目的:肝静脉闭塞病（Hepatic Veno-occlusive disease,VOD）,又称肝静脉闭塞综合症（Sinusoidal obstruction syndrome,SOS）,是造血干细胞移植（Hematopoietic stm cell transplantation,HSCT）后严重的并发症之一。本课题对我院521例重型地中海贫血（Thalassemia major,TM）患者接受HSCT后VOD/SOS的临床发生率、危险因素、预防、治疗及预后情况进行分析。方法:本研究对我院在2007年7月至2019年7月期间,行HSCT的521名TM患者进行临床分析,其中男性335例,女性186例,中位年龄5（2-19）岁。同胞供者（MSD）移植394例,非亲缘供者（URD）移植103例,单倍体移植24例。预处理方案采用白消安（busulfan,Bu）+环磷酰胺（cyclophosphamide,Cy）+胸腺细胞球蛋白（anti-thymocyte globulin,ATG）+氟达拉滨（fludarabine,Flu）方案。移植物抗宿主病（Gv HD）预防方案,MSD:环孢素A（Cs A）+甲氨蝶呤（MTX）+低剂量、短疗程霉酚酸酯（MMF）。URD移植及单倍体移植:他克莫司（FK-506）+MTX+短疗程MMF±抗CD25单克隆抗体（巴利昔单抗）。VOD/SOS的预防方案:低分子量肝素（Low molecular weight heparin,LMWH）+前列腺素E1（Prostaglandin E1,PGE1）。VOD/SOS的诊断标准采用改良后的西雅图标准[1],VOD/SOS的分型标准采用Mc Donald GB等提出的分型标准[2]。VOD/SOS的治疗采用:1、支持性治疗,如限制每日钠和液体的摄入量,使用利尿剂,输血等支持治疗;2、LMWH+PGE1治疗;3、短期暂停钙调磷酸酶抑制剂（calcineurin inhibitors,CNIs）治疗,改用甲泼尼龙和抗CD25单克隆抗体（巴利昔单抗）用于Gv HD的预防或治疗,VOD/SOS临床症状改善后,继续使用CNIs作为Gv HD的预防或治疗。结果:1、521例TM患者中,54例（10.4%）术后发生VOD/SOS,累计发生率为10.4%（95%CI,8.9-13.4）。其中,轻度VOD/SOS患者32例（59.3%）,中度VOD/SOS患者22例（40.7%）。VOD/SOS中位发生时间为12天（2-28天）。单因素分析结果显示,患者特征年龄、性别、铁蛋白水平、肝脏大小、Pesaro分级,供者性别、干细胞来源、ABO血型匹配,移植方式、血小板无效输注、Gv HD的发生、移植术后败血症发生,与VOD/SOS的发生无显著相关。但VOD/SOS患者血小板植入时间延迟（P=0.010）。MUD组中度VOD/SOS的的累计发生率为8.7%（95%CI,4.7-16.3）显著高于MSD组的累计发生率3.1%（95%CI,1.8-5.4,P=0.010）。2、中位随访时间38个月（1～150个月）,TM患者移植后发生VOD/SOS及未发生VOD/SOS患者总生存期（OS）、移植相关死亡（transplantrelated mortality,TRM）、Gv HD发生率无差异。54例患者中51例存活,存活率为94.4%;无患者进展为严重的VOD/SOS及死于VOD/SOS。3例（5.6%）死于TRM,其中2例死于移植后淋巴增生性疾病,1例死于间质性肺炎。结论1、我院TM患者HSCT后VOD/SOS发生率为10.4%,发生率较高。2、早诊断、合理的对症治疗、及时短期的停用CNIs、防治Gv HD可有效改善VOD/SOS预后。